Описание
Настоящая заявка является частичным продолжением и имеет приоритет предварительной заявки США №60/150514, поданной 24 августа 1999 г. Содержание упомянутой выше заявки включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В настоящей заявке различные ссылки включают в себя указания авторов и полного названия. Описание указанных публикаций целиком включено в настоящую заявку в качестве ссылки для более полного описания состояния области, к которой относится настоящее изобретение.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к стабильной плотной, прессованной или таблетированной вакцинной композиции, имеющей плотную твердую форму, включающей в себя один или более высушенных путем замораживания (лиофилизированных) антигенных компонентов и вспомогательный агент, способствующий растворению. Указанная стабильная плотная вакцинная композиция сохраняет все выгодные свойства ее лиофилизированных компонентов, включая стабильность титра и растворимость, в то же время обеспечивая полное и быстрое растворение в разбавителе. Более того, вакцинная композиция согласно настоящему изобретению не имеет недостатков, присущих известным ранее лиофилизированным препаратам. Также описан способ иммунизации субъекта с использованием стабильной вакцинной композиции для приготовления раствора вакцины.
Предпосылки к созданию изобретения
Хорошо известно, что биологические материалы в растворах, такие как вакцины, являются чувствительными к различным влияниям, включая нагревание, окислители, соли, рН, свет и протеолитические ферменты.
Известно несколько способов уменьшения этих вредных воздействий в целом и, более конкретно, способов улучшения стабильности вакцины, особенно во время хранения. Например, хранение при температуре ниже 0°С и до -70°С в морозильной камере является хорошо известным способом. Многие биологические материалы, включая живые клетки, можно успешно хранить в течение многих лет даже при еще более низких температурах, например, в жидком азоте. Однако подобные способы не всегда удобны в ситуациях, когда, например, надо прививать находящийся на свободном выпасе домашний скот.
Лиофилизация, или сушка путем замораживания, представляет собой другой известный способ сохранения живых клеток и вирусов для применения в качестве вакцин. Во время сушки замораживанием раствор, содержащий биологический материал, сначала замораживают, а затем выпаривают из него воду путем сублимации, обычно в условиях высокого вакуума и температурах ниже нуля. В предыдущих подходах использовали сушку замораживанием и другие методики для изготовления вирусных вакцин, однако все еще остаются другие трудности, касающиеся изготовления и введения окончательной стабильной лекарственной формы.
Например, в патенте США №4251509 (Hanson и Abegunde) описана стабильная состоящая из частиц вирусная вакцина, предназначенная для перорального введения в сухом состоянии находящемуся на свободном выпасе домашнему скоту. Однако описанная лекарственная форма является не лиофилизированной, а изготовленной путем концентрирования и экструзии высушенной пасты с образованием гранул.
Для обеспечения термостабильности требуются антиоксиданты, выбор которых будет зависеть от конкретного вируса. Подобную композицию бывает трудно изготовить, и она не очень хорошо подходит для тех случаев, когда перед иммунизацией вакцину желательно растворить.
В патентах США №№3458621 и 3608030 (Tint) описано применение лиофилизированных вирусных препаратов для изготовления таблетки для перорального введения с целью иммунизации кишечника. Однако изготовленные таблетки предназначаются для перорального введения и изготавливаются с энтеросолюбильным покрытием для задержки распада. Во время испытаний in vitro они распадаются медленно и, как было установлено, распадаются только "в течение 25 минут" при воздействии жидкости, имитирующей кишечный сок. Более того, время распада измеряли в жидкости, имитирующей кишечный сок, не принимая во внимание, таким образом, эффекты энтеросолюбильного покрытия. Помимо этого, Tint далее подчеркивает, что до тех пор, пока таблетки имеют "прессованное покрытие", они будут терять свой титр, как показано при сравнении таблеток с прессованным покрытием и непрессованным покрытием. Tint отмечает, что таблетки с непрессованным покрытием" не только не смогли вызвать ответ в виде выработки антител у всех индивидуумов, не имеющих антител, но, кроме того, степень повышения титра была значительно более низкой". (См. столбец 4, строка 40).
В публикации РСТ № WO 99/21579 (Seager et al.), принадлежащей R.P.Scherer Corp., описана "быстро" диспергирующаяся композиция для ветеринарной вакцины, такой как вакцина против ньюкаслской болезни, которая является лиофилизированной и "рыхлой". Лекарственная форма описана как "открытая матриксная сеть", такая как "твердая пена", со ссылкой на патент США №4371516 (копия патента UK №1548022), как противопоставляемая прессованной форме или твердому таблетированию. Кроме того, вакцины предназначены для перорального введения и нацелены на задержку в ткани слизистой оболочки. Вспомогательные вещества служат для обеспечения достаточного для всасывания времени задержки. Описанная вакцинная композиция не предусматривает ни приготовления жидкой дозы для последующей иммунизации, ни средств для легкого приготовления стабильного отмеренного вакцинного раствора для введения в качестве жидкой дозы, ни для приготовления стабильного прессованного или в виде твердой таблетки лиофилизата для облегчения его последующего введения.
В патенте США №5587180 (Allen, Jr. et al.) описан способ изготовления особо прочного матрикса для быстрорастворимой таблетки. В этом способе авторы отходят от лиофилизации и используют обычную методику сушки распылением. Особо прочный матрикс удобен для введения дозы при помещении в ротовую полость. Кроме того, не предложена стабильная вакцинная композиция в качестве вакцинного раствора в виде жидкой лекарственной формы.
В патенте США №5336666 (Neway et al.) описана лиофилизированная жидкая вакцина, из которой можно формировать таблетку для повторного растворения в жидкую форму. Однако вакцина ограничивается полярным гликопептидом определенной бактерии и не предусматривает полного или быстрого растворения.
Несмотря на то что лиофилизацию биологического материала можно осуществлять согласно методикам лиофилизации, хорошо известным специалистам, для получения стабильного вакцинного препарата, титр живого вируса к концу лиофилизации обычно уже не такой, который имелся в растворе до процесса лиофилизации. В целом, невозможно провести титрование до лиофилизации, поскольку раствор является нестабильным до тех пор, пока он не лиофилизирован. Помимо этого, во время лиофилизации титр будет изменяться непредсказуемым образом. Как следствие, оценка исходного титра, основанная на опыте, только подтверждается титрованием после лиофилизации. В результате всего вышеперечисленного почти невозможно добиться определенного точно требуемого титра.
Если лиофилизацию осуществляют с лиофилизатом, который уже помещен во флаконы, переделать серию обычно невозможно, и в некоторых случаях всю серию приходится выбрасывать, если она не соответствует спецификации.
В патенте США №5897852 (Wilderbreek et al.) попытались разрешить эту проблему, используя различные "лиофилизированные тела" с "лиосферами", чтобы устранить недостатки титра лиофилизированного остатка. Однако каждая лиосфера имеет свой собственный титр, делая, таким образом, необходимым титрование множества тел, для получения нужного титра. Даже в лучшем случае этом способ не позволяет достичь точного требующегося титра, поскольку он является только приблизительным из-за использования комбинированных тел для достижения нужного титра. Кроме того, изготовление лиосфер является относительно трудным процессом по сравнению с более простой сушкой растворов замораживанием, с получением лепешки или порошка. Помимо этого, часто требуется специальный матрикс для того, чтобы предотвратить распыление лиосферного материала после сушки. В целом, способ требует изготовления отдельных растворов, каждый из которых имеет свой титр, добавок и вспомогательных агентов. Указанный способ не решает ту проблему, что титр в серии живого вируса редко бывает однородным, и отличается в разных флаконах, особенно в областях холодных пластин аппарата для лиофильной сушки. Таким образом, определение необходимого количества лиосфер во флаконе всегда приблизительно.
Лиофилизация может также быть пригодной для вакцин, включающих в себя более одного иммуногенного компонента. Например, в ЕР 290197А описана лиофилизированная тетравалентная вакцина. Описана процедура смешивания и последующей лиофилизации четырех живых вирусов, являющихся компонентами вакцины.
Недостатком имеющихся в настоящее время методик лиофилизации вакцинных препаратов является то, что указанный процесс очень сложен, имеет много параметров, что делает его очень трудным для воспроизводимого осуществления с целью получения нужного продукта и однородности дозировок. Это особенно проблематично для ветеринарных вакцин, когда в одном флаконе лиофилизировано большое количество доз. Указанная проблема не является такой распространенной при изготовлении вакцин, предназначенных для человека, хотя и оценивается таким же образом, если необходимы массовые прививки, например, в военное время или в ситуациях пандемической инфекции. Например, стандартный флакон с одновалентной вакциной для вакцинации домашней птицы включает в себя в себя 1000 или 2000 доз и регистрируется в качестве такового. Перед лиофилизацией производится приблизительная оценка титра материала, но конечный титр можно определить только после лиофилизации, поскольку во время лиофилизации титр часто снижается достаточно непредсказуемым образом. Кроме того, сырой материал живого вируса или бактерий обычно невозможно сохранить стабильным достаточно долго, чтобы получить точные результаты титра до лиофилизации.
