ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соли желчных кислот, которые представляют собой органические кислоты, образованные из холестерина, являются природными ионогенными детергентами, которые играют основную роль в абсорбции, переносе и секреции липидов. В химии желчных кислот стероидное кольцо соли желчной кислоты является кольцом пергидроциклопентанофенантреном, общее для всех пергидростероидов. Отличительные признаки желчных кислот включают насыщенное кольцо стерина с 19 атомами углерода, бета-ориентированный водород в положении 5, разветвленную, насыщенную боковую цепь с 5 атомами углерода, содержащую в качестве концевой группы карбоновую кислоту, и альфа-ориентированную гидроксильную группу в положении 3. Единственным заместителем, имеющимся у большинства природных желчных кислот, является гидроксильная группа. У большинства млекопитающих гидроксильные группы находятся в положениях 3, 6, 7 или 12.
Обычные желчные кислоты отличаются главным образом числом и ориентацией гидроксильных групп на кольце стерина. Термин первичные желчные кислоты относится к желчным кислотам, синтезированным de novo печенью. У человека первичные желчные кислоты включают холевую кислоту (3α,7α,12α-тригидрокси-5β-холановую кислоту) ("СА") и хенодезоксихолевую кислоту (3α,7α-дигидрокси-5β-холановую кислоту) ("CDCA"). При дегидроксилировании этих желчных кислот кишечными бактериями образуются более гидрофобные вторичные желчные кислоты, дезоксихолевая кислота (3α,12α-дигидрокси-5β-холановая кислота) ("DCA") и литохолевая кислота (3α-гидрокси-5β-холановая кислота) ("LCA"). Эти четыре желчные кислоты, СА, CDCA, DCA и LCA, обычно составляют более чем 99 процентов пула солей желчных кислот у человека. Вторичные желчные кислоты, которые были метаболизированы печенью, иногда обозначают как третичные желчные кислоты.
Кетожелчные кислоты образуются дополнительно в организме человека в результате последующего окисления гидроксильных групп желчных кислот, особенно 7-гидроксильной группы, бактериями толстой кишки. Однако кетожелчные кислоты быстро восстанавливаются печенью в соответствующие α- или β-гидроксижелчные кислоты. Например, соответствующей кетожелчной кислотой CDCA является 7-кетолитохолевая кислота и одним из ее продуктов восстановления с соответствующей β-гидроксижелчной кислотой является урсодезоксихолевая кислота (3α,7β-дигидрокси-5β-холановая кислота) ("UDCA"), третичная холевая кислота.
UDCA, основной компонент желчной кислоты, использовали для лечения и защиты от многих типов заболевания печени в течение незначительно более чем 70 лет в качестве основного фармацевтического агента. Ее медицинские использования включают растворение рентгенопрозрачных желчных камней, лечение билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С. В организме других видов млекопитающих желчные кислоты, содержащие 6β-гидроксильную группу, которые обнаруживают у крыс и мышей, известны как мурихолевая кислота; 6α-гидроксижелчные кислоты, продуцируемые в организме свиней, называют гиохолевой кислотой и гиодезоксихолевыми кислотами. 23-Гидроксижелчные кислоты водных млекопитающих известны как фоцехолевая и фоцедезоксихолевая кислоты.
В типичных случаях более чем 99 процентов встречающихся в природе солей желчных кислот, секретированных в желчь человека, являются конъюгированными. Конъюгатами являются желчные кислоты, у которых второй органический заместитель (например, глицин, таурин, глюкуронат, сульфат или редко другие заместители) присоединен к карбоновой кислоте боковой цепи или к одной из гидроксильных групп кольца через связь сложного эфира, простого эфира или амида. Следовательно, свойства ионизации конъюгированных желчных кислот с глицином или таурином определяются кислотностью глицинового или тауринового заместителя.
Мономеры свободных, неконъюгированных желчных кислот имеют величины рКа приблизительно 5,0. Однако величины рКа конъюгированных с глицином желчных кислот составляют в среднем 3,9 и рКа желчных кислот, конъюгированных с таурином, меньше, чем 1,0. Следовательно, результатом конъюгации является снижение значения рКа желчной кислоты, так что большая часть ее ионизируется при любом данном значении рН. Поскольку форма ионизированной соли более растворима в воде, чем форма протонированной кислоты, конъюгация повышает растворимость при низком значении рН. Соли свободных желчных кислот осаждаются из водного раствора при рН от 6,5 до 7. В противоположность этому, осаждение конъюгированной с глицином желчной кислоты имеет место только при рН, меньшем, чем 5. Конъюгированные с таурином желчные кислоты остаются в водном растворе при очень сильно кислотных условиях (меньше, чем рН 1). Однако при желудочном диапазоне рН некоторые желчные кислоты, такие как UDCA и CDCA, больше не растворяются.
Конъюгирование боковой цепи желчной кислоты с глицином или таурином оказывает небольшое влияние на гидрофобную активность полностью ионизированных солей желчных кислот. Более гидрофобные соли желчных кислот обладают более высокой солюбилизирующей способностью для фосфолипида и холестерина и, следовательно, являются лучшими детергентами. Более гидрофобные соли желчных кислот являются также более вредными для различных мембран как in vivo, так и in vitro.
Пулы природных солей желчных кислот постоянно содержат множество солей желчных кислот. Смеси двух или более солей желчных кислот с разной гидрофобной активностью могут вести себя как одна соль желчной кислоты со средней гидрофобной активностью. В результате этого моющие свойства и токсичность смесей двух солей желчных кислот с разной гидрофобной активностью часто являются промежуточными между такими индивидуальными компонентами. Биологические функции и биологические свойства желчных кислот, вытекающие из их амфифильных свойств, являются следующими:
1. Урсодезоксихолевую кислоту можно применять в качестве иммуномоделирующего агента.
2. Урсодезоксихолевая кислота ингибирует индуцированный дезоксихолевой кислотой апоптоз посредством модуляции продуцирования митохондриальных трансмембранных потенциальных и реакционноспособных форм кислорода.
3. Урсодезоксихолевая кислота ингибирует индуцирование синтазы оксида азота (NOS) в кишечных эпителиальных клетках человека и in vivo.
4. Гидрофильная природа урсодезоксихолевой кислоты обеспечивает цитозащиту при некровоспалительных заболеваниях печени.
5. Урсодезоксихолевая кислота значительно повышает уровень трансаминаз и холестатические ферментативные индексы повреждения печени при хроническом гепатите.
6. Желчные кислоты значительно ингибируют рост Н. pylori.
7. Урсодезоксихолевая кислота является наиболее сильнодействующим ингибитором пепсина среди желчных кислот.
8. Высокие уровни желчных кислот исключительно сильно ингибируют пролиферацию вируса гепатита С.
9. Урсодезоксихолевая кислота обладает свойствами стабилизации клеточных мембран.
10. Урсодезоксихолевая кислота облегчает алкогольную жировую инфильтрацию печени.
11. Урсодезоксихолевая кислота обладает сосудорасширяющим действием на системное сосудистое ложе, но не изменяет ни легочную васкулярную функцию, ни сердечные функции.
12. Синтез желчных кислот из холестерина является одним из двух главных путей для удаления холестерина из организма.
13. Поток желчи генерируется потоком солей желчных кислот при прохождении через печень. Образование желчи является важным путем солюбилизации и экскреции органических соединений, таких как билирубин, эндогенные метаболиты, такие как амфипатические производные стероидных гормонов, и различные лекарственные средства и другие ксенобиотики.
14. Секреция солей желчных кислот в желчь связана с секрецией двух других желчных липидов, фосфатидилхолина (лецитина) и холестерина. Связывание вывода солей желчных кислот с выводом лецитина и холестерина обеспечивает основной путь удаления печеночного холестерина.
15. Соли желчных кислот вместе с лецитином солюбилизируют холестерин в желчи в форме смешанных мицелл и везикул. Недостаток солей желчных кислот и, следовательно, пониженная растворимость холестерина в желчи может играть роль в патогенезе холестериновых желчных камней.
16. Считается, что соли желчных кислот являются фактором в регуляции синтеза холестерина. В настоящее время точно не известно, регулируют ли они синтез холестерина непосредственно действием на гидроксиметилглутарилкофермент А(НМО-СоА)-редуктазу или косвенно путем модуляции абсорбции холестерина в кишечнике.
17. Считается, что соли желчных кислот в энтеропеченочной циркуляции регулируют синтез желчных кислот посредством подавления или дерепрессии активности холестерин-7-гидроксилазы, которая является ограничивающим скорость ферментом в пути биосинтеза желчных кислот.
18. Желчные кислоты могут играть роль в регулировании рецепторов печеночных липопротеинов (аро В.Е.) и, следовательно, могут модулировать скорость поглощения холестерина липопротеинов печенью.
19. В кишечнике соли желчных кислот в форме смешанных мицелл принимают участие в интрапороговой солюбилизации, переносе и абсорбции холестерина, растворимых в жирах витаминов и других липидов.
20. Соли желчных кислот могут принимать участие в переносе кальция и железа из полости кишечника к щеточной каемке.
Недавние исследования по доставке лекарственных средств, относящиеся к характеристикам и биофункциям существующей в природе желчной кислоты в качестве адъюванта и/или носителя, были сосредоточены на производных и аналогах желчных кислот и самих желчных кислотах как новых систем доставки лекарственных средств к кишечнику и печени. Эти системы используют механизм активного переноса для доставки целевых молекул лекарственного средства к определенной ткани-мишени пероральным введением или введением в желчный пузырь. Таким образом, если желчные кислоты или производные желчных кислот быстро и эффективно абсорбируются в печени и, следовательно, подвергаются действию энтеропеченочного цикла, предполагаются многие потенциальные терапевтические применения, включающие следующие: улучшение пероральной абсорбции биологически активного в организме, но плохо абсорбируемого гидрофильного и гидрофобного лекарственного средства; направленная в печень доставка лекарственного средства для достижения высоких терапевтических концентраций в больной печени с минимизацией общих токсических реакций где-либо еще в организме и системы доставки в желчный пузырь холецистографических агентов и средств для ускорения растворения холестериновых желчных камней. В качестве примера в 1985 Drs. Gordon and Moses et al. показали, что терапевтически полезное количество инсулина абсорбируется носовой слизистой оболочкой человека при введении в нос в виде спрея с обычными солями желчных кислот, такими как DCA, UDCA, CDCA, CA, TUDCA, TCDCA. См. Moses, Alan С., et al., Diabetes, vol. 32 (November 1983) 1040-1047; Gordon, G.S., et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, vol. 82 (November 1985) 7419-7423. В их эксперименте желчные кислоты вызывали заметные повышения в концентрации инсулина в сыворотке крови и приблизительно 50 процентное понижение концентраций глюкозы в крови. Однако эта революционная лекарственная форма в виде раствора для спрея в нос с желчными кислотами (солями) в качестве адъюванта не могла далее развиваться и коммерциализироваться, поскольку раствор для спрея в нос нужно было приготовить непосредственно перед использованием из-за осаждения соли желчной кислоты и нестабильности инсулина при уровнях рН между 7,4 и 7,8. Кроме того, как указано в этом описании, урсодезоксихолевую кислоту в качестве адъюванта нельзя было использовать вследствие ее нерастворимости при рН между 7,4 и 7,8.
