ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ЗАМЕЩЕННЫЕ 1-ОКСО-1,2-ДИГИДРО[2,7]-НАФТИРИДИНЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ПРИМЕНЕНИЯ И НАБОР Российский патент 2006 года по МПК C07D471/04 A61K31/4375 A61P25/00 A61P25/28 A61P25/18 C07D471/04 C07D213/00 C07D213/62 

Данное изобретение относится к физиологически активным веществам, лекарственным и агрохимическим кандидатам, к физиологически активным композициям, синтезу новых химических веществ, поиску новых способов их получения и применения.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым физиологически активным композициям, новым замещенным 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридинам, способам их получения и применения.

Существует большое количество физиологически активных соединений-лидеров и лекарств, молекулы которых включают нафтиридиновый фрагмент. Достаточно сослаться на базу «Ensemble^R» фирмы Prous Science (www.prous.com), включающую более 130000 биологически активных соединений, из которых более тысячи трехсот соединений представляют собой различные замещенные нафтиридиновые системы, обладающие широким спектром биологической активности.

Известны также несколько десятков 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридинов, представленных ниже общей формулой 1 и в таблице 1.

в которых: R¹ представляет атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный C1-C5 алкил, необязательно замещенную амино группу;

R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-С₅ алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу, исключая соединения, в которых R² и R³ одновременно представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу;

R⁴, находящийся при атомах углерода пиридинового фрагмента, представляет: атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, необязательно замещенный гидрокси С_1-5алкил, необязательно замещенную амино группу, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилоксикарбонильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;

R⁴, находящийся при атоме азота пиридинового фрагмента, образует пиридиниевую соль с фармакологически приемлемым анионом и представляет инертный заместитель.

Известные 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридины проявляют различные виды биологической активности. В частности, нафтиридинон 42 (табл.1) обладает анальгетической активностью, связанной с тем, что он является антагонистом тахикининовых NK рецепторов [Hosoki, R., Yanagisawa, M., Onishi, Y., Yoshioka, K., Otsuka, M. Pharmacological profiles of new orally active nonpeptide tachykinin NK1 receptor anatgonists. Eur. J. Pharmacol. 1998, 341(2-3): 235].

Соединение 28 (табл. 1) эффективно и селективно ингибирует фосфодиэстеразу-5, оно может быть использовано для лечения различных болезней органов кровообращения, например, эректильной дисфункции [Tanabe Seiyaku Co., Ltd. JP 2001031679, 02.06.2001; WO 0012503 03.09.2000]. Нафтиридин 43 (табл.1) является высокоэффективным антагонистом субстанции Р (substance Р) и потенциально может быть использован для лечения аутоиммунных заболеваний [Takeda Chemical Industries, Ltd. JP 2002348289, 12.04.2002; WO 0274771, 09.26.2002].

Следует отметить, что не были известны физиологически активные композиции, действующей на никотиновые рецепторы, включающие в качестве активной субстанции замещенные 1-оксо-1,2-дигидро-[2,7]нафтиридин общей формулы 1. Не были известны также замещенные 1-оксо-1,2-дигидро-[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоновой кислоты и их производные.

Учитывая высокий потенциал физиологической активности замещенных 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридинов, актуальным является разработка новых физиологически активных и фармацевтических композиций, включающих соединения этого типа, новых лигандов никотиновых рецепторов, новых замещенных 1-оксо-1,2-дигидро[2,7] нафтиридинов, способов их получения и применения.

В результате проведенных исследований, направленных на поиск новых физиологически активных композиций, физиологически активных веществ, соединений-лидеров, изобретатели получили новые физиологически активные композиции, включающие 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридины, в том числе неизвестные ранее замещенные 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридины, разработали способы их получения и применения.

Настоящее изобретение относится к новым физиологически активным композициям, включающим замещенные 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридины, новым замещенным 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоновым кислотам и их производным, способам их получения и применения.

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании изобретения.

«Комбинаторная библиотека» означает коллекцию соединений, полученных параллельным синтезом, предназначенную для поиска соединения-хита или соединения-лидера, а также для оптимизации физиологической активности хита или лидера, причем каждое соединение библиотеки соответствует общему скэффолду и библиотека является коллекцией родственных гомологов или аналогов.

