СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2007 года по МПК A61K9/127 C12P21/00 

Изобретение относится к области прикладной биотехнологии и может быть использовано для приготовления косметических средств на основе липосомальных препаратов, содержащих различные сочетания компонентов лизата галобактерий Halobacterium halobium, со стабильными защитными, стимулирующими и восстановительными свойствами.

Из уровня техники известен способ получения липосомальных препаратов путем смешивания раствора липидов в органическом растворителе с раствором биологически активного вещества (RU 2217129 C1, A61K 9/127, 2003). Однако из-за особенностей технологического процесса биологически активные компоненты в полученных липосомальных препаратах при использовании последних в косметических процедурах не в полной мере проявляют свои положительные свойства и могут вызывать побочные эффекты.

Изобретение направлено на создание технологически простого способа получения липосомальных препаратов с эффективным защитным, стимулирующим и восстановительным действием на кожу без побочных реакций.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе получения липосомальных препаратов путем смешивания раствора липидов в органическом растворителе с раствором биологически активного вещества, согласно изобретению в качестве биологически активного вещества вводят водный раствор лизата галобактерий Halobacterium salinarum с образованием липосомальной везикулы.

Кроме того, перед введением водного раствора лизата галобактерий Halobacterium salinarum из него удаляют некоторые компоненты и/или вводят биологически активные добавки, не входящие в состав лизата.

Предпочтительно, чтобы перед введением водного раствора лизата галобактерий Halobacterium salinarum из него удаляли не содержащие бактериородопсин фрагменты мембраны, фрагменты клеточных стенок и денатурированный белок.

Использование водного раствора лизата галобактерий Halobacterium salinarum (H. Salinarum), в клеточные мембраны (пурпурные мембраны) которых встроен бактериородопсин - биологически активный светочувствительный белок (М.В.Гусев, Л.А.Минеева. Микробиология, издательство московского университета, 1992, глава 18), обеспечивает при технологической простоте процесса высокую эффективность воздействия на кожу полученных в соответствии с изобретением липосомальных препаратов в виде гомогенной суспензии липосомальных везикул с липидной оболочкой, поскольку заключенные в липидную оболочку, состоящую преимущественно из нейтральных и отрицательно заряженных фосфолипидов, биологически активные компоненты лизата галобактерий H.Salinarum (белок бактериородопсин, каротиноиды, различные витамины, а также нуклеиновые кислоты, ликопин, сквален, макро- и микроэлементы) при косметических процедурах активно проникают в глубь кожного покрова, обуславливая эффективное проявление защитных, стимулирующих и восстановительных свойств, и не вызывают отрицательных иммунных реакций организма (например, в виде раздражения кожи) на чужеродные компоненты (белки). Кроме того, антиоксиданты и мембранные белки, входящие в состав лизата, стабилизируют липосомы, а липосомальные везикулы, соответственно, предотвращают разрушение компонентов лизата иммунной системой.

Заявленный способ осуществляется следующим образом.

Раствор фосфолипидов (индивидуальные фосфолипиды или их смеси, полученные из растительного, животного или биотехнологического сырья) в органическом растворителе (этаноле, бензоле, гексане, метаноле, хлороформе, эфире и т.п.) с концентрацией не менее 0,5% вводят в водный раствор лизата галобактерий Halobacterium salinarum, имеющий концентрацию до 40% (преимущественно 2,0÷20%), при соотношении не более 1:7 и интенсивно перемешивают до получения липосомального препарата в виде однородной (гетерогенной) суспензии липосомальных везикул.

Пример 1.

В 35 мл водного раствора лизата, приготовленного путем перемешивания с обработкой ультразвуком смеси 2 г влажной клеточной массы галобактерий Н. Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н.Salinarum, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 2.

