СПОСОБ КОРРЕКЦИИ НЕСТАБИЛЬНОСТИ ГЕНОМА У ДЕТЕЙ С ДЕТСКИМ ЦЕРЕБРАЛЬНЫМ ПАРАЛИЧОМ Российский патент 2007 года по МПК A61K38/01 A61K31/4412 A61P25/28 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к детской неврологии.

Известен способ медикаментозного лечения детского церебрального паралича (ДЦП), включающий различные лекарственные средства, такие как пирацетам, церебролизин, энцефабол, актовегин, кавинтон и другие, обладающие специфическим ноотропным и нейротрофическим действием. Эти средства используются с первых дней терапии перинатальной патологии, тяжелым исходом которой является детский церебральный паралич. При отсутствии противопоказаний препараты используются в различной комбинации между собой повторными курсами (2-3 раза в год).

Известен способ восстановительного лечения с использованием физиотерапевтических процедур (диадинамические и синусоидально-модулированные токи, лекарственный электрофорез, микроволновая резонансная терапия, грязелечение и т.д.), лечебной физкультуры (методика по К.А.Семеновой, кинезиотерапия по Войту и др.) и массажа (общий, точечный, сегментарный). Курсы лечения проводятся повторно, многократно в течение года с небольшими перерывами. Один курс лечения в зависимости от вида включает 8-20 процедур.

Целью исследования является в эксперименте оценить антимутагенную и антиоксидантную активность некоторых нейротропных средств, применяемых в комплексной терапии хронически-резидуальной стадии ДЦП, по результатам отобрать наиболее и наименее активные вещества и в клинических исследованиях оценить их способность нормализовать процессы, дестабилизирующие геном у больных ДЦП.

Недостатком прототипа является отсутствие дифференцированного подхода к назначению препаратов, у которых наряду со специфической нейротропной фармакологической активностью выражен и антимутагенный эффект, а также в комплексную терапию ДЦП включаются препараты с кластогенным и/или прооксидантным эффектом, которые усиливают дестабилизацию генома.

Способ выполняется следующим образом: в эксперименте оценены антимутагенная и антиоксидантная активность некоторых нейротропных средств, наиболее широко применяемых в комплексной терапии хронически-резидуальной стадии ДЦП. По полученным результатам отобраны наиболее и наименее активные лекарственные средства. Затем в клинических исследованиях оценили их способность нормализовать процессы, дестабилизирующие геном у больных ДЦП, т.е. осуществляли фармакологическую защиту генома у больных ДЦП.

Для экспериментальных и клинических исследований использовались нейротропные средства, применяемые при лечении хронически-резидуальной стадии ДЦП: церебролизин (Ebewe), энцефабол (Nycomed), ноотропил (Pliva d.d.) и его отечественный аналог пирацетам (Мосхимфармпрепараты), кавинтон (Gedeon Richter), актовегин (Nycomed).

1. Антиокислительная и антирадикальная активность нейротропных препаратов

Наиболее высокой антиокислительной активностью в таких условиях обладал ноотропил (С₅₀=40 мкл) (табл.1). В порядке ослабления эффекта далее следуют актовегин (С₅₀=43 мкл), пирацетам (65 мкл), церебролизин (82 мкл), кавинтон (выше 100 мкл). Энцефабол, напротив, усиливал образование малонового диальдегида, т.е. обладал прооксидантной активностью. Таким образом, пять из шести исследованных препаратов снижали на 50% интенсивность ПОЛ в модельной системе в диапазоне от 40 до 80 мкл/мл препарата в пробе.

Супероксиддисмутазной активностью (СОД-активностью) обладали только препараты церебролизин (C₅₀=60 мкл/мл) и актовегин (С₅₀ превышала 100 мкл и эффект был слабым). Остальные препараты в данной модельной системе усиливали хемилюминесценцию, т.е. проявили прооксидантную активность.

Наиболее активным препаратом по способности непосредственно реагировать с оксидом азота (NO) оказался церебролизин (C₅₀=4,25 мкл/мл). Актовегин (С₅₀=24 мкл/мл) и энцефабол (С₅₀=33,7 мкл/мл) проявили значительно меньшую активность в отношении оксида азота. Препараты пирацетам, ноотропил, кавинтон в концентрациях до 150 мкл/мл не оказывали эффекта в выбранной системе.