Таким образом, оказывается, что соли желчных кислот и инсулин являются химически и физически несовместимыми. Значения рН коммерческих инъекционных растворов инсулина находятся между 2,5 и 3,5 для подкисленных лекарственных форм и между 7,00 и 7,4 для нейтральных лекарственных форм. Лекарственные формы солей желчных кислот, полученные общепринятыми способами, были непригодными для преодоления проблем осаждения желчных кислот при этих уровнях рН и инсулин является нестабильным при рН 7,4 или выше. Следовательно, безопасные и эффективные препараты любых лекарственных форм инсулина с желчной кислотой (солью) в виде растворов являются коммерчески недоступными в настоящее время.
Гепарин, наиболее сильнодействующий антикоагулянт, широко используют при лечении и профилактике тромбоэмболизма. Однако лечение гепарином обычно ограничивается госпитализированными пациентами, поскольку данное лекарственное средство вводится только инъекцией. Альтернативными путями, которые были испытаны, являются внутрилегочный спрей, суппозитории и клизма. В соответствии с многочисленными публикациями для облегчения абсорбции гепарина через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта препараты должны быть в кислотных условиях. В соответствии с Dr. Ziv, Dr. Eldor et al. гепарин абсорбировался через слизистую оболочку прямой кишки грызунов и приматов, только когда его вводили в растворах, содержащих холат натрия или дезоксихолат натрия. См. Ziy E. et al., Biochemical Pharmacology, vol. 32, №5, pp. 773-776 (1983). Однако гепарин стабилен только в кислотных условиях. Желчные кислоты являются особенно нерастворимыми в кислотных условиях. Следовательно, из-за их несовместимых характеристик коммерческие лекарственные формы желчных кислот с гепарином в настоящее время являются недоступными.
Системы доставки лекарственных средств, включающие желчные кислоты, могут обеспечить печеньспецифическую "прицельную" доставку лекарственного средства, что представляет основной интерес для разработки лекарственного средства, поскольку стандартные фармакологические подходы к заболеваниям печени были неудовлетворительны из-за неадекватной доставки активных агентов в клетки печени, а также неспецифической токсичности по отношению к другим органам. Например, печеньспецифическая доставка лекарственного средства необходима для ингибиторов синтеза коллагена при лечении фиброза печени, чтобы избежать неспецифические и нежелательные побочные действия в экстрапеченочных тканях. Кроме того, для лечения ракового заболевания желчной системы высокие уровни лекарственного средства должны быть достигнуты в печени и в желчной системе, тогда как в экстрапеченочных тканях желательны низкие концентрации лекарственного средства, чтобы минимизировать цитотоксичность цитостатиков для нормальных, неопухолевых клеток. Dr.Kramer, Dr.Wess et al. показали, что гибридные молекулы, образованные ковалентным связыванием лекарственного средства с модифицированной молекулой желчной кислоты, распознаются Na+-зависимыми системами поглощения желчных кислот в печени и в подвздошной кишке. См. патент США №5641767. Даже если соли желчных кислот и их производные действуют в качестве челноков для специфической доставки лекарственного средства к печени, как уже указано выше, существуют огромные риски при разработке производных желчных кислот или солей желчных кислот в качестве носителей, поскольку новые производные желчных кислот или солей желчных кислот, образованные ковалентным связыванием лекарственного средства с желчной кислотой, нужно испытать на их фармакологию, токсичность и клиническую эффективность. Таким образом, разработка препаратов, в которых лекарственное средство может абсорбироваться с желчными кислотами или солями желчных кислот из мест, которые содержат избыточные желчные кислоты в кишечнике, является значительно более легкой и значительно более полезной задачей, чем разработка новых производных желчных кислот, потому что требует проведения меньшего числа испытаний.
Несмотря на чрезвычайно полезную терапевтическую активность и продолжительные исторические медицинские использования желчных кислот в качестве терапевтически активных агентов и в качестве носителей и/или адъювантов, основанные на уже указанных биологических свойствах и функциях желчных кислот, введение желчных кислот при коммерческих использованиях ограничивается фармацевтическими препаратами с твердой формой желчной кислоты, которые являются таблетками, капсулами и суспензиями. Это обусловлено нерастворимостью желчной кислоты в водной среде при рН приблизительно от 1 до 8. Это является также результатом особенно горького вкуса желчи и осязания такого же горького вкуса в течение нескольких последующих часов. Отмечается, что урсодезоксихолевая кислота, хенодезоксихолевая кислота и литохолевая кислота практически нерастворимы в воде. Дезоксихолевая кислота и холевая кислота имеют растворимость 0,24 г/л и 0,2 г/л соответственно. Тауроурсодезоксихолевая кислота, таурохенодезоксихолевая кислота и таурохолевая кислота не растворимы в растворе хлористовородной кислоты. Немногие водные лекарственные формы, которые доступны, являются нестабильными и имеют очень ограниченные использования из-за проблем регулирования и сохранения значения рН. Кроме того, было обнаружено, что некоторые коммерческие фармацевтические дозированные формы желчных кислот имеют недостаточную биологическую доступность, как описано в European Journal of Clinical Investigation (1985), 15, 171-178. Желчная кислота, особенно урсодезоксихолевая кислота, плохо растворима в содержимом желудка-двенадцатиперстной кишки-тощей кишки голодных субъектов. От 21% до 50% проглоченных доз были выделены в твердой форме из-за непредсказуемых изменений в очень медленно прогрессирующей солюбилизации твердой урсодезоксихолевой кислоты в желудочно-кишечном тракте. Желчные кислоты, особенно урсодезоксихолевая кислота, дезоксихолевая кислота, хенодезоксихолевая кислота, холевая кислота, гиодезоксихолевая кислота, 7-кетолитхолевая кислота, тауроурсодезоксихолевая кислота и таурохенодезоксихолевая кислота, среди других кислот являются особенно нерастворимыми в желудочном соке и в водном растворе хлористовородной кислоты. Однако растворимость желчных кислот повышается с повышением рН в кишечнике очень медленно и неполно и в конечном счете желчные кислоты становятся растворимыми при рН между 8 и 9,5.
Для преодоления этого медленного и неэффективного процесса абсорбции в кишечнике из-за неполной и медленной солюбилизации желчных кислот было получено много вновь разработанных фармацевтических готовых препаративных форм, таких как лекарственные формы пролонгированного действия (замедленное высвобождение активного ингредиента) с растворимыми в воде твердыми желчными кислотами, которые часто являются сильнощелочными. Эти вновь разработанные фармацевтические дозированные препаративные формы являются энтеросолюбильными-гастрорезистентными. Эти энтеросолюбильные-гастрорезистентные лекарственные формы остаются интактными в желудочном соке желудка, но растворяются и высвобождают сильнощелочные растворимые твердые соли желчных кислот препаратов в области, являющейся мишенью, в пределах ограниченного периода времени, после того, как они достигнут тонкую кишку.
Эти типы лекарственных форм, конечно, проявляют лучшую биологическую доступность, чем коммерциализированные в настоящее время лекарственные формы, как описано в патенте США №5380533. Однако чрезвычайно трудным и очень дорогим является получение лекарственных форм с точным замедлением высвобождения, которые могут высвобождать терапевтически активные компоненты путем дезинтеграции, растворения и диффузии в целевой области в пределах ограниченного отрезка времени. В соответствии с патентом США №5302398 испытание на человеке абсорбции гастрорезистентных энтеросолюбильных лекарственных форм желчных кислот, особенно урсодезоксихолевой кислоты, показывает, что ее абсорбция повышается на величину приблизительно 40 процентов по сравнению с введением такого же количества принятых в настоящее время коммерческих лекарственных форм. Ее максимальные гемические концентрации в среднем в три раза выше и достигаются быстрее, чем у коммерческих готовых препаративных форм. Любые лекарственные формы желчной кислоты должны быть способны высвобождать желчные кислоты известным и постоянным образом после введения пациенту. Как скорость, так и степень высвобождения важны и должны быть воспроизводимы. В идеальном случае, степень высвобождения должна быть приблизительно 100 процентов, тогда как скорость высвобождения должна отражать желаемые свойства лекарственной формы.
Хорошо известен факт, что лекарственные формы лекарственных средств в виде растворов проявляют значительно повышенные скорости и степени абсорбции по сравнению с таким же самым лекарственным средством, изготовленным в виде таблетки, капсулы или суспензии. Это происходит потому, что лекарственные формы в виде растворов являются химически и физически гомогенными растворами двух или более веществ. Кроме того, специально разработанные лекарственные формы в виде растворов, которые могут сохранять системы растворов без разрушения при любых условиях рН, готовы к диффузии в целевой области для немедленной и полной абсорбции, тогда как таблетки, капсулы или готовые препаративные формы с замедленным высвобождением активного ингредиента должны неизменно подвергаться дезинтеграции, растворению и диффузии в целевой области в пределах ограниченного периода времени. Непредсказуемые варианты в степени и скорости высвобождения желчных кислот путем дезинтеграции, растворения и диффузии лекарственных форм с замедленным или немедленным высвобождением активного ингредиента, имеющих рН-зависимую нестабильность, приводят к медленной и неэффективной абсорбции и пониженной биологической доступности желчных кислот.
Люминальная поверхность желудка покрыта тонким слоем защитной слизи. Покрытие слизистым гелем поддерживает градиент рН от интралюминального пространства до апикальной мембраны и, как считается, способствует феномену цитозащиты. Инфекция Н.pylori встречается на люминальной поверхности слизистой оболочки желудка в слизи, на эпителиальной поверхности и в желудочных пинтах. Считается, что бактериальные ферменты разрушают гликопротеиновую сетчатую структуру слизи и превращают полимеры в мономеры (или субзвенья), так что слизь не может больше существовать в виде геля. Кроме того, снижается муциногенез и слизистая оболочка становится восприимчивой к эрозивным действиям кислоты. Такое состояние может привести к гастриту и пептическим язвам.