«Фокусированная библиотека» означает комбинаторную библиотеку, или совокупность нескольких комбинаторных библиотек, или совокупность библиотек и веществ, специальным образом организованную с целью увеличения вероятности нахождения хитов и лидеров или с целью повышения эффективности их оптимизации. Дизайн фокусированных библиотек, как правило, связан с направленным поиском эффекторов (ингибиторов, активаторов, агонистов, антагонистов и т.п.) определенных биомишеней (ферментов, рецепторов, ионных каналов и т.п.).

«Соединение-хит» («хит») означает соединение, проявившее в процессе первичного скрининга искомую физиологическую активность.

«Соединение-лидер» («лидер») означает соединение с выдающейся (максимальной) физиологической активностью, связанной с конкретной биомишенью, относящейся к определенной (или нескольким) патологиям или болезням.

«Скэффолд» означает общую структурную формулу или молекулярный каркас или инвариантную область соединений, характерную для всех соединений, входящих в комбинаторную библиотеку.

«Заместитель» означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду или полупродукту синтеза в процессе их синтеза.

«Инертный заместитель» (или «не мешающий», "Non-interfering substituent") означает низко- или нереакционоспособный радикал, включая, но не ограничивая С₁-С₇алкил, С₂-С₇алкенил, С₂-С₇алкинил, С₁-С₇алкокси, С₇-С₁₂аралкил, замещенный аралкил, С₇-С₁₂гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С₇-С₁₂алкарил, С₃-С₁₀циклоалкил, С₃-С₁₀циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C₂-С₁₂акоксиалкил, С₂-С₁₀алкилсульфинил, С₂-С₁₀алкилсульфонил, (СН₂)_m-O-(С₁-С₇алкил), -(CH₂)_m-N(C₁-С₇алкил)_n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m и n имеют значение от 1 до 7. Предпочтительными «инертными заместителями» являются С₁-С₇алкил, C₂-C₇алкенил, С₂-С₇алкинил, С₁-С₇алкокси, С₇-С₁₂аралкил, С₇-С₁₂алкарил, С₃-С₁₀циклоалкил, С₃-С₁₀циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, (CH₂)_m-O-(C₁-C₇алкил), -(CH₂)_m-N(C₁-С₇алкил)_n, арил, замещенный арил, гетероциклил и замещенный гетероциклил.

«Замещенная группа, замещенный радикал или скэффолд» означают, соответственно группу, радикал или скэффолд, у которых имеется заместитель, включая но не ограничивая: инертный заместитель, атом галогена, нитро группа, циано группа, сульфо группа, гидроксильная группа, амино группа, карбоксиалкильная группа, карбоксильная группа, карбамоильная группа. Например: замещенный алкил означает алкил, у которого один или несколько заместителей, например, гидроксиалкил или метилоксикарбонилалкил, амино-метоксикарбонил-метил, диметиламиноалкил, 2-гидрокси-2-метоксикарбонил-этил и др.; замещенная амино группа означает амино группу, у которой имеется один или два заместителя, например, ациламино группа, N,N-диалкиламино группа, N-ацил-N-арил-амино группа, ацетил-метоксикарбонилметил-амино группа и др.; замещенный фенил означает фенил, у которого имеется один или несколько заместителей, например 2-метоксикарбонилфенил, 4-амино-3-метоксикарбонилфенил, 3,4-диаминофенил и др.

«Необязательно замещенная группа, необязательно замещенный радикал или скэффолд» означают, соответственно группу, радикал или скэффолд, включающие группы, радикалы или скэффолды с заместителями и без заместителей. Например, понятие необязательно замещенная аминогруппа включает: незамещенную аминогруппу и аминогруппы, содержащие любые, не противоречащие химии заместители, включая но не ограничивая ациламино группы, N,N-диалкиламино группы, N-ацил-N-арил-амино группы, ацил-метоксикарбонилметил-амино группы и др.

«Арил» означает один или более ароматических циклов, каждой из которых включает 5 или 6 атомов углерода. «Арил» может быть конденсированным полициклом, например, как нафталин, или неконденсированным, например как бифенил. «Замещенный арил» имеет один или несколько «не мешающих» заместителей.