В 40 мл водного раствора лизата, приготовленного путем перемешивания с периодической обработкой ультразвуком смеси 2 г влажной клеточной массы галобактерий Н.Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н.Salinarum и последующего удаления не содержащих бактериородопсин фрагментов мембраны, фрагментов клеточных стенок и денатурированного белка осаждением в поле силы тяжести, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 3.

В 40 мл водного раствора лизата, приготовленного ресуспензированием в 39 мл дистиллированной воды 3 г пурпурных мембран, осажденных центрофугированием при 50000g из промежуточного лизата, полученного путем перемешивания с периодической обработкой ультразвуком смеси 5 г влажной клеточной массы галобактерий Н.Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н. Salinarum и последующего удаления не содержащих бактериородопсин фрагментов мембраны, фрагментов клеточных стенок и денатурированного белка осаждением в поле силы тяжести, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 4.

В 45 мл супернатанта, содержащего в основном каратиноиды, приготовленного из лизата, полученного путем помещения 7 г влажной клеточной массы H.salinarum в 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы при постоянном перемешивании и периодической обработке ультразвуком до полного разрушения клеток H.salinarum с последующим осаждением в поле силы тяжести клеточных мембран, в том числе содержащих бактериородопсин, клеточных стенок и денатурированных белков, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 500 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 5.

В 40 мл водного раствора лизата, приготовленного путем перемешивания с периодической обработкой ультразвуком смеси 2 г влажной клеточной массы галобактерий Н.Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н.Salinarum и последующего удаления не содержащих бактериородопсин фрагментов мембраны, фрагментов клеточных стенок и денатурированного белка осаждением в поле силы тяжести, в который дополнительно введен витамин В₁₂ в количестве 0,4 г, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Для определения эффективности действия липосомальные препараты, введенные в нейтральный гель в концентрации 10÷15%, наносили 1 раз в день в течение 1 месяца на участок кожи предплечья пациентам различного возраста. В результате процедур обработанные участки кожи выглядели более гладкими и здоровыми, чем аналогичный участок кожи предплечья на другой руке. Кожа стала более эластичной, нормализовался баланс липидов на поверхности кожи, раздражений не наблюдалось.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 1, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,59 и рН 7,35, антиоксидантный эффект возрос на 10÷12%, а степень увлажнения увеличилась на 5÷6%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 2, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,57 и рН 7,42, антиоксидантный эффект возрос на 11÷13%, а степень увлажнения увеличилась на 5÷7%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 3, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,55 и рН 7,45, антиоксидантный эффект возрос на 13÷14%, а степень увлажнения увеличилась на 6÷8%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 4, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,47 и рН 7,39, антиоксидантный эффект возрос на 14÷15%, а степень увлажнения увеличилась на 7÷8%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 5, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,57 и рН 7,42, антиоксидантный эффект возрос на 11÷13%, а степень увлажнения увеличилась на 5÷6%.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для приготовления косметических средств на основе липосомальных препаратов, содержащих различные сочетания компонентов лизата галобактерий Halobacterium salinarum, со стабильными защитными, стимулирующими и восстановительными свойствами. Получают липосомальный препарат смешиванием раствора липидов в органическом растворителе с водным раствором лизата галобактерий Halobacterium salinarum. Смесь перемешивают до образования суспензии липосомальных везикул. Использование липосомального препарата повышает антиоксидантный эффект и степень увлажнения кожи на 5-8%. 2 з. п. ф-лы.

1. Способ получения липосомальных препаратов путем смешивания раствора липидов в органическом растворителе с раствором биологически активного вещества и перемешивания, отличающийся тем, что в качестве биологически активного вещества используют водный раствор лизата галобактерий Halobacterium salinarum, а перемешивание ведут до образования суспензии липосомальных везикул.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют водный раствор лизата галобактерий Halobacterium salinarum, из которых удалены не содержащие бактериородопсин фрагменты мембраны, фрагменты клеточных стенок и денатурированный белок.3. Способ по п.2, отличающийся тем, что дополнительно вводят биологически активные добавки.