СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ СУБСТАНЦИИ ИЗ ЭМБРИОНАЛЬНО-ЯИЧНОЙ МАССЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОТИВООЖОГОВОЙ ПЛАСТИНЫ И ПРОТИВООЖОГОВАЯ ПЛАСТИНА НА ЕГО ОСНОВЕ Российский патент 2011 года по МПК C12N1/38 A61K35/66 A61K9/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности к способам получения биологически активной субстанции с регенеринстимулирующим действием из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и противоожоговым пластинам на его основе, и может быть использовано для повышения регенеративной способности тканей организма при ожогах, трофических язвах, пролежнях и других нарушениях целостности тканей.

Уровень техники

При изучении литературных источников, патентов и данных, полученных из Интернет-сети, были обнаружены сведения более чем о 300 раневых покрытиях, находящихся на разных стадиях разработки. Все они разнообразны по происхождению, форме, функциональному значению, химическому составу основы и входящим в их состав лекарственным веществам.

Известна ранозаживляющая пластина, которая представляет комбинированную фибринколлагеновую субстанцию (ФКС) «Тахокомб». Она создана на основе коллагенового покрытия путем напыления на одну ее поверхность элементов фибринового клея. Основу раневого покрытия составляют два надежных кровоостанавливающих средства - тромбин и фибриноген (содержание которого в 15-30 раз выше физиологической концентрации) с добавлением апротинина, являющегося ингибитором фибринолиза. Пленка «Тахокомб» является эффективным гемостатическим средством для укрытия раневых поверхностей паренхиматозных органов с выраженным регенераторным действием (см. пат. RU №2176513, МПК А61К 35/66, опубл. 10.12.2001 г.).

Основным недостатком пластины «Тахокомб» является его малая доступность для широкого круга клиницистов из-за высокой стоимости (около 200 долларов за пластину размером 9,5×4,8×0,5 см).

Альтернативным перевязочным материалом является «Воскопран» (восковое покрытие ран Николаева), представляющее собой основу из пчелиного воска, пропитанную специальным составом с иммобилизированными в нем различными лекарственными препаратами, которые оказывают обезболивающий, антибактериальный, ранозаживляющий и ранопротекторный эффект. Восковая основа покрытия «Воскопран» быстро моделируется и хорошо фиксируется на поверхности раневого дефекта. Активное содержимое повязки обеспечивает длительное поддержание эффективных концентраций препаратов в ране. Воск образует защитный слой, а активная субстанция в течение длительного времени дозированно отдает в нее лекарственные препараты, входящие в состав салфетки, непосредственно в месте своего действия (см. РУ №ФСР 2007/00080, ТУ 9393-004-52708501-2002).

Недостатком данного препарата является отсутствие биологически активных биодеградируемых компонентов, и может использоваться лишь в первую фазу раневого процесса, а в фазах регенерации и эпителизации менее эффективен относительно препаратов, содержащих биогенные стимуляторы.

Достаточно широко в настоящее время в различных областях медицины применяются желатиновые лекарственные пленки. Результаты исследований показали, что в сравнении с традиционными лекарственными формами они имеют ряд преимуществ:

- быстрое достижение и длительное поддержание концентрации лекарственного вещества в зоне патологии;

- исключение или значительное снижение проявления побочных действий лекарственных веществ;

- маскировка неприятных свойств действующих веществ (вкус и запах);

- применение пленок не сопровождается болевым эффектом;

- возможность применения без участия медицинского персонала в домашних, полевых условиях;

- легкость изменения дозы путем наложения дополнительной пленки или ее удаления;

- прочная фиксация пленок в заданной зоне обеспечивает направленность действия, что удобно для пациента;

- экономическая доступность.

Известны кровоостанавливающие желатиновые пленки, предназначенные преимущественно для аппликации на слизистую оболочку рта. При наложении на слизистую оболочку желатиновые лекарственные пленки прочно фиксируются в зоне патологии. Такой контакт обеспечивает направленную доставку лекарственных веществ и позволяет достичь терапевтического эффекта дозами, в 10-20 раз меньшими, чем в традиционных лекарственных формах. Желатиновые лекарственные пленки медленно растворяются в секретах слизистой, выделяя лекарственное вещество в течение 3-6 часов.

Прополис-пленки обладают противовоспалительным, анестезирующим, биостимулирующим действием. Они усиливают процессы регенерации, повышают общую сопротивляемость организма, стимулируют его иммунные реакции.