На практике часто оказывается, что контейнер, исходно содержавший более 2000 доз, после лиофилизации содержит только 1900 доз. В этом случае флакон может продаваться только как флакон на 1000 доз, поскольку обычно только это является следующей официально регистрируемой дозировкой. В подобном случае может наблюдаться потеря 47% материала и соответствующее повышение стоимости. Эта проблема относится и к комбинированным вакцинам, поскольку для характеристики всей серии должна использоваться доза компонента с наименьшим титром. Еще одним недостатком является то, что когда флаконы, предназначенные для обеспечения 2000 однократных доз, впоследствии продают как флаконы на 1000 доз и используют для иммунизации 1000 животных, животные, привитые таким образом, без необходимости получают избыточную дозу. Кроме того, вынужденное увеличение количества доз до лиофилизации нельзя считать удовлетворительной альтернативой, если учесть, что некоторая часть вакцинной серии высушивается более эффективно. В этой ситуации просто прекращают впустую расходовать материал.
Указанные проблемы будут приобретать все большее значение, поскольку органы регистрации в настоящее время работают над системой регистрации, в которой количество титров вакцинных доз будет иметь строго определенные верхний и нижний пределы. При заданных многих параметрах как для производства, так и для процесса лиофилизации будет трудно придерживаться указанных пределов при производстве в промышленных масштабах. Как указано, данная проблема будет даже более выраженной, если потребуется комбинированная вакцина.
Еще одним недостатком известных ранее лиофилизированных комбинированных вакцин является то, что большое количество составленных комбинаций должно сохраняться при хранении. Это происходит потому, что различные компоненты в комбинированной вакцине обычно смешивают до лиофилизации. Таким образом, для изготовления полного ряда одно-/многокомпонентных вакцин против, например, двух болезней в качестве маточных компонентов должны сохраняться три различных продукта: (1) продукт, включающий в себя анти-А вакцину, (2) продукт, содержащий анти-В вакцину, и (3) продукт, содержащий анти-А-, и анти-В вакцину. В случае вакцин против трех болезней необходимо изготовить и хранить семь различных вакцин/комбинаций. Для четырех болезней это количество увеличивается до пятнадцати различных вакцин/комбинаций. Поэтому часто необходимо создавать и поддерживать большие мощности для хранения.
В патентах США №№5397569 и 5871748 (Whitfill et al.) описаны способ получения активного иммунитета против вируса ньюкаслской болезни (NDV) у птиц путем введения in ovo вакцинного комплекса, составленного из живого вакцинного вируса, и присоединенных к нему нейтрализующих антител. Whitfill описывает, что соотношение вируса и нейтрализующего антитела или его фрагмента будет определять успех иммунизации. Однако для того, чтобы подобный способ можно было эффективно использовать против NDV, необходимо поддерживать указанное соотношение в узких пределах величин, так, чтобы успешная иммунизация происходила без гибели цыплят. Кроме того, непредсказуемость титра при использовании лиофилизированного NDV (как и для других вирусных препаратов) означает, что такие способы как способ Whitfill нелегко применять при NDV. Таким образом, желательно иметь такой способ, который сможет гарантировать более точные титры NDV и антител для изготовления подобной вакцины.
Еще одним недостатком имеющихся в настоящее время вакцинных композиций и способов их изготовления является то, что существующий процесс лиофилизации требует больших пространств. Обычно лиофилизация вакцины требует сначала разлива солюбилизированной вакцины в стеклянные флаконы. Флаконы затем неплотно закрывают резиновыми пробками и помещают на поддонах на стеллажи в камере для сушки замораживанием или в конденсере. Сконцентрировать очень высокие дозы солюбилизированного вакцинного материала в очень малом пространстве трудно.
В результате флаконы, которые обычно используются при лиофилизации для множества доз вакцины, всегда содержат относительно большой объем жидкости. Для эффективной лиофилизации требуется, чтобы большая поверхность жидкости, которую нужно лиофилизировать, подвергалась воздействию вакуума. Следовательно, поскольку только верхушка замороженной гранулы находится в контакте с вакуумом, вакцины лиофилизируют в относительно больших стеклянных бутылках или флаконах с широким дном. Такие флаконы иногда имеют высоту 5 сантиметров, из которых дополнительные 2 см высоты требуются для резиновых пробок. В результате соотношение продукта и пустого пространства в аппарате для лиофилизации является крайне неэффективным, что выражается в менее эффективном в отношении стоимости процессе производства.
Другим недостатком обычных композиций для изготовления лиофилизированных вакцин в стеклянных флаконах является то, что резиновые пробки могут препятствовать свободному переносу молекул воды из флакона в конденсор по время лиофилизации. Это может увеличивать парциальное давление возгоняющихся газов внутри флакона, понижая, таким образом, эффективность лиофилизации, а также увеличивать риск спадения лиофилизированного материала. Стекло также препятствует переносу тепла, что дополнительно влияет на эффективность лиофилизации. Такой процесс изготовления вакцины, при котором будут устранены как стеклянные флаконы, так и пробки путем использования поддонов для лиофилизации, должен повысить эффективность. Кроме того, процесс лиофилизации требует длительного времени. Компоненты вакцины обычно хранят при температуре ниже температуры замерзания для сокращения времени возгонки воды. Однако более продолжительный период сушки почти неизбежно ведет к снижению титра. Стеклянные флаконы с их пробками и алюминиевыми крышками обычно представляют собой факторы, затрудняющие процесс. В условиях производства они могут составлять более 50 процентов стоимости изготовленной вакцины. В полевых условиях разбавитель нужно инъецировать во флакон, а полученный раствор извлечь и разбавить, если это необходимо. Это представляет собой неудобство, которое не всегда подходит к условиям на месте, таком как курятник. Нередко в таких ситуациях во время данной процедуры работник случайно может инъецировать самого себя. Еще одним недостатком указанной упаковки и изготовления вакцины является то, что некоторое количество концентрированного раствора будет оставаться во флаконе. Таким образом, общепринято, что необходимы излишки содержимого, чтобы компенсировать неоднородность и потери при изготовлении, а также потери в течение периодов хранения. Стеклянные флаконы также нужно ликвидировать безопасным образом, и они могут представлять потенциальную опасность для здоровья и окружающей среды.
В результате применение обычных лиофилизированных вакцинных композиций требует сложных технологий производства, которые являются дорогостоящими, а сами вакцины трудно применять в полевых условиях. Таким образом, указанные обычные вакцинные композиции не подходят для вакцинаций в развивающихся странах, в которых экономическое положение и полевые условия не позволяют проводить дорогостоящие кампании, а также не подходят для случаев массовых иммунизаций, которые могут потребоваться, например, в качестве защиты в случае применения биологического оружия или при других потенциальных катастрофах или эпидемиях.
Таким образом, желательной является вакцинная композиция, при которой можно избежать применения стеклянных флаконов для введения, делающая возможной менее дорогостоящую альтернативу упаковки массы продукта. Также желательна вакцинная композиция и способ ее применения, при которых обеспечивается более высокая точность дозирования и простота использования, при сохранении стабильности, стерильности, растворимости и однородности как для моно-, так и для поливалентных вакцинных композиций. Вакцинная композиция и улучшенный способ иммунизации, который облегчает более точное, воспроизводимое и эффективное введение, могут обеспечить такие преимущества, как более удобное использование в полевых условиях, улучшенная безопасность, улучшенное соотношение стоимости и эффективности, меньший расход и сохранение окружающей среды.
Краткое описание существа изобретения
Соответственно, целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, выполняемого простым растворением твердой, стабильной по плотности формы лиофилизированной вакцины в разбавителе, что устраняет, таким образом, необходимость использования стеклянных флаконов, в то же время позволяя получить значительно более высокую точность дозирования и простоту применения.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание лиофилизированной живой или инактивированной вакцины, которая компактно изготовлена, спрессована или таблетирована в виде стабильного по плотности твердого вещества, которое будет сохранять свою потенциальную иммунизирующую способность во время изготовления и на период времени, требующийся для достаточного срока хранения коммерческой вакцины.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание лиофилизированной живой или инактивированной вакцины, которая компактно изготовлена, спрессована или таблетирована в виде стабильного по плотности твердого вещества, которое облегчает изготовление вакцинных препаратов in ovo и их применение.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание лиофилизированной живой или инактивированной вакцины, которая компактно изготовлена, спрессована или таблетирована в виде стабильного по плотности твердого вещества, которое облегчает упаковку вакцин в контейнеры, не являющиеся флаконами, и их применение.
Другой целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, обеспечивающих большую гибкость при вакцинациях, и их применение.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, который снижает потребность в избыточном вакцинном материале, необходимом для компенсации неточностей титра, присущих упакованной вакцине, изготовленной известными способами.
Другой целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, обеспечивающего большую гибкость для типов вакцинных композиций, которые могут вводиться.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, который облегчает получение вакцинного раствора, содержащего множество доз, и его применение.
Другой целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, который облегчает массовую иммунизацию людей.
Другой целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, который является подходящим и эффективным в отношении стоимости вакцинаций в развивающихся странах, в которых стоимость и полевые условия не позволяют осуществлять сложное изготовление и проводить дорогостоящие кампании.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание вакцинной композиции и способа иммунизации, подходящего для применения в качестве защиты в случае применения биологического оружия, при котором массовая иммунизация является обязательной.
