БИОТРАНСПЛАНТАТ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДИЛЯТАЦИОННОЙ КАРДИОМИОПАТИИ Российский патент 2006 года по МПК A61K35/54 A61P9/00 

Изобретение относится к области медицины и касается приготовления генетически немодифицированной культуры мезенхимальных стволовых клеток человека и способа лечения кардиомиопатии.

Заболевания сердечной мышцы, или кардиомиопатии (от cardio - сердце, myo - мышца и pathos - заболевание), нарушают насосную функцию сердца, уменьшают его способность эффективно перекачивать кровь и представляет серьезную опасность для здоровья человека. Кардиомиопатии входят в группу четырех наиболее распространенных заболеваний сердца. Кардиомиопатию трудно распознать, она часто поражает молодых людей и часто заканчивается трагически.

При дилятационной кардиомиопатии (ДКМП) разрушается мышечная ткань миокарда, причем ослабляется сократительная способность всех камер сердца. У пациентов с критическим снижением массы жизнеспособного миокарда вследствие диффузного некроза и/или апоптоза ни хирургические, ни тем более терапевтические мероприятия не эффективны, поскольку сердце относится к нерегенерируемым органам. Кардиомиоциты перестают делиться сразу после рождения человека и в дальнейшем, при их повреждении преобладают не пролиферативные процессы в паренхиме, а фибропластические реакции стромы, которые почти необратимы [3]. В подобных случаях единственным альтернативным методом лечения является лишь способ создания новых сократительных элементов путем трансплантации в миокард клеток для замещения функции погибших кардиомиоцитов или трансплантация целого органа.

Клеточная трансплантация обладает рядом важных преимуществ по сравнению с пересадкой целого органа (сердца) [2]:

заместительная клеточная терапия позволяет культуральными методами избавиться от примеси сверхантигенных донорских клеток, которые в первую очередь вовлекаются в процесс иммунного отторжения;

подсадку клеток можно регулировать по дозам и многократно повторять;

стоимость клеточной трансплантации значительно ниже, чем пересадки органа.

В настоящее время предпринимаются попытки трансплантации клеток костного мозга или специфически дифференцированных (кардиомиобласты, скелетные миобласты) клеток для улучшения сократительной функции миокарда при кардиомиопатии. Несмотря на значительное количество накопленных к настоящему времени данных, результаты пересадок противоречивы. С одной стороны, описана трансдифференцировка различных клеточных типов в кардиомиобласты, другими авторами показана невозможность нормального функционирования трансплантата, возникновение дополнительных очагов фиброза или элиминация донорских клеток.

Большинство исследователей предпочитают аутогенные клетки (костный мозг, скелетные миобласты, клетки периферической крови). Преимущества аутотрансплантатов не вызывают сомнений, однако имеется ряд ограничений по их применению. В частности, длительность выращивания клеточных культур - более 2 месяцев, может являться критической для ряда пациентов; клетки, полученные от пожилых и тяжелобольных людей, обладают низкой способностью к пролиферации и самообновлению.

В сравнении с аутологичным клеточным трансплантационным материалом донорские (в том числе фетальные) клетки обладают рядом преимуществ [4]:

фетальные клетки имеют больший потенциал роста и пролиферации, выраженную способность к дифференцировке и функционально более активны, продуцируют факторы роста и регенерации;

пересаженные фетальные клетки стимулируют ангиогенез [5];

эмбриональные и фетальные клетки и ткани лучше переносят гипоксию и холодовую консервацию;

культуры донорских клеток могут быть приготовлены заранее и использоваться по первому требованию.

Наиболее выраженным терапевтическим потенциалом при патологиях миокарда обладают мезенхимальные стволовые клетки (МСК), способные не только заместить погибшие кардиомиоциты, но и обеспечить реваскуляризацию зоны фиброза. Кардиомиоциты человека, в основном, прекращают делиться вскоре после рождения. Однако недавние исследования показали, что в сердце взрослого человека сохраняется небольшая популяция кардиомиоцитов, способная к пролиферации. Являясь уникальной «фабрикой» цитокинов и факторов роста, донорские МСК обеспечивают активизацию собственных резервов организма.