Пленки с шалфеем обладают противовоспалительными, дубящими и кровоостанавливающими свойствами. Применяются при острых и хронических воспалительных заболеваниях слизистой оболочки полости рта и носоглотки, стоматитах, травматических язвах, различных формах пародонтоза, абсцессах, синуситах, тонзиллитах, ангинах.

Пленки с линкомицином применяют при хронических и острых воспалениях слизистой оболочки полости рта и носоглотки. В продаже также пленки с малавитом и комбинированные пленки с трихополом и метилурацилом.

Известен фармакологический препарат иммобилизованный на лекарственной желатиновой пленке (ушные трубочки), который обеспечивает более эффективное и быстрое купирование воспалительного процесса при лечении отомикоза. Желатиновая ушная трубочка максимально адаптирована для применения в полости наружного слухового прохода (см. пат. RU №2314795, МПК А61К 9/00, А61К 47/43, А61К 47/10, А61Р 27/16, опубл. 20.01.2008 г.).

Недостатком данных трубочек является невысокая эффективность при лечении заболеваний наружного уха.

Известен способ лечения слизистых оболочек, включающий применение лекарственных желатиновых пленок (ЛЖП), при этом ЛЖП применяют в виде аппликации в зоне патологии или максимальной близости от нее 1-3 раза в сутки, причем лекарственные средства в ЛЖП используют в малых дозах, порядка 1/10 от дозы (см. пат. RU №2264817, МПК А61К 35/32, A61L 15/00, опубл. 27.11.2005 г.).

Недостатком данных ЛПЖ по способу является невысокая регенеринстимулирующая активность, высокая стоимость способа приготовления.

Известна мазь «Левомеколь», в состав которой на 1 г вещества приходится 7,5 мг хлорамфеникола и 40 мг метилурацила. Мазь активна в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов - Staphylococcus spp., Pseudomonas aeruginosa и Escherichia coli. Препаратом пропитывают стерильные марлевые салфетки, которыми рыхло заполняют рану. Перевязки производят ежедневно до полного очищения раны от гнойно-некротических масс.

Существенным недостатком данного препарата являются ежедневные перевязки ран, которые, в свою очередь, могут приводить к дополнительной травматизации тканей, при относительно невысокой его эффективности (см. Справочник Видаль // Лекарственные препараты в России. 9-е изд., перераб. и доп. - М.: АстраФармСервис, 2003 г., 1488 с).

Известен гель (20%) и крем (5%) «Актовегин», который представляет собой депротеинизированный гемодериват из телячьей крови с низкомолекулярными пептидами и дериватами нуклеиновых кислот. Применяют для лечения открытых ран и язв при ожогах и лучевых поражениях, наносят на кожу тонким слоем. Препарат хранят при комнатной температуре не выше 25°С (см. Справочник Видаль // Лекарственные препараты в России. 9-е изд., перераб. и доп. - М.: АстраФармСервис, 2003 г., 1488 с.).

Недостатком данного геля и крема является длительное применение для полного выздоровления.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятым авторами за прототип является способ получения эмбрионального стимулятора роста микроорганизмов, включающий гомогенизацию куриного яйца, охлажденного при температуре 2-4°С, фильтрацию, при этом перед гомогенизацией куриное яйцо инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, при этом после гомогенизации проводят центрифугирование при 15000 об./мин, затем полученную массу фильтруют и подвергают тиндализации при температуре 60-65°С в течение 5-6 суток, фасуют и лиофилизируют (см. пат. RU №2283347, МПК C12N 1/38, А23К 3/00, опубл. 01.01.2000 г.).

Недостатком данного препарата является невысокая регенеринстимулирующая активность, отсутствие антибактериальных, смягчающих компонентов.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины, которая бы создала оптимальную микросреду для заживления ран, повышающей регенеративную активность, не обладала бы пирогенным, токсическим и антигенными действиями, имела бы эластичность и возможность моделирования поверхностей со сложным рельефом, а также представляла собой упрощенный и дешевый способ приготовления.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к созданию оптимальной микросреды для заживления ран, повышающей регенеративную активность, отсутствию пирогенного, токсичного и антигенного действий, обладанию свойством эластичности и возможностью моделирования поверхностей со сложным рельефом, а также к созданию более упрощенного и дешевого способа приготовления.

