Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной вирусологии, и может быть использовано для специфической профилактики оспы птиц.
Известна вакцина против оспы птиц, включающая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма вируса оспы кур и стабилизатор (Патент РФ №1405148, А61К 39/275,1986).
Недостатком этой вакцины является низкая инфекционная и иммуногенная активность.
Задачей изобретения является повышение эффективности целевого продукта за счет увеличения его инфекционной и иммуногенной активности против оспы птиц и упрощение способа его применения.
Предложена группа изобретений, объединенная единым изобретательским замыслом с достижением единого технического результата.
Поставленная задача решается за счет создания вакцины против оспы птиц, включающей вируссодержащий материал из аттенуированного штамма вируса оспы кур и стабилизатор, тем, что в качестве вируссодержащего материала она содержит штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур, а в качестве стабилизатора используют смесь пептона и лактозы в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с рН 7,0-7,4 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Поставленная задача решается за счет создания вакцины против оспы птиц, включающей вируссодержащий материал из аттенуированного штамма вируса оспы кур и стабилизатор, тем, что она используется в лиофилизированном виде.
Поставленная задача решается также за счет создания вакцины против оспы птиц, включающей вируссодержащий материал из аттенуированного штамма вируса оспы кур и стабилизатор, тем, что в качестве вируссодержащего материала она содержит штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур, а в качестве стабилизатора используют глицерин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Вакцинный штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур получен путем адаптационной аттенуации эмбрионального вируса оспы кур в культуре клеток кожи эмбрионов кур. Хранится в коллекции штаммов вирусов ФГУ ВГНКИ и депонирован под регистрационным номером ВГНКИ-3/7.
Используемый в качестве вакцинного аттенуированный штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур хранится в коллекции вирусов Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ВГНКИ) и характеризуется следующими признаками и свойствами: при электронной микроскопии вируссодержащей культуральной суспензии выявлены вирионы характерной для вируса оспы формы «кирпичика» размером 330×260 нм; посторонних вирусных кантоминантов и микоплазм не обнаружено.
Впервые предложена вакцина против оспы птиц, включающая в качестве вируссодержащего материала штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур (hen pox virus) с инфекционной активностью 5,0-7,0 lg ИД50/см 3. Авторами впервые показано, что геном штамма ВГНКИ-3/7 существенно (на 60 kb) превышает размеры геномов других штаммов (К и FPV М) вируса оспы кур, а его молекула ДНК расщепляется испытанными рестриктазами на большее число фрагментов, чем ДНК других штаммов. Так, ДНК штамма ВГНКИ-3/7 делится рестриктазой PST I на 25 фрагментов, а штаммов К и FPV М - на 17 и 17, а рестриктазами Sal GI, Barn HI и Hind III - соответственно на 18, 12 и 11; 28, 23 и 23; 45 и 43 фрагмента, что позволяет решить поставленную задачу, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».
Предлагаемая вакцина направлена на решение реальной технической задачи - специфической профилактики оспы птиц, т.е. предложение «промышленно применимо».
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур (КЭК) при концентрации 600 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 3% сыворотки крови крупного рогатого скота) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,1 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 36,5°С. Вирус культивируют в течение 96 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 20°С с последующим оттаиванием при температуре 30°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 5,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 650 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 5,0 lg ИД50/см 3 добавляют 40 г пептона, 50 г лактозы и 260 г 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,0. Далее целевой продукт расфасовывают в ампулы или флаконы и получают вакцину в жидкой форме состава 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 2. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 700 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 4% сыворотки крови крупного рогатого скота) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,5 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 37,0°С. Вирус культивируют в течение 84 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 40°С с последующим оттаиванием при температуре 30°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 6,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 700 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 6,0 lg ИД50/см 3 добавляют 100 г пептона, 100 г лактозы и 100 г 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,4. Далее целевой продукт расфасовывают в ампулы или флаконы и получают вакцину в жидкой форме состава 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 3. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 800 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 5% сыворотки крови крупного рогатого скота) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,8 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 36,5°С. Вирус культивируют в течение 72 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 30°С с последующим оттаиванием при температуре 35°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 675 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,0 lg ИД50/см 3 добавляют 70 г пептона, 75 г лактозы и 180 г 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,2. Далее целевой продукт расфасовывают в ампулы или флаконы и получают вакцину в жидкой форме состава 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 4. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 600 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 2% сыворотки крови северного оленя) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,1 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 36,5°С. Вирус культивируют в течение 96 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 20°С с последующим оттаиванием при температуре 30°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 5,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 650 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 5,0 lg ИД50/см 3 добавляют 40 г пептона, 50 г лактозы и 260 г 0,1 М фосфатного буфера рН 7,0. Далее целевой продукт расфасовывают в ампулы или флаконы и получают вакцину состава 4 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Затем получают сухую вакцину путем лиофилизации ее общеизвестным способом.