Соединения висмута приобретают нарастающий интерес при терапевтическом лечении нарушений в желудке и двенадцатиперстной кишке и особенно при уничтожении Helicobacter pylori, бактерии, которая, как считают, принимает участие в этиологии заболевания. Использовали многие пероральные препараты висмута. Оказывается, что различные препараты различаются по клинической эффективности, а также фармакокинетике. Используемые неорганические соли включают основной нитрат, основной карбонат, основной галлат, тартрат, цитрат и основной салицилат. Коммерческие препараты обычно были доступны через продажу и часто содержали другие соединения кроме соли висмута. Коммерческие препараты использовали успешно при лечении язвенной болезни как желудка, так и двенадцатиперстной кишки. Эти препараты показаны как эффективные в качестве антагонистов гистамина Н2 при лечении язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и были связаны с более низкими скоростями рецидива после прекращения терапии. Более низкая скорость рецидива после первичного заживления препаратами висмута была приписана их способности уничтожать Н.pylori и "смягчать" гастродуоденит, связанный с инфекцией данным организмом. Продолжительное уничтожение Н.pylori является более вероятным, когда препарат висмута вводят вместе с антибиотиками или антисептиками (местная доставка), такими как желчные кислоты.
Различные антибиотики и антисептики проявляют хорошую активность против Н.pylori in vitro. Однако при испытании в качестве единственных агентов в клинических исследованиях они не имели успеха в уничтожении организма. Неудача терапии и рецидив являются очень обычными. Причина этого противоречия между in vitro и клиническими результатами не была установлена. Возможным объяснением является плохая пенетрация соединений в слизь желудка, деструкция при кислотном значении рН, нерастворимость в кислотной окружающей среде и их сочетание. Следовательно, введение высоких доз антимикробных агентов на ежедневной основе необходимо для уничтожения Н.pylori. Эффективность этого курса терапии затрудняется плохой податливостью пациента вследствие отрицательных действий, таких как диарея, тошнота, позывы на рвоту и разрушение нормальной кишечной флоры.
Другой причиной неполного уничтожения может быть то, что время пребывания антимикробных агентов в желудке является таким коротким, что эффективные антимикробные концентрации не могут быть достигнуты в слизистом слое желудка или поверхностях эпитеальных клеток, где существует Н.pylori. Следовательно, уничтожение Н.pylori может быть лучше достигнуто терапией, которая повышает доставку антимикробного агента для местной активности и абсорбцию для системной активности. Однако не были описаны испытания на уничтожение in vivo с лекарственными формами, которые пролонгируют время пребывания в желудке для местной активности и имеют высокую скорость абсорбции в желудочно-кишечном тракте. Лучшие результаты до сих пор были достигнуты с комбинацией неабсорбированного агента с местной активностью, коллоидальных соединений висмута и хорошо абсорбированного агента с системной активностью, амоксициллина (Van Caekemberghe and Breyssens, 1987, Antimicrobial Agent and Chemotherapy, pp.1429-1430). Но ясно, что терапия против инфекций Н. pylori все же является субоптимальной.
Кроме бактерицидного действия некоторые соединения висмута обладают сильными действиями на некоторые патогенные механизмы, посредством которых Н. pylori повреждают слизистую оболочку. Соединения висмута являются сильнодействующими и неспецифическими ингибиторами ферментов. Исследования in vitro наводят на мысль, что эти соединения могут ингибировать бактериальные ферменты, в том числе липазы, протеазы и гликозидазы, синтезированные Н. pylori. Считается, что ингибирование ферментов бактерий и сохранение интактным покрытия в виде вязкоупругого геля относится к терапевтическому действию соединения висмута на связанные с Н. pylori гастрит и пептические язвы.
Соединения висмута блокируют адгезию Н. pylori к эпителиальным клеткам. Скоро после перорального введения этих соединений организмы были обнаружены внутри, а не под слизистым гелем. Считается, что это является результатом потери прилипания к апикальной мембране эпителиальных клеток желудка. Висмут в форме соединений с электронной плотностью, как показано, осаждается на поверхности и в бактериальных клетках. Но, к сожалению, концентрация висмута внутри слизи часто понижается ниже средней ингибирующей концентрации соединений висмута для Н.pylori вследствие эффектов разбавления пищей, длительного времени дезинтеграции продаваемых таблеток при рН<1,1 и осаждения висмута из-за нерастворимости в кислотной окружающей среде. Кроме того, Н.pylori, инактивированный под действием ингибирующих рост концентраций соединений висмута, остается жизнеспособным в течение нескольких часов и, следовательно, способен восстановить нормальный рост, когда висмут удаляют.
Ингибирующий фактор(ы) в желчи был заметно уменьшен подкислением с последующим центрифугированием для удаления осажденного комплекса глицинконъюгированные желчные кислоты и был полностью исключен посредством применения блокирующего желчные кислоты агента холестериламина. Эти результаты согласуются с точкой зрения, что кислотные условия в луковице двенадцатиперстной кишки могут быть полезными для осаждения ингибирующих желчных кислот (или других ингибирующих веществ) и роста Н.pylori в другом отношении враждебной окружающей среде. Обзоры D.Y.Graham (Osato et al., 1999, Digestive Diseases and Sciences 44(3): 462-464), относящиеся к гастриту с рефлюксом, можно распространить на возможное предположение связи между секрецией кислоты и язвой двенадцатиперстной кишки. Низкое значение рН в луковице двенадцатиперстной кишки у пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки, связанное с высокой секрецией кислоты, быстрым опорожнением желудка и локальным продуцированием кислоты, может как активировать развитие желудочной метаплазии, так и осаждать разрушенные комплексы глицинконъюгированные желчные кислоты, что позволяет Н.pylori образовывать колонии и буйно разрастаться.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к композиции, которая включает (1) желчную кислоту, ее производное, ее соль или ее конъюгат с амином, (2) воду и (3) достаточное количество водорастворимого продукта превращения крахмала, так чтобы желчная кислота и продукт превращения крахмала оставались в растворе при любом значении рН в выбранном диапазоне рН.
Изобретение далее относится к композиции, которая включает (1) желчную кислоту, ее производное, ее соль или ее конъюгат с амином, (2) воду и (3) достаточное количество водорастворимого некрахмального полисахарида, так чтобы желчная кислота и полисахарид оставались в растворе при любом значении рН в выбранном диапазоне рН.
Изобретение далее относится к фармацевтической композиции, которая включает (1) желчную кислоту, ее соль или ее конъюгат с амином, (2) воду, (3) фармацевтическое соединение в фармацевтически подходящем количестве и (4) достаточное количество водорастворимого продукта превращения крахмала или водорастворимого некрахмального полисахарида, так чтобы желчная кислота, фармацевтическое соединение и углевод оставались в растворе при любом значении рН в выбранном диапазоне рН.
Изобретение далее относится к лекарственным формам в виде растворов композиций желчных кислот. Преимущества этих лекарственных форм в виде растворов включают повышенную биологическую доступность и абсорционную способность желчной кислоты. Дополнительные преимущества лекарственных форм в виде растворов включают повышенную биологическую доступность и абсорбционную способность фармацевтического соединения.
В некоторых осуществлениях изобретения предложена композиция, которая включает (1) желчную кислоту, ее производное, ее соль или ее конъюгат с амином, (2) воду и (3) достаточное количество углевода, так чтобы компонент желчная кислота и углевод оставались в растворе при любом значении рН в выбранном диапазоне рН, где углевод является сочетанием водорастворимого продукта превращения крахмала и водорастворимого некрахмального полисахарида. В осуществлениях, содержащих как растворимый некрахмальный полисахарид, так и имеющий высокую молекулярную массу продукт превращения крахмала, количества каждого из них являются такими, что при смешивании вместе в композиции они были достаточны для сохранения компонента желчной кислоты, имеющего высокую молекулярную массу продукта превращения крахмала, растворимого некрахмального полисахарида и фармацевтического соединения, если оно присутствует, в растворе при любом значении рН в выбранном диапазоне рН.
В некоторых осуществлениях изобретения предложена композиция для комбинационной терапии, которая может повысить интенсивность реакции на фармацевтическое соединение или эффективность такого соединения. Такая композиция может позволить вводить более низкие дозы фармацевтического соединения, воздействовать на комплекс заболеваний в разных местах, влиять на удаление и/или изменение абсорбции фармацевтического соединения. Такая композиция может привести к снижению токсичности и/или побочных действий фармацевтического соединения или способствовать этому.
Изобретение далее относится к композиции, которая включает (1) желчную кислоту, ее соль или ее конъюгат с амином, (2) воду, 3) водорастворимое соединение висмута и (4) достаточное количество водорастворимого продукта превращения крахмала или водорастворимого некрахмального полисахарида, так чтобы желчная кислота, висмут и углевод оставались в растворе при любом значении рН в выбранном диапазоне рН.
Изобретение далее относится к способу лечения или профилактики заболевания человека или животного, включающему введение композиции изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фиг.1 - график для сыворотки крови зависимости концентрации UDCA (квадраты) и GUDCA (треугольники) от времени после введения дозированных готовых препаративных форм в соответствии с примерами II и VI и таблицей 4.
Фиг.2 - график для сыворотки крови зависимости концентрации UDCA от времени после введения дозированных готовых препаративных форм желчной кислоты в соответствии с примерами III и VI и таблицей 4.
Фиг.3 - диаграмма среднего значения (n=5) для группы 1 фармакокинетических параметров UDCA в организме человека после перорального введения жидкой готовой препаративной формы UDCA, полученной в соответствии с примером IX без висмута.
Фиг.4 - диаграмма среднего значения (n=5) для группы II фармакокинетических параметров UDCA в организме человека после перорального введения жидкой готовой препаративной формы UDCA, полученной в соответствии с примером IX.
Фиг.5А - полученная с помощью трансмиссионного электронного микроскопа микрофотография Н.pylori, культивированного в среде Columbia.
Фиг.5В - полученная с помощью трансмиссионного электронного микроскопа микрофотография Н.pylori спустя 48 часов после обработки UDCA и цитратом висмута, полученным в соответствии с примером IX.
Фиг.5С - полученная с помощью трансмиссионного электронного микроскопа микрофотография Н.pylori спустя 72 часа после обработки UDCA и цитратом висмута
Фиг.6 - данные ЯМР для UDCA в жидкой дозированной готовой препаративной форме, полученной в соответствии с примером III без консервантов, корригента и подслащивающего вещества.
Фиг.7 - запись ВЭЖХ для UDCA в жидкой дозированной готовой препаративной форме, полученной в соответствии с примером III без консервантов, корригента и подслащивающего вещества.
Фиг.8 - запись ВЭЖХ стандартной UDCA.