«Галоген» означает атом фтора, хлора, брома или иода.

«Гетероцикл» означает один или несколько насыщенных, ненасыщенных или ароматических циклов с 5, 6 или 7 атомами, по крайней мере, один из которых является гетероатомом. Преимущественными гетероатомами являются азот, сера и кислород. «Гетероцикл» может быть конденсированным полициклом, например, как бензимидазол, хинолин, бензотиазол, бензоксазол, или неконденсированным, например, как бипиридил.

Целью настоящего изобретения является создание новой физиологически активной композиции в форме таблеток, гранул, капсул, суспензий, растворов, инъекций, биологически активных соединений или их смесей, помещенных в приемлемую упаковку, для использования в медицине и сельском хозяйстве.

Поставленная цель достигается новой физиологически активной композицией, действующей на никотиновые рецепторы, в форме таблеток, гранул, капсул, суспензий, растворов, инъекций, биологически активных соединений, помещенных в приемлемую упаковку, содержащей в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенного 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридина общей формулы 1 или его соли, N-оксида или гидрата:

в которой: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, a R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-C₅алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

Целью настоящего изобретения является также создание способа получения новой физиологически активной композиции, действующей на никотиновые рецепторы.

Поставленная цель достигается смешиванием физиологически эффективного количества активной субстанции, с инертыми по отношению к субстанции наполнителями и/или разбавителями, с последующим таблетированием, гранулированием, капсулированием, суспендированием, растворением или разбавлением и помещением в пригодную упаковку, отличительная особенность которого состоит в использовании в качестве активной субстанции замещенного 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридина общей формулы 1, или его соли, N-оксида или гидрата, в которой: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, а R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-C₅алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

Целью настоящего изобретения также является способ лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей.

Поставленная цель достигается применением новой физиологически активной композиции, содержащей замещенный 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин общей формулы 1 или его соль, N-оксид или гидрат, в которой: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, а R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-С₅алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

Целью настоящего изобретения является также применение физиологически активных веществ для получения физиологически активной композиции, а также в качестве лигандов никотиновых рецепторов для экспериментального исследования физиологических процессов в качестве «фармакологических инструментов».

Поставленная цель достигается применением физиологически активных 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридинов общей формулы 1 или их солей, N-оксидов, или гидратов, в которой: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, а R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-C₅алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу, для получения физиологически активной композиции, а также в качестве лигандов никотиновых рецепторов для экспериментального исследования физиологических процессов в качестве «фармакологических инструментов».

Целью настоящего изобретения являются также новые замещенные 1-оксо-1,2-дигидро [2,7] нафтиридины.

Поставленная цель достигается замещенными 1-оксо-1,2дигидро[2,7]нафтиридинами общей формулы 1, в которой: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, а R² и R³ независимо друг от друга представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

Целью настоящего изобретения являются также способ получения замещенных 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридинов общей формулы 1, в которой: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, а R² и R³ независимо друг от друга представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

Поставленная цель достигается окислением 1,2-дигидро[2,7]нафтиридинов общей формулы 2 по схеме:

где: R¹ и R⁴ имеют вышеуказанное значение, а R² и R³ независимо друг от друга представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

Исходные 1,2-дигидро[2,7]нафтиридинов общей формулы 2 получают, например, в результате реакции 3-аминометилпиридинов 3 с ацетиленами 4 [Иващенко А.В., Введенский В.Ю., Иванов Ю.В., Хват А.В., Ткаченко С.Е., Окунь И.М. Заявка на патент России, 2003, 2003127780(029855)].

Ниже изобретение описывается с помощью примеров, которые иллюстрируют, но не ограничивают данное изобретение.

Все растворители и реагенты были получены из коммерческих источников, таких как Акрос (Acros) (Бельгия), Сигма-Олдрич (Sigma-Aldrich) (США), Ланкастер (Lancaster) (Англия) и КемДив (ChemDiv) (США). ¹Н и ¹³С ЯМР спектры были получены на спектрометрах фирмы Вариан (Varian) Gemini-300 (300 MHz) в CDCl₃, химические сдвиги проведены в шкале δ (м.д.). Внутренний стандарт тераметилсилан.