Мезенхимальные стволовые клетки, в основном, получают из донорского костного мозга, однако существуют и другие источники - скелетные мышцы, подкожная жировая ткань, фетальные органы гемопоэза (печень, тимус, селезенка). МСК из фетальных органов гемопоэза и методики их получения практически не изучены. Описанные методики выращивания МСК из костного мозга и липоаспиратов позволяют получить гетерогенные популяции клеток стромы, лишь небольшой процент которых являются стволовыми. Клетки зрелой стромы не обладают свойством дифференцироваться в различные клеточные линии и, таким образом, терапевтически неэффективны. После трансплантации стромальные клетки мигрируют преимущественно в соединительную ткань и там накапливаются.

При стандартном пассировании в высоких посевных дозах доля зрелых стромальных клеток быстро увеличивается.

Использование в качестве трансплантата гомогенной (не менее 80%) популяции плюрипотентных МСК позволяет повысить эффективность лечения, увеличить воспроизводимость результатов и избежать нежелательных эффектов.

В настоящее время существует два основных способа трансплантации клеточного материала в сердце: интрамиокардиальный и интракоронарный. При интрамиокардиальном введении часть клеток (до 45%) гибнет от ишемии, поскольку уровень васкуляризации в месте введения может оказаться недостаточным [7].

Интрамиокардиальный способ введения не может обеспечить равномерного распределения клеточного материала в толще миокарда [6].

При использовании интрамиокардиального способа большинство исследователей отмечают у своих пациентов повышенную склонность к развитию различного рода аритмий в послеоперационном периоде (от желудочковой экстрасистолии до фибрилляции желудочков). Опыт свидетельствует об очень упорном течении этих аритмий и их рефрактерности к медикаментозной терапии. Подобных недостатков лишен метод интракоронарного введения клеточного трансплантата.

Задачей настоящего изобретения является получение биотрансплантата для наиболее эффективного (комплексного) воздействия на миокард человека и разработка наиболее эффективного способа введения при дилятационной кардиомиопатии.

Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенная общим изобретательским замыслом.

Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы.

В качестве фетального материала используют ткани на сроках гестации: печень 5-8 недель, тимус 18-20 недель, костный мозг 17-20 недель, подкожная жировая ткань 17-19 недель.

В качестве донорского материала используют костный мозг, подкожную жировую ткань, тимус (у детей 6 лет), которые забирают у пациента для последующей аутотрансплантации и аллотрансплантации.

Предложен способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, заключающийся в том, что МСК выращивают в виде прикрепленных колоний на ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина, 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фиобластов - 2 и 8 U/мл гепарина, при этом отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов, а выращивание колоний ведут из плотности 10-50 клеток на см², при этом используют МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из фетальных (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань) тканей человека, и МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из тканей пациента (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань).

Предложен биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий фетальные миобласты, полученные из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности, и включает не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1).

Предложен также способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, заключающийся в том, что ткань скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности отмывают, измельчают, далее дезагрегируют в растворе, содержащем раствор коллагеназы II типа и трипсина в течение 40-90 минут, полученную суспензию диссициированных клеток культивируют до достижения конфлюэнтного монослоя, затем осуществляют пассирование, дезагрегацию монослоя раствором трипсина, при этом процесс культивирования ведут 18-25 дней при 37°С в атмосфере 9-10% CO₂.

Суспензию клеток засевают на среду, содержащую ростовую среду ДМЕМ/F12, 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% ИТС (инсулин, трансферин, селенит) и 5 нг/мл фактора роста эпидермиса и клетки засевают с плотностью не менее 1×10 кл/мл.

Среду в процессе культивирования неоднократно меняют.

Способ лечения дилятационной кардиомиопатии заключается в том, что ранее указанные биотрансплантаты вводят в коронарную артерию и/или аортокоронарный шунт соответственно в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.