Фиг.9 - способ культивирования Н.Pylori.
Фиг.10 - способ культивирования Н.Pylori.
Фиг.11 - Способ культивирования Н.Pylori.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к водному раствору, включающему (i) одну или несколько растворимых желчных кислот, водорастворимых производных желчных кислот, солей желчных кислот или желчных кислот, конъюгированных с амином (сообща называемые "желчной кислотой"), (ii) воду и (iii) один или несколько водорастворимых продуктов превращения крахмала или водорастворимого некрахмального полисахарида в количестве, достаточном для получения раствора, который не образует осадок при любом значении рН в требуемом диапазоне рН. В предпочтительном осуществлении изобретения желчная кислота и углевод не осаждаются при рН между приблизительно рН 1 и приблизительно рН 10, более предпочтительно при рН между приблизительно рН 1 и приблизительно рН 14 и наиболее предпочтительно при всех значениях рН, которые можно получить в водной системе. В некоторых осуществлениях изобретения желчная кислота остается растворенной при кислотных условиях в виде свободной желчной кислоты, несмотря на общую нерастворимость желчных кислот в кислотных условиях. В некоторых осуществлениях изобретения композицию можно использовать как фармацевтическую готовую препаративную форму, в которой фармацевтическое соединение остается в растворе без осаждения при преобладающих значениях рН в полости рта, желудке и кишечнике. Композиция может содержать желчную кислоту или ее соль, которая сама имеет фармацевтическую эффективность. Композиции изобретения могут действовать в качестве носителя, адъюванта или агента увеличения доставки фармацевтического материала, который остается растворенным в композиции изобретения на протяжении требуемого диапазона рН. В некоторых осуществлениях изобретения используют фармацевтическое средство, не являющееся желчной кислотой, хотя и не в растворе.
Преимущество данного изобретения состоит в том, что желчная кислота и углевод остаются в растворе без осаждения при любом значении рН от кислотного до щелочного. Эти системы водных растворов желчной кислоты по существу не содержат осадок или частицы. Следующим преимуществом данного изобретения является то, что системы водных растворов не демонстрируют изменения в физическом внешнем виде, такие как изменение в прозрачности, цвете или запахе после добавления сильных кислот или щелочи даже после нескольких месяцев наблюдения при форсированных условиях хранения при 50°С.
В некоторых осуществлениях изобретения систему водного раствора желчной кислоты вводят перорально, после чего она достигает кишечника через желудочно-кишечный тракт без осаждения желчных кислот в виде твердых веществ при воздействии кислотного желудочного сока и щелочного сока кишечника. Эти готовые препаративные формы растворенных желчных кислот, которые демонстрируют интактные системы растворов в кишечнике, могут быть эффективно и полностью абсорбированными и, следовательно, подвергаются энтерогепатическому циклу. В соответствии с изобретением растворимость желчных кислот (например, осаждение и изменения в физическом внешнем виде) не изменяется независимо от того, может ли быть боковая цепь с карбоновой кислотой некоторых желчных кислот протонированной (неионизированной), ионизированной или истинной карбоновой кислотой.
Состояние ионизации боковой цепи с карбоновой кислотой желчных кислот оказывает значительное влияние на гидрофобность и гидрофильность желчной кислоты в этих системах водных растворов. В некоторых осуществлениях изобретения таким состоянием ионизации управляют корректированием рН для регулирования токсичности, абсорбции и амфифильности желчных кислот. Одну или несколько желчных кислот можно растворить в этих системах водных растворов в качестве терапевтически активного агента, в качестве адъюванта, или носителя лекарственного средства, или агента повышения растворимости лекарственного средства. Эти системы водных растворов можно получить для перорального применения, клизм, жидкостей для промывания полости рта, жидкостей или растворов для полоскания рта и горла, назальных препаратов, ушных препаратов, инъекций, препаратов для душа, местных кожных препаратов, других местных препаратов и косметических составов, которые имеют необходимое значение рН без недостатка, проявляющегося в осаждении или ухудшении в физическом внешнем виде после продолжительных периодов времени.
Растворимые желчные кислоты являются любым типом водорастворимых желчных кислот. Солью желчной кислоты является любая водорастворимая соль желчной кислоты. Растворимые производные желчных кислот данного изобретения представляют собой такие производные, которые являются растворимыми или более растворимыми в водном растворе, чем соответствующая желчная кислота, не превращенная в производное. Производные желчных кислот включают, но не ограничиваются перечисленным производные, образованные у гидроксильных групп или групп карбоновой кислоты желчной кислоты с другими функциональными группами, включающими, но не ограничивающиеся ими галогены и аминогруппы. Водорастворимые соли желчных кислот можно получить взаимодействием желчных кислот, описанных выше, и амина, включающего, но не ограничивающегося ими алифатические свободные амины, такие как триентин, диэтилентриамин, тетраэтиленпентамин, и аминокислоты основного характера, такие как аргинин, лизин, орнитин и аммиак, и аминосахара, такие как D-глюкамин, N-алкилглюкамины, и четвертичные аммониевые производные, такие как холин, гетероциклические амины, такие как пиперазин, N-алкилпиперазин, пиперидин, N-алкилпиперидин, морфолин, N-алкилморфолин, пирролидин, триэтаноламин и триметаноламин. По данному изобретению водорастворимые соли желчных кислот с металлами, соединение включения между желчной кислотой и циклодекстрином и его производными и водорастворимые O-сульфированные желчные кислоты также включаются в качестве растворимых солей желчных кислот. Растворимая желчная кислота может включать водный препарат желчной кислоты в форме свободной кислоты в сочетании с одним реагентом из HCl, уксусной кислоты, аммиака и аргинина.
Желчные кислоты, использованные в данном изобретении, включают, но не ограничиваются перечисленным урсодезоксихолевую кислоту, хенодезоксихолевую кислоту, холевую кислоту, гиодезоксихолевую кислоту, дезоксихолевую кислоту, 7-оксолитохолевую кислоту, литохолевую кислоту, иоддезоксихолевую кислоту, иохолевую кислоту, тауроурсодезоксихолевую кислоту, таурохенодезоксихолевую кислоту, тауродезоксихолевую кислоту, тауролитохолевую кислоту, гликоурсодезоксихолевую кислоту, таурохолевую кислоту, гликохолевую кислоту и их производные у гидроксила или группы карбоновой кислоты на стероидном кольце.
Основное преимущество настоящего изобретения состоит в том, что посредством доставки желчной кислоты в растворе достигают более высоких уровней желчных кислот in vivo, чем в случае общепринятых препаратов. Следовательно, можно достичь более полный терапевтический потенциал желчной кислоты, чем в случаях предыдущих готовых препаративных форм. Уровни желчных кислот in vivo, достижимые с существующими готовыми препаративными формами, в которых желчная кислота растворена неполностью, являются более низкими и требуют введения более высоких количеств желчных кислот. Поскольку желчная кислота полностью растворена в готовой препаративной форме данного изобретения, можно достичь in vivo более высокие уровни желчной кислоты, даже если вводят более низкие дозы.
В некоторых осуществлениях изобретения в одной готовой препаративной форме используют несколько желчных кислот. Смеси двух или более желчных кислот с разной гидрофобной активностью могут вести себя как одна соль желчной кислоты со средней гидрофобной активностью. В результате моющие свойства и токсичность смесей двух желчных кислот с разной гидрофобной активностью часто являются средними между индивидуальными компонентами.
Углеводы, подходящие для использования в изобретении, включают водорастворимые продукты превращения крахмала и водорастворимые некрахмальные полисахариды. Для целей изобретения водорастворимые продукты превращения крахмала определены следующим образом:
1. Их можно получить при различных значениях рН частичным или неполным гидролизом крахмала.
2. Неограничивающие примеры их включают мальтодекстрин, декстрин, жидкую глюкозу, твердое вещество сиропа кукурузы (высушенный порошок жидкой глюкозы), растворимый крахмал, предпочтительно мальтодекстрин или твердое вещество сиропа кукурузы, наиболее предпочтительно твердое вещество сиропа кукурузы. Особенно предпочтительными являются MALTRIN® M200, твердое вещество сиропа кукурузы, и MALTRIN® M700, мальтодекстрин, оба из которых производятся GPC®, Grain Processing Corporation of Muscatine, Iowa. Для целей данного изобретения термин "сироп кукурузы" включает как сироп кукурузы, так и жидкую глюкозу.
3. Если соединение является полимером, полимер имеет, по меньшей мере, одну восстанавливающую концевую группу и, по меньшей мере, одну невосстанавливающую концевую группу. Полимер может быть линейным или разветвленным.
4. Молекулярная масса составляет приблизительно от 100 единиц массы до больше, чем 106 единиц массы. Имеющие высокую молекулярную массу водорастворимые продукты превращения крахмала являются продуктами с молекулярной массой выше 105.
Для целей изобретения водорастворимые некрахмальные полисахариды определяют следующим образом:
1. Их можно получить при различных значениях рН различными гидролитическими или синтетическими способами.
2. Неограничивающие примеры их включают декстран, камедь рожкового дерева, пектин, неусвояемое растворимое волокно.
3. Если соединение является полимерным, полимер имеет, по меньшей мере, одну восстанавливающую концевую группу и, по меньшей мере, одну невосстанавливающую концевую группу. Полимер может быть линейным или разветвленным.
4. Молекулярная масса составляет приблизительно от 100 массовых единиц до больше, чем 105 массовых единиц. Предпочтительная молекулярная масса превышает 105 массовых единиц.
