СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ НЕОПЛАСТИЧЕСКОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ ЭНДОМЕТРИОИДНЫХ КИСТ ЯИЧНИКОВ Российский патент 2020 года по МПК G01N33/68 

В структуре гинекологических заболеваний эндометриоз занимает третье место после воспалительных процессов и миомы матки. По данным разных авторов, частота заболеваемости эндометриозом у женщин репродуктивного возраста составляет от 10 до 50%, и является одной из частых причин нарушений репродуктивной функции, вплоть до развития бесплодия, синдрома хронических тазовых болей (Мовтаева Х.Р. 2011; Адамян Л.В, Андреева Е.Н., Аполихина И.А., Беженарь В.Ф., Геворкян М.А., Гус А.И., 2013; Gajbhiye R., Bendigeri Т., Ghuge A., Bhusane К., Begum S., Warty N., 2017; Socolov R., Socolov D., Sindilar A., Pavaleanu I., 2017; Komiyama S. et al., 2019; Shah R., Ervine A., 2020; Ruba S., Doherty D., Stewart C. J. R., 2020). Эндометриоз диагностируют у 80% женщин, страдающими хроническими тазовыми болями и у 50% - с разными формами бесплодия.

Атипическая форма эндометриоза характеризуется клеточной атипией и избыточной пролиферацией, однако часто на основании только морфологического исследования установить диагноз атипического эндометриоза представляется достаточно сложным. В результате исследования Байрамовой Н.Н. и соавт.(2019) высказано предположение, что атипический эндометриоз может быть морфологическим предшественником эндометриоидного и светлоклеточного рака яичника. В своей работе они продемонстрировали, что потеря экспрессии BAF250a (ARID1А), β-катенина, PTEN, дефект системы MMR могут расцениваться в качестве начальных признаков злокачественной трансформации эндометриоз-ассоциированных опухолей яичника (Байрамова Н.Н., Протасова А.Э., Раскин Г.А., Собивчак М.С., Ярмолинская М.И. 2019).

Злокачественная трансформация эндометриоза - редкое явление, которое происходит примерно в 0,7-2,5% случаев и преимущественно поражает яичники. Было описано, что у женщин с эндометриозом риск возникновения эндометриоидных и светлоклеточных опухолей яичника в 2-3 раза выше (Kuo Н.Н., Huang C.Y., Ueng S.H., Huang K.G., Lee C.L., Yen C.F., 2017). Морфологические исследования показывают непрерывный процесс, состоящий из последовательных этапов изменения нормального эпителия эндометриоидной кисты в атипичный эндометриоз и, впоследствии, в инвазивную карциному (Gadducci A., Lanfredini N., Tana R., 2014). Было показано, что в эпителии стенок эндометриоидных кист определялись синцитиальные папиллярные изменения, метаплазия с клетками типа «сапожного гвоздя с большой шляпкой», атипия эпителия с колебанием экспрессии Ki-67 и Bcl-2 от низкой до относительно высокой, с низкой экспрессией р53 (Леваков С.А., Громова Т.А., Кедрова А.Г., Шешукова Н.А., 2016; Громова Т.А., Шешукова Н.А., Большакова О.В., Зайратьянц О.В., Леваков С.А., Федотов Е.В., 2018; Neto L. F. S. et al., 2020).

В этих работах авторы демонстрируют возможность развития из эндометриоидных кистозных образований яичника светлоклеточных и эндометриоидных карцином, но не серозных, которые, как показано в нашем изобретении, также могут развиваться из эндометриоидных кистозных образований и ассоциированы с повышением уровня сывороточного СА125.

В 2014 году Всемирная организация здравоохранения предложила классификацию опухолей яичника, включающих в себя серозные карциномы высокой и низкой степени злокачественности (HGSC и LGSC соответственно), отличающиеся друг от друга генетическими нарушениями, клиническим течением и происхождением. HGSC, как известно, происходит из эпителия маточных труб, имплантированного на поверхность яичника, ассоциирована с серозной интраэпителиальной карциномой маточной трубы (STIC) и мутациями ТР53. LGSC характеризуется мутациями KRAS и BRAF, последовательно развиваются из серозных пограничных опухолей (Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H., 2014; Teasley H.E. et al., 2020). В 2016 г. Kurman R.J. и соавторы предложили выделить группу эндометриоз-ассоциированных карцином яичника, в которую включили эндометриоидную, светлоклеточную и серозно-муцинозную карциномы (Kurman R.J., Shin I.M., 2016).