Биотрансплантат вводят с объемной скоростью, которая предотвращает вымывание клеток в аортальной кровоток.

Мезенхимальные стволовые клетки и фетальные миобласты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК).

МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке выделяются из фетальных (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань) или донорских (костный мозг, жировая ткань, тимус) тканей. Биоматериал от доноров получают как для аутотрансплантаций, так и для аллопересадок. Для успешного выделения МСК забирают не менее 5 мл аспирата костного мозга, от 1 см² подкожной жировой клетчатки или от 1 см² тимуса (у детей до 6 лет). Для выделения фетальных клеток используют абортивный материал, полученный при искусственном прерывании беременности у здоровых женщин, предварительно обследованных на наличие вирусных и бактериальных инфекций. Наиболее эффективное выделение миогенных МСК из фетального биоматериала достигается на следующих сроках гестации: печень - 5-8 недель, тимус - 18-20 недель, костный мозг - 17-20 недель, подкожная жировая ткань - 17-19 недель. Если выделение клеток производится не из аспиратов (костный мозг, липоаспират), а из плотных тканей, например тимуса, орган предварительно измельчают и ферментативно дезагрегируют. Суспензию фильтруют через мелкоячеистое сито из нержавеющей стали. Клеточную суспензию (аспират) разводят 1:1 солевым раствором Хэнкса, центрифугируют в режиме 1, 500×g, 10 минут и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина. Суспензию клеток высевают на пластиковые чашки Петри с диаметром 100 мм. Плотность посева первичной клеточной суспензии составляет 1-20 миллионов мононуклеарных клеток на 1 см² в зависимости от источника выделения. Через 1 сутки неприкрепившиеся клетки удаляют, ростовую среду заменяют. Культуры инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО₂. Через 6 дней наблюдают рост гетерогенных клеточных популяций. По достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают на новые чашки с плотностью 10-30 клеток на 1 см² в ростовой среде, дополнительно содержащей 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 U/мл гепарина. Через 7-10 дней отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов. Отобранные колонии рассевают в новые чашки с плотностью 20 клеток/см² и выращивают до состояния преконфлуентности. Замену среды производят через каждые 2 дня. Последующие пассажи производят в том же режиме. В плотнорастущих колониях возможно появление многоядерных симпластов (миотубов), что подтверждает правильность соблюдения режима культивирования. Увеличение посевной дозы или изменение состава ростовой среды приводит к быстрому накоплению в культуре клеток зрелой стромы.

Экспериментально подобранные условия, объединяющие критерии отбора исходного материала и режим культивирования, являются оптимальными для достижения следующих результатов:

система отбора источников получения МСК позволяет получить культуры клеток с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке;

режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют при многократном пассировании максимально наращивать гомогенную клеточную культуру недифференцированных клеток;

режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют сохранить плюрипотентность клеточных культур;

режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют получить большое количество клеток для трансплантации (серию), что обеспечивает воспроизводимость результатов лечения.

Фетальные миобласты из скелетных мышц.

Культура получена из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности и содержит не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1) и не более 20% примесных клеток (фибробластов и эндотелиальных клеток).

Способ получения культуры скелетных миобластов характеризуется тем, что мышечную ткань фетусов человека 1-2 триместра беременности отмывают, механически измельчают и подвергают ферментативной дезагрегации в течение 40-90 минут в растворе, содержащем 0,01-0,1% раствор коллагеназы II типа, 0,25% раствор трипсина. Суспензию первичных диссоциированных клеток засевают с плотностью не менее 1×10⁶ кл./мл и культивируют в среде, содержащей ростовую среду DMEM/F12, 20% эмбриональной телячьей сыворотки с добавлением 1% ИТС (инсулин, трансферин, селенит, НПП «ПанЭко») и фактора роста эпидермиса EGF (5-10 нг/мл).

Среду неоднократно меняют. При достижении клеточной культуры конфлюэнтного состояния осуществляют пассирование с использованием раствора трипсина для дезагрегации монослоя. Плотность посева - 5×10⁵ кл./мл.