Эти и другие цели настоящего изобретения могут достигаться с помощью настоящего изобретения, которое относится к стабильной вакцинной композиции, содержащей по меньшей мере один предварительно оттитрованный лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению; причем указанная вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки. Помимо этого, настоящее изобретение относится также к способу иммунизации субъекта против болезни, включающему в себя этапы: растворения вакцинной композиции в разбавителе с получением раствора; причем вакцинная композиция содержит по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению; причем указанная вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки и обеспечивает защиту против указанной болезни; и введения полученного раствора субъекту в количестве, эффективном для иммунизации субъекта против болезни.
Настоящее изобретение в его конкретных признаках станет более очевидным благодаря следующему подробному описанию со ссылками на прилагающиеся примеры. Следующее описание продолжит обсуждение проблем и решений, предложенных настоящим изобретением, с точки зрения ветеринарного применения. Однако нижеследующее не должно интерпретироваться как ограничение или неприменимость для вакцинации человека.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к стабильной прессованной вакцинной композиции, содержащей по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция полностью и быстро растворяется в воде.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция является стерильной.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вспомогательный агент, способствующий растворению, представляет собой шипучий агент или пару агентов, разрыхлитель, поверхностно-активный агент или солюбилизирующий агент.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения шипучая пара включает в себя соль и кислоту.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения шипучая пара включает в себя лимонную кислоту и в качестве соли - бикарбонат.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает в себя связующий агент и смазывающий агент.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция полностью и быстро распадается в воде.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения активный материал представляет собой предварительно оттитрованный лиофилизат, который до употребления хранят в сухой атмосфере азота при температуре ниже температуры замерзания.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения лиофилизированный компонент составляет до 80% от массы композиции.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция характеризуется полным растворением менее чем через 80 секунд при контакте с разбавителем.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полное растворение вакцинной композиции наблюдается при соотношении разбавителя и композиции между 0,5 мл разбавителя на 200 мг композиции и 100 мл разбавителя на 400 мг композиции.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения стабильность вакцинной композиции характеризуется потерей титра, не превышающей разницу между 109,7 EID50/мл и 109,2 EID50/мл, через 5 дней при 37°С.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения стабильность вакцинной композиции характеризуется потерей титра, не превышающей разницу между 109,7 EID50/мл и 109,3 EID50/мл/ через 9 месяцев при 4°С.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антигенный компонент вакцинной композиции представляет собой цельный вирус, цельную бактерию или цельный микроорганизм.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антигенный компонент вакцинной композиции представляет собой живую бактерию или живой вирус.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает в себя индикатор наличия антигенного компонента.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения индикатор представляет собой краситель.
Настоящее изобретение относится также к стабильной вакцинной композиции, содержащей по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению; причем вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки, а антигенный компонент включает в себя липополисахарид или белок как натуральный, так и рекомбинантный или модифицированный.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антигенный компонент представляет собой живой вирус, выбранный из группы, состоящей из вируса или бактерии ньюкаслской болезни, штамма VH вируса ньюкаслской болезни, вируса инфекционной болезни бурсы, вируса болезни Гумборо, поксвируса птиц, вируса ларинготрахеита, вируса инфекционного бронхита домашней птицы, вируса Гумборо-Винтерфильда, вируса инфекционного бронхита (IB-H120), поксвируса овец, вируса Rinderpest, спор возбудителя сибирской язвы, Salmonella SPP., E.coli или смеси одного или более из вышеназванных микроорганизмов, как встречающихся в естественных условиях, так и рекомбинантных или модифицированных.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения антигенный компонент выбирают из группы, состоящей из спор возбудителя сибирской язвы, Salmonella SPP., E.coli или смеси одного или более из вышеназванных микроорганизмов, как встречающихся в естественных условиях, так и рекомбинантных или модифицированных.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антигенный компонент представляет собой живой вирус, а композиция дополнительно включает в себя нейтрализующие антитела против указанного вируса.
Настоящее изобретение относится также к способу иммунизации субъекта против болезни, включающему в себя этапы: растворения вакцинной композиции в разбавителе с получением раствора, причем вакцинная композиция включает в себя по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению, где указанная вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки и обеспечивает защиту против указанной болезни; и введения полученного раствора субъекту в количестве, эффективном для иммунизации субъекта против болезни.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения этап растворения в способе иммунизации дополнительно характеризуется полным растворением вакцинной композиции.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полное растворение во время этапа растворения в способе иммунизации наблюдается при соотношении разбавителя и композиции между 0,5 мл разбавителя на 200 мг композиции и 100 мл разбавителя на 400 мг композиции.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения этап растворения в способе иммунизации дополнительно характеризуется полным растворением менее чем через 80 секунд при контакте с разбавителем.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения этап введения включает в себя инъецирование раствора субъекту.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения этап введения включает в себя опрыскивание субъекта аэрозолем, образованным из раствора.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения этап введения включает в себя введение субъекту раствора в виде глазных капель.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения этап введения включает в себя пероральное введение раствора субъекту.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения способ иммунизации применяется по отношению к субъекту, который является птицей, а болезнь выбрана из группы, состоящей из ньюкаслской болезни, инфекционной болезни бурсы, оспы птиц, ларинготрахеита, инфекционного бронхита домашней птицы.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения этап введения включает в себя введение раствора субъекту in ovo.
Настоящее изобретение относится также к упаковке, включающей вакцинную композицию, имеющую по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению; причем указанная вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки или дополнительно содержит индикатор наличия антигенного компонента.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения упаковка представляет собой блистерную упаковку.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения упаковка представляет собой стерильный шприц.
Настоящее изобретение относится также к стерильному шприцу, включающему в себя компактно изготовленную вакцинную композицию; причем вакцинная композиция содержит по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения компактно изготовленная вакцинная композиция в стерильном шприце представляет собой прессованную композицию.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения прессованная вакцинная композиция в стерильном шприце имеет форму твердой таблетки.
Настоящее изобретение относится также к способу иммунизации субъекта против болезни, который включает в себя добавление разбавителя в стерильный шприц, содержащий компактно изготовленную вакцинную композицию; причем вакцинная композиция включает в себя по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению; или компактно изготовленная вакцинная композиция в стерильном шприце дополнительно характеризуется как прессованная композиция, или прессованная композиция в стерильном шприце имеет форму твердой таблетки, так, чтобы в шприце получать раствор, и введение полученного раствора субъекту.
Растворы, которые получаются после растворения вакцинной композиции согласно настоящему изобретению, можно вводить любыми удобными способами. В способе иммунизации субъекта против болезни согласно настоящему изобретению можно применять ряд способов для введения жидкого раствора, полученного из вакцинной композиции. Примерами способов введения являются внутримышечная инъекция, подкожная инъекция, внутривенная инъекция, интраперитонеальная инъекция, глазные капли, с питьем, аэрозоль или назальный спрей. В случае, когда животное, которого иммунизируют, является птицей, указанная птица может быть недавно вылупившимся птенцом (т.е. около одного дня после вылупления), подростком или взрослой птицей. Вакцина согласно настоящему изобретению может быть пригодной для введения птицам in ovo, как описано в патенте США №4458630, выданном Sharma.
Под высушенной замораживанием (лиофилизированной) предварительно оттитрованной вакцинной композицией согласно настоящему изобретению понимают препарат, составленный по меньшей мере из одного лиофилизированного предварительно оттитрованного вакцинного компонента, наполнителей и, необязательно, вспомогательных агентов, которые компактно изготовлены или спрессованы в плотную форму.
Используемый в настоящем документе термин "плотная" относится к вакцинной композиции, имеющей плотность более 1,0 г/см3. Обычно плотность вакцинной композиции будет более 1,5 г/см3. В типичном случае пределы плотности вакцинной композиции будут составлять приблизительно от 1,5 г/см3 до 2,5 г/см3.
Вакцинная композиция может быть компактно изготовленной, прессованной или иметь форму твердой таблетки.
Используемый в настоящем документе термин "компактная" относится к вакцинной композиции, имеющей плотность более 1,0 г/см3, но не имеющей измеримой твердости в единицах Strong-Cobb (SCU) и испытанной на твердость на аппарате для определения твердости таблеток ERWEKA Tablet Hardness Tester Model TBH20.
Используемый в настоящем документе термин "прессованная" относится к вакцинной композиции, имеющей твердость по меньшей мере 2,0 SCU, а термин "твердая таблетка" относится к вакцинной композиции в форме таблетки или другой плотной формы, имеющей твердость по меньшей мере 3,0 SCU.
Плотно изготовленную, прессованную вакцинную композицию или твердые таблетки вакцинной композиции можно изготавливать на автоматизированном аппарате Manesty F3 Single Punch 12 mm Flat Beveled или с помощью стандартных 6 мм вогнутых штампов.
