СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ НЕБНЫХ МИНДАЛИН У БОЛЬНЫХ ПАРАТОНЗИЛЛИТОМ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и иммунологии, и может быть использовано для оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин больных паратонзиллитом.

Известны способы оценки и прогнозирования состояния местного иммунитета небных миндалин при паратонзиллите по определению представительства иммунокомпетентных клеток в ткани небных миндалин с использованием иммуноморфологических методов (Быкова В.П. Современные аспекты проблемы тонзиллярной болезни. - Российская ринология, №2-3, 1996. - С.13-14).

Прототипом данного изобретения является оценка состояния иммунной системы небных миндалин путем определения клеточного представительства иммунокомпетентных клеток в биопсийном материале (Иммунология, иммунопатология и проблемы иммунотерапии в ринологии. / Под ред. Н.А.Арефьевой. - Уфа, 1997. - 120 с.).

Однако в данном способе не учитывались инфицированность небных миндалин возбудителями оппортунистических инфекций, в частности герпесвирусами, что не позволяет в достаточной степени оценить функциональное состояние иммунной системы небных миндалин.

Технический результат - повышение точности оценки за счет определения инфицированности герпесвирусами ткани небных миндалин.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. У больных паратонзиллитом в биопсийном материале небных миндалин выявляют ДНК герпесвирусов - цитомегаловируса, вируса простого герпеса, вируса Эпштейна-Барр (ЦМВ, ВПГ, ВЭБ) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и исследуют содержание иммуноглобулина класса G в слюне.

Для этого биопсийный материал небных миндалин объемом 2 мм³ берут утром натощак окончатым зажимом после предварительной местной анестезии Sol. Lidocaini 10%, погружают в буферный раствор и замораживают при -86°С до проведения ПЦР.

Слюну забирают утром, через час после еды. Ротовую полость ополаскивают дистиллированной водой, через 10 минут слюну собирают в чистый флакон в объеме 1,0-2,0 мл, центрифугируют 10 минут при 1500 об/мин, надосадочную жидкость замораживают при -86°С до проведения исследования.

Количественное определение иммуноглобулинов классов SIgA, G, A, M в слюне проводят иммуноферментным методом (тест-системы «Вектор-Бест», Новосибирская обл.).

Под нашим наблюдением находились 32 больных паратонзиллитом. В качестве контрольной группы выступали 27 практически здоровых лиц. У больных паратонзиллитом в ткани небных миндалин была обнаружена высокая выявляемость герпесвирусов - 71,88%. Из них в большинстве своем они были представлены вирусом Эпштейна-Барр либо в виде моноинфекции (73,9%), либо в сочетании с вирусом простого герпеса (ВПГ) или цитомегаловирусом (ЦМВ) (13,1%).

Оценку показателей исследования клеточного и гуморального звеньев местного иммунитета проводили по данным фенотипирования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин, по кластерам дифференцировки (CD3, CD4, CD8, CD22, CD16, HLA-DR, CD25 и CD71), количественного определения в слюне иммуноглобулинов SIgA, IgA, IgG, IgM иммуноферментным методом и расчетов показателей секреции иммуноглобулинов на местном уровне - относительные коэффициенты секреции - ОКС.

Были выявлены три типа реагирования иммунной системы небных миндалин в ответ на гнойно-воспалительный процесс. Полученные данные представлены в таблице.

Для больных паратонзиллитом без персистенции вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) был характерен 1 тип, сопровождающийся ожидаемой активацией факторов защиты. Для больных с персистенцией ВЭБ - преимущественно 2 и 3 типы, сопровождающиеся дисбалансом иммунного реагирования.

1 тип реагирования характеризовался активацией клеточного и гуморального звеньев иммунной системы небных миндалин в виде Т-клеточной активации (CD4+, Р<0,05) и выраженной тенденцией к увеличению в слюне иммуноглобулинов класса A (SIgA - выше 550 мкг/мл, IgA - выше 95 мкг/мл) за счет повышения их родукции клетками небных миндалин (ОКС SIgA выше 65, IgA - выше 3.5).