В 2012 г. группа исследователей на основании данных более 21000 пациенток установили связь между эндометриозом и отдельными группами опухолей яичника, таких как эндометриоидные, светлоклеточные, серозные low grade (Yamamoto S., Tsuda H., Takano M., Tamai S., Matsubara O., 2012). В 2015 и 2019 гг. Wang Y. и соавторы проводили исследования с использованием иммуногистохимических маркеров OVGP1, WT-1 и FOM3, в которых показали, что LGSC развиваются из эпителия трубного типа кистозных образований яичника (Wang Y., Mang М., Wang Y., Wang L., Klein R., Kong В., Zheng W., 2015; Wang Y., Hong S., Mu J., Wang Y., Lea J., Kong В., Zheng W., 2019). WT1-ген, расположенный в 11p13 хромосоме, обеспечивает синтез белка, необходимого для нормального развития почек и гонад. В этих тканях белок WT1, являясь транскрипционным фактором, принимает участие в процессе роста, созревания, дифференцировки клеток, а также в апоптозе. Патологическая экспрессия белка WT-1 расценивается как маркер серозной дифференцировки, так как он обладает положительной экспрессией во многих серозных опухолях яичника.

В работах данных авторов была установлена связь между эндометриоидными кистами яичников и серозной карциномой яичника low grade, но не была проведена оценка сывороточных маркеров и уровня экспрессии маркеров серозной дифференцировки, как это сделано в нашем изобретении.

Нарушения гликозилирования, как один из маркеров онкологического заболевания, приводит к продукции опухоль-ассоциированных гликанов и гликоротеинов. Маркером гликозилирования, применяемым для детекции и мониторирования серозных опухолей яичника является СА125. Так как изменения гликозилирования рано происходит в опухоли, определение опухоль-ассоциированных маркеров гликозилирования является эффективной стратегией в улучшении диагностики и лечения (Silsirivanit А., 2019).

Уровень СА125 в сыворотке 35 Е/мл, выявляемый у 1% здоровых доноров-женщин, часто расценивается как верхняя граница нормы в клинической практике. Следует отметить, что этот уровень является спорным, например, у постменопаузальных женщин или у пациенток после гистерэктомии, уровень СА125 имеет тенденцию к снижению и понижение уровня нормального значения может быть более приемлемым: 20 и 26 Е/мл. В целом, примерно у 85% пациенток с эпителиальными опухолями яичника уровень СА125 выше 35 Е/мл. СА125 менее часто повышается при муцинозных, светлоклеточных и пограничных опухолях яичников, чем при серозных. Повышение сывороточного СА125 может быть также связано с другими злокачественными новообразованиями (поджелудочная железа, молочная железа, толстая кишка, легкое) и доброкачественными или физиологическими состояниями, включая беременность, эндометриоз и менструацию (Crosby D.A., Glover L.E., Martyn F., Wingfield M., 2018; Shinmura H. et al., 2020).

При исследовании CA125, как маркера эндометриоза многие авторы склоняются к тому, что уровень СА125 ≥30 Е/мл является показателем эндометриоза с высокой точностью только у женщин с симптомами боли и бесплодия. СА125 должен рассматриваться как дискриминационный тест при подозрении на эндометриоз, при этом уровень СА125 <30 Е/мл, тем не менее, не может быть критерием достоверного выявления эндометриоза (Hirsch М., Duffy J., Davis C.J.,Nieves Plana M., Khan K.S., 2016; Karimi-Zarchi M., Dehshiri-Zadeh N., Sekhavat L., Nosouhi F., 2016; Hirsch M., Duffy J.M.N., Deguara C.S., Davis C.J., Khan K.S. 2017; Akinwunmi B.O., Babic A., Vitonis A.F., Cramer D.W., Titus L., Tworoger S.S. et al., 2018; Szymanska B. et al., 2020). Такие данные приводят к предположению, что эндометриоз является либо гетерогенным заболеванием с конвергентной гистоморфологической картиной, либо заболеванием с прогредиентным течением и способностью к неопластической трансформации.