Вакцинную композицию в форме твердой таблетки изготавливали под давлением максимум 4 тонны. Таблетки испытывали на твердость на аппарате для определения твердости таблеток ERWEKA Tablet Hardness Tester Model TBH20, как описано выше, и было установлено, что все они имеют твердость более 3,0 SCU.
Под такой "таблеткой" обычно понимают классическую таблетку, связанную с терапевтическими агентами. Однако понятно, что под такое определение подходит также любая компактно изготовленная или прессованная плотная форма, включая те из них, которые менее часто используются в фармацевтической области. Например, большие "брикеты" будут удобны, если конечное применение требует большого объема материала.
Понятно, что препарат, который распадается или растворяется в разбавителе "полностью" или "быстро", представляет собой препарат, который способен к этому в чистой воде, даже если предусмотрено использование не чистой воды, а раствора, например физиологического раствора, или неводного носителя.
Под "полным растворением" подразумевается, что не остается нерастворенного растворимого компонента. Под "быстрым распадом или растворением" подразумевается, что распад или растворение является полным в течение приблизительно нескольких минут или менее, когда для малого объема прессованной лиофилизированной вакцинной композиции используется большой объем воды, например 100 мл воды на 400 мг шипучую таблетку. Указанное время возрастает, когда объемы разбавителя соответствующим образом уменьшаются. Таким образом, для одной и той же таблетки может потребоваться 70 секунд при объеме воды 10 мл и 80 секунд при объеме воды 2 мл.
Время распада или растворения, упомянутое выше, представляет собой время, которое требуется для растворения или распада таблетки при ее помещении в отмеренное количество воды при комнатной температуре и перемешивании.
Под "стабильной" подразумевается, что композиции согласно настоящему изобретению будут сохранять свою (потенциальную) иммунизирующую способность во время изготовления и в течение времени, необходимого для хранения коммерческой вакцины.
Как будет показано со ссылкой на следующие примеры, вакцинная композиция и способ иммунизации согласно настоящему изобретению имеет многочисленные преимущества, как описано в настоящем документе.
Способ согласно настоящему изобретению в общих чертах проиллюстрирован с помощью следующих примеров, касающихся изготовления вакцинной композиции, содержащей 1000 доз вакцинного компонента. Раствор вакцинного компонента лиофилизируют на поддонах. Высушенный материал распыляют. Определяют титр однородно перемешанного образца после лиофилизации, когда лиофилизат хранят в атмосфере азота в плотно закрытом контейнере при -20°С. Если титр лиофилизированного материала определяют как 625 доз на 100 мг, достаточно отмерить 160 мг указанного материала на прессованный вакцинный препарат, чтобы точно получить требующийся титр. Указанный материал затем смешивают с необязательными и/или функциональными вспомогательными агентами, и препарат прессуют или таблетируют. Прессованные лиофилизированные вакцинные препараты затем можно упаковывать любым способом, известным специалистам и/или описанным в настоящем документе.
Термин "наполнитель" является общим термином для разбавителей или носителей, которые используются при составлении вакцинной композиции. Наполнители могут включать в себя разбавители или наполнители, связывающие агенты или агенты, придающие клейкость, агенты, способствующие растворению, смазывающие агенты, агенты, препятствующие прилипанию, агенты, обеспечивающие скольжение или агенты, способствующие текучести, красители, корригенты, подсластители и адсорбенты.
Конкретно, наполнители для таблеток представляют собой вещества, которые составляют массу таблетки и главным образом действуют как носитель. Обычные наполнители для таблеток включают в себя, без ограничения, сульфат кальция, фосфат кальция, карбонат кальция, крахмал, модифицированные крахмалы (карбоксиметилкрахмал и т.п.), микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, сахарозу, декстрозу, маннит и сорбит.
Содержание наполнителя для таблеток составляет приблизительно от 0% до 90% от массы таблетки.
Связывающие агенты действуют как "клей", который удерживает порошки вместе для образования гранул. Связывающие агенты включают в себя, без ограничения, натуральные полимеры, такие как крахмалы или аравийские камеди, трагакант и желатин, или синтетические полимеры, такие как ПВП или метил-, этил- и гидроксипропилцеллюлоза.
Содержание связующего агента составляет приблизительно от 0% до 20% от массы композиции.
Агенты, способствующие растворению, ускоряют растворение вакцинной композиции. Обычные примеры включают в себя, без ограничения, шипучие агенты, разрыхлители, поверхностно-активные агенты и солюбилизаторы.
Разрыхлители вызывают распад прессованных таблеток. Обычные примеры включают в себя, без ограничения, крахмал, микрокристаллическую целлюлозу, очищенный шерстяной крахмал, альгиновую кислоту, гликолят натрий-крахмала, гуаровую камедь, поперечно связанный поливинилпирролидон (ПВП), ионообменную смолу и целлюлозы, такие как метил-, натрий-кроскармеллоза, натрий-карбоксиметили- и гидроксипропилметил-.
Содержание агента, способствующего растворению, составляет приблизительно от 1% до 95% от массы композиции.
Смазывающие агенты уменьшают трение между материалом, подвергаемым прессованию, и стенкой пресс-формы по время прессования и выброса. Большинство смазывающих агентов не растворяется в воде; они включают в себя стеараты (магния, кальция и натрия), стеариновую кислоту, тальк и воски. Водорастворимые смазывающие агенты включают в себя ПЭГ, бензоат натрия, олеат натрия, ацетат натрия, лаурилсульфат натрия и лаурилсульфат магния.
Содержание смазывающего агента составляет приблизительно от 0% до 5% от массы композиции.
Красители добавляют для облегчения идентификации типов вакцинных композиций, например, в форме таблеток, для эстетических и функциональных целей, например, в качестве примера, но не для ограничения настоящего изобретения, такие красители, которые описаны в примерах A-D патента Израиля №46189.
Содержание красителя составляет приблизительно <1% композиции.
Вакцинные композиции согласно настоящему изобретению можно таблетировать в соответствии со способами, известными специалистам, такими, которые описаны в Pharmaceuticals Dosage Forms, Tablets, 2nd Ed., 1989, Vols 1, 2, 3, Editors H.A.Lieberman, L.Lachman, J.B.Schwarts.
В предпочтительном варианте осуществления композиция согласно настоящему изобретению представляет собой твердую таблетку, содержащую в качестве агента, способствующего растворению, шипучий агент. Специалистам понятно, что шипучая таблетка должна содержать основной компонент и кислотный компонент, такие как шипучая пара, так, чтобы при растворении наблюдалась соответствующая реакция с выделением диоксида углерода и угольной кислоты. Подходящие шипучие компоненты включают в себя карбонатное семейство основных соединений и неорганические или органические кислотные соединения.
Среди карбонатного семейства основных соединений предпочтительными шипучими агентами для применения в композициях согласно настоящему изобретению являются: карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат глицина, карбонат калия, бикарбонат калия, дигидроцитрат калия и карбонат кальция. Наиболее предпочтительным основным соединением является бикарбонат натрия.
Предпочтительными кислотными агентами для применения в композициях согласно настоящему изобретению являются лимонная кислота, адипиновая кислота, винная кислота, малеиновая кислота, борная кислота, бензойная кислота, гидроксибензойная кислота, метоксибензойная кислота, миндальная кислота, малоновая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, глутаровая кислота, аспарагиновая кислота, хлористоводородная кислота, щавелевая кислота, салициловая кислота, янтарная кислота и уксусная кислота. Наиболее предпочтительным кислотным шипучим компонентом является лимонная кислота.
Помимо основных и кислотных ингредиентов шипучей таблетки, описанных выше, таблеточная композиция согласно настоящему изобретению может содержать также другие обычно применяемые наполнители.
Таблеточные композиции согласно настоящему изобретению получают с помощью процедур таблетирования, известных специалистам. Обычно процедуры таблетирования, используемые в настоящем изобретении, можно суммировать следующим образом: ингредиенты просеивают, смешивают и непосредственно прессуют в таблетки нужного веса, размера и твердости на таблеточном прессе MANESTY F3.
Шипучие таблеточные композиции согласно настоящему изобретению можно растворять в обычной воде или простом физиологическом растворе.
Антигенные вакцинные компоненты представляют собой такие компоненты, которые специфичным образом запускают иммунный ответ против антигена или антигенов, из которых получены вакцинные компоненты. Указанные компоненты могут иметь происхождение от одного вируса или микроорганизма, включая рекомбинанты, например антигенный липополисахарид и антигенный белок, или, например, два разных антигенных белка. Они могут также включать в себя антигенные части белка или полисахарида. Указанные компоненты обычно называют субъединицами. В некоторых случаях вакцинный компонент включает в себя цельный вирус или микроорганизм, включая рекомбинанты. Вакцинный компонент может представлять собой, например, бактерии или живую аттенуированную бактерию или вирус, инактивированную бактерию или вирус или убитую бактерию или вирус, включая рекомбинант и иным способом модифицированные организмы. Предпочтительно, вакцинный компонент представляет собой живую (модифицированную невирулентную или частично вирулентную, включая рекомбинант) бактерию или вирус. Примеры включают в себя, без ограничения, бактерию рода Salmonella, вирус ньюкаслской болезни, вирус инфекционной болезни бурсы (Гумборо), вирус инфекционного бронхита, вирус болезни Ауески или вакцину спор возбудителя сибирской язвы.
