Способ диагностики кандидоза Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

о

со

СО ОО

ю

ОО

Изобретение относится к области микологии и может быть использовано в диагностике кандвдоза, вызванного Candida albicans.

Наиболее часто кавдидоэ вызываетс дрожжеподобными грибками С,albicans.

Известен способ комплексной клинико-лабораторной диагностики кандидоза, включающий клиническое, микроскопическое, культуральное, серологическое исследование и постановку внутрикожных проб со специфическим аллергеном l .

Недостатком способа является высеваемосты С.albicans, положительные серологические реакции и результаты постановки внутрикожных проб со специфическим аллергеном у части практически здоровых лиц, а также часто негативные результаты этих тестов у больных кандидозом, В связи с этим кандидозная природа заболевания устанавливается лишь с учетом динамики изменения культуральных находок и сероло ических сдвигов (увеличение коли ества клеток гриба в патологическом материале, нарастание . титров противокандидозных антител в сыворотке кровиJ при повторных исследованиях.

Цель изобретения - ускорение диагностики кандвдоза, вызванного С. albicans.

Поставленная цель достигается тем что согласно способу путем вьщеления и исследования патологического материала обследуемых лиц исследуют адгез1шную активность Candida albicans путем инкубации их с эпителиальными клетками при соотношении :JOO в. течение 1,5-2 ч в термостате и при адгезии в среднем J6 и более клеток гриба на одну эпителиальную клетку диагностируют кандидоз.

Способ осуществляется следующим образом,

В фазу овуляции (14-18-й день менструального цикла от 22 здоровых женщин забирают поверхностные эпителиальные клетки слизистой оболочки влагалища путем смьша вагинального содержимого 10-ю мл стерильного абуференногофизиологического раствора (ЗФР рН 7,2.5,ПолученнЬ1Й материал смешивают трижды, отмывают;, таким же раствором центрифугированием

в режиме 2000 об./мин по 10 мин и суспендируют в ЗФР рН 7,2 до конечной концентрации 50000 клеток в 1 мл (подсчет клеток осуп1ествляют в камере Горяева), Двухсуточную- культуру исследуемых штаммов С.albicans, выращенных на сусло-агаре, смывают ЗФР рН 7,2, профильтровьгоают через 6-слойный марлевый фильтр, троекратно отмьшают от остатков среды 20 .объемами ЗФР рН 7,2 центрифуги0рованием при 2000 об./мин в течение 15 мин и взвешивают в таком же растворе до концентрации клеток 500000 в I мл 0,25 мл суспензии эпителиальных клеток, смешивают с равным

5 объемом взвеси гриба и полученную смесь инкубируют в термостате при 37 С в течение 1,5 ч при периодическом перемешивании. Затем материал ресуспендируют и на предметных стеклах

0 готовят по 5 мазков для каждого из исследуемых штаммов. Мазки высушивают при комнатной температуре, окрашивают 0,1%-ным раствором трипанового сине- го в течение 10 мин, остатки краски смьшают слабой струей водопроводной воды и стекла вновь подсушивают. В каждом мазке под микроскопом подсчи тьшают общее количество клеток гриба, прилипших к 100 неповрегденным эпителиальным клеткам. Результаты выражают индексом адгезии, определяющимся по формуле:

общее количество прилипших клеток гриба

ИЛ

500

Пример 1. Больная 37 лет поступила в кл1даику глубоких микозов с жалобами на зуд наружных половых органов в области ануса, небольшие пенисто-творожистые вьщеления из влагалища. При осмотре гинекологом обнару7кены явления вульвовагинита. Антитела к специфическому антигену, присутствовали в сьшоротке крови в титрах J:64. При микроскопии мазков отделяемого влагалища обнаружена влагалищная трихимонада. Посев патологического материала на сусло-агар выявил рост дрожжевых грибов в .количестве 12500 колоний/мл, культура идентифицирована как Candida albicans. Вьщеленный гриб в тот же день засевали на сусло-агар, ин5 кубировали 2 сут при 37°С. Культуру гриба смывали с агара и определяли ее адгезгшную активность. №адекс адгезии составил 18,О,что указьюало

на наличие у больной кандидозного вульвовагинита.

Действительно, на основании повторных микологических и серологических исследований, проведенных через неделю, у больной подтвердилось наличие кандидозного вульвовагшшта. Больной поставлен диагноз хроническо го вульвовагинита смешанной кандидозно-трихомонадной этиологии в стадни обострения. Сочетанное лечение противогрибковыми и антитрихомониазными препаратами привело к положительному эффекту.

П р и м е р 2, Больная 42 лет пос тупила в клинику глубоких микозов с жалобами на сухой постоянньш кашель, затрудненное дыхание, боли в левом боку при вдохе,непереносимость едких запахов, слабость, суОфебрильную тем пературу по вечерам, головные боли. В 1977 г. впервые перенесла пневмойию, после чего беспокоит постоянный кашель, слабость, периодическое повьг йёние температуры до субфебрильной. С 1975 г. на работе имеет контакт с плесневыми грибами. При объективном обследовании у больной обнаружены явления трахеобронхита,

При бактереологическом исследоваmm мокроты выявлен стафилококк. 21 апреля из мокроты вьщелены плесне- вые грибы (аспергил и пеницилл). При повторном микологическом исследовании патологического материала, проведенном 5 мая, в мазке мокроты обнаружены единичные дрожжевые клетки, а посевном материале - дрожжевые грибы в количестве 400 колоний /мл, которые были ид.ентифициррваны как Candida albicans. Одновременно выделенную культуру гриба засеялк на сусло-агар, инкубировали 2 сут при 37 С и 13 мая определяли адгезивную

активность полученного гриба. Индекс адгезии оказался равным 6,2, что свидетельствовало о кандиданосительстве у данной больной.

Действительно, последующие микологические и иммунологические исследования, проведенные спустя неделю, подтвердили отсутствие кандидоза у больной. Был поставлен диагноз хронического бронхита бактериальноплесневой этиологии в стадии умеренного обострения, микогенной сенсибилизации к Candida albicans,обусловленной каидидоносительством в бронхах.

Таким образом, предложенный способ позволяет обойтись при диагностике кандвдоза без постановки серологических реакций и внутрикожных проб, а также исключает необходимость повторных культуральных и серологических исследований.

Предложен1ШЙ способ позволяет сократить время диагностики кандидоза на срок около 6 дней.

Предлагаемое изобретение проверено на 20 штаммах Candida albicans, вьщеленных от больных кандидозным вульвовагинитом, и 10 культурах того же гриба, полученных от здоровых жен7 щин. Результаты исследования показали что у грибов., полученных из влагалища здоровых женщин, индекс адгезии гриба к клеткам эпителия влагалища не превышал П, у грибов, вьщеленных из влагалища здоровых женщин, этот показатель равнялся 16 и более.

Результаты , опытов представлены в таблице.

Таким образом, предложенный способ позволяет сократить время исследования с 10 до 4-х дней, что ускоряет диагностику кандидоза на 6 дней.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КАНДИДОВА путем выделения и исследования патологического материала, отличающийся тем, что, с целью ускорения диагностики, исследуют адгезивную активность Candida albicans путем инкубации их с эпителиальными клетками при соотношении 1:100 в течение 1,5-2 ч в термостате и при адгезии в среднем 16 и более клеток гриба на одну эпителиальную клетку диагностируют кандидоз.

Штаммы гриба, вьщеленные от здоровых

Штаммы гриба, вьщеленные от больных

От 7 до 8 От 8 до 9 11

Продолжение таблицы

5 6 1

От 18 до 19 От 19 до 20 23,4