Количество растворимого в воде продукта превращения крахмала с высокой молекулярной массой и/или растворимого некрахмального полисахарида, используемого в данном изобретении, составляет, по меньшей мере, количество, необходимое для того, чтобы сделать выбранную соль желчной кислоты, растворимой при нужной концентрации и при требуемом диапазоне значений рН. В предпочтительных осуществлениях изобретения приблизительное минимальное количество мальтодекстрина, требуемое для предотвращения осаждения желчных кислот из лекарственных форм в виде водного раствора изобретения, составляет 5 г для каждых 0,2 г урсодезоксихолевой кислоты, 25 г для каждого 1 г урсодезоксихолевой кислоты и 50 г для каждых 2 г урсодезоксихолевой кислоты в 100 мл воды. В предпочтительных осуществлениях изобретения приблизительное минимальное количество мальтодекстрина составляет 30 г для каждых 200 мг хенодезоксихолевой кислоты, 12 г для каждых 200 мг 7-кетолитохолевой кислоты, 10 г для каждых 200 мг холевой кислоты и 50 г для каждых 200 мг дезоксихолевой кислоты. В предпочтительных осуществлениях изобретения приблизительное минимальное количество жидкой глюкозы (коммерческий легкий сироп кукурузы), требуемое для предупреждения осаждения желчных кислот из лекарственных форм в виде водного раствора изобретения, составляет 80 г для каждых 500 мг урсодезоксихолевой кислоты в 100 мл воды и 80 г для каждого 500 мг урсодезоксихолевой кислоты в 200 мл воды. В предпочтительных осуществлениях изобретения приблизительное минимальное количество высушенного порошка жидкой глюкозы (твердое вещество сиропа кукурузы, например MALTRIN® M200), требуемое для предупреждения осаждения желчных кислот из лекарственных форм в виде водных растворов изобретения составляет 30 г для каждых 500 мг урсодезоксихолевой кислоты в 100 мл воды и приблизительно 30 г для каждых 500 мг урсодезоксихолевой кислоты в 200 мл воды. В предпочтительных осуществлениях изобретения приблизительное минимальное количество растворимого некрахмального полисахарида (например, пектина, камеди рожкового дерева, аравийской камеди), требуемое для предупреждения осаждения желчных кислот из лекарственных форм в виде водных растворов изобретения, составляет 50 г камеди рожкового дерева для каждых 500 мг урсодезоксихолевой кислоты в 100 мл воды и 80 г пектина для каждых 500 мг урсодезоксихолевой кислоты в 100 мл воды. Минимальное требуемое количество имеющих высокую молекулярную массу водорастворимых продуктов превращения крахмала или растворимого некрахмального полисахарида определяется, главным образом, абсолютным количеством желчных кислот в готовой препаративной форме в виде раствора, а не концентрацией.
В некоторых осуществлениях изобретения готовая препаративная форма может включать циклодекстрин.
В некоторых осуществлениях изобретения готовая препаративная форма дополнительно включает пищевое волокно. Неограничивающие примеры пищевого волокна включают камедь рожкового дерева, пектин, псиллиум, овсяную камедь, волокно сои культурной, овсяные отруби, кукурузные отруби, целлюлозу и пшеничные отруби.
В некоторых осуществлениях изобретения готовая препаративная форма дополнительно включает эмульгирующие агенты. Для целей изобретения термин "эмульгирующий агент" включает эмульгирующие агенты и суспендирующие агенты. Неограничиващие примеры эмульгирующих агентов включают камедь рожкового дерева, пектин, аравийскую камедь, карраген, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, гидроксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, метилцеллюлозу, поливиниловый спирт, повидон, трагакантовую камедь, ксантановую камедь и сложный эфир сорбитана.
Выбранный диапазон рН, при котором готовая препаративная форма не будет осаждать ее желчную кислоту, продукт превращения крахмала, растворимый некрахмальный полисахарид или ее фармацевтическое соединение, может быть любым диапазоном значений рН, достижимым с водной системой. Данный диапазон предпочтительно находится между приблизительно рН 1 и приблизительно рН 14 и более предпочтительно между приблизительно рН 1 и приблизительно рН 10. Еще более предпочтительно диапазон является любой частью диапазона значений рН, достижимых в водной системе, достаточный для того, чтобы фармацевтическая композиция оставалась в растворе из препарата, и достаточной для введения и адсорбции в организме в соответствии со способом введения.
Изобретение рассматривает использование широкого диапазона фармацевтических соединений. Неограничивающие примеры включают гормоны, антагонисты гормонов, аналгетики, жаропонижающие средства, противовоспалительные лекарственные средства, иммуноактивные лекарственные средства, антибластомные лекарственные средства, антибиотики, противовоспалительные средства, симпатомиметические лекарственные средства, антибактериальные лекарственные средства, противоопухолевые средства и анестезирующие средства. Следующие нелимитирующие примеры включают лекарственные средства, которые "нацеливаются" или воздействуют на желудочно-кишечный тракт, печень, сердечно-сосудистую систему и респираторную систему. Дополнительные неограничивающие примеры фармацевтических соединений включают инсулин, гепарин, кальцитонин, ампициллин, октреотид, силденафил цитрат, кальцитриол, дигидротахистерин, ампоморфин, йохимбин, тразодон, ацикловир, амантадин•HCl, римантадин•HCl, цидофовир, делавирдин•мезилат, диданозин, фамцикловир, форскарнет натрий, фторурацил, ганцикловир натрий, идоксуридин, интерферон-α, ламивудин, невирапин, пенцикловир, рибавирин, ставудин, трифлуридин, валацикловир•HCl, залцитабин, зидовудин, индинавирв•Н2SO4, ритонавир, нелфинавир•СН3SO3Н, сакванавир•СН3SO3Н, d-пеницилламин, хлорохин, гидроксихлорохин, ауротиоглюкозу, смешанный тиомалат золота и натрия, ауранофин левамизол, DTC, изопринозин, монофосфат метилинозина, мурамилдипептид, диазоксид, гидралазин•HCl, миноксидил, дипиридамол, изоксуприн•HCl, ниацин, нилидрин•HCl, фентоламин, доксазозин•СН3SO3Н, празозин•HCl, теразоцин•HCl, клониди•HCl, нифедипин, молсидомин, амиодарон, ацетилсалициловая кислота, верапамил, дилтиазем, низолдипин, израдипин, бепридил, изосорбид•динитрат, пентаэритрит•тетранитрат, нитроглицерин, циметидин, фамотидин, низатидин, ранитидин, ланзопразол, омепразол, мизопростол, сукралфат, метоклопрамид•HCl, эритромицин, соединение висмута, алпростадил, албутерол, пирбутерол, тербуталинв•Н2SO4, салметрол, аминофиллин, дифиллин, эфедрин, этилнорэпинефрин, изоэтарин, изопротеренол, метапротеренол, n-докромил, окситрифиллин, теофиллин, битолтерол, фенотерол, будезонид, флунизолид, беклометазон•дипропионат, флутиказон•пропионат, кодеин, сульфат кодеина, фосфат кодеина, декстрометорфан•HBr, триамцинолон•ацетонид, монтелукаст натрий, зафирлукаст, цилейтон, кромолин натрий, бромид ипратропия, недокромил натрий бензоат, дифенгидрамин•HCl, гидрокодон•битартрат, метадон•HCl, морфинсульфат, ацетилцистеин, гуайфенезин, карбонат аммония, хлорид аммония, тартрат сурьмы и калия, глицерин, терпин•гидрат, пальмитат колфосцерила, аторвастатин-кальций, цервастатин-натрий, флувастатин-натрий, ловастатин, правастатин-натрий, симвастатин, picrorrhazia kurrva, andrographis paniculata, moringa oleifera, albizzia lebeck, adhata vasica, curcuma longa, momordica charantia, gymnema sylvestre, terminalia arjuna, azadirachta indica, tinosporia cordifolia, метронидазол, амфотерицин В, клотримазол, флуконазол, галопрогин, кетоконазол, гризеофульвин, итраконазол, тербинафин•HCl, эконазол•HNO3, миконазол, нистатин, оксиконазол•HNO3, сулконазол•HNO3, цетиризин•2HCl, дексаметазон, гидрокортизон, преднизолон, кортизон, катехин и его производные, глицирризин, глициррезиновую кислоту, бетаметазон, лудрокортизон•ацетат, флунизолид, флутиказон•пропионат, метилпреднизолон, соматостатин, лиспро, глюкагон, проинсулин, нерастворимые инсулины, акарбозу, хлорпропамид, глипизид, глибурид, метформин•HCl, репаглинид, толбутамид, аминокислоту, колхицин, сульфинпиразон, аллопуринол, пироксикам, толметин натрий, индометацин, ибупрофен, дифлунизал, мефенамовую кислоту, напроксен и триентин.
Дополнительными фармацевтическими соединениями, которые можно включить в готовую препаративную форму, являются любые соединения, которые остаются растворимыми при добавлении в готовую препаративную форму. С дополнительным фармацевтическим соединением в готовой препаративной форме желчная кислота в растворе может действовать в качестве адъюванта, носителя или агента, повышающего растворимость некоторых терапевтически активных агентов, включающих, но не ограничивающихся перечисленным инсулин (рН 7,4-7,8), гепарин (рН 5-7,5), кальцитонин, ампициллин, амантадин, римантадин, силденафил, сульфат неомицина (рН 5-7,5), апоморфин, йохимбин, тразодон, рибавирин, паклитаксел и его производные, ретинол и третиноин, которые являются растворимыми и стабильными в кислоте и/или щелочи и могут быть добавлены, если необходимо, в эти лекарственные формы в виде водных растворов некоторых концентраций желчных кислот в данном изобретении. Некоторые терапевтически активные агенты, включающие, но не ограничивающиеся перечисленным метформин•HCl (рН 5-7), ранитидин•HCl, циметидин, ламивидин, цитризин•2HCl (рН 4-5), амантадин, римантадин, силденафил, апоморфин, йохимбин, тразодон, рибавирин и дексаметазон, гидрокортизон, преднизолон, триамцинолон, кортизон, ниацин, таурин, витамины, природные аминокислоты, катехин и его производные, экстракт Glycyrrhizal и его основные компоненты, такие как глицирризин и глицирризиновая кислота, водорастворимые соединения висмута (например, тартрат висмута и натрия), которые являются растворимыми и стабильными в кислоте и/или щелочи, можно добавить, если необходимо, в эти дозированные готовые препаративные формы в виде водных растворов данного изобретения, содержащие урсодезоксихолевую кислоту.
В соответствии с изобретением соединения висмута включает водорастворимый продукт взаимодействия между ионом висмута и хелатообразующим агентом. Неограничивающие примеры таких хелатообразующих агентов включает лимонную кислоту, винную кислоту, яблочную кислоту, молочную кислоту и эйдетовую кислоту и щелочи. Неограничивающие примеры соединений висмута включают аммониевую соль хелатного комплекса висмута, цитрат висмута, галлат висмута, сульфат висмута, основной нитрат висмута, основной салицилат висмута, трикалийдицитратовисмутат и висмутнатрийтартрат.
Изобретение рассматривает использование рН-регулирующих агентов. Неограничивающие примеры их включают HCl, H2SO4, HNO3, СН3СООН, лимонную кислоту, яблочную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, фосфат, эйдетовую кислоту и щелочи.