Комбинированные вакцины представляют собой вакцины, содержащие различные вакцинные компоненты. Комбинированные вакцины могут включать в себя также антигенные компоненты, полученные из двух или более различных вирусов или микроорганизмов.
Более сложные комбинации также являются возможными. Таким образом, вакцины одного из типов, описанных выше, а также их смеси называются комбинированными вакцинами. Они также могут содержать любой из известных адъювантов.
Под "упаковкой" подразумевается любая упаковка, пригодная для хранения стабильного прессованного вакцинного препарата.
Упаковка может, например, представлять собой, без ограничения, стеклянный или пластиковый (например, из полиэтилена высокой плотности) контейнер, который обычно используют для упаковки и хранения таблеток. Добавление стабильного прессованного лиофилизированного вакцинного препарата к разбавителю для однородного растворения препарата должно быть достаточным, чтобы сделать вакцину готовой к применению. Другой формой упаковки для прессованных лиофилизированных вакцинных препаратов согласно настоящему изобретению является блистерная упаковка. Одним примером блистерной упаковки являются пластиковые листы с рядами ямок (карманов), которые содержат препарат и запечатаны горячим способом алюминиевой фольгой, предпочтительно под сухим азотом. Другой разновидностью блистерной упаковки, пригодной для чувствительных продуктов, является так называемый алюминий/алюминиевый блистер, в которых как ямки, так и их покрытия основаны на алюминии или алюминиевых ламинатах с различными пластиками. Это поможет отказаться от использования дорогих и требующих больших пространств стеклянных флаконов, которые обычно используются для упаковки и хранения вакцин, что окончательному потребителю совершенно не нужно.
Настоящее изобретение делает возможным добавление одной или более прессованных лиофилизированных вакцинных композиций непосредственно из блистерной упаковки в сосуд с водой, который предназначен для питья воды или для использования в системе, распыляющей аэрозоль, чтобы гарантировать успешную вакцинацию. Эти действия обычно выполняют на месте, например в курятнике. Ветеринарную вакцинацию можно выполнять также путем окуривания, распыления через вентиляционную систему, уколов, опрыскивания всего тела или закапывания глазных капель. Вакцинный раствор, полученный подобным образом, альтернативно может быть использован для иммунизации эмбрионов in ovo, как описано в патентах США №№5397569 и 5871748.
Понятно, что любое устройство, которое можно использовать для хранения прессованных твердых веществ, может быть использовано для целей настоящего изобретения. Разбавителем может служить простая вода, или, с другой стороны, он может представлять собой сложную смесь буферов и адъювантов. Это будет зависеть главным образом от того, какие вспомогательные агенты добавлены в раствор до лиофилизации или в препарат до прессования.
В результате известных способов лиофилизации во флаконе получают лепешку, включающую в себя вакцинный компонент или компоненты. Указанный способ требует больших пространств и затрат времени, как отмечалось ранее. Если антигенный вакцинный компонент или компоненты лиофилизируют на поддонах, содержащих раствор, то во время процесса в аппарате для лиофилизации поверхность холодных пластин используется целиком. Кроме того, при коллапсе или если возникает любая другая проблема в процессе лиофилизации, материал можно легко восстановить. Это невозможно, если материалом до лиофилизации предварительно наполнены стеклянные флаконы. Кроме того, поскольку в этой части процесса не используются флаконы, занимающие определенную высоту, холодные пластины можно помещать в стеллажи с высокой плотностью. В результате пропускная способность аппаратов для лиофилизации значительно возрастает и практически ограничивается только мощностью конденсера. Как следствие, для целей настоящего изобретения можно использовать значительно меньшие по размерам аппараты для лиофилизации, чтобы получить тот же выход, что и при использовании флаконов в значительно больших по размерам аппаратах для лиофилизации.
Таким образом, в одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинную композицию прессуют из стерильного лиофилизированного антигенного материала, который был высушен на поддонах, а затем измельчен в порошок и смешан со стерильными добавками, способствующими таблетированию и конечному растворению. Стерильную вакцинную композицию затем упаковывают под сухим азотом в стерильную блистерную упаковку, имеющую высокий барьер для проникновения влаги и газа.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения лиофилизированный материал представляет собой живой аттенуированный вирус.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения смесь, включающую в себя комбинацию предварительно высушенных вирусных компонентов, прессуют в единый препарат вместе с добавками, способствующими растворению, и, необязательно, адъювантами, нужными для инокуляции.
Если требуется комбинированная вакцина, преимущества настоящего изобретения выражены еще больше. Достаточно просто добавить достаточное количество предварительно оттитрованного лиофилизата каждого типа антигенного вакцинного компонента в препарат до прессования, чтобы получить комбинированную вакцину, содержащую каждый компонент в очень точной дозе.
В то же время настоящее изобретение предлагает решение проблемы больших мощностей, которые требуются для хранения всех возможных вариантов, например, трех или четырехкомпонентной вакцины.
Вместо смешивания различных компонентов до лиофилизации, как это может потребоваться для лиофилизации комбинированных вакцин, каждый компонент лиофилизируют по отдельности. Таким образом, различные компоненты можно хранить по отдельности. Когда это необходимо, можно легко изготовить любую нужную комбинацию путем смешивания соответствующего количества лиофилизированного материала каждого нужного компонента в один препарат, как описано в настоящем документе, а затем прессования и упаковки смеси, как описано.
Это позволяет, например, в случае 4-компонентной комбинированной вакцины хранить только четыре контейнера, каждый из которых содержит только лиофилизированный материал одного конкретного вакцинного типа, что делает возможным составление любого препарата моновалентной или комбинированной вакцины, который потребуется. Известные ранее способы потребовали бы 15 различных контейнеров, каждый из которых содержит предварительно изготовленный компонент или смесь.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения контейнер для вакцины включает в себя стерильную блистерную упаковку, содержащую твердые формы, такие как стерильные таблетки, прессованные из лиофилизированного материала одного или более вакцинных компонентов, смешанных со стерильным агентом, способствующим растворению, в виде шипучей пары (например, бикарбоната натрия и лимонной кислоты), стерильным связывающим агентом (например, поливинилпирролидоном) и стерильным смазывающим агентом (например, стеарилфумаратом натрия, стеаратом магния). Указанные одно- или многокомпонентные препараты затем можно использовать для легкого приготовления in situ точного вакцинного раствора с известным титром. Упомянутые выше агенты являются примерами агента, способствующего растворению, связывающего агента и смазывающего агента, и не должны приниматься как ограничение вакцинной композиции согласно настоящему изобретению.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция и способ иммунизации включают в себя вакцинную композицию с компонентами, полученными из двух или более антигенных компонентов. Вакцина, основанная на компонентах из множества антигенных компонентов, имеет то преимущество, что однократного введения такой вакцины достаточно для обеспечения защиты от множества болезней. Следует понимать, что для каждого вируса или микроорганизма может быть включен любой из различных антигенных вакцинных компонентов.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения антигенные компоненты для каждой вакцины можно смешивать в точных соотношениях, необходимых для образования комплекса, требующегося для иммунизации in ovo, такого как живые вакцины против болезни Марека, NDV и Gumboro. Изготовление многокомпонентных вакцинных препаратов для иммунизации in ovo, таким образом, также является возможным. Лекарственную форму для указанной комбинации можно изготовить с помощью настоящего изобретения путем прессования смеси лиофилизированных антигенных компонентов для каждой болезни и требующихся антител вместе в агентами, облегчающими таблетирование. Подобный препарат затем можно использовать для получения нужного вирусного иммунизирующего комплекса in situ путем растворения препарата в требующемся носителе и в специально оговоренных условиях непосредственно перед инокуляцией in ovo.
Обычно контейнер для вакцины может содержать от 1 до 10000 доз вакцины или более. Контейнеры, содержащие одну дозу, являются распространенным средством для индивидуальной вакцинации как человека, так и животных.
Вакцину против полиовируса человека, человеческую живую лиофилизированную вакцину против брюшного тифа или вакцину против собачьего парвовируса обычно изготавливают в виде однократной дозы. Следует понимать, что для однократной дозы вакцины полностью применимы сходные процедуры изготовления, которые описаны для вакцин, содержащих множество доз.
Для вакцинации только что вылупившихся цыплят в больших курятниках общей практикой является использование контейнера, содержащего 10000 доз вакцины, для вакцинации против вируса инфекционного бронхита или NDV. Для вакцинации на больших фермах таких животных, как крупный рогатый скот, против, например, вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота или вируса парагриппа широко применяют контейнеры, содержащие 10 доз вакцины.
Одним из преимуществ вакцинных композиций, изготовленный согласно настоящему изобретению, является то, что агенты, способствующие растворению, которые могут быть несовместимыми в лиофилизированном растворе, можно включать после лиофилизации. Это ускоряет процедуру введения. Неожиданно было установлено, что использование лимонной кислоты в качестве части шипучей пары, которая, как ожидалось, будет вредно действовать на препараты живого аттенуированного вируса, не оказывает значимого влияния на титры.