Технический результат достигается с помощью способа получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины, включающего гомогенизацию куриного яйца, при этом перед гомогенизацией куриное яйцо инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С и фасованием, при этом дополнительно после гомогенизации проводят обработку гомогената ультразвуком и к полученной субстанции вносят однородную массу, содержащую медицинский желатин, отвар календулы и ромашки, антибиотические средства, анестезин, амарантовое масло, глицерин, бриллиантовый зеленый, при этом обработку гомогената ультразвуком проводят в ультразвуковом диспергаторе, затем проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, причем перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату 1:1 добавляют смесь 0,1% раствора натрия бензойнокислого и 0,1% раствора калия сорбиновокислого в равных частях, а для получения однородной массы предварительно медицинский желатин в количестве 3,5-4 г заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 55-60 мин при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 0,5-0,6 г антибиотических средств, 0,9-1,0 г анестезина, 0,9-1,0 мл амарантового масла, 2,5-3,0 мл глицерина, 0,4-0,5 мл бриллиантового зеленого с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 4-5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 45-50 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешиванием в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 15 мл в специальную емкость диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 3,5-4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин и фасуют в полиэтиленовую пленку.

В способе в качестве антибиотических средств используют амикацин и фурацилин.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы, включающей эмбрионально-яичную массу, при этом она дополнительно содержит биологически активную субстанцию на основе эмбрионально-яичной массы и однородную массу, включающую амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин, глицерин и антибиотические средства, причем в качестве антибиотических средств используют амикацин и фурацилин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы 48-50 амикацин 0,4-0,5 фурацилин 0,8-0,1 амарантовое масло 0,8-1,0 бриллиантовый зеленый 0,4-0,5 анестезин 0,8-1,0 желатин 3,5-4,0 глицерин 2,5-3,0 отвар календулы и ромашки остальное

Таким образом, биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и компоненты, входящие в состав противоожоговой пластины, обладают следующими свойствами.

Компоненты куриного яйца являются полноценной биологической субстанцией, содержащей практически весь комплекс биологически активных веществ (БАВ), положительно влияющий на большинство клеток, тканей и систем организма, что обусловливает его успешное использование не только в фармацевтической, но и в косметической промышленности. В процессе развития эмбриона в яйце существенно повышается количество биологически активных компонентов и энергетического потенциала за счет интенсивности процессов роста и развития. Поэтому субстрат, используемый при получении данной субстанции, - это внеэмбриональные и эмбриональные ткани куриного яйца на 9-й день инкубации. В этот период при сохранении комплекса биологически активных веществ во внеэмбриональных тканях и высокой пролиферативной активности и энергетической ценности клеток и тканей, присущей эмбриону, уже сформированы достаточно полноценные иммунные и другие жизненно важные органы.

В процессе обработки субстрата по специальной методике, состоящей из рациональных и эффективных манипуляций (патент №2197251), происходит не только сохранение широкого перечня БАВ, но и приобретение субстанцией новых свойств, обусловленных образованием липосом и накоплением специфических БАВ (биологических стимуляторов, цитомединов, цитаминов, аминокислот, органических кислот, витаминов и т.п.) и образованием новых биогенных стимуляторов. Содержащиеся в субстанции липосомы, включающие в себя многочисленные БАВ, обеспечивают их стабилизацию и доставку без изменения к органам и тканям, что значительно повышает их эффективность.

Препарат амикацин относится к полусинтетическим антибиотикам широкого спектра действия, действует бактерицидно. Связываясь с 30S субъединицей рибосом, препятствует образованию комплекса транспортной и матричной РНК, блокирует синтез белка, а также разрушает клеточные мембраны бактерий. Высокоактивен в отношении аэробных грамотрицательных микроорганизмов - Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella spp., Serratia spp., Providencia spp., Enterobacter spp., Salmonella spp., Shigella spp.; некоторых грамположительных микроорганизмов - Staphylococcus spp. (в т.ч. устойчивых к пенициллину, некоторым цефалоспоринам); умеренно активен в отношении Streptococcus spp. При одновременном назначении с бензилпенициллином оказывает синергидное действие в отношении штаммов Enterococcus faecalis. He действует на анаэробные микроорганизмы. Амикацин не теряет активности под действием ферментов, инактивирующих др. аминогликозиды, и может оставаться активным в отношении штаммов Pseudomonas aeruginosa, устойчивых к тобрамицину, гентамицину и нетилмицину.

Фурацилин - антибактериальное вещество, действующее на различные грамположительные и грамотрицательные бактерии. Применяется наружно - для лечения и предупреждения гнойно-воспалительных процессов.

Анестезин - местный анестетик для поверхностной анестезии. Уменьшает проницаемость клеточной мембраны для Na⁺, вытесняет Ca²⁺ из рецепторов, расположенных на внутренней поверхности мембраны, блокирует проведение нервных импульсов. Препятствует возникновению болевых импульсов в окончаниях чувствительных нервов и их проведению по нервным волокнам. При нанесении на поверхность слизистой оболочки полости рта действие развивается через 1 мин.

