СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СМЕШАННОЙ ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНОЙ ФОРМЫ ХРОНИЧЕСКОЙ ЭПШТЕЙНА-БАРР ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для проведения диагностики смешанной вирусно-бактериальной формы хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции (ХЭБВИ).

Эпштейна-Барр вирусная инфекция (ЭБВИ) относится к наиболее распространенным инфекционным заболеваниям детского возраста. Антитела к вирусу Эпштейна-Барр обнаруживают у 60% детей первых 2-х лет жизни и 80-100% взрослых (В.В.Иванова, И.В.Шилова и соавт., "Новые данные об инфекционном мононуклеозе". Рос. вестник перинатологии и педиатрии, № 6, 2006, с.44).

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) является герпесвирусом 4 типа и обладает рядом уникальных биологических свойств. Основными клетками-мишенями для ВЭБ являются В-лимфоциты, однако он может поражать эпителий ротоглотки, протоков слюнных желез, шейки матки, желудочно-кишечного тракта, эндотелий сосудов и иммунокомпетентные клетки - Т-лимфоциты (CD3), естественные киллерные клетки (NK, CD 16), нейтрофилы, макрофаги. Инфицированные вирусом В-клетки приобретают способность к неограниченной пролиферации - иммортализации, то есть к «клеточному бессмертию» и синтезизируют большое количество гетерофильных антител. Кроме того, ВЭБ может вызвать хронические манифестные формы заболевания, протекающие по типу хронического мононуклеоза.

В последнее время пристальное внимание ученых привлекает ХЭБВИ в связи с ее не только медицинской, но и социальной значимостью. Установлено, что в основе хронизации инфекционного процесса лежит способность ВЭБ к пожизненной персистенции в организме человека, формированию иммунодефицитного состояния (ИДС). Как и все герпесвирусы, ВЭБ оказывает мощное иммуносупрессирующее действие, он вызывает нарушение иммунного ответа по клеточному и гуморальному типам, цитокинового статуса, факторов врожденной резистентности (И.К.Малашенкова и соавт. "Клинические формы хронической Эшптейн-Барр вирусной инфекции: вопросы диагностики и лечения". Лечащий врач, № 9, 2003, с.32).

Таким образом, нарушения иммунного статуса являются тем патогенетическим фоном, который приводит к длительной персистенции ВЭБ в клетках-мишенях. Обычно ХЭБВИ протекает в форме моно-инфекции, однако в условиях ИДС происходит активация патогенной и условно-патогенной микрофлоры, вирусов, грибов, поэтому у значительного количества детей заболевание протекает в форме смешанной инфекции с участием нескольких герпесвирусов, бактерий (A.M.Сарычев, "Особенности клинических проявлений и иммунопатогенеза хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции", Автореф. дис. … канд. мед. наук, Ростов-на-Дону, 2004, с.19).

Формирование смешанной инфекции способствует углублению ИДС, в результате чего происходит повторная реактивация ВЭБ.

В связи с этим большое значение имеет возможность осуществления диагностики смешанной вирусно-бактериальной формы ХЭБВИ, что позволит своевременно скорректировать этиотропную и иммунокорригирующую терапию.

Проведенный поиск по патентной и научно-медицинской литературе выявил различные способы диагностики Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

Известен способ диагностики ЭБВИ, приведенный в работе Ивановой В.В., Железниковой Г.Ф., и др. «Инфекционный мононуклеоз: клиника, патогенез, новое в диагностике и терапии» (Инфекционные болезни, 2004, т.2, № 4, с.5-12), путем модифицированной реакции связывания комплемента (мРСК), иммуноферментного анализа (ИФА) и иммуногистохимического метода (ИГЦХМ). Недостатком данного способа диагностики является то, что с его помощью невозможно осуществлять диагностику смешанной вирусно-бактериальной формы ХЭБВИ.

Известен «Способ диагностики инфекционного мононуклеоза», защищенный патентом РФ № 2299439 (2007 г., БИМП №14) путем исследования крови с помощью инфракрасной спектроскопии. Недостатком этого метода является необходимость использования специальной аппаратуры и обученного персонала для проведения исследований. Данный способ также не позволяет осуществлять диагностику смешанной вирусно-бактериальной формы ХЭБВИ.

Наиболее близким техническим решением, принятым нами за прототип, является способ диагностики ХЭБВИ, приведенный в работе Волынец Г.В., Хавкина А.И. и соавт. «Диагностика хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей с хроническим гастритом» (Сб. трудов 3-го конгресса педиатров-инфекционистов - М., 2004, с.44). Предложенный способ предусматривает исследование сыворотки крови пациента и сопоставление серологических показателей IgM к VCA-, IgG к ЕА-, IgG к EBNA - антигенам ВЭБ, а также данных полимеразноцепной реакции (ПЦР). Недостатком прототипа является то, что он сложен в выполнении, а также не позволяет проводить диагностику смешанной вирусно-бактериальной формы ХЭБВИ.

Целью предлагаемого изобретения является упрощение способа диагностики, позволяющего определять смешанную вирусно-бактериальную форму ХЭБВИ.