Также должно быть понятно, что целостность влагонепроницаемого барьера в контейнере для композиций указанного типа имеет большое значение, и следует предпринять определенные шаги, чтобы гарантировать создание эффективного влагонепроницаемого барьера в упаковке. Это особенно важно при использовании блистерных упаковок, а также когда выбранные вспомогательные агенты во влажном состоянии являются потенциально дестабилизирующими, как, например, в случае с лимонной кислотой.
Настоящее изобретение относится также к способу иммунизации субъекта против болезни, включающему в себя этапы растворения вакцинной композиции в разбавителе с получением раствора, причем вакцинная композиция содержит по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный агент, способствующий растворению, где указанная вакцинная композиция имеет форму твердой таблетки и обеспечивает защиту против указанной болезни; и введения полученного раствора субъекту в количестве, эффективном для иммунизации субъекта против болезни.
Альтернативно, лиофилизаты могут включать в себя антигенные вакцинные компоненты, которые были получены из двух или более вирусов или микроорганизмов.
Помимо этого, настоящее изобретение относится к вакцинной композиции, в которой вакцинная композиция и разбавитель содержатся в упаковке вместе. Такой вариант осуществления настоящего изобретения позволяет осуществлять такой способ иммунизации, при котором этап растворения для получения жидкой вакцины для введения может происходить in situ в полевых условиях.
Следует понимать, что вакцинной упаковкой или упаковкой, содержащей прессованную лиофилизированную стабильную вакцинную композицию, может быть любая подходящая упаковка для вакцины. В простой форме вакцинная упаковка включает в себя вакцинный контейнер, включающий в себя вакцинные компоненты, упакованный вместе с инструкциями в коробку. В более сложной форме вакцинной упаковки вакцинный контейнер может дополнительно включать в себя разбавитель и шприц. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения прессованную лиофилизированную вакцину упаковывают в стерильных условиях в герметично закрытый шприц таким образом, что растворение вакцины может происходить внутри стерильного шприца. В этом случае размер партии предварительно заполненных шприцев не зависит от пространства, которое занимают шприцы в аппарате для лиофилизации.
Следующие примеры иллюстрируют изготовление и эффективность вакцинной композиции согласно настоящему изобретению, которую используют для иммунизации субъекта против различных инфекционных болезней. Также представлена оценка стабильности с анализом титров прессованной лиофилизированной таблетированной формы для различных вакцинных композиций.
Примеры представлены для дополнительной иллюстрации и объяснения настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие с какой бы то ни было точки зрения. Если не указано иное, в примерах, описании и формуле изобретения все части и процентные доли представлены в единицах массы. Величины температур представлены в градусах Цельсия.
ПРИМЕР 1
1.1 Изготовление таблеток, содержащих штамм VH живого аттенуированного вируса ньюкаслской болезни
В оплодотворенные, не зараженные специфическими патогенами (SPF) яйца инокулировали NDV и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов NDV в яйцах.
Аллантоисную амниотическую жидкость (AAF) собирали и очищали центрифугированием при 4000 g в течение 20 мин.
Лиофилизацию во флаконах осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
Таблетки изготавливали следующим образом:
К 13,2 г распыленного лиофилизата добавляли:
60 г бикарбоната натрия
42 г безводной лимонной кислоты
4,2 г поливинилпирролидона К-30
0,3 г стеарата магния
Ингредиенты затем смешивали и прессовали таблетки массой 400 мг.
Каждая из полученных таблеток, изготовленных указанным способом, содержала 44 мг лиофилизата.
1.2 Анализ таблеток
Титр в SPF-яйцах при использовании таблеток, выбранных слепым способом, оценивали и сравнивали с приведенным количеством лиофилизата во флаконах.
В случае, когда одну таблетку добавляли к 100 мл воды, полное растворение происходило в течение периода времени менее минуты, т.е. невооруженным глазом не было заметно никаких следов твердого вещества.
В случае, когда одну таблетку добавляли к 10 мл воды, полное растворение происходило в течение 70 секунд.
В случае, когда одну таблетку добавляли к 2 мл воды, полное растворение происходило в течение 80 секунд.
Хотя в 1 мл воды и достигалось полное растворение, полагают, что шипучий характер этой таблетки не влиял на полное растворение, которое занимало приблизительно 4 минуты.
1.3 Упаковка и стабильность
Таблетки упаковывали в блистерные упаковки из поливинилхлорида (ПВХ), изучали их стабильность при 37°С и установили, что они были относительно стабильными через 5, 7 и 9 дней.
Хранение при 4°С не оказывало регистрируемых изменений в титре и цвете таблеток через девять месяцев.
Титры представлены в единицах EID50 на таблетку или флакон, из расчета на такое же количество активного материала.
1.4 Тест на эффективность таблетированной вакцины против NDV-VH у цыплят
HI = единицы ингибирования гемагглютинации
А: таблетку NDV-VH растворяли в 20 мл стерильной дистиллированной воды и в качестве иммунизирующей дозы для каждого из 18 цыплят (возраст 4 недели, содержание в изоляторах) использовали 0,02 мл путем закапывания в глаза.
В: Другую группу цыплят вакцинировали сходным образом таблетированной вакциной против VH, растворенной в 40 мл стерильной дистиллированной воды.
С: Флакон NDV-VH растворяли в стерильной дистиллированной воде с получением той же концентрации вируса, что и в А.
D: Невакцинированный контроль.
Через три недели после вакцинации у птиц брали кровь для определения титра антител с помощью теста на ингибирование гемагглютинации (HI) и все группы подвергали контрольному заражению висцеротропным велогенным NDV путем в/м инъекции в дозе 106,3 EID50 на птицу в ветеринарном институте Кимрона (ветеринарная служба Израиля).
Результаты испытаний показывают, что все испытанные вакцинные препараты обеспечивали цыплятам хорошую защиту.
ПРИМЕР 2
2.1 Изготовление таблеток, включающих NDV-VH
В оплодотворенные SPF-яйца инокулировали NDV и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов NDV в яйцах.
AAF собирали и очищали центрифугированием при 4000 g в течение 20 мин. Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
Вирус NDV-VH лиофилизировали на поддоне. Высушенный порошок герметично запечатывали в условиях низкой влажности в стерильный двойной мешок из полипропилена и хранили при -20°С. Изготавливали шипучие таблетки, содержащие возрастающие количества высушенного порошка. Таблетки изготавливали согласно процедуре, описанной в примере 1.
2.2 Анализ таблеток
Титры NDV-VH (EID50) в таблетках получали титрованием в SPF-яйцах.
Были получены удовлетворительные линейные зависимости между концентрациями активного материала и титрами вируса.
В случае, когда одну таблетку добавляли к 100 мл воды, полное растворение происходило в течение периода времени менее минуты, т.е. невооруженным глазом не было заметно никаких следов твердого вещества.
2.3 Упаковка и стабильность
Таблетки помещали в шприцы, которые упаковывали в пакетики из алюминиевого ламината. Раствор для инъекций получали путем всасывания разбавителя для инъекций в шприц, после чего следовало полное растворение таблетки. Полученные растворы для инъекций использовали как непосредственно для индивидуальной вакцинации, так и альтернативно, для множественной вакцинации, после дополнительного разведения в контейнере большего размера. В этом случае применяли автоматический шприц.
ПРИМЕР 3
3.1 Изготовление таблеток, включающих в себя штамм NDV-VH, содержащих антитела против вируса ньюкаслской болезни (NDA) для вакцинации in ovo
В оплодотворенные SPF-яйца инокулировали NDV и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах.
AAF собирали и очищали путем центрифугирования при 4000 g в течение 20 мин. Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам, а лиофилизированный материал титровали. Определяли нужные количества NDV и NDA.
Таблетки изготавливали следующим образом:
К 7,0 г распыленного лиофилизата добавляли:
0,36 г лиофилизированной гипериммунной в отношении NDV сыворотки цыплят (NDA)
13 г бикарбоната натрия
9,1 г безводной лимонной кислоты
0,9 г поливинилпирролидона К-30
0,07 г стеарата магния
Ингредиенты затем смешивали и прессовали таблетки массой 500 мг. Каждая из полученных таблеток, изготовленных указанным способом, содержала 115 мг лиофилизированного вирусного препарата.
3.2 Анализ таблеток
В случае, когда одну таблетку добавляли к 100 мл воды, полное растворение происходило в течение 2,5 минут, т.е. невооруженным глазом не было заметно никаких следов твердого вещества.
3.3 Упаковка
Таблетки упаковывали в блистерные упаковки из ПВХ.
3.4 Тест на эффективность таблетированной вакцины против NDV-VH с NDA in ovo
In ovo вакцинация коммерческих бройлерных цыплят NDV-VH+NDA. Контрольное заражение вакцинированных in ovo цыплят осуществляли через 2 и 4 недели после вылупления. Эмбрионы вакцинировали на товарной ферме с помощью аппарата Inovoject (Embrex U.S.A.) на 18 день инкубации. Таблетку растворяли в 200 мл разбавителя для вакцины Марека и в каждое яйцо инъецировали по 0,05 мл. Как вакцинированных, так и невакцинированных цыплят содержали в изоляторах для избежания неспецифической контаминации вирусами NDV.