Бриллиантовый зеленый - Viride nitens (Brilliant grim). Бис-(пара-диэтиламино)-трифенилангидрокарбинол-оксалат. Действует сходно с пиоктанином, но имеет более выраженное антимикробное влияние. Наиболее губителен он для грамположительных бактерий, на грамотрицательные влияет очень слабо. Прекращает рост золотистого стафилококка в концентрации 1:10000000 при 20-минутной экспозиции, а дифтерийной палочки - в концентрации 1:85000000 при 15-минутной. Но на туберкулезную палочку не влияет даже в 1% концентрации при 48-часовой экспозиции. Действует противовоспалительно умеренно, но длительно. При значительных воспалительных процессах бриллиантовый зеленый благоприятствует образованию демаркационного вала и задерживает гангренозные процессы. Бриллиантовый зеленый применяют для лечения инфицированных ран (растворы в воде и жидком парафине 1:1000-2000), при ожогах (1-2% спиртовые растворы), используют его и при стафилококковых заболеваниях кожи.

Амарантовое масло содержит 67% полиненасыщенных жирных кислот, лецитин, витамин Е и большое количество сквалена. Амарантовое масло также содержит 8% сквалена, который усиливает насыщение тканей организма кислородом, является противоопухолевым фактором, а также оказывает иммуностимулирующий эффект.

Показания к применению:

- нарушения в иммунной системе;

- нарушения обмена веществ;

- онкологические заболевания;

- сердечно-сосудистые заболевания, атеросклероз;

- язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки;

- хронический гастрит;

- хронический колит;

- пищевые отравления;

- дерматологические заболевания;

- воспалительные заболевания органов малого таза;

- ожоги и гнойные раны;

- пролежни;

- стоматит;

- пародонтит.

В косметических целях - для защиты, детоксикации, увлажнения, смягчения и питания кожи (Одобрено Минздравом РФ. Гигиенический сертификат 77.99.02.914.Д.003275.05.03., произведено ООО «Витсем»).

Желатин - обратимо коагулирующий коллоид, получаемый из фибриллярного белка коллагена вывариванием в воде шкуры животных, кожи, костей, хрящей или сухожилий, т.е. материала, в котором содержится коллаген. Почти 20% веса желатина составляет аминокислота глицин. Получение желатина сходно с получением клея, но вываривание в процессе ее приготовления длится не столь долго и не приводит к полной деградации коллагена до жидких конечных продуктов, поэтому у желатина желатинирующая способность выше, чем у клея (см. паспорт качества П-11, ООО «Югреактив»).

Ромашка лекарственная оказывает противовоспалительное, спазмолитическое и умеренное противомикробное действие (см. инструкцию Р №001339/01).

Цветки календулы оказывают противовоспалительное, антисептическое действие при воспалительных заболеваниях (см. инструкцию: P 001369/01-2002).

Сущность способа получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и противоожоговой пластины на его основе заключается в следующем.

Проводят отбор свежих неинфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, а после гомогенизации проводят обработку гомогената ультразвуком в ультразвуковом диспергаторе затем проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, при этом перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату 1:1 добавляют смесь 0,1% раствора натрия бензойнокислого и 0,1% раствора калия сорбиновокислого в равных частях, полученную таким образом биологически активную субстанцию из эмбрионально-яичной массы используют для получения противоожоговой желатиновой пластины.

Для получения однородной массы при приготовлении противоожоговой желатиновой пластины берут 3,5-4,0 г медицинского желатина, заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 55-60 мин при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 0,5-0,9 г антибиотических средств, 0,9-1,0 г анестезина, 0,9-1,0 мл амарантового масла, 2,5-3,0 мл глицерина, 0,4-0,5 мл бриллиантового зеленого с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 4-5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 48-50 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 15 мл в специальную емкость диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 3,5-4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Противоожоговую пластину заключают в полиэтиленовую упаковку.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции для повышения регенерации тканей из эмбрионально-яичной массы, дополнительно содержит отвары календулы и ромашки в соотношении 1:1, амикацин, фурацилин, амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин и глицерин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция   из эмбрионально-яичной массы 48-50 амикацин 0,2-0,5 фурацилин 0,3-0,4 амарантовое масло 0,9-1,0 бриллиантовый зеленый 0,4-0,5 анестезин 0,9-1,0 желатин 3,5-4,0 глицерин 2,5-3,0 отвар календулы и ромашки остальное

Краткое описание чертежей

На фиг.1 дан способ получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины. Моделирование ожога и испытание противоожоговой пластины по примеру 3.

