СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВАГИНАЛЬНОГО КАНДИДОЗА Российский патент 2006 года по МПК G01N33/487 

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и может быть использовано для диагностики вагинального кандидоза.

Известен микроскопический и культуральный метод диагностики вагинального кандидоза, основанный на выявлении во влагалищном секрете клеточных элементов и псевдомицелия грибов Candida с количественной оценкой колониеобразующих единиц на мл исследуемого материала (Кубанова А.А., Потекаев Н.С., Потекаев Н.Н. Руководство по практической микологии. - М.: ФИД «Деловой экспресс». - 2001. - с.136-137).

Недостатки прототипа: не высоко специфичен, не позволяет дифференцировать различные формы кандидозной инфекции, трудоемкий, продолжительный во времени.

Изобретение направлено на решение задач: упрощение при высокой точности, повышение специфичности и информативности диагностики вагинального кандидоза.

Технический результат: исключение необоснованного применения антимикотических средств при кандидоносительстве.

Поставленные задачи достигаются путем определения коэффициента вирулентности (К_в) грибов С.albicans, для чего влагалищный секрет высевают на чашки с плотной средой Сабуро с добавлением желтка, помещают в термостат при 37° и через 48 часов с помощью компьютерной морфометрии оценивают результат, измеряя диаметр 10 произвольно выбранных колоний и ширину зоны опалесцирующего просветления вокруг них.

Рассчитывают коэффициент вирулентности (K_в) по формуле:

К_в=А/D, где

- среднее значение ширины зоны просветления вокруг колоний,

- среднее значение диаметра выросших колоний, и при значениях К_в≥0,3 диагностируют вагинальный кандидоз, а менее 0,3 - кандидоносительство.

Появление и степень выраженности опалесцирующего просветления вокруг колонии связано с проявлением фосфолипазной активности (ФЛА), которая рассматривается как основной, коррелирующий с другими, фактор патогенности С.albicans (Mahmoud A. Ghannoum. Potential Role of Phoapholipases in Virulence and Fungal Pathogenesis// Clinical Microbiology, Jan 2000 Reviews, Vol.13. - №1. - P.122-143). Определение К_в, который рассчитывают на основе этой характеристики, позволяет различать штаммы грибов по степени их болезнетворности, что дает возможность дифференцировать вагинальный кандидоз от кандидоносительства.

Способ осуществляется следующим образом: у женщины, ложкой Фолькмана (0,1 мл) забирают вагинальный секрет и помещают в пробирку с физиологическим раствором (0,9 мл). В стерильных условиях берут полную бактериологическую петлю содержимого пробирки (исследуемого материала) и засевают штрихом на питательную среду с желтком, которая готовится следующим образом: к 50 мл плотной стандартной среды Сабуро, расплавленной на водяной бане, добавляют 0,8 мл яичного желтка, суспензированного в 20 мл стерильного физиологического раствора, перемешивают и разливают по чашкам Петри. Засеянную чашку Петри помещают в термостат и выдерживают в течение двух суток при Т=37°С. О наличии ФЛА и степени ее выраженности, определяющей вирулентность грибов С.albicans, судят по образованию зоны опалесцирующего просветления вокруг колонии. Морфометрический анализ выполняют с помощью установки OLYMPUS (производство Япония) для компьютерной микроскопии, при инструментальных увеличениях 4×0,85×10. По вышеуказанной формуле рассчитывают коэффициент вирулентности (К_в) и при его значении ≥0,3 диагностируют вагинальный кандидоз.

Примеры практического применения:

Пример 1. Пациентка А., 35 лет, обратилась к врачу для прохождения очередного медицинского осмотра.

Объективно: слизистая вульвы и влагалища физиологической окраски, выделения нормальные.

При микроскопии мазка: флора умеренная с преобладанием бациллярной, единичные лейкоциты, эпителий плоский 1-2 в поле зрения. Почкующиеся клетки дрожжевых грибков.

Кв=0,255

Ds: Здорова. Кандидоносительство (вагинальный кандидоз исключен).

Пример 2. Пациентка И., 23 года, обратилась с жалобами на дискомфорт, зуд и выделения из влагалища.

Объективно: Гиперемия, отечность вульвы и влагалища, трещины, микроэрозии на слизистой влагалища, плотный белесоватый налет, выделения обильные, творожистые, имеют нерезкий кисловатый запах.

Аминный тест отрицательный.

В мазке: флора скудная, лейкоциты 25-30 в поле зрения, почкующиеся клетки и псевдомицелий гриба.

Кв=0,821.

Ds: Вагинальный кандидоз.

Пример 3. Пациентка С., 20 лет, обратилась с жалобами на дискомфорт и обильные выделения из влагалища с запахом.

Объективно: очаговая гиперемия, отечность вульвы и влагалища, трещины, микроэрозии, выделения обильные, имеют неприятный запах.

Аминный тест положительный.

В мазке: флора обильная, полиморфная, преимущественно кокковая, лейкоциты 10-20 в поле зрения, «ключевые» клетки 3-4 в поле зрения, почкующиеся клетки дрожжевых грибков.

Кв=0,675.

Ds: Бактериальный вагиноз в сочетании с вагинальным кандидозом.

Пример 4. Пациентка Н., 30 лет, обратилась для прохождения очередного медосмотра.

Объективно: диффузная гиперемия, отечность влагалища, выделения гомогенные, желтоватого цвета.

Аминный тест отрицательный.

В мазке: флора смешанная с преобладанием кокковой, лейкоциты 15-20 в поле зрения, почкующиеся клетки дрожжевых грибков.

Кв=0,190.

Ds: Неспецифический вагинит. Кандидоносительство (вагинальный кандидоз исключен).

Положительный эффект заявляемого способа состоит в следующем: способ высоко специфичен и информативен, позволяет дифференцировать различные формы кандидозной инфекции влагалища, исключает при кандидоносительстве необоснованное применение антимикотических средств; высокая скорость выполнения, низкая себестоимость.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для диагностики вагинального кандидоза. Сущность изобретения состоит в том, что у обследуемых из влагалищной жидкости выделяют грибы рода Candida на плотной среде Сабуро с добавлением желтка, измеряют диаметр выросших колоний с помощью компьютерной морфометрии, ширину зоны просветления вокруг них и рассчитывают коэффициент вирулентности (К_в) по предлагаемой формуле, и при значении К_в≥0,3 диагностируют вагинальный кандидоз. Техническим результатом является упрощение и повышение специфичности и точности диагностики вагинального кандидоза.

Способ диагностики вагинального кандидоза путем исследования влагалищной жидкости, отличающийся тем, что выделение грибов Candida производят на плотной среде Сабуро с добавлением желтка, с помощью компьютерной морфометрии измеряют диаметр выросших колоний и ширину зоны просветления вокруг них, затем рассчитывают коэффициент вирулентности (К_в) по формуле

К_в=A/D,

где А - среднее значение ширины зоны просветления вокруг колоний;

D - среднее значение диаметра выросших колоний,

и при значениях К_в≥0,3 диагностируют вагинальный кандидоз.