В некоторых осуществлениях изобретения готовые препаративные формы можно использовать для лечения заболеваний человека и млекопитающих. Изобретение рассматривает лечение желудочно-кишечных нарушений, заболеваний печени, желчных камней и гиперлипидемии. Неограничивающие примеры заболеваний печени включают вызванные алкоголем заболевания печени и вызванные не алкоголем заболевания печени. Неограничивающие примеры желудочно-кишечных заболеваний включают хронический гастрит, рефлюксный гастрит и пептическую язву. Неограничивающие примеры вызванных не алкоголем заболеваний печени включают первичный билиарный цирроз, острый и хронический гепатит, первичный склерозирующий холангит, хронический активный гепатит и избыточное накопление жира в печени. Изобретение далее рассматривает лечение вирусных, бактериальных и грибковых заболеваний. В некоторых осуществлениях изобретения готовую препаративную форму вводят для лечения заболевания и/или уничтожения возбудителя инфекции Helicobacter pylori. В некоторых осуществлениях изобретения готовую препаративную форму вводят для лечения заболевания и/или уничтожения возбудителя вирусной инфекции гепатита С, гриппа А, гриппа С, парагриппа 1, sendai, краснухи и вирусного ложного бешенства. В некоторых осуществлениях изобретения готовую препаративную форму вводят для лечения острых или хронических воспалительных заболеваний. Неограничивающие примеры воспалительных заболеваний включают бронхит, хронический фарингит и хронический тонзиллит. В некоторых осуществлениях изобретения готовую препаративную форму вводят для лечения гиперхолестеринемии.
В некоторых осуществлениях изобретения готовую препаративную форму модифицируют так, чтобы ее можно было ввести в виде жидкости, твердого вещества, порошка или таблетки. В некоторых осуществлениях изобретения композицию включают в сироп, густой сироп или пасту. Неограничивающим примером сиропа является раствор мальтодекстрина, в котором концентрация мальтодекстрина составляет меньше, чем 1,0 кг/л. Неограничивающим примером густого сиропа является раствор мальтодекстрина, в котором концентрация мальтодекстрина находится между 1,0 кг/л и 1,2 кг/л включительно. Неограничивающим примером пасты является раствор мальтодекстрина, в котором концентрация мальтодекстрина выше, чем 1,2 кг/л.
ПРИМЕРЫ
Стабильность дозированных препаратов изобретения оценивали измерением концентрации приемлемой желчной кислоты на протяжении времени в препаратах, включающих растворимую желчную кислоту, водорастворимый продукт превращения крахмала с высокой молекулярной массой и воду при различных уровнях рН и температуры. Время удерживания каждой желчной кислоты можно регулировать, как требуется, чтобы сделать возможным индивидуальный анализ каждой желчной кислоты, присутствующей в комплексных образцах, т.е. образце, имеющем много желчных кислот.
Испытания стабильности можно провести на трех разных системах водных растворов
1. Желчную кислоту и имеющий высокую молекулярную массу водорастворимый продукт превращения крахмала смешивали в водном растворе в соответствии с примером 1 с результатами, показанными в таблицах 1А и 1В.
2. Смешанные желчные кислоты и имеющий высокую молекулярную массу водорастворимый продукт превращения крахмала смешивали в водном растворе в соответствии с примером II с результатами, показанными в таблице 2.
3. Желчные кислоты, имеющий высокую молекулярную массу водорастворимый продукт превращения крахмала и аминокислоты с разветвленной цепью (например, лейцин, изолейцин, валин или другая аминокислота с разветвленной боковой цепью) смешивали в водном растворе в соответствии с примером IV с результатами, показанными в таблицах от 3А до 3F.
Испытания на стабильность проводили с применением ВЭЖХ и микроскопа при различных значениях рН в нормальных или ускоренных условиях. Ускоренные условия для испытания фармацевтических композиций были описаны (Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed., p. 640). Все эти результаты испытаний на стабильность были удовлетворительными в том отношении, что концентрация желчной кислоты, измеряемая ВЭЖХ, не изменялась значительно на протяжении времени при различных значениях рН. Таким образом, композиции примеров являются подходящими для получения коммерческих жидких лекарственных форм. В частности, все композиции в виде растворов, которые содержали желчную кислоту, обнаруживали превосходные результаты в испытаниях на стабильность без осаждения и без изменений в физическом внешнем виде на протяжении периода испытания. Некоторые композиции сохраняют стабильность в течение более 2 лет.
Кроме того, испытания на стабильность растворов проводили на лекарственных формах в виде водных растворов, включающих смесь водорастворимой UDCA, аминокислоты с разветвленной цепью (лейцин, изолейцин, валин) и мальтодекстрина в соответствии с примером IV в качестве типичного примера лекарственных форм в виде раствора, в котором растворяют желчную кислоту в качестве терапевтически активного агента, в качестве адъюванта или носителя, фармацевтически активного агента или агента повышения растворимости и имеющие высокую молекулярную массу, водорастворимые продукты превращения крахмала или растворимые некрахмальные полисахариды. В соответствии с результатами испытания не имеется обесцвечивания, изменения прозрачности и осаждения. Кроме того, не обнаружены поддающиеся обнаружению примеси, образованные вследствие разрушения UDCA или аминокислот с разветвленной цепью при анализе ВЭЖХ при различных значениях рН, таких как рН 1, 3, 5, 7, 9 и 10, при ускоренных условиях или при инкубации при 50°С.
Лекарственные формы в виде водных растворов по данному изобретению не изменялись ни физически, ни химически при разных условиях рН и при ускоренных условиях, несмотря на добавление терапевтически и химически активных агентов, которые являются стабильными и растворимыми в растворе хлористоводородной кислоты. Следовательно, эти системы в виде растворов являются очень ценными фармацевтическими дозированными формами для препаратов терапевтически активных желчных кислот и/или препаратов для доставки лекарственного средства (фармацевтического соединения), в которых желчные кислоты играют роль адъюванта лекарственного средства, носителя лекарственного средства или агента повышения растворимости лекарственного средства посредством образования мицеллы при различных значения рН без проблем растворимости, в том числе осаждения при кислотных условиях.
Для испытания стабильности раствора для каждой желчной кислоты использовали ВЭЖХ для измерения концентрации рассматриваемой желчной кислоты при следующих условиях: растворитель для элюирования 0,02 М KH2PO4: ацетонитрил в отношении 55:45 с рН 3,01, скорость потока 0,8 мл/мин, объем инъекции 20 мкл, длина волны для детектирования была 195 нм. В таблицах концентрация указанной соли желчной кислоты для каждого из трех пронумерованных экспериментов и среднее значение ее приводится на каждой строчке. Процент указывает относительную концентрацию соли желчной кислоты после инкубации в течение некоторого периода времени по сравнению с начальной концентрацией.
Пример I
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующим составом не обнаружили никакого осаждения при любом испытанном значении рН.
Растворимая желчная кислота 200 мг (как свободная кислота)
Минимальное количество мальтодекстрина
для CDCA приблизительно 30 г;
для UDCA приблизительно 5 г;
для 7-кетолитохолевой кислоты
приблизительно 12 г;
для холевой кислоты
приблизительно 10 г;
для дезоксихолевой кислоты
приблизительно 50 г;
для гиодезоксихолевой кислоты
приблизительно 3,5 г;
Очищенная вода для получения 100 мл
Получали 100 мл водного раствора, в котором была растворена одна из вышеуказанных желчных кислот. В образовавшийся прозрачный раствор добавляли при перемешивании при комнатной температуре мальтодекстрин, имеющий высокую молекулярную массу, водорастворимый продукт превращения крахмала. Для регулирования общего объема до 100 мл добавляли очищенную воду. В соответствии с настоящим изобретением и всеми примерами очищенная вода представляет собой деионизированную, перегнанную-деионизированную-перегнанную воду или имеет сорт, обычно используемый для фармацевтических препаратов.
На основе этих композиций были получены лекарственные формы в виде водных растворов различных концентраций некоторых желчных кислот (или солей) с соответствующим им минимальным или большим количеством имеющих высокую молекулярную массу водорастворимых продуктов превращения крахмала (например, мальтодекстрина, жидкой глюкозы, высушенного порошка жидкой глюкозы (коммерческое твердое вещество кукурузного сиропа), декстрана, декстрина и растворимого крахмала) или растворимого некрахмального полисахарида (например, камеди рожкового дерева, пектина, аравийской камеди).
Пример II
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаружили никакого осаждения при любом испытанном значении рН.
Получали 60 мл водного раствора, в котором были растворены растворимая холевая кислота, растворимая 7-кетолитохолевая кислота и растворимая хенодезоксихолевая кислота. В образовавшийся прозрачный раствор добавляли при перемешивании при комнатной температуре мальтодекстрин. Для регулирования общего объема до 100 мл добавляли очищенную воду.
С использованием этой композиции проводили испытание на стабильность для водного раствора смеси различных желчных кислот, которые могут регулировать гидрофильность или гидрофобность.
В таблице 1А показаны результаты испытания стабильности на протяжении времени при рН 7 и 50°С композиций СА, 7-кетолитохолевой кислоты (KLCA), CDCA и DCA в растворе с мальтодекстрином, полученных в соответствии с примером I. Концентрации желчных кислот измеряли ВЭЖХ и концентрация желчной кислоты как процент ее концентрации в день 0 приводится в колонке, отмеченной как процент.
В таблице 1В показаны результаты испытания стабильности на протяжении времени при рН 10 и 50°С композиций СА, 7-кетолитохолевой кислоты, CDCA и DCA в растворе с мальтодекстрином, полученных в соответствии с примером I.
В таблице 2 показаны результаты испытания стабильности на протяжении времени при рН 1 и 50°С композиций СА, 7-кетолитохолевой кислоты, CDCA и DCA в растворе с мальтодекстрином, полученных в соответствии с примером II.
Пример III
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаружили никакого осаждения при любом испытанном значении рН.
Получали 80 мл водного раствора, в котором была растворена растворимая UDCA и затем в образовавшийся прозрачный раствор добавляли при перемешивании при комнатной температуре мальтодекстрин. В образовавшийся прозрачный раствор добавляли подслащивающее вещество, консерванты и корригенты в количествах, подходящих для фармацевтических композиций. Для регулирования общего объема до 100 мл добавляли очищенную воду.
В этих приготовлениях лекарственные формы в виде водных растворов содержат различные концентрации урсодезоксихолевой кислоты (или ее солей) с соответствующим им минимальным или большим количеством водорастворимых продуктов превращения крахмала (например, мальтодекстрина, жидкой глюкозы, высушенного порошка жидкой глюкозы (коммерческое твердое вещество кукурузного сиропа), декстрана, и растворимого крахмала).
Фиг.6 представляет собой ЯМР-спектр UDCA, демонстрирующий, что UDCA, когда она находится в композиции, полученной в соответствии с примером III, является абсолютно свободной UDCA. То есть карбоновая кислота UDCA в положении С-24 находится в свободной форме (R-COOH) и две гидроксильные группы в положениях С-3 и С-7 находятся в свободной форме (R-OH).