На фиг.2 - то же, внешний вид поврежденной кожи до лечения, ожог 2 степени.

На фиг 3 - то же, контроль: нанесение антисептической мази на место ожога.

На фиг.4 - то же, опыт: фиксация противоожоговой пластины на месте ожога.

На фиг.5 - то же, контроль: влажный некроз на месте ожога, отсутствие линии демаркационного воспаления на границе ожога со здоровой тканью (7-е сутки).

На фиг.6 - то же, опыт: выраженные регенеративные процессы с эпителизацией поврежденной кожи на месте ожога, четкая линия демаркационного воспаления (7-е сутки).

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения способа получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и противоожоговая пластина на его основе.

Пример 1. Проводят отбор свежих неинфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, а после гомогенизации проводят обработку гомогената ультразвуком в ультразвуковом диспергаторе, затем проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, при этом перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату 1:1 добавляют смесь 0,1% раствора натрия бензойнокислого и 0,1% раствора калия сорбиновокислого в равных частях, полученную таким образом биологически активную субстанцию из эмбрионально-яичной массы используют для получения противоожоговой желатиновой пластины.

Для получения однородной массы при приготовлении противоожоговой желатиновой пластины берут 2 г медицинского желатина, заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 45 мин при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют антибиотические средства, причем в качестве антибиотических средств используют амикацин в количестве 0,25 г и фурацилин в количестве 0,05 г, 0,5 г анестезина, 0,5 мл амарантового масла, 1,5 мл глицерина, 0,2 мл бриллиантового зеленого, с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 3 мин, затем к полученной однородной массе приливают 30 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 10 мл в специальную посуду диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Противоожоговую пластину заключают в полиэтиленовую упаковку.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции для повышения регенерации тканей из эмбрионально-яичной массы, дополнительно содержит отвары календулы и ромашки в соотношении 1:1, амикацин, фурацилин, амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин и глицерин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы 30 амикацин 0,25 фурацилин 0,05 амарантовое масло 0,5 бриллиантовый зеленый 0,2 анестезин 0,5 желатин 2,0 глицерин 1,5 отвар календулы и ромашки остальное

Хранят пластины в сухом месте при температуре плюс 2-4°С, однако пластины при этом долго застывают, слишком тонкие, легко рвутся и оказывают недостаточно противовоспалительное и противомикробное действие.

Пример 2. Приготовление эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. Для получения однородной массы при приготовлении противоожоговой желатиновой пластины берут 3 г медицинского желатина, заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 55 мин при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют антибиотические средства, причем в качестве антибиотических средств используют амикацин в количестве 0,3 г и фурацилин в количестве 0,5 г, 0,5 г анестезина, 0,7 мл амарантового масла, 2,0 мл глицерина, 0,5 мл бриллиантового зеленого с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 3,5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 45 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 20 мл в специальную посуду диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Противоожоговая пластина заключается в полиэтиленовую упаковку.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции для повышения регенерации тканей из эмбрионально-яичной массы, дополнительно содержит отвары календулы и ромашки в соотношении 1:1, амикацин, фурацилин, амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин и глицерин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы 45 амикацин 0,3 фурацилин 0,5 амарантовое масло 0,7 бриллиантовый зеленый 0,5 анестезин 0,5 желатин 3,0 глицерин 2,0 отвар календулы и ромашки остальное

Полученные противоожоговые пластины оказывают анальгезирующее, противовоспалительное, противомикробное действие, способствуют быстрой регенерации повреждения, однако слишком толстые, плохо застывают, легко ломаются.

Пример 3. Приготовление эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. При приготовлении противоожоговой желатиновой пластины берут 3,5 г медицинского желатина, заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 1 часа при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 0,5 г антибиотических средств, 0,9 г анестезина, 0,9 мл амарантового масла, 2,5 мл глицерина, 0,4 мл бриллиантового зеленого с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 48 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 15 мл в специальную посуду диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Противоожоговая пластина заключается в полиэтиленовую упаковку.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции для повышения регенерации тканей из эмбрионально-яичной массы дополнительно содержит отвары календулы и ромашки в соотношении 1:1, амикацин, фурацилин, амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин и глицерин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы 48 амикацин 0,2 фурацилин 0,3 амарантовое масло 0,9 бриллиантовый зеленый 0,4 анестезин 0,9 желатин 3,5 глицерин 2,5 отвар календулы и ромашки остальное

Полученная противоожоговая пластина является гибкой, умеренной толщины, удобна в использовании, обладает анальгезирующим, противовоспалительным, противомикробным действием, способствует быстрой регенерации повреждения.