Клетки культивируют 18-25 дней при 37°С в атмосфере 9-10% углекислого газа.

Трансплантацию осуществляют в условиях стерильной рентгеноперационной путем введения гомогенной взвеси клеток в нативные коронарные артерии и/или аортокоронарные шунты. Взвесь суспендирована в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов, предотвращающей их быструю агрегацию.

В процессе выполнения процедуры необходимо постоянное перемешивание суспензии для поддержания клеток во взвешенном состоянии.

Доступ к коронарным артериям и/или аортокоронарным шунтам осуществляется по стандартной методике через бедренную артерию с использованием катетеров Judkins и Sones. После выполнения коронаро- и/или шунтографии по стандартной методике, оценивается объем миокарда левого желудочка, кровоснабжаемого каждым из коронарных сосудов и/или аортокоронарных шунтов. Распределение общей дозы клеток для введения в каждый из коронарных сосудов и/или аортокоронарных шунтов производится прямо пропорционально этому объему. Введение клеток осуществляют стерильным шприцом.

Введение клеточного трансплантата осуществляется в три этапа:

1. Первый этап - установка катетера в устье коронарной артерии. На этом этапе следует подобрать такой диаметр катетера, который позволял бы установить его кончик на расстояние не менее 4-5 мм дистальнее устья коронарной артерии или аортокоронарного шунта без значимого нарушения коронарного кровообращения (т.е. при отсутствии у пациента загрудинных болей).

2. Второй этап - подбор оптимальной объемной скорости введения клеточной взвеси. Для этого в установленный согласно п.1 катетер хирург с помощью инфузомата вводит контрастное вещество. Объемная скорость введения подбирается такой, какая предотвращает вымывание контраста в аортальный кровоток.

3. Третий этап - собственно введение клеточной взвеси с помощью инфузомата с объемной скоростью, определенной на этапе 2.

Окончание процедуры не отличается от такового после рутинной коронарографии.

В течение 16 часов после операции пациента наблюдают в отделении интенсивной терапии с мониторингом электрокардиограммы и артериального давления. Выписка на 2-е сутки с рекомендацией контрольного осмотра через 1 месяц.

По предложенному способу лечения в Самарском областном кардиологическом диспансере проведено 3 операции интракоронарного введения аллогенных фетальных скелетных миобластов и МСК пациентам, с дилатационной кардиомиопатией.

В период проведения исследования все пациенты получали стабильную медикаментозную терапию средними терапевтическими дозами ингибиторов АПФ, β-адреноблокаторами, диуретиками.

В группу больных (средний возраст 48±4,5 года) с ДКМП включены пациенты с неясной (неалкогольной, нетоксической) этиологией заболевания, с хронической сердечной недостаточностью 2б функционального класса (3-4 класса по NYHA).

На протяжении всего исследования пациенты не получали иммуносупрессивной терапии.

В контрольную группу включены пациенты с аналогичным диагнозом, с хронической сердечной недостаточностью 2б функционального класса, получающие соответствующую стабильную медикаментозную терапию - 6 пациентов с ДКМП.

Во время исследования проводилось динамическое обследование пациентов: общий анализ крови, мочи, биохимический анализ крови, ЭКГ, ЭхоКГ, ангиокардиография, в том числе по методике Centraline.

Имплантацию осуществляли в условиях стерильной рентгеноперационной путем введения суспензии аллогенных скелетных миобластов 10 млн кл./кг массы тела в 100 мл физиологического раствора в аортокоронарные шунты. Доступ к коронарным артериям и аортокоронарным шунтам осуществляли по стандартной методике через бедренную артерию. В течение 16 часов после операции пациента наблюдают в отделении интенсивной терапии с мониторингом электрокардиограммы и артериального давления.

В раннем послеоперационном периоде ни у одного из пациентов не наблюдалось каких-либо реакций, побочных эффектов или осложнений, связанных с процедурой.