Пример 5. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 800 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 3% сыворотки крови северного оленя) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,8 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 37,0°С. Вирус культивируют в течение 72 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 40°С с последующим оттаиванием при температуре 30°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 700 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,0 lg ИД50/см 3 добавляют 100 г пептона, 100 г лактозы и 100 г 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,4. Далее целевой продукт расфасовывают в ампулы или флаконы и получают вакцину состава 5 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Затем получают сухую вакцину путем лиофилизации ее общеизвестным способом.
Пример 6. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 700 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 3% сыворотки крови северного оленя) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,5 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 36,5°С. Вирус культивируют в течение 84 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 30°С с последующим оттаиванием при температуре 35°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 6,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 675 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 6,0 lg ИД50/см 3 добавляют 70 г пептона, 75 г лактозы и 180 г 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,2. Далее целевой продукт расфасовывают в ампулы или флаконы и получают вакцину состава 6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Затем получают сухую вакцину путем лиофилизации ее общеизвестным способом.
Пример 7. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 600 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 3% сыворотки крови крупного рогатого скота) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,5 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 36,5°С. Вирус культивируют в течение 96 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 20°С с последующим оттаиванием при температуре 30°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма вируса оспы кур ВГНКИ-3/7 с инфекционной активностью 6,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 950 г вируссодержащего материала из штамма вируса оспы кур ВГНКИ-3/7 с инфекционной активностью 6,0 lg ИД50/см 3 добавляют 50 г глицерина. Далее целевой продукт расфасовывают во флаконы и получают вакцину в жидкой форме состава 7 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 8. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 700 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 4% сыворотки крови крупного рогатого скота) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,6 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 37,0°С. Вирус культивируют в течение 84 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 40°С с последующим оттаиванием при температуре 30°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,0 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 900 г вируссодержащего материала из штамма вируса оспы кур ВГНКИ-3/7 с инфекционной активностью 7,0 lg ИД50/см 3 добавляют 100 г глицерина. Далее целевой продукт расфасовывают во флаконы и получают вакцину в жидкой форме состава 8 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пример 9. Для получения предложенной вакцины против оспы птиц суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур при концентрации 800 тыс.клеток в 1 см3 питательной среды (среда Игла MEM, содержащая 4% сыворотки крови северного оленя) заражают штаммом ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур из расчета 0,8 ТЦД50 на клетку, разливают в бутыли и культивируют в роллерной установке при температуре 36,5°С. Вирус культивируют в течение 72 часов, после чего, при наличии цитопатических изменений монослоя клеток, бутыли размещают в морозильнике при температуре минус 30°С с последующим оттаиванием при температуре 35°С.
В результате был получен вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,5 lg ИД50/см 3. Для изготовления 1000 г вакцины к 925 г вируссодержащего материала из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 7,5 lg ИД50/см 3 добавляют 75 г глицерина. Далее целевой продукт расфасовывают во флаконы и получают вакцину в жидкой форме состава 9 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Использование вакцины иллюстрируется на следующем примере.
Пример 10. Из цыплят 60-дневного возраста по принципу аналогов формируют 15 групп по 30 цыплят в каждой.
1 опытная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной, полученной согласно примеру 4 описания материалов заявки, однократно из расчета 100 ИД50 на одну птицу;
2 опытная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной, полученной согласно примеру 5 описания материалов заявки, однократно из расчета 150 ИД50 на одну птицу;
3 опытная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной, полученной согласно примеру 6 описания материалов заявки, однократно из расчета 200 ИД50 на одну птицу;
4 опытная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной, полученной согласно примеру 1 описания материалов заявки, однократно из расчета 100 ИД50 на одну птицу;
5 опытная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной, полученной согласно примеру 2 описания материалов заявки, однократно из расчета 150 ИД50 на одну птицу;
6 опытная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной, полученной согласно примеру 3 описания материалов заявки, однократно из расчета 200 ИД50 на одну птицу;
7 опытная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной, полученной согласно примеру 7 описания материалов заявки, однократно из расчета 100 ИД50 на одну птицу;
8 опытная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной, полученной согласно примеру 8 описания материалов заявки, однократно из расчета 150 ИД50 на одну птицу;
9 опытная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной, полученной согласно примеру 9 описания материалов заявки, однократно из расчета 200 ИД50 на одну птицу;
10 опытная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной, полученной согласно примеру 7 описания материалов заявки, однократно из расчета 100 ИД50 на одну птицу;
11 опытная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной, полученной согласно примеру 8 описания материалов заявки, однократно из расчета 150 ИД50 на одну птицу;
12 опытная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной, полученной согласно примеру 9 описания материалов заявки, однократно из расчета 200 ИД50 на одну птицу;
13 контрольная группа - вакцинируется аэрозольно вакциной-прототипом однократно из расчета 200 ИД50 на одну птицу;
14 контрольная группа - вакцинируется внутрикожно вакциной-прототипом однократно из расчета 200 ИД50 на одну птицу;
15 контрольная группа - не вакцинировалась.
Результаты испытаний приведены в таблице.