Пример 4. Приготовление эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. Затем для приготовления противоожоговой желатиновой пластины из активированной эмбрионально-яичной массы берут 4 г медицинского желатина, заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 1 часа при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 0,9 г антибиотических средств, 1,0 г анестезина, 1,0 мл амарантового масла, 3,0 мл глицерина, 0,5 мл бриллиантового зеленого с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 50 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 15 мл в специальную посуду диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Противоожоговую пластину заключают в полиэтиленовую упаковку.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции для повышения регенерации тканей из эмбрионально-яичной массы дополнительно содержит отвары календулы и ромашки в соотношении 1:1, амикацин, фурацилин, амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин и глицерин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы 50 амикацин 0,5 фурацилин 0,4 амарантовое масло 1,0 бриллиантовый зеленый 0,5 анестезин 1,0 желатин 4,0 глицерин 3,0 отвар календулы и ромашки остальное

Полученная противоожоговая пластина является гибкой, умеренной толщины, удобна в использовании, обладает анальгезирующим, противовоспалительным, противомикробным действием, способствует быстрой регенерации повреждения.

Пример 5. Приготовление эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. Затем для приготовления противоожоговой желатиновой пластины из активированной эмбрионально-яичной массы берут 5 г медицинского желатина, заливают отваром календулы и отваром ромашки до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 1 часа при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 1,2 г антибиотических средств, 1,5 г анестезина, 2,0 мл амарантового масла, 4,0 мл глицерина, 1,0 мл бриллиантового зеленого с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 70 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 15 мл в специальную посуду диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Противоожоговую пластину заключают в полиэтиленовую упаковку.

Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции для повышения регенерации тканей из эмбрионально-яичной массы дополнительно содержит отвары календулы и ромашки в соотношении 1:1, амикацин, фурацилин, амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин и глицерин при следующем соотношении компонентов в г/%:

биологически активная субстанция из эмбрионально-яичной массы 70 амикацин 1 фурацилин 0,2 амарантовое масло 2,0 бриллиантовый зеленый 1,0 анестезин 1,5 желатин 5,0 глицерин 4,0 отвар календулы и ромашки остальное

Полученная противоожоговая пластина на основании данного состава компонентов является гибкой, умеренной толщины, удобна в использовании, обладает анальгезирующим, противовоспалительным, противомикробным действием, способствует быстрой регенерации повреждения, однако является более дорогостоящей, так как содержит большое количество эмбрионально-яичной массы, антибиотиков и всех остальных компонентов.

Таким образом, наиболее оптимальными являются примеры 3 и 4 и противоожоговые пластины, приготовленные с данным составом компонентов.

Результат испытания противоожоговой пластины на белых лабораторных крысах линии Вистар в сравнительном аспекте

Для оценки влияния противоожоговых пластин на основе предлагаемой биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы на репаративные процессы в коже при ожогах были созданы две группы животных: экспериментальная (n=5) и контрольная (n=5).

У лабораторных животных опытной и контрольной группы моделируют термический ожог с помощью раскаленного над спиртовкой металлического шпателя (фиг.1).

При этом крысам применяют эфирный наркоз. У всех экспериментальных животных ожог соответствует I-II степени. В зоне ожога отмечалось значительное обугливание шерстного покрова, в центре - некроз всех слоев эпидермиса, вплоть до волосяных фолликулов, ближе к периферии был поражен преимущественно эпидермис (фиг.2).

Крыс контрольной (фиг.3) группы лечат путем ежедневного нанесения на зону повреждения смеси актовегина (гель) и гентамициновой мази (1:1). Крысам опытной группы накладывают испытуемые ранозаживляющие противоожоговые пластины, которые закрепляют на области повреждения с помощью фиксирующей повязки (фиг.4).

В процессе применения пластин крысам при экспериментальном ожоге получены следующие результаты. В контрольной группе после выхода из наркоза и на протяжении всего эксперимента состояние животных было тяжелым. Крысы отказывались от корма и воды, шерстный покров взъерошен. Пять крыс контрольной группы пали со второго по пятый день наблюдения, при признаках выраженной интоксикации. За остальными наблюдали до 7 дня, учитывая при этом внешний вид зоны повреждения. Обобщенные результаты по оставшимся в живых крысам свидетельствуют о том, что зоны повреждения сильно отечны, тестоватой консистенции, без шерсти, светло-серые, с белесоватыми размягченными участками, без признаков соответствующей коже архитектоники (коагуляционный некроз) (фиг.5).