Прототипом изобретения является способ из статьи «Рак эндометрия или рак яичников?» (Авторы: Жорданиа К.И., Паяниди Ю.Г., Савостикова М.В., Гокадзе Н.Н., Калиничева Е.В., Дмитриев, В.Н. // Акушерство и гинекология: Новости. Мнения. Обучения. - 2017. - №.1 (15)), в котором применяется иммуноцитохимическая методика выявления факторов увеличения гиперпластических процессов эндометрия при возникновении рака яичников. Для цитологического исследования полученного материала и проведения иммуноцитохимических (ИЦХ) реакций готовили жидкостные цитоспиновые монослойные препараты системы «Cytospin». ИЦХ исследования проводились с использованием моноклональных антител к антигенам р53, СА125, WT1, Ki-67. У пациенток с клиническим диагнозом «рак яичников» при ИЦХ исследовании материала из полости матки в 86% определяется экспрессия белка р53, WT1, р16 в клетках рака яичника. При совместном использовании традиционного цитологического и ИЦХ методов диагностики клетки карциномы яичника в полости матки выявлялись в 88% наблюдений. Полученные данные свидетельствуют о достаточно высокой эффективности иммуноцитохимического способа диагностики рака яичников, основанного на экспрессии молекулярно-генетических маркеров клеток, полученных из аспирационного материала полости матки.

Недостатками данного способа являются повышенная сложность определения антигенов, что не позволяет провести именно раннюю диагностику неопластической трансформации эндометриоза яичников, диагностика других диагнозов по МКБ-10, неточность выявления антигенов, вследствие дисперсии материала на предметном стекле, без возможности оценить гистологическую структуру.

Аналогом изобретения является способ из статьи «Ovarian Seromucinous Carcinoma» (Авторы: Taylor J., McCluggage W. G. The American journal of surgical pathology, 39.7 (2015): 983-992), в котором изучалась диагностика пограничных вариантов серозно-муцинозных карцином с компонентами железистого, микрогландулярного и солидного роста. Тоже был выявлен эндометриоз и эндометриоидные аденокарциномы тела матки, которые подтверждались иммуногистохимически, в том числе, также через положительное окрашивание СА125 и WT1.

Недостатками данного способа являются то, что исследование касается в основном морфологической и иммуногистохимической характеристики серозно-муцинозных карцином, при этом, несмотря на то, что была выявлена связь с эндометриозом, не была установлена корреляция с сывороточными онкомаркерами, такими, как СА125.

Схожим аналогом изобретения является методика, приведенная в статье «Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика эндометриоза яичников в зависимости от тяжести заболевания» (Авторы: Михалева Л.М., Соломатина А.А., Болтовская М.Н., Садовникова Е.А., Старосветская Н.А., Степанова И.И., Стрыгина В.А., Журнал «Клиническая и экспериментальная морфология». - 2016. - Т. 19. - №.3. - С. 15-21), где приведена клинико-морфологическая характеристика эндометриоза яичников в зависимости от степени тяжести заболевания. Проведено клинико-лабораторное обследование и лечение 51 пациентки репродуктивного возраста с эндометриоидными образованиями яичников. Условно на основании клинико-лабораторных и инструментальных данных пациентки распределены на три группы: легкая, средняя и тяжелая степень течения заболевания. Проведены иммуногистохимическое исследование ткани яичника с использованием антител к СА-125, гликоделину A, Ki-67, р53, BCL-2, ER, PRA, b-катенину, а также иммуноферментный анализ концентраций СА-125 и гликоделина А в сыворотке крови и перитонеальной жидкости. При тяжелой форме эндометриоза выявлены максимально выраженная экспрессия СА-125 и гликоделина А в стенке эндометриоидной кисты яичника и наиболее высокие показатели этих маркеров в сыворотке крови и перитонеальной жидкости. При иммуногистохимическом исследовании обнаружены достоверные различия в уровнях экспрессии Ki-67 и р53 между легкой и тяжелой степенью заболевания. СА-125, гликоделин A, Ki-67, р53 являются информативными маркерами, отражающими степень тяжести эндометриоза.

