СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВА ЭНДОМЕТРИОИДНОЙ КИСТЫ ЯИЧНИКА Российский патент 2007 года по МПК G01N33/573 

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии.

Одним из способов прогнозирования рецидивирования эндометриоза является выявление и оценка следующих прогностически неблагоприятных факторов: невроз, проявляющийся в ипохондрии, раздражительной слабости, фобиях, повышенной тревожности, астении, выраженной интравертированности и интрапсихической неупорядоченности; температурный акцент более 0,6°С в органоспецифических точках влагалища; повышение средней электропроводности в тесте Ryodoraku более 70 мкА (Гончаренко В.П. Значение психотерапии и лазеропунктуры в комплексном лечении и медицинской реабилитации больных генитальным эндометриозом. Дисс. к.м.н. В. - 2000. - 185 с.).

Недостатком способа является невысокая точность, обусловленная выявлением, большей частью, общеклинических факторов риска, характерных не только при рецидивировании эндометриоза.

Наиболее близким к предлагаемому способу является прогнозирование рецидивирования эндометриоидных кист яичников на основании регистрации повышения содержания лептина (свыше 20 нг/мл) и интерлейкина 6 (свыше 10 пг/мл) в сыворотке крови больных спустя 3 месяца после операции. Автор считает, что даже при отсутствии клинических и инструментальных признаков заболевания повышение показателей свидетельствует о высоком риске рецидива заболевания (Орлов О.Н. Клиническое значение исследования лептина и интерлейкина-6 в диагностике и лечении эндометриоза яичников. Дисс... к.м.н. М. - 2005. - 131 с.).

Недостатком этого способа прогнозирования является небольшая точность, вероятно, обусловленная определением показателей в сыворотке крови, что менее информативно, чем определение тех же показателей в ткани эндометриоза яичников.

Задачей изобретения является повышение точности способа прогнозирования рецидива эндометриоидной кисты.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в определении иммуногистохимических (ИГХ) показателей экспрессии матриксной металлпротеиназы-7 (ММР-7) и ингибитора матриксной металлопротеиназы-4 (TIMP-4) в ткани эндометриоидной кисты яичника, взятой после операции по удалению кисты, и при величине первого более 5 и второго менее 5 прогнозируют рецидив.

Практически способ осуществляют следующим образом. После операции резекции яичника или цистэктомии (удаления кисты) из удаленного препарата изготавливают парафиновые блоки. Далее изучают парафиновые срезы, включающие очаги эндометриоза, окрашенные гематоксилином и эозином по методу Ван Гизона. ИГХ реакции ставят по общепринятому протоколу. Демаскировку антигена проводят в СВЧ-печи при кипячении срезов в течение 20 минут при 600 Вт. С помощью моноклональных антител (Lab Vision, США) выявляли уровни экспрессии ММР-7 и TIMP-4. Проводились параллельные позитивные и негативные контрольные реакции. Результаты реакций определялись полуколичественным методом в баллах от 0 до 6 (Diagnostic immunopathology. Edit. Colvin R.B., Bhan A.K., M. Cluskey R.T. - 2 ed. - Raven Press, New York - 1995. - pg.820). Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью программы Epi Info 5.0 (CDC; http://www.CDC.GOV).

Таблица 1Бальная система оценки иммуногистохимических реакций.Число баллов6 баллов4 балла2 балла0 балловЯркость окраски++++++-Число окрашенных клеток20% клеток и более10-20% клеток5-10% клеток0 клеток

Иммуногистохимические исследования.

Все больные прооперированы в пролиферативную фазу цикла. Пациенткам после оперативного удаления кисты проводилось иммуногистохимическое исследование препарата с оценкой уровней экспрессии ММР-7 и TIMP-4. Затем ретроспективно больных разделили на две группы: I группа - 22 пациентки, у которых в течение одного года после операции возникал рецидив эндометриоидной кисты; II группа - 42 пациентки с отсутствием рецидива эндометриоидной кисты (в течение одного года). Проводили сравнение выявленных в проспективных исследованиях показателей в двух группах.

Продукты реакций ММР-7 и TIMP-4 выявлялись в цитоплазме клеток стромы эндотелия сосудов, макрофагов, фибробластов, а также в эпителиальных клетках. TIMP-4 обнаруживался в фибробластах, макрофагах и эндотелии новообразованных сосудов стромы, а ММР-7 - преимущественно в эпителии эндометриоза яичника.

При оценке уровней экспрессии (подсчитывались средние арифметические показатели балльных оценок) были получены следующие результаты (таблица 2). Показатели экспрессии ММР-7 в очаге эндометриоза (соответственно в строме и в эпителии) оказались: в I группе - 0,1±0,01 и 5,9±0,1; во второй группе - 0,1±0,01 и 2,1±0,1. Значения экспрессии TIMP-4 в ткани эндометриоидной кисты (в строме и в эпителии): в I группе - 1,2±0,03 и 0,1±0,01; во II группе - 4,9±0,1 и 0,1±0,01.