Через 1-3 месяца после имплантации все пациенты отмечали улучшение самочувствия, объективно наблюдалось улучшение общего состояния, повышение толерантности к физическим нагрузкам, уменьшение одышки, периферических отеков, гепатомегалии, при инструментальном обследовании выявлено незначительное уменьшение объемов сердца, размеров зон гипокинетичного миокарда, увеличение ФВ ЛЖ. В контрольной группе, в условиях стабильной медикаментозной терапии, состояние и клинико-лабораторные показатели пациентов не изменились или отмечалась отрицательная динамика.

Больная Ф., 36 лет, поступила в Самарский областной клинический кардиологический диспансер с жалобами на выраженную общую слабость, быструю утомляемость, одышку при незначительной физической нагрузке, отеки на нижних конечностях, доходящие до уровня верхней трети голеней, чувство дискомфорта в области правого подреберья.

При объективном исследовании отмечен цианоз кожи и видимых слизистых оболочек, похолодание кожи конечностей. Аускультативно в легких - на фоне жесткого дыхания в нижних отделах выслушиваются влажные мелкопузырчатые хрипы. Тоны сердца глухие, ритм неправильный. ЧСС 90-96 в 1 мин. Печень выступает из-под края реберной дуги на 5 см, болезненна при пальпации, гладкая, край ее закруглен.

ЭКГ: синусовая тахикардия, горизонтальное положение ЭОС, гипертрофия ЛЖ с изменениями комплекса QRS, гипертрофия ПЖ.

ЭхоКГ: Регургитация на митральном клапане 2 ст. Диаметр основания аорты 35 мм. Регургитация на аортальном клапане. Градиент между ЛЖ и аортой 12 мм рт.ст. Регургитация на трехстворчатом клапане 1 ст. Систолический градиент на трехстворчатом клапане 48 мм рт.ст. Диаметр легочной артерии 30 мм. Давление в легочной артерии 43 мм рт.ст. Переднезадний размер ЛП 50 мм. Медиально-латеральный размер ЛП 49 мм. Верхненижний размер ЛП 62 мм. КДРЛЖ 78 мм, КСРЛЖ 65 мм, КДОЛЖ 170 мл, КСОЛЖ 98 мл, ФВ 31%. Гипокинезия апикально-латерального сегмента, апикального сегмента предсердной стенки. Акинезия верхушки, апикально-септального сегмента.

Ангиокардиография: КДО 320 мл, КСО 242 мл, УО 60 мл, ФВ 25%. При исследовании по методике Centraline 50% сегментов миокарда асинергичны с явлениями гипо- и акинезии, а уровень сократимости остальных 50% миокарда находился на нижней границе нормы.

15 декабря 2003 года пациентке проведена операция коронаровентрикулография с интракоронарным введением клеточного биотрансплантата.

В течение 16 часов после операции пациентка наблюдалась в отделении интенсивной терапии с мониторингом электрокардиограммы и артериального давления. Послеоперационное течение гладкое. Больная выписана на 2-е сутки.

При контрольном осмотре через 8 месяцев пациентка отмечает значительное улучшение состояния, уменьшение слабости, утомляемости. Одышка возникает только при физической нагрузке. Отеков нет.

При осмотре кожа и видимые слизистые обычной окраски. Аускультативно в легких дыхание жесткое, хрипов нет. Тоны сердца глухие, ритм правильный. ЧСС 88 в 1 мин, печень выступает из-под края реберной дуги на 1,5 см.

Лабораторные показатели крови без существенной динамики.

ЭхоКГ: ФВ возросла на 15%, КДОЛЖ уменьшился на 3%, ангиокардиография - КДО - 190 мл, КСО - 136 мл. УО - 112 мл, ФВ 38%. При исследовании по методике Centraline 25% сегментов миокарда асинергичны с явлениями гипокинезии, уровень сократимости 25% миокарда на нижней границе нормы, а сократимость 45% сегментов миокарда была нормальной.