Содержание основного вещества контролировали с помощью HPLC на приборе Шимадзу (Shimadzu) 10-AV (колонка Luna-C18, Phenomenex, 25 см×4.6 мм, UV детектирование при 215 и 254 нм) и LC-MS на приборе Applied Biosystems (Shimadzu 10-AV LC, Gilson-215 автоматическая подача образца, масс-спектрометр API 150EX, детекторы UV (215 и 254 нм) и ELS, колонка Luna-C18, Phenomenex, 5 см×2 мм).

Аналитическую ТСХ проводили на силикагеле на алюминиевых пластинках Silufol UV₂₅₄ (5 см×15 см) (Kavalier, Czech Republic) или на стеклянных пластинках с 0.25-мм слоем силикагеля 60 F₂₅₄ (Merck, Germany). Визуализация осуществлялась с помощью УФ света на длине волны 254 нм. Для хроматографической очистки использовали силикагель 5-40 μm (Chemapol, Czech Republic) и 63 μm (ЕМ Science, USA). В соответствии с данными LC/MS все синтезированные соединения имели содержание основного вещества выше 95%.

Биологическая активность синтезированных соединений и возможность использования их в качестве лигандов никотиновых рецепторов для экспериментального исследования физиологических процессов в качестве «фармакологических инструментов» определялась на клетках рабдомиосаркомы и феохромоцитомы, в которых никотиновый рецептор контролирует натриевую проницаемость и, как результат, клеточный трансмембранный электрический потенциал. Последний измерялся с помощью пары анионных флуоресцентных зондов (DiBAC₄(5) и DiBAC₄(3)) по изменению ФРЕТ при клеточной деполяризации, как описано в [Okun, I., Okun, A., Kaler, G. Pat. US 6287758, 2001]. Измерения ФРЕТ производились с помощью флуоресцентного параллельного считывателя VICTOR²V (PerkinElmer, USA) путем возбуждения флуоресцентного донора (DiBAC₄(3)) светом с длиной волны 485 nm и измерения интенсивности флуоресценции акцептора (DiBAC₄(5)) при длине волны 615 nm. При деполяризации клеточной мембраны в результате активации никотинового рецептора, эффективность ФРЕТ возрастает, что проявляется в увеличении интенсивности флуоресценции акцептора.

Пример 1. Общий способ получения 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридинов общей формулы 1. К суспензии 300 мг KMnO₄ в 20 мл CH₂Cl₂ добавляли 3-4 капли 10% раствора 18-краун-6 в СН₂Cl₂ и раствор 0.2 ммоль 1,2-дигидро[2,7]нафтиридина 2 в 3 мл CH₂Cl₂. Смесь перемешивали в течение 2 ч, профильтровывали через селит, фильтровали, упаривали фидьтрат на роторном испарителе, остаток подвергали флэш-хроматографии (этилацетат). Получали 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридины 1 с выходом (85-95%), в том числе диэтил 2-(3-фторобензил)-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат 1(1): выход 89%, LC-MS m/z 399 (М+Н); ЯМР-¹Н (CDCl₃, TMS): s 9.67 (1H), d 8.86 (1H), d 8.18 (1H), m 7.26-7.32 (1H), m 6.92-7.04 (3H), s 5.37 (2H), q 4.40 (2H), q 4.22 (2H), t 1.41 (3H), t 1.14 (3Н), 2-(3-фторобензил)-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат 1(2): выход 92%: LC-MS m/z 399 (М+Н); ЯМР-¹Н (CDCl₃, TMS): s 9.68 (1H), d 8.86 (1H), d 8.18 (1H), m 7.22-7.30 (1H), m 7.02-7.12 (3H), s 5.45 (2H), q 4.39 (2H), q 4.23 (2H), 11.39 (3H), t1.14 (3Н).