Полученные результаты свидетельствуют о повышении уровня экспрессии ММР-7 в эпителии очагов эндометриоза I группы по сравнению со II группой (р<0,05). Одновременно с этим в строме очагов эндометриоза яичников I группы имеет место понижение уровня экспрессии TIMP-4 по сравнению с показателем во второй группе (Р<0,05).

 I группа
Ткань эндометриоидной кисти яичника
(Рецидив)II группа
Ткань эндометриоидной кисти
(Рецидив отсутствует) СтромаЭпителийСтромаЭпителийMMP-70,1±0,015,9±0,10,1±0,012,1±0,08TIMP IV1,1±0,030,1±0,015,4±0,10,1±0,01

Таким образом, при показателе экспрессии ММР-7 более 5 и показателе экспрессии TIMP-4 менее 5 баллов прогнозируем рецидив эндометриоидной кисты. Используя предложенный способ, в 86% случаев прогноз рецидивирования подтвердился.

Пример 1

Больная С. (№16), 29 лет, была госпитализирована с жалобами на тянущие боли внизу живота, больше справа. Заключение врача ультразвуковой диагностики: ЭХО-признаки эндометриоидной кисты правого яичника.

В плановом порядке была произведена лапароскопическая операция удаления эндометриоидной кисты правого яичника.

Диагноз подтвержден морфологически.

После операции препарат в парафиновом блоке был отправлен на иммуногистохимическое исследование.

ИГХ показателиБаллыМатриксная металлопротеиназа-76Ингибитор матриксной металлопротеиназы - TIMP-44

На основании полученных результатов был прогнозирован риск развития рецидива эндометриоидной кисты яичника.

К концу 1 года наблюдения после операции у пациентки диагностирован рецидив эндометриоидной кисты.

Пример 2

Больная Л. (№21), 23 года, была госпитализирована в стационар с направительным диагнозом эндометриоидная киста яичника. Жалоб не предъявляла. Заключение врача ультразвуковой диагностики: ЭХО-признаки эндометриоидной кисты правого яичника.

В плановом порядке была произведена лапароскопическая операция удаления эндометриоидной кисты правого яичника.

Диагноз подтвержден морфологически.

После операции препарат в парафиновом блоке был отправлен на иммуногистохимическое исследование.

ИГХ показателиБаллыМатриксная металлопротеиназа-72Ингибитор матриксной металлопротеиназы - TIMP-46

Полученные данные указывают на отсутствие риска возникновения рецидива эндометриоидной кисты яичника.

Через год на профилактическом осмотре при проведении ультразвукового исследования никаких структурных изменений яичников не обнаружено, данных за рецидив эндометриоза не выявлено.

Пример 3

Больная Д. (№8), 31 лет, была госпитализирована с жалобами на тянущие боли внизу живота, усиливающиеся накануне и во время менструации. Заключение врача ультразвуковой диагностики: ЭХО-признаки эндометриоидной кисты левого яичника.

В плановом порядке была произведена лапароскопическая операция удаления эндометриоидной кисты правого яичника.

Диагноз подтвержден морфологически.

После операции препарат в парафиновом блоке был отправлен на иммуногистохимическое исследование.

ИГХ показателиБаллыМатриксная металлопротеиназа-76Ингибитор матриксной металлопротеиназы - TIMP-42

На основании полученных результатов был прогнозирован высокий риск развития рецидива эндометриоидной кисты яичника.

Через 8 месяцев у пациентки диагностирован рецидив эндометриоидной кисты.

Предлагаемый способ позволяет прогнозировать рецидивирование эндометриоидной кисты задолго до появления клинических признаков, что делает возможным проведение своевременной терапии и предотвращение повторного возникновения эндометриоидной кисты.

Точность прогнозирования в наших исследованиях - 86%, что выше, чем при известном способе (57%).

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для прогнозирования риска рецидивирования эндометриоидной кисты яичника. Сущность способа заключается в том, что иммуногистохимически определяют показатели экспрессии матриксной металлпротеиназы-7 и ингибитора матриксной металлопротеиназы - TIMP-4, по величине которых прогнозируют рецидив эндометриоидной кисты яичника. Техническим результатом является разработка более точного способа, позволяющего прогнозировать рецидивирование эндометриоидной кисты яичника задолго до появления клинических признаков. 1 табл.

Способ прогнозирования риска рецидивирования эндометриоидной кисты яичника, включающий исследование биопрепарата, отличающийся тем, что иммуногистохимически определяют показатели экспрессии матриксной металлпротеиназы-7 и ингибитора матриксной металлпротеиназы - TIMP-4, при величине первого более 5 и второго менее 5 баллов прогнозируют рецидив эндометриоидной кисты.