В отдельных просветленных участках ткани размягчены с изъязвлениями, вокруг которых скопление гноя (у двух крыс). У всех крыс участки некроза с неровными краями и выраженной тенденцией к распространению на прилежащие участки эпидермиса.

Демаркационный вал по периферии всего поврежденного участка у большинства крыс отсутствует или слабо заметен и прерывист. Признаков эпителизации не отмечено. Размеры зоны повреждения в диаметре достигают в среднем 2,5-3 см. Учитывая тяжесть состояния, крысы подвергнуты эвтаназии с последующим отбором материала для гистологических исследований.

В опытной группе выжили все крысы. Большая часть крыс со вторых-третьих суток начали пить воду, а с третьих-четвертых суток некоторые крысы проявили оживление при подаче в клетку корма и постепенно приступили к его приему. С учетом того, что наличие интоксикации нельзя отрицать и у крыс этой группы, разницу в поведении можно обосновать пролонгированным эффектом обезболивания. К седьмому дню две крысы уже самостоятельно разгрызли фиксирующую повязку, остальным ее сняли. Зафиксировано частичное рассасывание испытуемой пленки. Под пленкой поверхность сухая, темно-серая (фиг.6).

В зоне ожога - признаки островковой или тотальной эпителизации эпидермиса, местами с едва заметной прорастающей шерстью. Учитывая отсутствие у большинства крыс в зоне ожога остатков некротизированных тканей, можно предположить их ферментативное расплавление под пленкой, как под некротическим струпом.

По периферии четко выраженная зона демаркационного воспаления, резко отделяющая эту зону от здоровой кожи. Признаков гнойного воспаления не отмечено, очаги поражения локальные, практически округлые с ровными краями, размеры не превышают 2 см. Для изучения динамики процессов репаративной регенерации в поврежденной ткани оценивались также гематологические и биохимические показатели крови как одни из важнейших маркеров.

Таблица 1 Гематологические и биохимические показатели крови лабораторных животных на 1-е сутки после ожога Группы Гемоглобин (г/л) Эритроциты ×10¹² л Лейкоциты ×10⁹ л Общий белок Контрольная 97±0,48 6,68±1,57 8,9±0,75 68,4±3,58 Экспериментальная 101±1,02 6,0±0,81 8,4±1,02 75,4±2,68

Таблица 2 Гематологические и биохимические показатели крови лабораторных животных на 6-е сутки после ожога Группы Гемоглобин (г/л) Эритроциты ×10¹² л Лейкоциты ×10⁹ л Общий белок Контрольная 89,8±0,86 4,53±0,73 11,44±0,49 б3,92±3,15 Экспериментальная 113±0,86 5,47±0,32 7,6±0,96 78,14±3,49

Таким образом, в контрольной группе в первые сутки после ожога уровень гемоглобина понизился на 6,7% (табл.1) относительно исходного значения и к 6-м суткам составил 89,8±0,86 г/л (табл.2), что на 13,6% ниже, чем до моделирования ожога. Уровень эритроцитов в данной группе на 1-е сутки после ожога возрос на 7,74% (табл.1), а на 6-е сутки понизился на 26,9%, что составило 4,53±0,73×10¹² л (табл.2). Несколько иначе регистрировалось поведение лейкоцитов, наблюдалось увеличение их количества в первые сутки на 2,3% (табл.1), а на 6-е сутки на 31,5% (табл.2). Показатели общего белка снизились, после ожога показатель составил 68,4±3,58, что на 4,74% (табл.1) меньше исходного уровня, а к 6-м суткам составил 63,92±3,15, что свидетельствует о его снижении на 11% (табл.2).

В опытной группе уровень гемоглобина в первые сутки после ожога снизился на 7,34% (табл.1), а в завершении эксперимента увеличился на 3,7% (табл.2) и составил 113±0,86 г/л. Количество эритроцитов сразу после ожога повысилось на 3,4% (табл.1), а на 6-е сутки снизилось до 5,47±0,32×10¹² л (табл.2), что составило 5,7%. В первые сутки после ожога в опытной группе отмечалось повышение уровня лейкоцитов на 6,33% (табл.1), а к 6-м понизился до 7,6±0,96×10⁹ л (табл.2), т.е. на 3,8%. Уровень общего белка колебался в незначительных пределах, на 1-е сутки зафиксировано снижение на 1,7% (табл.1), а к 6-му дню повысился на 1,9% (табл.2).