Кроме того, профиль ВЭЖХ кислоты UDCA в композиции, полученной в соответствии с примером III (фиг.7), подобен профилю UDCA, растворенной в метаноле (фиг.8). Эти данные показывают, что не имеется UDCA-комплексного соединения. Присутствует только свободная UDCA. Стандартный раствор UDCA получали растворением 100 мг UDCA в 100 мл метанола. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил (51), воду (49) и уксусную кислоту (1).
Пример IV
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаружили никакого осаждения при любом рН в выбранном, нужном диапазоне величин рН.
Получали 85 мл водного раствора, в котором была растворена растворимая UDCA, и затем в образовавшийся прозрачный раствор добавляли мальтодекстрин. В образовавшийся прозрачный раствор добавляли при перемешивании разветвленные аминокислоты с регулированием рН (4-7) и затем добавляли подслащивающее вещество, консерванты и корригент. Для регулирования общего объема до 100 мл добавляли очищенную воду.
На основе этих составов были получены лекарственные формы в виде водных растворов различных концентраций урсодезоксихолевой кислоты (или ее соли) и соответствующее ей минимальное или большее количество мальтодекстрина, жидкой глюкозы, высушенного порошка жидкой глюкозы, (коммерческий сироп кукурузы) или декстрана с различными количествами разветвленной аминокислоты (общее количество лейцина, изолейцина и валина).
В таблицах 3А-3F показаны результаты испытания на стабильность на протяжении времени композиции, полученной с аминокислотами в соответствии с примером IV. Все испытания на стабильность проводили при 50°С. Показаны результаты испытаний на стабильность при рН 1 (таблица 3А), рН 3 (таблица 3В), рН 5 (таблица 3С), рН 7 (таблица 3D), рН 9 (таблица 3Е) и рН 10 (таблица 3F).
Пример V
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживают никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне. Эта композиция основана на известных аналитических данных для фармацевтического использования желчной кислоты.
Растворимую UDCA растворяют в воде и затем добавляют имеющий высокую молекулярную массу водорастворимый продукт превращения крахмала и воду. В образовавшийся прозрачный раствор добавляют тауро-UDCA, тауро-CDCA, глико-UDCA, глико-CDCA, подслащивающее вещество и корригент. Очищенную воду добавляют для регулирования общего объема до 2,0 л.
Пример VI
Лекарственные формы в виде водных растворов в соответствии с данным изобретением, содержащие 200 мг урсодезоксихолевой кислоты (UDCA), получали по способу, описанному в вышеуказанном примере III, и вводили трем здоровым мужчинам, имеющим нормальную массу после голодания. Уровни UDCA и глико-UDCA в крови оценивали при помощи хорошо известных химических способов. После введения забуференной сыворотки в колонку sep-pak метанольный элюат дериватизировали фенацилбромидом при 80°С в течение 45 минут. Эти производные фенацилбромида растворяли в ацетонитриле в препарате для ВЭЖХ. Экспериментальные результаты абсорбции, измеренные через некоторые промежутки времени после дозированного введения, включают общую абсорбцию, выраженную в виде площади под кривой концентрация в сыворотке-время (AUC: мкг/мл×часы), максимальную концентрацию в крови (Cmax; мкг/мл), которая была получена, и время (Тmax; час), при котором была получена указанная максимальная концентрация. Эти результаты приводятся в таблице 4, на фиг.1 и фиг.2.
Экспериментальные фармакокинетические испытания лекарственных форм в виде водных растворов по данному изобретению, проведенные на мужчинах, показали значительные улучшения в AUS, Cmax и Тmax по сравнению с лучшими результатами любых лекарственных форм, известных до настоящего времени. Максимальная концентрация в крови (Cmax) в таблице 4 показывает среднее значение 8,43±1,69 мкг/мл, которое, по меньшей мере, в два раза выше, чем максимальная концентрация, указанная при использовании препаратов натриевой соли UDCA с энтеросолюбильной оболочкой, и в четыре раза выше, чем максимальная концентрация, полученная с использованием обычных препаратов UDCA в виде таблеток. Кроме того, время пиковой концентрации (Тmax), которое близко связано со скоростью абсорбции UDCA из лекарственной формы в виде водного раствора, составляет 0,25 часа, по меньшей мере, в три раза быстрее, чем ранее известное самое быстрое Тmax.
В таблице 4А и таблице 4В показана концентрация в плазме UDCA и GUDCA, измеренная у 3 мужчин на протяжении времени после перорального введения содержащих UDCA и GUDCA готовых препаративных форм в соответствии с примером VI, и сравнение результатов с результатами других используемых различных фармацевтических готовых препаративных форм UDCA.
В таблице 5 показаны фармакокинетические параметры UDCA у человека после перорального введения жидкой готовой препаративной формы UDCA. Показано Cmax.
Взятые вместе данные в таблицах 4 и 5 и фигурах 3 и 4 иллюстрируют превосходство готовых препаративных форм настоящего изобретения относительно обычных готовых препаративных форм в отношении Сmax и Тmax. Растворы настоящего изобретения действовали без любого разрушения системы раствора, вызванного рН окружающей среды в желудке и кишечнике. Терапевтический потенциал желчной кислоты и, возможно, даже добавленных фармацевтических средств может более полно реализовываться с использованием готовых препаративных форм изобретения. Когда терапевтически активные ингредиенты в формах водных растворов не осаждаются в виде твердых веществ под действием кислотного желудочного сока в желудке и под действием различных щелочных значений рН кишечника, препарат преодолевает как природное последствие недостаточную биологическую доступность, происходящую в результате неожиданных, нежелательных результатов для степени и скорости высвобождения дезинтеграцией, растворением и/или диффузией, которые должны быть преодолены.
(мкг/мл)
Пример VII
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживают никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Получали 85 мл водного раствора, в котором растворен растворимый UDCA, и затем в прозрачный раствор добавляли смесь высушенного порошка жидкой глюкозы, имеющего высокую молекулярную массу водорастворимого продукта превращения крахмала и растворимого некрахмального полисахарида (камедь рожкового дерева, пектин и т.д.). Очищенную воду добавляли для регулирования общего объема до 100 мл.
Пример VIII: Раствор смеси
Композиции примеров VIII, IX и Х включают сульфат висмута. В каждом из этих примеров лекарственные формы в виде раствора получали добавлением количества аммониевой соли сульфата висмута, достаточного для обеспечения указанного количества висмута.
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
UDCA и CDCA сначала растворяли в 1,5 мл 1 н. раствора NaOH. Затем в образовавшийся прозрачный раствор добавляли цитрат висмута и 150 мл воды. Затем порциями при энергичном перемешивании добавляли твердое вещество кукурузного сиропа. Образовавшийся раствор титровали лимонной кислотой до рН 4. Очищенную воду добавляли для установления общего объема 1,0 л.
Пример IX: Сироп UDCA (20 г UDCA/л)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA в 60 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли сульфат висмута и 150 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли мальтодекстрин. Образовавшийся раствор титровали лимонной кислотой до рН 3,5. Очищенную воду добавляли для установления общего объема 1,0 л.
Пример X: Сироп UDCA (20 г UDCA/л)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA в 60 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли сульфат висмута и 280 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 1050 г твердого вещества кукурузного сиропа. Образовавшийся раствор титровали лимонной кислотой до рН 3,5. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пример XI: Густой сироп UDCA (30 г UDCA/л)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA в 90 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли сульфат висмута и 250 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 1050 г мальтодекстрина. Образовавшийся раствор титровали до рН 3 добавлением 50 г лимонной кислотой. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пример XII: Густой сироп UDCA (30 г UDCA/л)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими рецептами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA в 90 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли сульфат висмута и 230 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 1500 г твердого вещества кукурузного крахмала. Образовавшийся раствор титровали до рН 3 добавлением 50 г лимонной кислотой. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пример XIII: Паста UDCA (45 г UDCA/л)
Препараты примеров XIII, XIV, XV и XVI включали цитрат висмута. В каждом из указанных примеров лекарственные формы в виде растворов получали добавлением количества аммониевой соли цитрата висмута, достаточного для обеспечения указанного количества цитрата висмута.
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA в 135 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли цитрат висмута и 200 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 1575 г мальтодекстрина. Образовавшийся раствор титровали до рН 3 добавлением лимонной кислоты. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пять человек снабжали лекарственными формами, полученными в соответствии с данным примером. Результаты показаны в таблицах 5А и 5В и представлены графически на фиг.3 и 4. Сравнение острого пика фиг.3 с широким пиком фиг.4 указывает на то, что посредством регулирования лекарственной формы практикующий врач может манипулировать с Cmax и Тmax желчных кислот.
Н.pylori культивировали на среде Columbia Bood Agar Base (CRAB), содержащей препарат примера IX. Получали чашки с 2 л CRAB, которая содержала 9,9 г CRAB, 9,1 г агара с триптической соей, 50 мл крови овец, вакомицин, амфотерицин В, полимиксин В, 2 мл препарата примера IX и 358 мл дистиллированной воды. После микроаэрофильного культивирования от 48 до 72 часов бактерии фиксировали с использованием фиксатора Karnovsky и заливали в эпон. Электронные микрофотографии клеток Н.pylori показаны на фиг. от 5А до 5С.
Пример XIV: Паста UDCA (45 г UDCA/л)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA в 135 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли цитрат висмута и 150 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 2300 г твердого вещества кукурузного сиропа. Образовавшийся раствор титровали до рН 3 добавлением лимонной кислоты. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пример XV: Раствор смеси UDCA (22 г) и CDCA (3 г)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA и CDCA в 75 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли цитрат висмута и 240 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 875 г мальтодекстрина. Образовавшийся раствор титровали до рН 3 добавлением лимонной кислоты. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пример XVI: Раствор смеси UDCA (22 г) и CDCA (3 г)
Лекарственные формы в виде растворов, которые были получены в соответствии со следующими составами, не обнаруживали никакого осаждения при любом рН в выбранном, необходимом диапазоне.
Сначала растворяли UDCA и CDCA в 75 мл 1 н. раствора NaOH. Затем к образовавшемуся прозрачному раствору добавляли цитрат висмута и 240 мл воды. Затем в виде порций при энергичном перемешивании добавляли 1320 г твердого вещества кукурузного сиропа. Образовавшийся раствор титровали до рН 3 добавлением лимонной кислоты. Очищенную воду добавляли до установления общего объема 1,0 л.