У больных с персистенцией ВЭБ подобная активация иммунной системы небных миндалин отмечалась лишь в единичных случаях (n=3; 14,3%).

В большинстве случаев наблюдения у больных была выявлена либо гуморальная недостаточность на фоне активации клеточных факторов защиты (2 тип реагирования, n=14; 52,4%), либо комбинированная недостаточность в виде низких значений показателей как гуморального, так и клеточного звеньев иммунной системы небных миндалин, сопровождающаяся угнетением продукции иммуноглобулинов на местном уровне (3 тип реагирования, n=7; 33,3%).

2 тип реагирования характеризовался активацией Т-клеточного звена - отмечались статистически значимые повышенные значения CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов (соответственно Р<0,05, Р<0,001 и Р<0,05) и низкими показателями содержания в слюне иммуноглобулинов классов G и М (IgG - ниже 20 мкг/мл, IgM - ниже 2,5 мкг/мл) по-видимому за счет их активного потребления, так как показатели секреции IgG и IgM на местном уровне (ОКС) имели лишь тенденцию к снижению (ОКС IgG - ниже 0,11 и ОКС IgM - ниже 0,17).

3 тип реагирования характеризовался Т-клеточной недостаточностью - низкими значениями содержания в ткани небных миндалин Т-лимфоцитов (CD3+, Р<0,01), клеток с маркерами активации (CD25+ с Р<0,01 и HLA-DR+ с Р>0,05), низким содержанием иммуноглобулинов класса G - ниже 20 мкг/мл, и повышенными, возможно компенсаторно, показателями концентрации в слюне SIgA - выше 550 мкг/мл. Кроме того, показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне (ОКС) свидетельствовали о выраженном угнетении продукции IgG, IgA, IgM и SIgA небными миндалинами (ОКС IgG - ниже 0,11, ОКС IgA - ниже 2,0, ОКС IgM - ниже 0,17 и ОКС SIgA - ниже 40).

В целом, в обеих группах больных паратонзиллитом, инфицированных ВЭБ, отмечались статистически достоверно низкие значения концентрации иммуноглобулинов класса G в слюне. Сочетание с недостаточностью клеточного звена иммунной системы небных миндалин (3 тип реагирования) сопровождалось угнетением продукции практически всех классов иммуноглобулинов на местном уровне.

Для определения пороговых значениий содержания иммуноглобулина класса G в слюне использовалась формула расчета: М±2m, где М - средняя арифметическая величина, m - средняя ошибка средней арифметической (Н.Х.Шарафутдинова с соавт. Средние величины, методика их вычисления, оценка достоверности средних и относительных величин. Методические указания для самостоятельной работы студентов медицинского института и курсантов факультета усовершенствования врачей. - Уфа: БГМИ, 1994. - С.24). Таким образом, нижняя граница содержания иммуноглобулина класса G в слюне в группе практически здоровых лиц составляет М-2m=32,09-2·509=21,9 мкг/мл (≈20 мкг/мл), что определено как пороговое значение содержания иммуноглобулина класса G в слюне.

Таким образом, персистенция вируса Эпштейна-Барр в ткани небных миндалин является маркером иммунодефицитного состояния небных миндалин у больных паратонзиллитом, характеризующегося нарушением продукции иммуноглобулинов на местном уровне, особенно в отношении иммуноглобулинов класса G (содержание в слюне менее 20 мкг/мл), что необходимо учитывать при проведении лечебно-профилактических мероприятий).

Пример 1 (без персистенции ВЭБ в ткани небных миндалин, 1 тип реагирования).

Больной Абизгильдин И.З., 15 лет, история болезни №873, поступил в стационар 20.02.03 г. с диагнозом левосторонний передне-верхний паратонзиллярный абсцесс (ПТА), состояние средней тяжести, температура тела 38°С, частых ангин и сочетание ПТА с ангиной - не отмечает, рецидивов ПТА в анамнезе нет.

