ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ Российский патент 2007 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к микробиологии, именно к получению питательных сред для выращивания бруцеллезного микроба.

Известна питательная среда, основой которой является агар Мартена следующего состава, г/л: пептон Мартена 0,5; хлористый натрий 3,0; 20% гидроокись натрия 3,0; агар микробиологический 2,0; мясная вода 0,5 л; рН 7,2±0,1 (Черкесс Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология. - М.: Изд. Медицина, 1987).

Недостатком данной среды является ее низкая продуктивность.

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является среда Альбими, способ приготовления которой следующий: 2 г пептона, 1 г декстрозы, 5 г натрия хлорида, 0,1 г натрия бисульфата, 2 см³ дрожжевого аутолизата, 2% промытого агар-агара растворяют в 1 л дистиллированной воды (Сидоров М.А., Скородумова Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1995, - с.183).

Недостатками данной среды являются ее высокая себестоимость и сложность в приготовлении.

Целью настоящего изобретения является получение основы качественной питательной среды растительного происхождения, которая обеспечивала ростовые свойства и снижение ее стоимости, а также упрощение способа приготовления.

Поставленная цель достигается тем, что питательной основой предлагаемой питательной среды является патока рафинадная, натрия хлорид, натрий фосфорнокислый двузамещенный, агар микробиологический на водопроводной воде с добавлением в среду стимулирующих добавок, в качестве которых используют метабисульфит натрия и дрожжевой экстракт при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Патока рафинадная20,0Дрожжевой экстракт5,0Натрия хлорид5,0Натрий фосфорнокислый двузамещенный4,0Натрия метабисульфит0,3Агар микробиологический12,0Водопроводная вода Остальное

Патока рафинадная (ОСТ 18-233-75) в своем составе содержит не менее - 45% сахарозы. В отличие от прототипа предлагаемая среда, имея более низкую стоимость, обеспечивает оптимальные условия для роста и размножения бруцеллезного микроба.

Использование патоки рафинадной с метабисульфитом натрия и дрожжевого экстракта на водопроводной воде в качестве основы является отличительным признаком предлагаемой питательной среды.

Способ приготовления питательной основы предлагаемой питательной среды для выращивания бруцеллезного микроба заключается в следующем. Патоку рафинадную растворяют в водопроводной воде, добавляют хлорид натрия, натрий фосфорнокислый двузамещенный, дрожжевой экстракт, нагревают до кипения, доводят рН до 7,2±0,1 гидроокисью натрия 20%. Выпавший осадок фильтруют через тканевый фильтр с фильтровальной бумагой. В фильтрат добавляют агар микробиологический, варят в течение 10±1 мин до полного его расплавления. Корректируют рН до 7,2±0,1, добавляют метабисульфит натрия. Готовую среду разливают по 400±0,1 мл в стерильные градуированные флаконы, закупоривают стерильными резиновыми пробками, накрывают алюминиевыми колпачками, вальцуют, стерилизуют при 1 атм 30 мин. Готовую среду используют для выращивания бруцелл.

Эффективность исследуемых сред оценивали в соответствии с методическими рекомендациями «К контролю питательных сред по биологическим показателям». М., 1980, с использованием в качестве тест-культур вакцинных штаммов бруцелл В.melitensis Rev-1, В.abortus 19, В suis 61 и вирулентных штаммов В.melitensis 565, В.abortus 544, В.suis 1330.

Испытуемые культуры выращивали на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С 48 ч. Из двухсуточных культур готовили 1 млрд. взвесь м.т. тест-штаммов, равный 10 ед. по оптическому стандарту мутности ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасевича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000 и 100 м.к. Из данных разведений взвеси культур высевали по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного агара. Посевы инкубировали при 37°С в течение 5 суток при ежедневном их просмотре. Через 72-120 ч учитывали результаты подсчетов выросших колоний.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: патоку рафинадную 18,0; дрожжевой экстракт 4,0; натрия хлорид 4,0; натрия фосфорнокислого двузамещенного 3,0; метабисульфита натрия 0,2, агар микробиологический 11,0; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцеллезного микроба при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило 83 и 5.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: патоку рафинадную 20,0; дрожжевой экстракт 5,0; натрия хлорид 5,0; натрия фосфорнокислого двузамещенного 4,0; метабисульфита натрия 0,3; агар микробиологический 12,0; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцеллезного микроба при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило 130 и 16.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: патоку рафинадную 22,0; дрожжевой экстракт 6,0; натрия хлорид 6,0; натрия фосфорнокислого двузамещенного 5,0; метабисульфита натрия 0,4, агар микробиологический 13,0; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцеллезного микроба при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило 70 и 2.

Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе патоке рафинадной (пример 2).

Таким образом, на основании вышеизложенного можно сказать о явных преимуществах предлагаемой питательной среды, состоящей из патоки рафинадной 20,0, дрожжевого экстракта 5,0, натрия хлорида 5,0, натрия фосфорнокислого двузамещенного 4,0, метабисульфита натрия 0,3, агара микробиологического 12,0, водопроводной воды. Питательная среда технически проста в приготовлении без предварительного этапа подготовки основы. Предлагаемая среда дешевле, так как в основу берется растительное сырье и для ее приготовления не требуется дистиллированной воды, среда готовится на водопроводной воде.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в получении питательных сред для выращивания бруцеллезного микроба. Питательная среда в своем составе содержит в качестве питательной основы патоку рафинадную, дрожжевой экстракт, натрия хлорид, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрия метабисульфит, агар микробиологический, водопроводную воду. Изобретение позволяет снизить себестоимость питательной среды и упростить способ ее приготовления.

Питательная среда для культивирования бруцелл, содержащая питательную основу, натрия хлорид, агар микробиологический, воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит натрий фосфорнокислый двузамещенный, в качестве стимулирующей добавки натрия метабисульфит и дрожжевой экстракт, а в качестве питательной основы - патоку рафинадную, воды - водопроводную воду при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Патока рафинадная20,0Дрожжевой экстракт5,0Натрия хлорид5,0Натрий фосфорнокислый двузамещенный4,0Натрия метабисульфит0,3Агар микробиологический12,0Водопроводная водаОстальное