Недостатками этого способа являются повышенная сложность выявления антигенов, отсутствие исследования возможности неопластической трансформации эндометриоза и его связи с определенными типами опухолей яичника.

Аналогом является способ из статьи «Морфология рака яичников в классификации ВОЗ 2013 года» (Автор: Ожиганова И.Н. // Практическая онкология. - 2014. - Т. 15. - №.4. - С. 143-152), которая описывает пограничные и другие опухоли яичников, выявляемые через уровень СА125 солидного, солидно-кистозного или папиллярного строения, с папиллярной, железистой и криброзной структурой, с крупными ядрами, гиперхромными и полиморфными, иногда причудливыми, при этом ядрышки четкие, могут быть очень крупными и эозинофильными, митозы многочисленные и атипичные. И также экспрессию WT1 в ядрах считают диагностически значимой и она отсутствует в большинстве серозных карцином эндометрия.

Недостатками данного способа является неточное изложение методики и отсутствие диагностики на ранней стадии неопластической трансформации эндометриоза яичников с диагнозом «эндометриоидная киста яичников» или с коморбидными диагнозами: «эндометриоидная киста и лейомиома матки».

Близкий способ известен из статьи «Expression of WT1 and PAX8 in the epithelial tumours of Malaysian women with ovarian сапсег» (Авторы: Rhodes A., Vallikkannu N., Jayalakshmi P.Br J Biomed Sci. 2017; 74(2):65-70), в которой проводится дифференциальная диагностика эпителиальных образований яичника с помощью антител WT1 и РАХ8, при этом серозные опухоли были основным гистологическим типом. Подавляющее большинство серозных опухолей были положительными по экспрессии WT1 и РАХ8 (86%, р<0,001), в то время как 40% опухолей были положительными по РАХ8 и 13% по WT1.

Недостатками данного способа является отсутствие корреляции полученных данных об иммуногистохимическом профиле эпителиальных опухолей яичника с сывороточным маркером СА125.

Близким аналогом является способ, описанный в публикации «Immunohistochemistry: A diagnostic aid in differentiating primary epithelial ovarian tumors and tumors metastatic to the ovary» (Авторы: Kriplani D., Patel M.M. South Asian J Cancer. 2013; 2(4):254-258), в котором изучались первичные и метастатические новообразования яичников. Использовались шесть маркеров, включая CK7, CK20, СБА, также СА125 и WT1, чтобы помочь классифицировать и дифференцировать различные опухоли яичников. При этом WT1 в данном способе помогает типировать первичные поверхностные эпителиальные опухоли яичника, а также дифференцировать первичную от метастатической серозной карциномы яичника.

Недостатками данного способа являются повышенная сложность выявления онкомаркеров, не детальное изложение методики, а также отсутствие возможности проведения диагностики на ранней стадии неопластической трансформации эндометриоза яичников.

Похожим аналогом также является способ, описываемый в статье «Serous papillary adenocarcinoma of the female genital organs and invasive micropapillary carcinoma of the breast. Are WT1, CA125, and GCDFP-15 useful in differential diagnosis?)) (Авторы: Moritani S, Ichihara S, Hasegawa M, et al.. Hum Pathol. 2008; 39(5):666-671). В нем проводилась дифференциальная диагностика рака женских половых органов и молочных желез также с помощью онкомаркеров WT1, СА125 и GCDFP-15). Авторы показали, что СА125 не всегда полезен для дифференциальной диагностики серозной папиллярной аденокарциномы и инвазивной микропапиллярной карциномы. Хотя положительная частота WT1 была значительно выше при серозной папиллярной аденокарциноме, чем при инвазивной микропапиллярной карциноме, экспрессия WT1 при серозно-папиллярной аденокарциноме эндометрия была нечастой. Способ показал, что WT1 и GCDFP-15 могут быть полезными маркерами для дифференциальной диагностики аденокарцином.

Недостатками данного способа является концентрация исследования на дифференциальной диагностике опухолей яичника, а не на взаимосвязи эндометриоза яичника с определенными типами опухолей.