Сопоставляя данные об активности препаратов в различных модельных системах, наиболее эффективным антиоксидантным и антирадикальным препаратом можно считать церебролизин. Из 6 изученных препаратов церебролизин обладает наивысшей способностью ингибировать активность супероксид анион-радикала (SOD) и монооксид азота (NO). Энцефабол, единственный из 6 препаратов, обладает проокислительной способностью, слабо ингибирует монооксид азота и не обладает способностью снижать активность супероксид анион-радикала.

1. Исследование антикластогенной активности нейротропных препаратов

Антимутагенный эффект (или антикластогенная активность) некоторых нейротропных препаратов исследован с использованием этилметалсульфаната, сильнейшего мутагена, вызывающего 100% мутации (аберрации) на растительной среде.

Оказалось, что лишь некоторые препараты обнаружили выраженную способность подавлять интенсивность химически индуцированного мутагенеза (табл.2). Максимальную антикластогенную активность проявил церебролизин и в меньшей степени кавинтон (на 43,0 и 24,6% соответственно). Выраженный антимутагенный эффект церебролизина может быть связан с антиоксидантными свойствами компонентов, которые входят в его лекарственную форму.

В отличие от церебролизина энцефабол показал низкий антикластогенный эффект: антимутагенная активность энцефабола оказалась более чем в 2 раза ниже, чем у церебролизина (18,2 и 43,0% соответственно).

Таким образом, с учетом полученных результатов наших экспериментов по исследованию антикластогенных, про- и антиоксидантных свойств некоторых препаратов, применяемых в терапии ДЦП, для клинических исследований мы избрали два препарата из группы нейротропных средств: церебролизин - препарат, обладающий наивысшей антиоксидантной и антирадикальной способностью, и энцефабол, обладающий прооксидантными свойствами, слабой антирадикальной способностью и низким антикластогенным эффектом.

3. Динамика уровня микроядер в полихроматофильных эритроцитах периферической крови у больных с детским церебральным параличом под воздействием церебролизина и энцефабола.

В исследование на двух препаратах - церебролизин и энцефабол после информированного согласия включено 20 больных (9 девочек и 11 мальчиков) 2-10 лет с диагнозом ДЦП, спастическая диплегия средней степени тяжести. Все больные были разделены на две группы: первая группа (6 мальчиков и 4 девочки) принимала церебролизин, вторая (5 мальчиков и 5 девочек) - энцефабол. Выбор формы - спастическая диплегия - определен ее промежуточным положением по уровню цитогенетических нарушений по сравнению с другими клиническими формами ДЦП (табл.3).

У всех пациентов обязательным условием на время эксперимента было отсутствие сопутствующих соматических заболеваний. Препараты не назначались детям с эпилепсией и некупированными пароксизмальными реакциями. В случае необходимости использования других препаратов наряду с названными ноотропными средствами (например, жаропонижающие или противокашлевые и т.п.) больной исключался из дальнейшего исследования. За 30 дней до монотерапии больные не получали медикаментозного и физиотерапевтического лечения, не проводилось инструментальное обследование.

Эффективность монотерапии церебролизином и энцефаболом оценивалась по клиническим показателям, динамики числа эритроцитов с микроядрами (ЭМ) и проценту снижения уровня ЭМ - антианеугенной активности. Уровень ЭМ определяли в трех точках: в день начала монотерапии (до лечения), через 10 и 20 дней лечения.

Церебролизин использовался в/м 1 раз в день, по утрам, в стандартной суточной дозе из расчета 1 мл препарата на 10 кг веса ребенка (0,1 мл/кг). Энцефабол применялся внутрь по 50 мг от 2 до 5 лет и по 100 мг от 6 до 10 лет 3 раза в день спустя 30 мин после еды.

В результате лечения больных церебролизином и энцефаболом отмечена положительная клиническая динамика: у 9 из 10 детей, принимавших церебролизин, и у 8 из 10 больных, принимавших энцефабол. У больных снижался спастический гипертонус в пораженных конечностях, расширялся объем активных движений и уменьшались глазодвигательные нарушения. Родители отмечали, что на фоне терапии церебролизином у детей возрастает интерес к окружающему миру, улучшаются речевые навыки и навыки запоминания. При приеме энцефабола улучшаются характеристики поведения, повышается общий жизненный тонус, отмечаются положительные сдвиги в эмоциональной сфере.