У 2- и 4-недельных цыплят брали кровь для выявления антител с помощью теста HI и обе группы подвергали контрольному заражению висцеротропным велогенным NDV путем в/м инъекции в дозе 105,3 EID50 на птицу в ветеринарном институте Кимрона (ветеринарная служба Израиля). Результаты показывают, что цыплятам через 4 недели после вылупления была обеспечена хорошая защита.
ПРИМЕР 4
4.1 Изготовление таблеток, включающих в себя живой аттенуированный вирус болезни Гумборо (далее "MB")
В SPF-яйца инокулировали вирус болезни Гумборо (MB)и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах.
Эмбрионы и хорионаллантоисные оболочки собирали и вирус экстрагировали путем гомогенизации.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
Таблетки изготавливали следующим образом:
К 10,0 г распыленного лиофилизата добавляли:
22,4 г бикарбоната натрия
15,7 г безводной лимонной кислоты
1,7 г поливинилпирролидона К-30
0,1 г стеарата магния
Ингредиенты затем смешивали и прессовали таблетки массой 350 мг.
Каждая из полученных таблеток, изготовленных указанным способом, содержала 70 мг лиофилизата.
4.2 Анализ таблеток
Титр при использовании таблеток, выбранных слепым способом, оценивали как 106,6 EID50/на таблетку.
(102,5 EID50 рассматривали как вакцинирующую дозу).
В случае, когда одну таблетку добавляли к 100 мл воды, полное растворение происходило в течение периода времени менее минуты, т.е. невооруженным глазом не было заметно никаких следов твердого вещества.
Титры вируса в шипучих таблетках и во флаконах
4.3 Упаковка и стабильность
Таблетки упаковывали в блистерные упаковки из ПВХ и изучали их стабильность при 37°С.
ПРИМЕР 5
5.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вакцинный вирус оспы птиц
В SPF-яйца инокулировали вирус оспы птиц и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах.
Эмбрионы и хорионаллантоисные оболочки собирали и вирус экстрагировали путем гомогенизации.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата.
5.2 Анализ таблеток
Титр каждой таблетки оценивали на SPF-яйцах и обнаружили, что он составляет 106,25 EID50 /на таблетку. В случае, когда одну таблетку добавляли к 100 мл воды, полное растворение происходило через две минуты, т.е. невооруженным глазом не было заметно никаких следов твердого вещества.
ПРИМЕР 6
6.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вирус ларинготрахеита (птиц)
В SPF-яйца инокулировали вакцинный вирус ларинготрахеита птиц и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах. Эмбрионы и хорионаллантоисные оболочки собирали и вирус экстрагировали путем гомогенизации.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам. 700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата. Титр каждой таблетки оценивали на SPF-яйцах и обнаружили, что он составляет 105,53 EID50.
ПРИМЕР 7
7.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вирус инфекционного бронхита домашней птицы
В SPF-яйца инокулировали вирус инфекционного бронхита домашней птицы и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах. Эмбрионы и хорионаллантоисные оболочки собирали и вирус экстрагировали путем гомогенизации.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата.
7.2 Анализ таблеток
Титр каждой таблетки оценивали на SPF-яйцах и обнаружили, что он составляет 106,15 EID5о/на таблетку.
ПРИМЕР 8
8.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вирус Гумборо-Винтерфильда (птиц)
В SPF-яйца инокулировали вирус болезни Гумборо-Винтерфильда (птиц) и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах.
Эмбрионы и хорионаллантоисные оболочки собирали и вирус экстрагировали путем гомогенизации.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата.
8.2 Анализ таблеток
Титр каждой таблетки оценивали на SPF-яйцах и обнаружили, что он составляет 106,28 EID50/на таблетку.
ПРИМЕР 9
9.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вирус инфекционного бронхита (IB-HI20)+NDV-VH (птиц)
В SPF-яйца инокулировали вирус IB-HI20 или вирус болезни NDV-VH и инкубировали согласно известным способам для размножения вирусов в яйцах.
AAF собирали и центрифугировали при 4000/g в течение 20 мин.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата.
9.2 Анализ таблеток
В случае, когда одну таблетку добавляли к 100 мл воды, полное растворение происходило в течение 2 минут, т.е. невооруженным глазом не было заметно никаких следов твердого вещества.
Титр каждой таблетки оценивали на SPF-яйцах и обнаружили, что он составляет 105,80 и 109,60 EID50/на таблетку для IB-HI20 и NDV-VH (птиц) соответственно.
Пример 10
10.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вирус оспы овец
Размножение вирусов осуществляли в клетках Vero, выращенных на пластиковых валиках.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата.
10.2 Анализ таблеток
Титр каждой таблетки оценивали как 105,85 TCID50/на таблетку. Вакцинный вирус оспы овец титровали на клетках Vero.
ПРИМЕР 11
11.1 Изготовление шипучих таблеток, содержащих живой вакцинный вирус Rinderpest (крупного рогатого скота)
Размножение вирусов осуществляли в клетках Vero, выращенных на пластиковых валиках.
Лиофилизацию осуществляли в полном объеме согласно известным обычным процедурам.
700 мг таблетки изготавливали практически так же, как описано в примере 1.
Каждая таблетка содержала 140 мг лиофилизата.
11.2 Анализ таблеток
Титр каждой таблетки оценивали как 104,1 TCID50/на таблетку. Вакцинный вирус Rinderpest титровали на клетках Vero.
11.3 Цветовое кодирование вакцинных композиций
Израильский патент №46189 описывает вирусную вакцину для домашней птицы с цветовым кодом, окрашенную различимым красителем, который является безопасным для живых тканей и который не наносит вреда жизнеспособности вирусов. Различным вакцинам присваивается цветовой код посредством различных различимых красителей. Подходящими красителями являются, например, амарантовый красный, тартразиновый желтый, индиго карминовый синий или смеси любых из указанных красителей, дающие различимые цветовые оттенки.
Процесс окрашивания различных типов вакцин (или кодирование цветом) в различные контрастные цвета полезен для избежания ошибок, которые могут совершать фермеры, когда вакцинируют свое поголовье домашней птицы не тем типом вакцины, которым они намеревались вакцинировать, подвергая таким образом свое незащищенное поголовье опасности заболевания, против которого они на самом деле намеревались иммунизировать птиц. Подобные ошибки обнаруживают обычно слишком поздно, если вообще обнаруживают, и во многих случаях это приводит к жалобам на вакцину, помимо серьезных финансовых потерь и вреда, наносимого хозяйству. Однако химические красители, которые сами по себе могут быть безопасными, тем не менее создают ряд проблем и опасностей, будучи объединены с вирусной вакциной.
Вакцинация домашней птицы предусматривает использование живых вирусных вакцин, при котором в конечном продукте содержится культура живых вирусов, и поскольку живые вирусы являются очень чувствительными и их легко повредить, возникает техническая проблема. Различные окрашивающие агенты и красители, как известно, являются химически активными и они могут вызывать химическое окисление или восстановление. Живые вирусы являются очень чувствительными к изменениям окружающей среды, таким как условия рН, температура, радиация, ионы различных металлов, и на них могут воздействовать химические агенты, с которыми они контактируют. Такие окрашивающие агенты, как метиленовый синий или фусциновый красный или анилиновые красители, могут быть токсичными для вирусов и, возможно, создавать проблемы с цыплятами или индюшками, которые будут получать их с инъекциями. Таким образом, необходимо было выбрать такие красители, которые были бы безопасными для использования в живых тканях и не вредили бы жизнеспособности вирусов, с которыми они контактируют. Для идентификации четырех наиболее популярных и важных вакцин, используемых в птицеводстве в настоящее время, были выбраны четыре цветовых оттенка, а именно красный цвет для идентификации вакцины против лентогенного штамма ньюкаслской болезни, или, как его называют в Израиле, "цыплячьего" штамма Комарова; желтый цвет для идентификации вакцины против штамма Комарова-Хайфы или "куриного" штамма ньюкаслской болезни; синий цвет для идентификации вакцины против ларинготрахеита и зеленый оттенок - для идентификации вакцины против оспы птиц.
Как описано в патенте Израиля №46189, испытывали различные концентрации указанных красителей, которые смешивали с вакциной во влажном состоянии до ее помещения в конечные контейнеры и до ее сушки (лиофилизации). Несколько тестов провели, чтобы убедиться, что указанные красители не нанесут вреда вакцине.
Различные серии окрашенных вакцин помещали для хранения в условиях холодильника и в других условиях и повторно титровали для верификации концентрации вируса. Параллельно со всеми испытаниями окрашенной вакцины изучали контроли в виде вакцины без добавления краски, в достаточном объеме. Окрашенные вакцины также испытывали непосредственно на живых птицах, чтобы посмотреть, какое действие они могут оказывать. Повторные испытания всех четырех типов вакцин и четырех красителей, которые использовались в указанных экспериментах, показали отсутствие вредного действия на результаты титрования вирусов. Испытания с инъекциями живым птицам и применения вирусных вакцин другими путями, такими как через питьевую воду; методом укола через кожу (оспа птиц) и через вентиляционную систему (для вакцины против ларинготрахеита), показали, что краска не оказывала вредного действия на птиц, а в случае внутримышечной инъекции она рассасывалась из тканей и полностью исчезала через 36 часов. Патент Израиля №46189 описывает вакцины, которые испытывали в полевых условиях на нескольких стадах домашней птицы, которых вакцинировали указанными окрашенными вакцинами в возрасте от одного дня до возраста продажи. Этих птиц успешно продали, и никаких следов краски у них не наблюдалось.