В биопсийном материале небных миндалин ДНК герпесвирусов методом ПЦР не обнаружены. Показатели исследования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин, по данным фенотипирования: CD3-64% (выше нормы), CD4-47% (выше нормы), CD8-19%, CD22-9%, CD 16-6% (ниже нормы), HLA-DR-30%, CD25-8% (ниже нормы), CD71-7% (ниже нормы). Показатели исследования содержания иммуноглобулинов в смешанной слюне: SIgA - 1144,58 мкг/мл (выше нормы), IgA - 221,05 мкг/мл (выше нормы), IgG - 30,68 мкг/мл, IgM - 2,97 мкг/мл, внеклеточная пероксидазная активность - 2564 у.е. Показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне: ОКС SIgA - 143,90 (выше нормы), ОКС IgA - 4,65 (выше нормы), ОКС IgG - 0,17, ОКС IgM - 0,09.

Заключение: функциональное состояние небных миндалин характеризуется активацией Т-клеточного звена иммунной системы, сопровождающейся повышенным уровнем в слюне IgA и IgM и концентрации IgG в пределах нормы за счет высокой продукции на местном уровне иммуноглобулинов класса А и G.

Пример 2 (с персистенцией ВЭБ в ткани небных миндалин, 2 тип реагирования).

Усманов И.Т., 17 лет, история болезни №1701, поступил в стационар 11.04.03 г. с диагнозом левосторонний передне-верхний паратонзиллярный абсцесс (ПТА), состояние удовлетворительное, температура тела 36,8°С, отмечает в анамнезе частые ангины.

В биопсийном материале небных миндалин методом ПЦР были обнаружены ДНК вируса Эпштейна-Барр. Показатели исследования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин по данным фенотипирования: CD3-61% (выше нормы), CD4-50% (выше нормы), CD8-38% (выше нормы), CD22-41% (выше нормы), CD16-7%, HLA-DR-44%, CD25-37%, CD71-30% (выше нормы). Показатели исследования содержания иммуноглобулинов в смешанной слюне: SIgA - 273,3 мкг/мл (ниже нормы), IgA - 129,41 мкг/мл (выше нормы), IgG - 1,36 мкг/мл (ниже нормы), IgM - 1,3 мкг/мл (ниже нормы); внеклеточная пероксидазная активность - 922 у.е. Показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне: ОКС SIgA - 0,36 (ниже нормы), ОКС IgA - 12,54 (выше нормы), ОКС IgG - 0,009 (ниже нормы), ОКС IgM - 0,17 (ниже нормы).

Заключение: функциональное состояние небных миндалин характеризуется персистенцией в ткани вируса Эпштейна-Барр, активацией клеточного звена иммунной системы, сопровождающейся повышенным уровнем в слюне IgA, но низким уровнем SIgA, IgG и IgM за счет низкой их продукции на местном уровне.

Пример 3 (с персистенцией ВЭБ в ткани небных миндалин, 3 тип реагирования).

Таран Т.Д., 36 лет, история болезни №2039, поступил в стационар 2.05.03 г. с диагнозом правосторонний передне-верхний паратонзиллярный абсцесс (ПТА) в сочетании с лакунарной ангиной, состояние удовлетворительное, температура тела 37,8°С. Частых ангин и сочетание ПТА с ангиной не отмечает, рецидивов ПТА в анамнезе нет.