Кроме того, были проведены испытания вакцины против оспы птиц из штамма ВГНКИ-3/7 при аэрозольной вакцинации птиц против оспы одновременно с вакцинами против нъюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита птиц.
Опыты ставили в птицеводческих хозяйствах. В помещениях птичников содержались от 23-х до 84-х тысяч птиц. Вакцинировали цыплят в возрасте 2-х месяцев. Для этого генераторы аэрозоля (САГ-1) заполняли смесью 3-х вакцин: предлагаемой вакциной против оспы из штамма ВГНКИ-3/7 и коммерческими вакцинами против нъюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита птиц. Контроль результатов аэрозольной вакцинации против оспы проводили через 7-9 суток путем внутрикожного введения в перепонку крыла птиц (100 голов) вируса той же вакцины в дозе 1000 ИД50 в объеме 0,01 см3. На 7-10 день после этого птиц осматривали и подсчитывали количество цыплят, которые не имели оспин на месте внутрикожного введения оспенного вируса, считая их иммунными против оспы.
В результате этих опытов было установлено, что при одновременной аэрозольной вакцинации против оспы, нъюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита птица приобретала напряженный и длительный иммунитет (до 14 месяцев) ко всем болезням, как и при раздельной аэрозольной вакцинации.
Для защиты против оспы птиц вакцинируют предлагаемой вакциной в 60-65-суточном возрасте внутрикожно или аэрозольно однократно. При необходимости цыплят прививают с 1-суточного возраста и через 2-3 месяца их ревакцинируют. Иммунитет наступает в течение 5-7 суток практически у всех привитых птиц и длится не менее 14 месяцев.
Таким образом, предлагаемая вакцина в отличие от прототипа обладает способностью формировать иммунитет против оспы птиц не только при внутрикожном, но и при аэрозольном применении и увеличивает длительность иммунитета до 14 месяцев. За счет возможности аэрозольной вакцинации упрощается способ ее применения и одновременно вакцинируется большое поголовье птиц. Кроме того, вакцина безвредна для цыплят и не обладает риверсибельностью.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
ВАКЦИНА ПРОТИВ ОСПЫ ПТИЦ И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ | 1986 |
|
RU1405148C |
АССОЦИИРОВАННАЯ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ СУХАЯ ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ И ОСПЫ ПТИЦ | 2005 |
|
RU2295357C1 |
ШТАММ "БГ" ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ И ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ | 1997 |
|
RU2127602C1 |
ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ | 1998 |
|
RU2127604C1 |
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВИРУС-ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА ПТИЦ | 2003 |
|
RU2246317C1 |
ИНАКТИВИРОВАННАЯ СОРБИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ | 2004 |
|
RU2283136C2 |
АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ "КЭМ-7" ВИРУСА ОСПЫ КУР Fowlpox virus ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ДИАГНОСТИКИ ОСПЫ ПТИЦ | 2012 |
|
RU2493253C1 |
ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ | 2001 |
|
RU2205021C2 |
ВАКЦИНА ПРОТИВ ОСПЫ ОВЕЦ | 1989 |
|
RU1614201C |
ШТАММ "К-58" ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ | 2004 |
|
RU2268936C1 |
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Вакцина по первому варианту выполнения включает в качестве вируссодержащего материала штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур. В качестве стабилизатора используют смесь пептона и лактозы в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с рН 7,0-7,4 при следующем соотношении компонентов, мас.%: вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур с инфекционной активностью 5,0-7,0 ИД50/см 3 - 65,0-70,0, пептон - 4,0-10,0, лактоза - 5,0-10,0, 0,1-0,2 М фосфатный буфер с рН 7,0-7,4 - остальное. Вакцина по второму варианту выполнения в качестве вируссодержащего материала также содержит штамм ВГНКИ-3/7 вируса оспы кур, а в качестве стабилизатора - глицерин при следующем соотношении компонентов, мас.%: глицерин - 5-10, вируссодержащий материал из штамма ВГНКИ-3/7вируса оспы кур с инфекционной активностью 6,0-7,5 lg ИД50/см 3 - остальное. Вакцина создает длительный напряженный иммунитет. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.
ВАКЦИНА ПРОТИВ ОСПЫ ПТИЦ И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ | 1986 |
|
RU1405148C |
Ветеринарные препараты | |||
Справочник | |||
/Под ред | |||
ОСИДЗЕ Д.Ф | |||
- М.: Колос, 1981, с.144-149 | |||
СПОСОБ ТРАНСПОРТИРОВКИ ЖИДКОСТИ | 2006 |
|
RU2429965C2 |
Приспособление для автоматического регулирования двигателей внутреннего горения | 1935 |
|
SU50603A1 |
Устройство для доводки малых отверстий шаржированным притиром | 1959 |
|
SU124832A1 |
СН 624430 А, 31.07.1981 | |||
Бутоксиметиловый эфир бензилтритиокарбоната в качестве противозадирной присадки к смазочным маслам | 1985 |
|
SU1268573A1 |
Авторы
Даты
2007-08-20—Публикация
2006-07-06—Подача