Дальнейшие подробности изобретения, описанного в патенте Израиля №46189, легко понять в связи с описанием, представленным в следующих примерах, которые взяты из указанного патента и которые были выбраны только для целей иллюстрации с целью упростить для специалиста применение композиций для вакцин с цветовым кодом, и таким образом, указанные примеры не являются ограничениями для настоящего изобретения.
ПРИМЕР А
Краситель амарантовый красный подготавливали для объединения с "цыплячьей" вакциной против ньюкаслской болезни Vineland путем изготовления концентрированного раствора краски. Указанный концентрат содержал 145 граммов сухой порошкообразной краски, растворенной в 4 литрах дистиллированной воды. Концентрированный раствор красителя автоклавировали под давлением 20 фунтов/дюйм2 в течение 20 минут вскоре после приготовления и хранили в герметично закрытых стеклянных бутылях в темном месте. Концентрированный раствор краски добавляли в количестве 1,33% к конечной "цыплячьей" вакцине против ньюкаслской болезни Vineland.
Результаты титрования окрашенной вакцины по сравнению с неокрашенным контролем были следующими:
Титрование через 2 недели после лиофилизации:
Без краски 109,0 EID50/мл
С краской 109,3 "
Ускоренное титрование
Без краски 109,1 "
С краской 109,3 "
Титрование через 30 дней после лиофилизации:
Без краски 109,16 "
С краской 109,3 "
Титрование через 3 месяца после лиофилизации:
Без краски 108,86 "
С краской 109,3 "
Титрование через 6 месяцев после лиофилизации:
Только образец с краской 109,16 "
ПРИМЕР В
Краситель тартразиновый желтый подготавливали для объединения с вакциной "куриного" штамма против ньюкаслской болезни Vineland (мезогенный штамм Хайфа-Коморав) путем изготовления концентрированного раствора красителя. Указанный концентрат содержал 200 граммов сухой порошкообразной краски, растворенной в 3 литрах дистиллированной воды. Концентрированный раствор красителя автоклавировали под давлением 20 фунтов/дюйм2 в течение 20 минут вскоре после приготовления и хранили в герметично закрытых стеклянных бутылях в темном месте. Концентрированный раствор красителя добавляли в количестве 3% к конечной "куриной" вакцине против ньюкаслской болезни Vineland.
Результаты титрования окрашенной вакцины по сравнению с неокрашенным контролем были следующими:
Результаты титрования обычной вакцины:
109,4 EID50 на миллилитр
Результаты титрования образца с краской: 108,8
Титрование через 7 дней инкубации при 37°С:
Без краски 108,3 EID50/мл
С краской 108,8 "
Титрование через 39 дней после лиофилизации:
Без краски 108,66 "
С краской 108,9 "
Титрование через 93 дня после лиофилизации:
Без краски 108,66 "
С краской 108,66 "
7 1/2 месяцев после лиофилизации:
Без краски 108,53 "
С краской 108,76 "
ПРИМЕР С
Краситель индиго-карминовый синий подготавливали для объединения с вакциной против ларинготрахеита Vineland Injections путем изготовления концентрированного раствора краски.
Указанный концентрат содержал 200 граммов сухой порошкообразной краски, растворенной в 3 литрах дистиллированной воды. Концентрированный раствор красителя автоклавировали под давлением 20 фунтов/дюйм2 в течение 20 минут вскоре после приготовления и хранили в герметично закрытых стеклянных бутылях в темном месте. Концентрированный раствор красителя добавляли в количестве 3% к конечной вакцине Vineland Injections против ларинготрахеита.
Результаты титрования окрашенной вакцины по сравнению с неокрашенным контролем были следующими:
Титрование через 3 недели после лиофилизации:
Без краски 106,3 EID50/мл
С краской 106,16 "
Ускоренное титрование
Без краски 105,0 "
С краской 104,8 "
Титрование через 30 дней после лиофилизации:
Без краски 106,0 "
С краской 105,8 "
Титрование через 3 месяца после лиофилизации:
Без краски 105,66 "
С краской 105,5 "
Титрование через 7 месяцев после лиофилизации:
Без краски 105,5 "
С краской 105,6 "
(Этот достаточно необычный провал в титре как в окрашенных, так и в неокрашенных образцах и ускоренные серии показали снижение ускорения более чем на 1 логарифм, что указывает на возможное высокое содержание влаги в этой серии).
ПРИМЕР D
Краситель зеленого оттенка, закодированный как "Р" (рох - оспа) получали путем смешивания индиго-карминовой и тартразиновой красок и использовали для объединения с вакциной против оспы птиц Vineland. 100 граммов порошкообразной краски растворяли в 3 литрах дистиллированной воды.
Использовали ту же процедуру, что и в примерах №2 и №3, и раствор добавляли в количестве 3% к конечной вакцине против оспы птиц.
Результаты титрования окрашенной вакцины по сравнению с неокрашенным контролем были следующими:
7 дней после лиофилизации:
неокрашенный контроль: 105,5 EID50/мл
вакцина с краской: 105,5 " "
спустя 3 месяца
неокрашенный контроль: 105,4 EID50/мл
вакцина с краской: 105,5 " "
спустя 6 месяцев
неокрашенный контроль: 105,35 " "
вакцина с краской: 105,4 " "
9 месяцев после изготовления
неокрашенный контроль: 103,1 " "
вакцина с краской: 105,3 " "
Представленное выше описание служит для обучения специалистов практическому осуществлению настоящего изобретения и не предназначено для подробного описания всех его очевидных модификаций и вариаций, которые будут очевидны для опытных специалистов после прочтения настоящего описания. Все подобные очевидные модификации и вариации включены в объем настоящего изобретения, которое определено следующей формулой изобретения.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ СО СНИЖЕННЫМ ОБРАЗОВАНИЕМ ПЕНЫ | 2015 |
|
RU2731534C2 |
| СПОСОБ ИММУНИЗАЦИИ ПТИЦЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ БАКТЕРИЯМИ CLOSTRIDIUM | 2007 |
|
RU2409385C2 |
| КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ХИТОЗАН, ДЛЯ ГЛАЗНОГО ВВЕДЕНИЯ ВАКЦИНЫ (ВАКЦИН) ПТИЦАМ | 2009 |
|
RU2498818C2 |
| СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ВАКЦИНАЦИИ ДОМАШНЕЙ ПТИЦЫ | 2007 |
|
RU2561673C2 |
| КОМПОЗИЦИИ В ВИДЕ СУХОГО ПОРОШКА И СИСТЕМЫ ДЛЯ ВАКЦИНАЦИИ ДОМАШНЕЙ ПТИЦЫ | 2007 |
|
RU2450828C2 |
| ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ ВИРУСОВ ОТРЯДА Mononegavirales | 2007 |
|
RU2435857C2 |
| ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПТИЦЫ | 2010 |
|
RU2545530C2 |
| СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ ВАКЦИННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ СТИМУЛИРОВАНИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 2003 |
|
RU2339400C2 |
| РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВИРУСЫ БОЛЕЗНИ МАРЕКА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2014 |
|
RU2681889C2 |
| СУХИЕ КОМПОЗИЦИИ ВАКЦИН, СТАБИЛЬНЫЕ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ | 2014 |
|
RU2826263C2 |
Изобретение относится к области ветеринарии и касается стабильной спрессованной ветеринарной вакцинной композиции. Сущность изобретения заключается в спрессованной вакцинной композиции, содержащей лиофилизированный антигенный компонент и вспомогательный компонент, способствующий растворению, стерильный шприц, содержащий вакцинную композицию, упаковку, способ иммунизации ветеринарного животного и стабильную спрессованную вакцинную композицию, включающую второй лиофилизированный компонент, содержащий нейтрализующие антитела против лиофилизированного антигенного компонента. Преимущество изобретения заключается в повышении стабильности. 11 н. и 39 з.п. ф-лы.
(а) растворения вакцинной композиции по п. 1, которая обеспечивает защиту против указанной болезни, в разбавителе с образованием раствора и
(в) введения полученного раствора субъекту в количестве, эффективном для иммунизации субъекта против болезни.
(a) растворение вакцинной композиции по п. 1, обеспечивающей защиту от указанного заболевания, в разбавителе с образованием раствора и
(b) введение полученного раствора млекопитающему в количестве, эффективном для иммунизации млекопитающего против этого заболевания.
| Бесколесный шариковый ход для железнодорожных вагонов | 1917 |
|
SU97A1 |
| US 5897852 A, 27.04.1999 | |||
| US 5206219 A, 27.04.1993. | |||