Пример 2. Общий способ получения 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридинов общей формулы 1. К раствору 0.5 ммоль 1,2-дигидро[2,7] нафтаридина общей формулы 2 в 4 мл безводного этанола 2 г силикагеля и высушивали на роторном испарителе. Полученную сыпучую массу распределяли тонким слоем в чашке Петри, облучали УФ лампой в течение 12-36 ч в контакте с кислородом воздуха, вносили в стартовую зону заполненной силикагелем хроматографической колонки и элюировали смесью CHCl₃/МеОН/Et₃N=100:6:1. После отгонки растворителя из элюэнта получали 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридины 1 с выходом 60-80%, в том числе: диэтил 2-бензил-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридин-3,4-дикарбоксилата 1(3), выход 62%, желтые кристаллы, ¹Н ЯМР, δ, м.д. (CHCl₃): 9.67(s, 1H), 8.84(d, J=5.8 Hz, 1H), 8.17(d, J=5.8 Hz, 1H), 7.27-7.35(m, 3H), 7.19-7.24(m, 2H), 5.4 (s, 2H), 4.39(q, J=7.1 Hz, 2H), 4.16 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.39(t, J=7.1 Hz, 3H), 1.08(t, J=7.1 Hz, 3Н); ¹³С ЯМР, δ, м.д. (CHCl₃): 164.1, 162.3, 161.0, 152.1, 151.8, 139.0, 135.4, 129.2, 128.6, 127.9, 127.2, 119.7, 118.4, 106.7, 63.0, 62.1, 48.8, 14.1, 13.3; LC-MS, время удержания 3.87 мин, m/z 381(M+1); 2-(4-фторбензил)-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат 1(4), выход 61%, желтые кристаллы, ¹Н ЯМР, δ, м.д. (CDCl₃): 9.64(s, 1H), 8.82(d, J=5.6 Hz, 1H), 8.15(d, J=5.6 Hz, 1H), 7.20-7.25(m, 2H), 6.95-7.00(m, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.37(q, J=7.0 Hz, 2H), 4.22(q, J=7.1 Hz, 2H), 1.39(t, J=7.1 Hz, 3H), 1.15(t, J=7.1 Hz, 3Н); ¹³С ЯМР, δ, м.д. (CDCl₃): 164.1, 163.6, 162.4, 161.1, 161.0, 152.2, 151.8, 144.2, 139.0, 131.2, 131.1, 129.4, 129.3, 119.7, 118.4, 115.7, 115.5, 106.8, 63.1, 62.2, 48.4, 14.1, 13.4; LC-MS, время удерживания 4.00 мин, m/z 399(M+1).

Аналогично примеру 1 получают другие 1-оксо-1,2-дигидро[2,7] нафтаридинов общей формулы 1:

1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат,

2-метил-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат,

6-трифторметил-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат,

2-(2-цианоэтил)-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат,

2-(4-карбокси-циклогексилметил)-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат,

2-(3-пиридил)-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат,

2-(3-фурил)-1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридин-3,4-дикарбоксилат.

Пример 3. Биологическая активность 1-оксо-1,2-дигидро[2,7] нафтаридинов общей формулы 1 и использование их в качестве лигандов никотиновых рецепторов для экспериментального исследования физиологических процессов в качестве «фармакологических инструментов». Фокусиророванную библиотеку составляли из 35 соединений, в том числе 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридины общей формулы 1, подвергли испытанию на способность активировать никотиновый рецептор на клетках рабдомиосаркомы и феохромоцитомы. В качестве стандарта использовали грамицидин. Клетки рабдомиосаркомы выращивались в среде Дулбеко при 37°С во влажной атмосфере с содержанием СО₂ 5% до примерно 100% конфлуентности в лунках 96-луночных тарелок. Среда удалялась из лунок и замещалась свежей средой (250 μL), содержащей смесь красителей в соотношении 1:1 в конечной концентрации 1 мкМ по каждому красителю. Клетки инкубировались в течение 30 минут для того, чтобы концентрации красителей уравновесились между внутри- и внеклеточной средами в соответствии с клеточным трансмембранным потенциалом. После 30-минутного уравновешивания красителей производилось первое измерение флуоресценции клеток в состоянии покоя (I_о), после чего изучаемые соединения общей формулы (1) или (2), растворенные в диметилсульфоксиде, добавлялись в каждую лунку. Концентрация доводилась до 30 μМ и измерялась флуоресценция при нулевом времени (°I_i). Клетки выдерживались 10 минут вместе с соединениями общей формулы (1) или (2), после чего производилось повторное измерение флуоресценции (¹⁰I_i). Прирост интенсивности (^ΔI_i=¹⁰I_i-⁰I_i) характеризовал деполяризацию клеток, которая выражалась в процентах относительно деполяризации, вызванной грамицидином Д (^ΔI_ГрД=¹⁰I_ГрД-⁰I_ГрД): ^ΔI_i/^ΔI_ГрДх100%. Эффект каждого соединения измерялся в четырех повторах и достоверность эффекта оценивалась по коэффициенту Стьюдента с доверительным интервалом 95%. Ниже представлены результаты скрининга некоторых 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтаридинов общей формулы 1 на билологическую активность на никотиновый рецептор.