Пример XVII
Испытывали влияние обработки инфицированных Н.pylori мышей лекарственной формой в виде раствора данного изобретения. Самок мышей C57BL/6 возраста шесть недель инфицировали кормлением пищей, включающей 109 CFU/мл штамма SS1 Н.pylori. Мыши потребляли этот корм два раза с интервалом кормления одну неделю. Затем четырем инфицированным животным вводили 0,2 мл лекарственной формы в виде раствора в соответствии с примером VIII один раз в день в течение одной недели. Двух животных умерщвляли через одну неделю после введения последней дозы раствора изобретения. Оставшихся двух животных умерщвляли через четыре недели после введения последней дозы раствора изобретения. Все желудки промывали насыщенным раствором соли для удаления слизистой оболочки и дебриса. Образец ткани желудка каждого животного подвергали испытанию CLO с использованием набора для быстрого теста на уреазу (Delta West, Australia). Каждый оставшийся после промывания желудок фиксировали 10% раствором формалина и заливали парафином. Гистологические срезы (толщина 4 мкм) собирали на предметные стекла и окрашивали окрашивающим раствором Н&Е и окрашивающим раствором Warthin. Ткань оценивали на патологическое состояние общепринятой микроскопией.
Результаты, суммированные в таблице 6, показывают, что результаты с тестом на уреазу были отрицательными для мышей, у которых прошла одна неделя после прерывания введения жидкой лекарственной формы, и Н.pylori не был обнаружен в анализе Warthin. Из других двух мышей одна показала отрицательный тест на уреазу и не было видно Н.pylori в анализе Warthin. Другая, однако, проявила положительный тест на уреазу, хотя только несколько Н.pylori было видно в анализе Warthin.
Пример XVIII
Проводили анализ роста Н. pylori на среде, содержащей UDCA, или цитрат висмута, или как UDCA, так и цитрат висмута. Для этих анализов использовали следующие среды:
000112В-1, имеющий рН 4,0 и включающий 525 г/л мальтодекстрина и 15 г/л UDCA.
OSABY, имеющий рН 3,7 и содержащий 1 кг/л твердого вещества кукурузного сиропа и 6 г/л цитрата висмута.
Эти анализы проводили для оценки способности роста Н. pylori в присутствии UDCA, висмута или обоих, причем рН, концентрацию и продолжительность действия варьировали.
1. Helicobacter pylori суспендировали в физиологическом солевом растворе с получением содержания организмов около 109 на миллилитр. 50 мкл этого инокулята переносили в пробирки, содержащие 1 мл цитрат-фосфатного буфера при рН 3,0, 4,0 и 4,5. Парные пробирки получали с 6 мМ мочевиной и без нее. После инкубации 30 минут при комнатной температуре суспензии пересевали на агаровых чашках, содержащих 000112В-1, с использованием 1 мкл петли. Чашки инкубировали в микроаэрофильных условиях при 37°С в течение 72 часов. Данная процедура иллюстрируется на фиг.9.
Как показано в таблице 7, Н. pylori плохо рос на контрольной среде с рН 3 и рН 4. В таблице 7 также видно, что Н. pylori не рос на среде с рН 3 и рН 4, содержащей UDCA. Обозначения "3 мл", "4 мл" и "5 мл" относятся к общему объему среды 000112В-1 на чашку. "PBS" является забуференным фосфатом солевым раствором при рН 7,0.
Нет
FO
FO
0
0
Нет
FO
FO
O
Р
Нет
FO
O
FP
Р
Нет
O
FP
Р
Р
Нет
Y
Y
Y
Y
Нет
Y
Y
Y
FO
Нет
FP
FP
Р
Р
Нет
Y
Y
Y
Y
Нет
Y
Y
FO
FO
Нет
FP
FP
FP
Р
Нет
Y
Y
Y
Y
Нет
Y
Y
Y
Y
Нет
FP
FP
Р
Р
2. Helicobacter pylori суспендировали в физиологическом солевом растворе с получением содержания организмов около 109 на миллилитр. 50 мкл этого инокулята переносили в пробирки, содержащие 1 мл цитрат-фосфатного буфера при различных концентрациях среды для чашек Петри, таких как 1/10, 1/30, 1/50, 1/100, 1/200, 1/500, 1/800, 1/1000, 1/2000. Все пробирки получали с 6 мл мочевины. После инкубации 30 минут при комнатной температуре суспензии пересевали на агаровых чашках с использованием 1 мкл петли. Эти чашки по существу не содержали висмут и желчные кислоты. Чашки инкубировали в микроаэрофильных условиях при 37°С в течение 72 часов. Данная процедура иллюстрируется на фиг.10.
В таблице 8 показаны результаты тестирования уреазы после 72 часов роста Н. pylori на средах, полученных с разведениями UDCA (000112В-1), или цитрата висмута (OSABY), или как UDCA, так и цитрата висмута. Наблюдали бедный рост Н. pylori на средах, содержащих либо UDCA, либо цитрат висмута (таблица 8). Рост Н. pylori далее ослабевал, когда культивирование проводили на средах, содержащих как UDCA, так и цитрат висмута (таблица 8).
3. Helicobacter pylori суспендировали в физиологическом солевом растворе с получением содержания организмов около 109 на миллилитр. 50 мкл этого инокулята переносили в пробирки, содержащие 1 мл цитрат-фосфатного буфера при различных концентрациях, таких как 1/2, 1/4 и 1/10, и инкубировали в течение 15 минут, 1/2, 1/4 и 1,10 и инкубировали в течение 30 минут и 1/2, 1,4 и 1/10 и инкубировали в течение 45 минут. Парные пробирки инокулировали с 6 мМ мочевиной или без нее. После инкубации 30 минут при комнатной температуре суспензии пересевали на чашках с агаровой средой с пользованием 1 мкл петли. Эти чашки по существу не содержали висмут и желчные кислоты. Чашки инкубировали в микроаэрофильных условиях при 37°С в течение 72 часов. Данная процедура иллюстрируется на фиг.11.
В таблице показаны результаты тестирования уреазы после 72 часов роста Н. pylori на среде, полученной с разбавлением UDCA (000112B-1), или цитрата висмута, или как UDCA, так и висмута. Как указано, более продолжительные времена воздействия вызвали повышение отрицательного действия растворов на Н. pylori.
Изобретение относится к медицине и касается создания фармацевтических композиций, содержащих желчные кислоты, и способов лечения заболеваний этими композициями. Для этого предлагается композиция, представляющая собой прозрачный водный раствор, содержащий желчную кислоту или ее соединения, полисахарид и воду. При этом количества первых двух компонентов подбирают таким образом, чтобы они оба оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН. Введение такой композиции в организм характеризует способ повышения уровня энтерогепатической желчной кислоты, в том числе в крови, а также повышения абсорбции желчной кислоты. Добавление в указанную композицию различных лекарственных средств позволяет эффективно лечить соответствующие заболевания. Изобретение приводит к улучшению доставки к тканям организма самих желчных кислот как самостоятельных терапевтических агентов, так и лекарственных средств. 6 н. и 41 з.п. ф-лы, 9 табл., 11 ил.
(а) введение прозрачного водного раствора, содержащего:
(i) первый материал, выбранный из группы, состоящей из желчной кислоты, водорастворимого производного желчной кислоты, соли желчной кислоты, желчной кислоты, конъюгированной с амином амидной связью, и их комбинаций;
(ii) второй материал, выбранный из группы, состоящей из водорастворимого продукта превращения крахмала и/или водорастворимого некрахмального полисахарида, и
(iii) воду,
причем количества первого и второго материала подбирают таким образом, чтобы они оба оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН.
(а) введение прозрачного водного раствора, содержащего:
(i) первый материал, выбранный из группы, состоящей из желчной кислоты, водорастворимого производного желчной кислоты, соли желчной кислоты, желчной кислоты, конъюгированной с амином амидной связью, и их комбинаций;
(ii) второй материал, выбранный из группы, состоящей из водорастворимого продукта превращения крахмала или водорастворимого некрахмального полисахарида, и
(iii) воду,
причем количества первого и второго материала подбирают таким образом, чтобы они оба оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН.
(а) введение прозрачного водного раствора, содержащего:
(i) первый материал, выбранный из группы, состоящей из желчной кислоты, водорастворимого производного желчной кислоты, соли желчной кислоты, желчной кислоты, конъюгированной с амином амидной связью, и их комбинаций;
(ii) второй материал, выбранный из группы, состоящей из водорастворимого продукта превращения крахмала и/или водорастворимого некрахмального полисахарида, и
(iii) воду,
причем количества первого и второго материала подбирают таким образом, чтобы они оба оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН.
(а) введение прозрачного водного раствора, содержащего:
(i) первый материал, выбранный из группы, состоящей из желчной кислоты, водорастворимого производного желчной кислоты, соли желчной кислоты, желчной кислоты, конъюгированной с амином амидной связью, и их комбинаций;
(ii) второй материал, выбранный из группы, состоящей из водорастворимого продукта превращения крахмала и/или водорастворимого некрахмального полисахарида, и
(iii) воду,
причем количества первого и второго материала подбирают таким образом, чтобы они, оба, оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН.
(а) введение прозрачного водного раствора, содержащего:
(i) первый материал, выбранный из группы, состоящей из желчной кислоты, водорастворимого производного желчной кислоты, соли желчной кислоты, желчной кислоты, конъюгированной с амином амидной связью, и их комбинаций;
(ii) второй материал, выбранный из группы, состоящей из водорастворимого продукта превращения крахмала и, водорастворимого некрахмального полисахарида, и
(iii) воду,
причем количества первого и второго материала подбирают таким образом, чтобы они, оба, оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН.
(a) первый материал, выбранный из группы, состоящей из желчной кислоты, водорастворимого производного желчной кислоты, соли желчной кислоты и желчной кислоты, конъюгированной с амином амидной связью;
(b) полисахарид, имеющий, по меньшей мере, одну восстанавливающую концевую группу и, по меньшей мере, одну невосстанавливающую концевую группу, и
(c) воду,
причем количества первого материала и полисахарида, подбирают таким образом, чтобы они оба оставались в растворе при всех величинах выбранного диапазона рН.
| MOSES A.C | |||
| et al | |||
| Diabetes, 1983, vol.32, pp.1040-1047 | |||
| RU 97112497 А, 10.06.1999 | |||
| US 4999287 A, 12.03.1991 | |||
| JP 62153220 А, 08.07.1987 | |||
| УАЙКА Л.А | |||
| и др | |||
| Фармакотоксикологические аспекты применения циклодекстринов в качестве носителей лекарственных средств (Обзор) | |||
| Химико-фармацевтический журнал, 1990, №7, с | |||
| Способ изготовления электрических сопротивлений посредством осаждения слоя проводника на поверхности изолятора | 1921 |
|
SU19A1 |
| WANG X | |||
| et al | |||
| The protectiv | |||