У всех больных, включенных в исследование (основная группа), исходный уровень ЭМ (до лечения) достоверно превышал число ЭМ у здоровых лиц (группа контроля) (р<0,05).

Динамика ЭМ у исследованных больных обеих групп больных, находившихся на лечении церебролизином или энцефаболом, имела некоторые особенности (табл.4).

Оказалось, что антианеугенная активность у церебролизина уже к 10 дню терапии оказалась достоверно выше, чем у энцефабола (35,6 и 32,7% соответственно; р<0,001). К 20 дню терапии антианеугенный эффект церебролизина увеличился и достиг 37,1%. В группе больных, принимавших энцефабол, к 20 дню терапии наметилась некоторая отрицательная динамика уровня ЭМ и антимутагенное действие препарата несколько снизилось (до 31,4%).

Это однозначно свидетельствует о наличии у препаратов способности подавлять интенсивность анеугенеза на уровне целого организма. При этом важно подчеркнуть два момента.

Во-первых, лекарства снижали интенсивность анеугенеза не до физиологической нормы, а в лучшем случае на треть (от 31,4 до 37,1%).

Во-вторых, в группе детей, принимавших церебролизин, на фоне терапии уровень ЭМ плавно снижался и за 20 дней лечения уменьшился почти в 1,5 раза. У больных, принимавших энцефабол, столь явного регресса цитогенетических нарушений к концу терапии не произошло, напротив, наметилась тенденция некоторого увеличения клеток с перестройками.

Для более подробного изучения этого феномена изучена динамика числа ЭМ у мальчиков и девочек по отдельности. Оказалось, что у всех девочек, находившихся на лечении названными препаратами, отмечалось плавное снижение числа ЭМ (Фиг.1 и 2). В группе мальчиков, находившихся на терапии энцефаболом, после достигнутого к 10 дню лечения уменьшения показателя число ЭМ к 20 дню возросло.

Следовательно, в группе больных, принимавших энцефабол, выявлены половые различия регресса числа ЭМ: у мальчиков антианеугенная активность к 20-му дню терапии оказалась существенно ниже, чем у девочек.

Таким образом, впервые в экспериментальных и клинических исследованиях оценена антимутагенная, про- и антирадикальная активность нейротропных препаратов - церебролизин, энцефабол (пиритинол), ноотропил (пирацетам), актовегин и кавинтон (винпоцетин). В химических, ферментативных и клеточных модельных системах только церебролизин ингибировал генерацию супероксидного анион-радикала, монооксида азота и конечных продуктов деградации цепей жирных кислот. Наибольшей антикластогенной активностью в опытах на Crepis capillaries обладал церебролизин. Энцефабол проявил наибольший прооксидантный эффект и низкую антикластогенную активность. Модифицирующий эффект препаратов был различен: церебролизин в большей степени, чем энцефабол, снижал интенсивность анеу- и кластогенеза у больных. Более эффективно протекторный эффект препаратов на 20 день приема реализовался в группе девочек.

ВЫВОДЫ

1. В экспериментальных исследованиях препараты из группы нейротропных средств показали различную степень антимутагенной и антиоксидантной активности. Наиболее активным по изученным свойствам оказался церебролизин.

2. Энцефабол проявил наименьшую антимутагенную активность, а антиоксидантные свойства практически отсутствовали (прооксидант).

3. Для фармакологической коррекции повреждений генетического аппарата у больных детским церебральным параличом рекомендован церебролизин (в дозе 0,1 мл на кг веса ежедневно утром в/м 20 дней), у которого наряду со специфической фармакологической активностью выражен и антимутагенный компонент.

4. Мальчикам, больным детским церебральным параличом, энцефабол рекомендован курсом не более 10 дней внутрь в дозе по 50 мг от 2 до 5 лет и по 100 мг от 6 до 10 лет 3 раза в день спустя 30 мин после еды.

Источники информации

1. Заваденко Н.Н. Ноотропные препараты в практике педиатра и детского невролога. М., 2003, 23 с.

2. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и перспективы // Эксперимент. и клин. фармакология, 1998, №4, с.3-9.

3. Gonzalez M.E., Francis L., Castelleno O. 1998. System antioxidant activity of Cerebrolyzin // J. Neural Trasm. Vol.52. P.333-341.

4. Schmid W. The micronucleus test. // Mutat. Res. - 1975. - Vol.31. - N 1. - P.9-15.

Табл.1. Результаты изучения антиокислительной и антирадикальной активности нейротропных препаратов.Способ коррекции нестабильности Активность препаратовНазвание препаратаантиокислительнаяантирадикальнаяПОЛ (%)SOD (%)NO (%)Энцефабол (пиритнол)0 (в данной системе препарат обладает проокислительной активностью)ПроосидантС₅₀=33,7 мкл/млПирацетамС₅₀=65 мкл/млПрооксидантЭффект отсутствует
(C_max=150 мкл/мл)Ноотропил (пирацетам)С₅₀=40 мкл/млПрооксидантЭффект отсутствует
(C_max=150 мкл/мл)АктовегинС₅₀=43 мкл/млЭффект слабый (С₅₀=100 мкл/мл)С₅₀=24 мкл/млКавинтон (винпоцетин)ПрооксидантПрооксидантЭффект отсутствует
(С_max=150 мкл/мл)ЦеребролизинС₅₀=8C мкл/млЭффект выраженый
(С₅₀=60 мкл/мл)С₅₀=4,25 мкл/млТабл.2. Антикластогенный эффект нейротропных препаратовСпособ коррекции нестабильности...Наименование препаратаАнтикластогенная активность (%)Ноотропил14,5Актовегин6,9Пирацетам14,7Церебролизин43,0Кавинтон24,6Энцефабол18,2Табл.3. Уровень эритроцитов с микроядрами у больных различными клиническими формами ДЦПФормы ДЦПСреднее число микроядерГемипаретическая0,1946Атонически-астатическая0,2107Спастическая диплегия0,2114Гиперкинетическая0,2149Двойная гемиплегия0,2238Итого0,2111Здоровые0,0787Табл.4. Антианеугенная активность препаратов церебролизин и энцефабол при монотерапии у больных ДЦППрепаратУровень ЭМ(%) на фоне терапииАнтианеугенная активность препарата (%)Исходныйк 10 днюк 20 днюк 10 днюк 20 днюЦеребролизин0,2050,1320,129^*
35,6^***
37,1^**Энцефабол0,2960,1990,20332,7^*31,4^*Примечание: различия значений достоверны (р<0,001):
^* - по вертикали, ^** - по горизонтали

Изобретение относится к медицине, к детской неврологии. Способ заключается в медикаментозной терапии детей с повышенным уровнем эритроцитов с микроядрами в периферической крови. В качестве указанной терапии независимо от пола ребенка используют монотерапию церебролизином внутримышечно один раз в день утром в суточной дозе 0,1 мл/кг веса курсом 20 дней или энцефаболом внутрь 3 раза в день спустя 30 мин после еды. Используют следующие дозы энцефабола: по 50 мг у детей от 2 до 5 лет или по 100 мг у детей от 6 до 10 лет. Детям мужского пола энцефабол назначают курсом не более 10 дней, а детям женского пола - более 10 дней. Способ обеспечивает оптимальную коррекцию нестабильности генома у детей с детским церебральным параличом за счет дифференцированного выбора нейротропных препаратов и режимов их назначения с учетом их впервые установленной антимутагенной и антиоксидантной активности. 4 табл., 2 ил.

Способ коррекции нестабильности генома у детей с детским церебральным параличом, заключающийся в медикаментозной терапии детей с повышенным уровнем эритроцитов с микроядрами в периферической крови, при этом в качестве указанной терапии независимо от пола ребенка используют монотерапию церебролизином внутримышечно один раз в день утром в суточной дозе 0,1 мл/кг веса курсом 20 дней или энцефаболом внутрь 3 раза в день спустя 30 мин после еды в следующих дозах: по 50 мг у детей от 2 до 5 лет или по 100 мг у детей от 6 до 10 лет, причем детям мужского пола энцефабол назначают курсом не более 10 дней, а детям женского пола - более 10 дней.