Цель достигается тем, что у детей с ХЭБВИ проводят исследование сыворотки крови, в которой определяют содержание интерферона-гамма (ИФН-гамма) и интерлейкина-4 (ИЛ-4). При значениях ИФН-гамма более 17 пг/мл и ИЛ-4 более 1,7 пг/мл диагностируют смешанную вирусно-бактериальную форму ХЭБВИ.

Способ диагностики ХЭБВИ осуществляют следующим образом: у пациентов утром натощак из кубитальной вены забирают 5,0 мл крови в пластмассовую пробирку. Определение содержания ИФН-гамма проводят с помощью набора реагентов А-8752 «гамма-Интерферон-ИФА-БЕСТ» (тест-системы фирмы «Вектор-Бест», Россия). Определение содержания ИЛ-4 проводят с помощью набора реагентов А-8754 «ИЛ-4-ИФА-БЕСТ» (тест-системы фирмы «Вектор-Бест», Россия).

При значениях ИФН-гамма более 17 пг/мл и ИЛ-4 более 1,7 пг/мл диагностируют смешанную вирусно-бактериальную форму ХЭБВИ.

Практическая реализуемость заявляемого способа иллюстрируется примерами из клинической практики.

ПРИМЕР

Больной З., 3 года (карта № 72), обратился в инфекционное отделение Городской больницы № 1 г.Ростова-на-Дону с жалобами на затруднение носового дыхания, боли в горле при глотании, увеличение лимфатических узлов.

Диагноз при поступлении: ХЭБВИ в стадии реактивации: лакунарная ангина, ринофарингит, аденоидит, гепатомегалия, спленомегалия.

Анамнез: 8 месяцев назад перенес серологически подтвержденный инфекционный мононуклеоз, вызванный ВЭБ. Лечился в стационаре. В дальнейшем отмечались частые ОРЗ до 10-12 раз в год и обструктивные бронхиты до 4-5 раз в год, появилась быстрая утомляемость.

Объективно: кожные покровы бледные, чистые. Носовое дыхание затруднено. Слизистая ротоглотки гиперемирована, задняя стенка глотки зернистая, небные миндалины гипертрофированы до 2-3 ст. на небных миндалинах гнойные налеты, которые легко снимаются, без кровоточивости. Передне-, задне-шейные лимфатические узлы увеличены справа до 3,0 см в диаметре, слева - до 2,0 см, безболезненные, не спаяны между собой, кожа над ними не изменена. В легких пуэрильное дыхание, хрипов нет. Тоны сердца ритмичные, приглушены. Живот при пальпации мягкий, безболезненный. Печень выступает из-под края реберной дуги на 3,0 см: консистенция мягкоэластическая.

Больному согласно заявляемому способу было проведено исследование сыворотки крови для определения типа ХЭБВИ. Пациенту утром натощак из кубитальной вены забирали 5,0 мл крови в пластмассовую пробирку. Определение содержания ИФН-гамма проводили с помощью набора реагентов А-8752 «гамма-Интерферон-ИФА-БЕСТ» (тест-системы фирмы «Вектор-Бест», Россия). Определение содержания ИЛ-4 проводили с помощью набора реагентов А-8754 «ИЛ-4-ИФА-БЕСТ» (тест-системы фирмы «Вектор-Бест», Россия).

Были получены результаты: ИФН-гамма = 51,16 пг/мл, ИЛ-4 = 5,59 пг/мл.

Поскольку значение ИФН-гамма более 17 пг/мл и значение ИЛ-4 более 1,7 пг/мл, больному был поставлен диагноз: Смешанная вирусно-бактериальная форма ХЭБВИ.

Больному было назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили правильность поставленного диагноза.

Согласно заявляемому способу нами были обследованы 30 пациентов с ХЭБВИ. В результате проведенного исследования у 13 детей была выявлена моно-ХЭБВИ, а у 17 детей - смешанная вирусно-бактериальная форма ХЭБВИ. Результаты лечения и данные катамнеза подтвердили правильность поставленного диагноза.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой степенью достоверности проводить диагностику смешанной вирусно-бактериальной формы ХЭБВИ.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для проведения диагностики смешанной вирусно-бактериальной формы хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции (ХЭБВИ). У детей с ХЭБВИ проводят исследование сыворотки крови, в которой определяют содержание интерферона-гамма (ИФН-гамма) и интерлейкина-4 (ИЛ-4). При значениях ИФН-гамма более 17 пг/мл и ИЛ-4 более 1,7 пг/мл диагностируют ХЭБВИ смешанной вирусно-бактериальной формы. Способ позволяет определять смешанную вирусно-бактериальную форму ХЭБВИ.

Способ диагностики формы хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции (ХЭБВИ) путем исследования сыворотки крови, характеризующийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание интерферона-гамма (ИФН-гамма) и интерлейкина-4 (ИЛ-4) и при значениях ИФН-гамма более 17 пг/мл и ИЛ-4 более 1,7 пг/мл диагностируют ХЭБВИ смешанной вирусно-бактериальной формы.