Существует также аналог в статье «WT1, monoclonal СБА, TTF1, and СА125 antibodies in the differential diagnosis of lung, breast, and ovarian adenocarcinomas in serous effusions» (Авторы: Zhu W., Michael C.W. Diagnostic cytopathology. 2007; 35(6); 370-375), в котором диагнозы были подтверждены хирургической резекцией. При этом далее для проведения дифференциальной диагностики метастатических аденокарцином легких, молочной железы и яичников срезы с парафиновых блоков подвергали иммуногистохимической окраске антителами к WT1, mCEA, TTF1 и СА125. Два наблюдателя вслепую просматривали полученные препараты без знания предыдущих клинических или гистологических диагнозов. Интенсивность окрашивания оценивали как отрицательную, 0; слабый, 1+; умеренный, 2+; и сильный, 3+. Процент положительно окрашенных клеток был оценен. Характер распределения реактивности для WT1 и TTF1 регистрировали как ядерно, a mCEA и СА125 как мембранное окрашивание. Метастатические аденокарциномы яичника показали положительную иммунореактивность к WT1 в 19/20 (95%) случаях, СА125 в 20/20 (100%), и все показали отрицательную реакцию как для mCEA (0/20, 0%), так и для TTF1 (0/20, 0%). Аденокарциномы молочной железы показали положительную реакцию в 6/13 (46%) случаев на СА125 и mCEA. Картина окрашивания была диффузной для СА125 и очаговой для mCEA. Только 2/13 (15%) были положительными для WT1, в то время как все 13 случаев аденокарцином молочной железы (0/13, 0%) были отрицательными для TTF1. Аденокарциномы легкого продемонстрировали положительную иммунореактивность на TTF1 в 9/13 (69%) с характерной картиной ядерного окрашивания, но только 3/13 (23%) были очагово окрашены на WT1. Кроме того, 8/13 (62%) случаев аденокарциномы легкого были положительными как для СА125, так и для mCEA. Результаты диагностики по способу авторов показывают, что очаговое окрашивание WT1 специфично для метастатической карциномы яичников, демонстрируя высокую чувствительность. Кроме того, окрашивание СА125 очень чувствительно к аденокарциномам яичника, но может быть положительным примерно в половине случаев аденокарцином легкого и молочной железы. Иммуноокрашивание, включающее положительный mCEA и отрицательный WT1, исключает аденокарциному яичника, что повышает вероятность наличия аденокарциномы легкого и молочной железы. Положительное окрашивание TTF1 подтверждает диагноз метастатической карциномы, возникающей из легких, а не из молочной железы, в то время как отрицательное окрашивание TTF1 свидетельствует в пользу первичной карциномы молочной железы. Иммуногистохимические исследования с антителами WT1, TTF1 и mCEA полезны при дифференциальной диагностике метастатических аденокарцином легких, молочной железы и яичников.

Недостатками данного способа являются отсутствие возможности проведения дифференциальной диагностики между эпителиальными и стромальными клетками в эндометриоидной кисте яичника, а также отсутствие исследования на предмет неопластической трансформации эндометриоза яичников.

Аналогом также является способ из статьи «The utility of immunohistochemistry in the differential diagnosis of gynecologic disorders. (Авторы: Kaspar H.G., Crum CP. // Arch Pathol Lab Med. 2015; 139(1):39D54), где идет речь только о злокачественных новообразованиях яичника, их дифференциальной диагностике с помощью различных панелей антител или изменений в уровнях сывороточного маркера СА125.

Недостатком данной методики является то, что она не касается вопроса неопластической трансформации эндометриоидных кистозных образований.

Известен похожий патент RU 2480761 C1 «СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОМЕТРИОИДНЫХ КИСТ ЯИЧНИКОВ» (Патентообладатель: «ФГБУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздравсоцразвития РФ»), который включает исследование сыворотки крови, где у пациенток при наличии кисты яичника колориметрическим методом определяют активность аргиназы и при ее величине 0,73 ммоль/ч/л и выше диагностируют эндометриоидные кисты яичников.

Однако этот способ не предусматривает диагностику морфологических форм эндометриоидных кистозных образований яичника и возможность неопластической трансформации.

Существует также аналог RU 2625751 C1 «СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА ЭНДОМЕТРИОИДНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ ЯИЧНИКОВ» (Патентообладатель: ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России), где описан способ патоморфологического и молекулярно-биологического исследования ткани яичника, включающий анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага также эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1. При превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82.