В связи с вышеизложенным можно сделать вывод о положительном влиянии противоожоговой пластины на динамику гематологических показателей и уровень общего белка, свидетельствующем о снижении интенсивности воспалительной реакции и о повышении иммунной реактивности организма экспериментальных животных.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- оказывает анальгезирующее, противовоспалительное и противомикробное действие;

- способствует быстрой регенерации повреждения;

- оказывает положительное влияние на динамику гематологических показателей и уровень общего белка;

- повышает иммунную реактивность организма;

- удобство в использовании.

Изобретения относятся к биотехнологии, в частности к способам получения биологически активной субстанции с регенерирующим и стимулирующим действием из эмбрионально-яичной массы, и может быть использовано для повышения регенеративной способности тканей организма при ожогах, трофических язвах, пролежнях и других нарушениях целостности тканей. Способ предусматривает следующее. Отбирают неинфицированные свежие куриные яйца с последующим их инкубированием в течение 9 суток. Причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт с последующим охлаждением яиц в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С и гомогенизацией яиц. Полученный гомогенат подвергают обработке ультразвуком в ультразвуковом диспергаторе. К гомогенату, обработанному ультразвуком, добавляют смесь, содержащую 0,1% раствор натрия бензойнокислого и 0,1% раствор калия сорбиновокислого в равных частях, в соотношении по массе 1:1 соответственно с последующей ультрамикрофильтрацией через фильтры диаметром 0,2 мкм с получением биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы. Готовят однородную массу следующим образом. Медицинский желатин заливают отваром, содержащим отвар календулы и отвар ромашки в соотношении по массе 1:1, выдерживают в течение 55-60 минут при температуре 20-25°С с последующим помещением отвара с желатином на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина. В полученный отвар с желатином добавляют амикацин, фурацилин, анестезин, амарантовое масло, глицерин и бриллиантовый зеленый с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 4-5 мин с получением однородной массы. К полученной однородной массе добавляют биологически активную субстанцию из эмбрионально-яичной массы в заданном соотношении и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин. Полученную массу разливают в специальные емкости и помещают в термостат на 3,5-4 часа при температуре 37-39°С с последующим охлаждением в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин. Изобретения позволяют быстро регенерироваться повреждениям, повышают иммунную реактивность организма и позволяют упростить способ получения противоожоговой пластины. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.

1. Способ получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины, включающий гомогенизацию куриного яйца, при этом перед гомогенизацией куриное яйцо инкубируют в течение 9 суток, причем на 5, 6, 7 сутки куриное яйцо облучают в течение 30 с при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С и фасованием, отличающийся тем, что дополнительно готовят однородную массу, содержащую медицинский желатин, отвар календулы и ромашки, антибиотические средства, анестезин, амарантовое масло, глицерин, бриллиантовый зеленый и после гомогенизации проводят обработку гомогената ультразвуком, при этом обработку гомогената ультразвуком проводят в ультразвуковом диспергаторе, затем проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, причем перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату 1:1 добавляют смесь 0,1%-ного раствора натрия бензойнокислого и 0,1%-ного раствора калия сорбиновокислого в равных частях, а для получения однородной массы предварительно медицинский желатин в количестве 3,5-4 г заливают отваром календулы и отваром ромашки в соотношении 1:1 до 100 мл, выдерживают в течение 55-60 мин при температуре 20-25°С, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°С до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют антибиотические средства, в качестве которых берут 0,2-0,5 г амикацина, 0,3-0,4 г фурацилина, анестезин 0,9-1,0 г, амарантовое масло 0,9-1,0 мл, глицерин 2,5-3,0 мл, бриллиантового зеленого 0,4-0,5 мл с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 4-5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 48-50 мл биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 5-7 мин, полученную массу разливают по 15 мл в специальную емкость диаметром 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 3,5-4 ч при температуре 37-39°С, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пластин.

2. Противоожоговая пластина на основе биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы, включающая эмбрионально-яичную массу, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит биологически активную субстанцию на основе эмбрионально-яичной массы и однородную массу, включающую амарантовое масло, бриллиантовый зеленый, анестезин, желатин, глицерин и антибиотические средства, причем в качестве антибиотических средств используют амикацин и фурацилин при следующем соотношении компонентов, г/%:
биологически активная субстанция из   эмбрионально-яичной массы 48-50 амикацин 0,2-0,5 фурацилин 0,3-0,4 амарантовое масло 0,9-1,0 бриллиантовый зеленый 0,4-0,5 анестезин 0,9-1,0 желатин 3,5-4,0 глицерин 2,5-3,0 отвар календулы и ромашки остальное