Источники информации:

1. В.Ю. Мареев, Ю.Н. Беленков, Перспективы в лечении хронической сердечной недостаточности.

2. Репин В.С., Сухих Г.Т. Медицинская клеточная биология. М., РАМН: БЭБиМ, 1998. - 200 с.

3. Саркисов Д.С. Регенерация и ее клиническое значение. М., Медицина, 1979. - 284 с.

4. Сухих Г.Т. Трансплантация фетальных тканей и клеток: настоящее и будущее. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1998; 126 (приложение 1): 3-13.

5. Leor J., Patterson М., Qumones M.J. et al. Transplantation of Fetal Myocardial Tissue Into the Infarcted Myocardium of Rat A Potential Method for Repair of Infarcted Myocardium? Circulation 1996; 94 [suppl II]: II-332-II-336.

6. Suzuki K., Brand N.J., Morrison K.J. et al. Development of a Novel Method for Cell Transplantation via Coronary Artery. Circulation 1999; 100 (suppl I): I-164.

7. Zhang М., Murry C.E. Death of Grafted Cardiomyoctyes Limits Formation of New Myocardium in Injured Hearts. Circulation 1999; 100 (suppl I): I-837.

Изобретение относится к области биофармакологии и касается биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы, в качестве фетального материала используют ткани на сроках гестации: печень 5-8 недель, тимус 18-20 недель, костный мозг 17-20 недель, подкожная жировая ткань 17-19 недель, в качестве донорского материала используют костный мозг, подкожную жировую ткань, тимус (у детей 6 лет), которые забирают у пациента для последующей аутотрансплантации и аллотрансплантации, а также способ его получения. Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий фетальные миобласты, полученные из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности, и включает не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1) и способ его получения и способ лечения с использованием указанного биотрансплантата. Изобретение обеспечивает получение биотрансплантата и способа лечения с наиболее эффективным (комплексным) воздействием. 5 н. и 9 з.п. ф-лы.

1. Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут, избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы.2. Биотрансплантат по п.1, где в качестве фетального материала используют ткани на сроках гестации: печень 5-8 недель, тимус 18-20 недель, костный мозг 17-20 недель, подкожная жировая ткань 17-19 недель.3. Биотрансплантат по п.1, где в качестве донорского материала используют костный мозг, подкожную жировую ткань, тимус (у детей 6 лет), которые забирают у пациента для последующей аутотрансплантации.4. Способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что МСК выращивают в виде прикрепленных колоний на ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина, 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 U/мл гепарина, при этом отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов, а выращивание колоний ведут из плотности 10-50 клеток на 1 см².5. Способ по п.4, где используют МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из фетальных (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань) тканей человека.6. Способ по п.4, где используют МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из тканей пациента (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань).7. Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что он содержит фетальные миобласты, полученные из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности, и включает не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1).8. Способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что ткань скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности отмывают, измельчают, далее дезагрегируют в растворе, содержащем раствор коллагеназы II типа и трипсина, в течение 40-90 мин, полученную суспензию диссоциированных клеток культивируют до достижения конфлюэнтного монослоя, затем осуществляют пассирование, дезагрегацию монослоя раствором трипсина, при этом процесс культивирования ведут 18-25 дней при 37°С в атмосфере 9-10% CO₂.9. Способ по п.8, где суспензию клеток засевают на среду, содержащую ростовую среду ДМЕМ/Р12, 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% ИТС (инсулин, трансферин, селенит) и 5 нг/мл фактора роста эпидермиса.10. Способ по п.8, где клетки засевают с плотностью не менее 1×10 кл/мл.11. Способ по п.4, где среду в процессе культивирования неоднократно меняют.12. Способ лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что биотрансплантат по п.1 и/или 7 вводят в коронарную артерию и/или аортокоронарный шунт соответственно в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.13. Способ по п.12, где биотрансплантат вводят с объемной скоростью, которая предотвращает вымывание клеток в аортальной кровоток.14. Способ по п.12, где мезенхимальные стволовые клетки и фетальные миобласты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.