Недостатком данного способа является трудоемкая методика, а также отсутствие корреляции эндометриоза яичников с уровнями сывороточных маркеров, в частности, СА125 и WT1.

Техническое решение способа заключается в разработке доступного и надежного способа морфологической диагностики, позволяющего диагностировать изменения в гистоархитектонике эндометриоидных кистозных образований яичника, а именно, серозной дифференцировки эпителия, характерных для ранних этапов неопластической трансформации.

Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в обеспечении возможности достоверной диагностики серозной дифференцировки эпителия эндометриоидных кистозных образований яичников, характерной для начала неопластической трансформации, и для определения дифференциально-диагностических критериев с целью более простого, доступного, широкого и своевременного выбора адекватной лечебной тактики: динамического наблюдения и выбора оптимального вида оперативного лечения при рецидивах онкогинекологических заболеваний.

Способ осуществляется следующим образом.

В случае повышения уровня концентрации онкомаркера СА125 в сыворотке крови у пациенток, с клинически установленным диагнозом «эндометриоидная киста яичников» или с коморбидными диагнозами: «эндометриоидная киста и лейомиома матки», «эндометриоидная киста и аденомиоз матки» берут операционный материал, фиксированный в 10%-ом забуференном нейтральном формалине в течение 24 часов, затем, после стандартной гистологической проводки на основе изопропилового спирта 99% и ксилола, его заливают в парафин, изготавливают по 2 гистологических среза толщиной 3-4 микрометра с каждого фрагмента операционного материала яичника и проводят микроскопическое исследование гистологических срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, позволяющее выявить кистозное образование яичника с выстилкой эндометриоидным эпителием и наличием эндометриоидной стромы.

Далее для достоверного выявления клеток с серозной дифференцировкой в эпителии проводят иммуногистохимическое исследование с готовым к применению моноклональным антителом к WT1 (клон 6F-H2, иммуностейнер «Leica Bond-maX» (Germany)). Интерпретацию результатов иммуногистохимического исследования с указанным антителом осуществляют с учетом локализации позитивных клеток (в эпителии эндометриоидных кистозных образований яичника) путем подсчета как количества окрашенных эпителиальных клеток на 100 клеток в 10 полях зрения (увеличение 400), так и интенсивности окрашивания. Полученные количественные результаты выражают в процентах, где 0 - отсутствие экспрессии, до 50% окрашенных клеток - очаговая экспрессия, более 50% окрашенных клеток - выраженная экспрессия маркера.

При иммуногистохимическом исследовании определяют наличие ядерной экспрессии WT1 в эпителии эндометриоидных кистозных образований яичника, так как для серозной дифференцировки эпителиальных клеток характерными признаками являются выраженная интенсивная ядерная экспрессия WT1 как в отдельных клетках, так и в группах клеток эпителия эндометриоидного кистозного образования яичника.

Полученные количественные результаты выражают в процентах, где 0% - отсутствие экспрессии, от 1 до 50% окрашенных клеток - очаговая экспрессия, более 50% окрашенных клеток - выраженная экспрессия маркера. Затем пациенток с повышенными уровнями СА125 свыше 35 Е/мл можно разделить на 2 подгруппы: с низким риском неопластической трансформации, в случае очаговой экспрессии WT1 и с высоким риском неопластической трансформации, в случае выраженной экспрессии вне его, это своеобразный контроль - на фоне негативной экспрессии во всем фрагменте и видим локальную выраженную экспрессию именно в очагах серозной дифференцировки.WT1.

Таким образом, мы имеем в одном фрагменте разную величину экспрессии маркера в очаге серозной дифференцировки эпителия и

Разработанный способ морфологической диагностики, позволяющий диагностировать изменения в гистоархитектонике эндометриоидных кистозных образований яичника, характерных для ранних этапов неопластической трансформации позволяет не только проводить диагностику при поступлении пациента в лечебно-профилактическое учреждение, но и скорректировать лечебную тактику и последующее динамическое наблюдение. Данный способ морфологической диагностики подходит для диагностики серозной дифференцировки эпителия эндометриоидных кистозных образований яичника.

