СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭМБРИОНАЛЬНОГО СТИМУЛЯТОРА РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ Российский патент 2006 года по МПК C12N1/38 A23K3/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов и может быть использовано как составная часть питательной среды при выращивании различных видов микроорганизмов.

Уровень техники

Известен способ получения стимулятора роста дрожжей, предусматривающий окисление технических лигнинов при повышенной температуре с последующим осаждением кислотой и выделением продукта, при этом качестве окисляющего агента используют кислород воздуха, а процесс окисления осуществляют в щелочной среде, содержащей 1,5 - 4% гидроокиси натрия или соды, при давлении воздуха 1,0-1,5 МПа в течение 2-8 часов, а выделение продукта проводят подкислением соляной кислотой (см. а.с. СССР № 1198117, кл. С 12 N 1/38).

Недостатком данного стимулятора роста дрожжей является невысокий выход дрожжей.

Известен стимулятор роста микроорганизмов, в качестве которого используют культуральную жидкость «чайного» гриба, представляющую комплекс продуктов метаболизма одной из природных ассоциаций микроорганизмов, состоящей из дрожжей, уксуснокислых, молочнокислых и других микроорганизмов, стерилизованную методом ультрафильтрации через мембранные фильтры. Причем установлено, что для каждого вида микроорганизмов необходимы свои оптимальные дозы СРМ (Светлакова Е.В. Совершенствование способов повышения выживаемости микробных клеток в сухих живых вакцинах и пробиотиках: Дисс. канд. биол. наук / Е.В. Светлакова / - Ставрополь, 2003. - 160 с.).

Недостатком данного стимулятора роста микроорганизмов является невысокая биологическая активность готового продукта.

Известна липоевая кислота, используемая в качестве биостимулятора микроорганизмов, представляющая собой коферментный препарат невитаминного происхождения и являющейся важным окислительно-восстановительным переносчиком водорода. Липоевая кислота - это один из препаратов пируватдегидрогеназы, играет весьма ответственную роль в биологическом окислении, обеспечивает клетку необходимой для ее жизнедеятельности энергией, принимает участие в биосинтезе углеводов, липидов и других соединений. Используется порошкообразная липоевая кислота, разработанная во ВНИСВМ, которая предварительно перед добавлением в питательную среду растворяется в спирте ректифицированном 96% (Катунина Л.С. Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивированного чумного микроба: Дисс. канд. биол. наук. - Ставрополь, 2002. - С.164).

Недостатком данного биостимулятора является то, что препарат не выдерживает установленного срока хранения, при применении не дает эффекта повышения объема бактериальной массы.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является способ приготовления биостимулятора эмбрионального, включающий гомогенизацию яйца, охлажденного при температуре 2-4°С, разбавление, фильтрацию, при этом перед гомогенизацией яйцо инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки яйцо облучают в течение 30 секунд при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт и охлаждают в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, при этом в качестве разбавителя используют физиологический раствор в соотношении 1:10 с добавлением 5%-ного раствора фенола до его концентрации 0,3% (см. пат. РФ №2197251, кл. А 61 К 35/12, опубл. 27.01.2003 г.).

Недостатком данного биостимулятора эмбрионального является невысокий эффект повышения объема бактериальной массы.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов более простого и дешевого и повышающего объем бактериальной массы.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого изобретения сводится к повышению объема бактериальной массы, получению более дешевого и доступного стимулятора роста микроорганизмов, упрощению способа получения.

Технический результат достигается с помощью способа получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов, включающего гомогенизацию куриного яйца, охлажденного при температуре 2-4°С, центрифугирование, фильтрацию и тиндализацию, при этом перед гомогенизацией куриное яйцо инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 секунд при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт и охлаждают в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, после гомогенизации проводят центрифугирование при 15000 об/мин, затем полученную массу фильтруют и подвергают тиндализации при температуре 60-65°С в течение 5-6 суток, фасуют и лиофилизируют.

Сущность способа получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов заключается в следующем.