Как видно из представленных в таблице результатов, соединения 1(1) и 1(4) (табл.2) достоверно изменяют интенсивность флуорисценции зондов, чувствительных к мембрамному потенциалу, что убедительно свидетельствует о модуляции ими активности никотинового рецептора.

Пример 3. Пример, иллюстрирующий приготовление таблеток, содержащих 50 мг активного ингредиента. Смешивают 800 мг крахмала, 800 мг измельченной лактозы, 200 мг талька и 500 мг соединения 1(4) и спрессовывают в брусок. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в таблетки подходящей формы весом 280 мг каждая.

Пример 4. Капсулы, содержащие 200 мг диэтил соединения 1(4), согласно изобретению могут быть получены тщательным смешиванием соединения 1(4) с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкоообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.

Пример 5. Инъекционные композиции для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций могут быть приготовлены смешиванием 500 мг активного ингредиента с подходящей растворимостью, например, гидрохлорида соединения 1(4) с 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропиленгликоля и 100 мл инъекционной воды. Полученный раствор фильтруют и помещают по 1 мл в ампулы, которые запаивают и стерилизуют в автоклаве.

Изобретение относится к новой физиологически активной композиции, действующей на никотиновые рецепторы, в форме таблеток, гранул, капсул, суспензий, растворов, инъекций, содержащей в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенного 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридина общей формулы 1 или его соли, N-оксида или гидрата:

в которой: R¹ представляет атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный С₁-С₅алкил, необязательно замещенную аминогруппу; R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-C₅алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу; R⁴, находящийся при атомах углерода пиридинового фрагмента, представляет: атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, необязательно замещенный гидрокси-С_1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу; R⁴, находящийся при атоме азота пиридинового фрагмента, образует пиридиниевую соль с фармакологически приемлемым анионом и представляет инертный заместитель. Изобретение также относится к новым замещенным 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридинам общей формулы 1 или их солям, N-оксидам или гидратам, где R¹ и R⁴ имеют значение, указанное в п.1, a R² и R³ независимо друг от друга представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу, способу их получения, а также к способу модулирования активности никотинового рецептора и применению соединений общей формулы 1 по п.1, для получения физиологически активной композиции, а также в качестве лигандов никотиновых рецепторов для экспериментального исследования физиологических процессов в качестве "фармакологических инструментов". Изобретение также относится к набору для получения композиции. 6 н.з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Физиологически активная композиция, действующая на никотиновые рецепторы, в форме таблеток, гранул, капсул, суспензий, растворов, инъекций, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенного 1-оксо-1,2-дигидро[2,7]нафтиридина общей формулы 1 или его соли, N-оксида или гидрата:

в которой

R¹ представляет атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный С₁-С₅алкил, необязательно замещенную аминогруппу;

R² и R³ независимо друг от друга представляют атом водорода, нитрильную группу, формильную группу, инертный заместитель, необязательно замещенный C₁-C₅алкил, карбоксильную группу, необязательно замещенную

C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу;

R⁴, находящийся при атомах углерода пиридинового фрагмента, представляет атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, необязательно замещенный гидрокси-С_1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;

R⁴, находящийся при атоме азота пиридинового фрагмента, образует пиридиниевую соль с фармакологически приемлемым анионом и представляет инертный заместитель.

в которой R¹ и R⁴ имеют значение, указанное в п.1, a R² и R³ независимо друг от друга представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.

в которой

R¹ и R⁴ имеют значение указанное в п.1, a R² и R³ независимо друг от друга представляют карбоксильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилоксикарбонильную группу или необязательно замещенную карбамоильную группу.