В биопсийном материале небных миндалин методом ПЦР были обнаружены ДНК вируса Эпштейна-Барр. Показатели исследования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин по данным фенотипирования: CD3-35% (ниже нормы), CD4-28%, CD8-8% (ниже нормы), CD22-15%, CD16-11%, HLA-DR-21% (ниже нормы), CD25-19% (ниже нормы), CD71-15%. Показатели исследования содержания иммуноглобулинов в смешанной слюне: SIgA - 675,21 мкг/мл (выше нормы), IgA - 114,91 мкг/мл (выше нормы), IgG - 12,42 мкг/мл (ниже нормы), IgM - 1,47 мкг/мл (ниже нормы); внеклеточная пероксидазная активность - 1313 у.е. Показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне: ОКС SIgA - 7,13 (ниже нормы), ОКС IgA - 0,3 (ниже нормы), ОКС IgG - 0,006 (ниже нормы), ОКС IgM - 0,007 (ниже нормы).

Заключение: функциональное состояние небных миндалин характеризуется персистенцией в ткани вируса Эпштейна-Барр, угнетением Т-клеточного звена иммунной системы (CD3, CD8), процессов активации иммунной системы (HLA-DR, CD25 и CD71), сопровождающееся повышенным уровнем в слюне иммуноглобулинов класса А (SIgA и IgA), но низким уровнем IgG и IgM, отмечается низкая продукция на местном уровне практически всех классов иммуноглобулинов.

Способ оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин у больных паратонзиллитом

Таблица 1Показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета небных миндалин у больных паратонзиллитомПоказателиИсследуемые группыПрактически здоровые лица (n=27)Больные паратонзиллитомБез ВЭБС ВЭБТипы реагирования иммунной системы небных миндалин1 тип (n=10)2 тип (n=11)3 тип (n=7)CD3, %47,24±3,2955,70±4,9059,64±2,55*34,43±0,75**CD4, %28,89±3,3240,90±3,46*47,18±3,24***25,43±1,36CD8, %17,06±1,9921,40±3,8126,00±3,99*14,29±4,07CD22, %16,47±2,5918,70±3,0524,64±3,3515,57±3,50CD 16, %12,59±1,918,70±1,5012,27±2,9114,29±2,91HLA-DR, %39,18±3,3334,20±6,0936,27±3,4331,57±4,96CD25, %35,44±3,0323,90±6,0131,45±3,5917,29±3,71**CD71, %19,41±2,3419,90±6,1821,82±4,4220,43±2,02SIgA, мкг/мл442,75±45,07596,40±114,05370,20±60,10668,75±48,53*IgA, мкг/мл73,75±9,62119,80±19,11*81,67±20,8489,94±14,14IgG, мкг/мл32,09±5,0935,60±10,518,18±1,89***10,69±2,76**IgM, мкг/мл3,60±0,373,35±0,382,40±0,37*3,05±0,54ВПА, y.e.978,65±156,91627,11±311,31675,82±277,5*1472,86±354,6OKC SIgA51,44±5,6764,28±25,9559,18±21,2414,07±8,82***OKC IgA2,74±0,334,07±1,143,88±1,750,66±0,24***OKC IgG0,19±0,040,23±0,080,14±0,080,01±0,003***OKC IgM0,25±0,040,16±0,040,22±0,070,03±0,006***Примечание: * - показатели отличаются от данных практически здоровых лиц со статистической достоверностью Р<0,05; ** - с Р<0,01; *** - с Р<0,001.

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и иммунологии. Заявителем предложен способ оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин у больных паратонзиллитом, в котором в ткани небных миндалин у больных паратонзиллитом выявляют вирус Эпштейна-Барр и определяют содержание имуноглобулина класса G в слюне. При обнаружении в биоптате вируса Эпштейна-Барр и содержании IgG менее 20 мкг/мл определяют функциональную несостоятельность иммунной системы небных миндалин. Применение изобретения повышает точность оценки. 1 табл.

Способ оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин у больных паратонзиллитом, отличающийся тем, что в ткани небных миндалин у больных паратонзиллитом выявляют вирус Эпштейна-Барр, определяют содержание имуноглобулина класса G в слюне и при обнаружении вируса Эпштейна-Барр и содержании IgG менее 20 мкг/мл определяют функциональную несостоятельность иммунной системы небных миндалин.