СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИМПЕРАТИВНОГО НЕДЕРЖАНИЯ МОЧИ Российский патент 2006 года по МПК A61K35/30 A61K35/54 A61P13/10 

Настоящее изобретение относится к терапии и может найти применение в лечении императивного недержания мочи.

Урогенитальные расстройства в климактерии - комплекс вагинальных и мочевых симптомов, развитие которых является осложнением атрофических и дистрофических процессов в эстрогензависимых тканях и структурах нижней трети мочеполового тракта: мочевом пузыре, уретре, влагалище, связочном аппарате и мышцах тазового дна.

Основой терапии императивного недержания мочи является заместительная гормонотерапия в комбинации с одним из препаратов, обладающих М-холинолитическим действием, таким как оксибутинин (новитропан), детрузитол (толтеродин), троспия хлорид (спазмекс) (Регистр лекарственных средств России "Энциклопедия лекарств", 10 выпуск, 2003, стр.611, 265, 852).

Основной недостаток такой терапии - большое количество побочных эффектов, таких как сухость во рту, тошнота, рвота, запор, метеоризм, снижение моторики желудка и кишечника, сердцебиение, тахикардия, вазодилатация, слабость, головокружение, сонливость или бессонница, беспокойство, галлюцинации, снижение продукции слезной жидкости, мидриаз, повышение внутриглазного давления, паралич аккомодации, нарушения зрения (амблиопия), пониженное потоотделение, подавление лактации, аллергические реакции (высыпания) и множество противопоказаний.

Частичное снижение побочных эффектов такой терапии достигнуто за счет использования вагинальных суппозиториев, содержащих оксибутинин и эстриол (Патент РФ №2241442, 2004). Длительность терапии минимум 6 месяцев.

Однако и это средство полностью не устраняет вышеперечисленные побочные эффекты. Кроме того, терапия с использованием этого средства является длительной.

Задача изобретения - способ лечения императивного недержания мочи, не имеющий побочных эффектов и имеющий минимум противопоказаний, обладающий меньшей длительностью.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что пациентке внутривенно вводят 40-60 млн. стволовых мезенхимальных клеток человека и подкожно или внутримышечно 5-7×10⁹ фетальных нейральных прогенитарных клеток.

Получение и культивирование мезенхимальных клеток. Источником материала служил костный мозг от плодов 2-ого триместра гестации (18-23 недели).

Аспират гепаринизированного костного мозга разводили 1:1 раствором Хенкса. Фракционировали на градиенте (1,073 г/мл) фиколл/пак. Клетки из интерфазы переводили в раствор Хенкса, осаждали при 1000 об./мин 15 мин и ресуспендировали в полной среде (MEM без дезоксирибонулеотидов или рибонуклеотидов, 20% фетальная телячья сыворотка, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ L-глутамина). Клетки культивировали при 37°С, 5% CO₂. Через 24 часа удаляли неприлипшие клетки, а прикрепившиеся клетки отмывали PBS (2 раза). Раз в 3-4 дня частично меняли среду. При достижении монослоя клетки рассевали инкубированием в 0,05% трипсине при 37°С в течение 3 минут. Проводили 2-6 пассажей до получения необходимого количества клеток.

Получение и культивирование нейральных клеток.

Источником клеточного материала служили мозг эмбрионов человека 1 триместра гестации (8-12 недель) и перивентрикулярная зона плодов 2 триместра гестации (17-23 неделя).

Ткани головного мозга суспендировали одноразовым шприцом в охлажденном (+4°С) физиологическом растворе. Полученную клеточную суспензию центрифугировали при 1000 об./мин в течение 3 минут и дважды отмывали средой F12. Осадок ресуспендировали в бессывороточной среде DMEM\F12 (1:1) с добавлением основного фактора роста фибробластов (hFGF-b)-20 нг/мл; эпидермального ростового фактора (hEGF); фактора выживаемости нейрональных клеток (N-2 supplement)-1:100; гепарина - 8 мкг/мл; пенициллина/стрептомицина - 20 нг/мл. Конечная концентрация клеток в среде составляла 2×10⁶ кл/мл. Клеточную суспензию культивировали при 37°С, 5% CO₂. Частичную смену среды (1:1) производили 2 раза в неделю, при этом клеточные агрегаты диссоциировали пипетированием. На 7-9 сутки культивирования формировались множественные нейросферы, размеры которых увеличивались в процессе культивирования. Подсчет клеток проводили в исходной суспензии и при последующей диссоциации клеточных агрегатов в камере Горяева. Жизнеспособность клеток определяли стандартным тестом с трипановым синим.

Нижеследующий пример иллюстрирует способ по изобретению.

Пример 1. Пациентка С., 56 лет, постменопауза 7 лет, жалобы на частое дневное (до 12 раз), частое ночное (до 5 раз) мочеиспускание, неудержание мочи при позыве.

Диагноз: синдром императивного нарушения мочеиспускания. Комплексное уродинамическое исследование выявило снижение детрузорного давления до 5-20 см водяного столба. Получала детрузитол по 1 мг 2 раза в день 1,5 месяца, отмечала плохую переносимость (сухость во рту), спазмекс по 15 мг 2 раза в день, оставались частые ночные мочеиспускания и сухость во рту. Больной были назначены суппозитории, содержащие оксибутинин и эстриол. Исчезла сухость во рту, но частые мочеиспускания сохранились.

Принято решение о введении стволовых клеток. Больной дважды с интервалом в 1 месяц внутривенно введено 50 млн. стволовых мезенхимальных клеток человека и внутримышечно 6×10⁹ фетальных нейральных прогенитарных клеток. Эффект лечения отмечен уже на 2-ой неделе после 1-го введения.

Стойкий лечебный эффект отмечен в течение 6 месяцев наблюдения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии императивного недержания мочи у женщин. Способ заключается в том, что пациентке дважды с интервалом в 1 месяц вводят внутривенно 50 млн. фетальных стволовых мезенхимальных клеток человека и внутримышечно 6×10⁹ фетальных стволовых нейральных клеток. Способ позволяет получить стойкий лечебный эффект в короткие сроки при минимуме противопоказаний, не вызывая побочных явлений.

Способ лечения императивного недержания мочи у женщин, заключающийся в том, что пациентке дважды, с интервалом в 1 месяц вводят внутривенно 50 млн фетальных стволовых мезенхимальных клеток человека и внутримышечно 6×10⁹ фетальных стволовых нейральных клеток.