Используемый маркер WT1 обладает высокой чувствительностью и специфичностью в отношении серозной дифференцировки эпителия эндометриоидных кистозных образований яичника, что позволяет с большой точностью проводить дифференциальную диагностику в ряду: эпителий эндометриоидного типа - эпителий серозного типа.

Изобретение поясняется следующими фигурами.

На фиг. 1 представлен гистологический микропрепарат одного из фрагментов эндометриоидного кистозного образования яичника, окрашенный гематоксилином и эозином, увеличение х400.

На фиг. 2 представлена выраженная ядерная экспрессия WT1 в эпителии эндометриоидного кистозного образования яичника, увеличение х400.

На фиг. 3 представлен участок с негативной экспрессией WT1 в том же эндометриоидном кистозном образовании, увеличение х400.

На фиг. 4 представлен гистологический микропрепарат одного из фрагментов эндометриоидного кистозного образования яичника, окрашенный гематоксилином и эозином, увеличение х400.

На фиг. 5 представлена выраженная ядерная экспрессия WT1 в эпителии эндометриоидного кистозного образования яичника, увеличение х400.

На фиг. 6 представлен участок с негативной экспрессией WT1 в том же эндометриоидном кистозном образовании, увеличение х400.

В качестве примера возможности реализации заявленного назначения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.

Клинический пример 1.

Пациентка Г., 31 года, поступила на плановое стационарное лечение по направлению из женской консультации с диагнозом «Киста яичника». Было проведено комплексное предоперационное обследование, включающее сывороточные онкомаркеры (СА125 - 90 Е/мл, РЭА - 0,5 Е/мл). Пациентке выполнена хирургическая операция в объеме лапароскопии, разделения спаек, коагуляции очагов наружного генитального эндометриоза, цистэктомии слева, хромогидротубации. Послеоперационный диагноз: Спаечный процесс в малом тазу 2-3 ст. Наружный генитальный эндометриоз 2-3 ст. Эндометриоидная киста левого яичника. Макропрепарат - ткань кисты левого яичника отправлен на гистологическое исследование.

Гистологические срезы толщиной 4 мкм были окрашены гематоксилином и эозином. Иммуногистохимическое исследование антитела WT1 проводилось с помощью иммуностейнера «Leica Bond-maX» (Germany).

Проведено гистологическое исследование операционного материала. При гистологическом исследовании материал определялся фрагментами ткани яичника с отеком, диффузным склерозом, фрагментами стенки кисты, представленными плотноволокнистой фиброзной тканью с диффузным склерозом, очаговым гиалинозом, скоплениями сидерофагов, очаговыми кровоизлияниями, отложением гранул гемосидерина, эпителиальная выстилка представлена эндометриоидным эпителием. На фиг. 1 представлен гистологический микропрепарат одного из фрагментов эндометриоидного кистозного образования, окрашенный гематоксилином и эозином.

Проведена оценка результатов иммуногистохимического исследования экспрессии маркера серозной дифференцировки WT1.

Фиг. 2 иллюстрирует выраженную ядерную экспрессию WT1 в 58% эпителиальных клеток эндометриоидного кистозного образования яичника. На фиг. 3 представлен участок с негативной экспрессией WT1 в эпителиальных клетках в этом же эндометриоидном кистозном образовании.

На основании полученных данных проведенного патоморфологического и иммуногистохимического исследования был установлен диагноз: Эндометриоидное кистозное образование яичника с выраженной серозной дифференцировкой эпителия.

Клинический пример 2.

Пациентка К., 42 лет, поступила на плановое стационарное лечение по направлению из женской консультации, где при УЗИ малого таза обнаружены кистомы (эндометриомы) обоих яичников. Из анамнеза известно, что два года назад было оперативное вмешательство по поводу эндометриомы левого яичника в объеме резекции левого яичника. Проведено комплексное предоперационное обследование, включающее сывороточные онкомаркеры (СА125 - 116,5 Е/мл). Пациентке выполнена хирургическая операция в объеме лапароскопии, разделения спаек, удаления левых придатков матки, резекции правого яичника, санации и дренирования брюшной полости. Послеоперационный диагноз: Кистомы (эндометриомы) обоих яичников. Спаечный процесс в малом тазу. Макропрепарат - левые придатки матки и ткань кисты правого яичника отправлен на гистологическое исследование.