Проводят отбор свежих, не инфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриные яйца облучают по 30 секунд при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, затем куриные яйца охлаждают в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, проводят гомогенизацию, центрифугирование при 15000 об/мин, затем полученную массу фильтруют и подвергают тиндализации при температуре 60-65°С в течение 5-6 суток, фасуют и лиофилизируют.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения способа получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов

Пример 1. Проводят отбор свежих, не инфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриные яйца облучают по 30 секунд при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, затем куриные яйца охлаждают в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, проводят гомогенизацию, разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:10 с добавлением 5%-ного раствора фенола до его концентрации 0,3%.

Полученный стимулятор обладает недостатками: препарат не выдерживает установленного срока хранения, при применении не дает эффекта повышения объема бактериальной массы, среда слишком мутная и имеет много балластных частиц, так как добавляется физиологический раствор и фенол, а также не удаляются крупные частицы.

Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, но после гомогенизации проводят центрифугирование при 15000 об/мин, затем полученную массу фильтруют, фасуют и лиофилизируют.

Полученный стимулятор не выдерживает установленного срока хранения, при применении не дает эффекта повышения бактериальной массы.

Пример 3. Проводят аналогично примеру 2, но после фильтрации перед фасовкой препарат подвергают тиндализации при температуре 60-65°С в течение 5-6 суток.

Полученный стимулятор при данных параметрах обладает высоким эффектом повышения активности прироста бактериальной массы.

Пример 4. Проводят аналогично примеру 2, но после фильтрации перед фасовкой препарат подвергают тиндализации при температуре 70-80°С в течение 3 суток.

Полученный стимулятор содержит слишком много балластных частиц и вызывает помутнение питательной среды.

Таким образом, наиболее оптимальным и соответствующим требованиям роста и размножения различных микроорганизмов является способ получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов по примеру 3.

Пример 5. Препарат, приготовленный согласно примера 3, испытывали при выращивании различных штаммов микроорганизмов. Были получены следующие результаты: биологическая активность пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae при добавлении к среде выращивания препарата, приготовленного по примеру 3, увеличилась на 60,4% по сравнению с контролем; при культивировании Listeria monocytogenes штамм АУФ на агаре Хоттингера с добавлением препарата, приготовленного по примеру 3, количество колоний, выросших при посеве, увеличилось по сравнению с контролем в 1,4 раза; при выращивании Leptospira interrogans различных серотипов с добавлением в среды препарата, приготовленного по примеру 3, бактериальная масса лептоспир увеличилась на 10,6% по сравнению с контрольным культивированием; при выращивании Yersinia pestis штамм EV количество колоний, выросших при посеве на средах с добавлением препарата, приготовленного по примеру 3, больше в 2 раза, чем в контроле.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- стимулятор, полученный с помощью предлагаемого изобретения, обладает значительной эффективностью по повышению роста и размножения различных микроорганизмов;

- полученный стимулятор не изменяет биологические свойства культивируемых с помощью него микроорганизмов;

- более дешев в изготовлении;

- основные методики, препараты, аппараты, используемые в приготовлении препарата легко доступны.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов, и может быть использовано как составная часть питательной среды при выращивании различных видов микроорганизмов. Способ заключается в следующем: проводят отбор свежих, неинфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриные яйца облучают по 30 секунд при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, затем куриные яйца охлаждают в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, проводят гомогенизацию, центрифугирование при 15000 об/мин, затем полученную массу фильтруют и подвергают тиндализации при температуре 60-65°С в течение 5-6 суток, фасуют и лиофилизируют. Способ позволяет получить эффективный стимулятор роста и размножения микроорганизмов.

Способ получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов, включающий гомогенизацию куриного яйца, охлажденного при температуре 2-4°С, фильтрацию, при этом перед гомогенизацией куриное яйцо инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, отличающийся тем, что после гомогенизации проводят центрифугирование при 15000 об./мин, затем полученную массу фильтруют и подвергают тиндализации при температуре 60-65°С в течение 5-6 суток, фасуют и лиофилизируют.