Гистологические срезы толщиной 4 мкм были окрашены гематоксилином и эозином. Иммуногистохимическое исследование антитела WT1 проводилось с помощью иммуностейнера «Leica Bond-maX» (Germany).

Проведено гистологическое исследование операционного материала. При гистологическом исследовании материал были определены фрагменты ткани яичника с отеком, диффузным склерозом, а также стенки кисты, представленными плотноволокнистой фиброзной тканью с диффузным склерозом, скоплениями сидерофагов, отложением гранул гемосидерина, эпителиальная выстилка представлена эндометриоидным эпителием. На фиг. 4 представлен гистологический микропрепарат одного из фрагментов эндометриоидного кистозного образования, окрашенный гематоксилином и эозином.

Проведена оценка результатов иммуногистохимического исследования экспрессии маркера серозной дифференцировки WT1.

Фиг. 5 иллюстрирует выраженную ядерную экспрессию WT1 в 86% эпителиальных клеток эндометриоидного кистозного образования яичника. На фиг. 6 представлен участок с негативной экспрессией WT1 в эпителиальных клетках в этом же эндометриоидном кистозном образовании.

На основании полученных данных проведенного патоморфологического и иммуногистохимического исследования был установлен диагноз: Эндометриоидное кистозное образование яичника с выраженной серозной дифференцировкой эпителия.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики риска неопластической трансформации эндометриоза яичников. При наличии повышенного уровня онкомаркера СА125 свыше 35 Е/мл в сыворотке крови, у пациенток с клинически установленным диагнозом «эндометриоидная киста яичников» или с коморбидными диагнозами: «эндометриоидная киста и лейомиома матки», «эндометриоидная киста и аденомиоз матки» берут операционный материал. Затем, после стандартной гистологической проводки, его заливают в парафин, изготавливают по 2 гистологических среза и проводят микроскопическое исследование гистологических срезов. Далее проводят иммуногистохимическое исследование с антителом к WT1, а интерпретацию результатов иммуногистохимического исследования с указанным антителом осуществляют с учетом локализации позитивных клеток в эпителии эндометриоидных кистозных образований яичника путем подсчета количества окрашенных эпителиальных клеток на 100 клеток в 10 полях зрения и интенсивности окрашивания, выражая полученные количественные результаты в процентах. Изобретение обеспечивает возможность достоверной диагностики серозной дифференцировки эпителия эндометриоидных кистозных образований яичников, характерной для начала неопластической трансформации. 6 ил., 1 табл., 2 пр.

Способ диагностики риска неопластической трансформации эндометриоза яичников, отличающийся тем, что при наличии повышенного уровня онкомаркера СА125 свыше 35 Е/мл в сыворотке крови у пациенток с клинически установленным диагнозом «эндометриоидная киста яичников» или с коморбидными диагнозами: «эндометриоидная киста и лейомиома матки», «эндометриоидная киста и аденомиоз матки» берут операционный материал, фиксированный в 10%-ном забуференном нейтральном формалине в течение 24-х часов, затем, после стандартной гистологической проводки на основе изопропилового спирта 99% и ксилола, его заливают в парафин, изготавливают по 2 гистологических среза толщиной 3-4 микрометра с каждого фрагмента операционного материала яичника и проводят микроскопическое исследование гистологических срезов, окрашенных гематоксилином и эозином; далее проводят иммуногистохимическое исследование с антителом к WT1, а интерпретацию результатов иммуногистохимического исследования с указанным антителом осуществляют с учетом локализации позитивных клеток в эпителии эндометриоидных кистозных образований яичника путем подсчета количества окрашенных эпителиальных клеток на 100 клеток в 10 полях зрения с увеличением в 400 раз и интенсивности окрашивания, выражая полученные количественные результаты в процентах, где 0% - отсутствие экспрессии, от 1 до 50% окрашенных клеток - очаговая экспрессия, более 50% окрашенных клеток - выраженная экспрессия маркера, что позволяет затем разделить пациенток на 2 подгруппы серозной дифференцировки эпителия эндометриоза яичников: с низким риском неопластической трансформации в случае очаговой экспрессии WT1 и с высоким риском неопластической трансформации в случае выраженной экспрессии WT1.