СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ВЫРАЖЕННОСТИ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВ ОРГАНИЗМА Российский патент 2007 года по МПК G01N33/493 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному методу исследования, и может быть использован для качественной оценки иммунного состояния организма в практике всех клинико-диагностических учреждений.

Известно, что наиболее ранние иммунологические события при инфекционных процессах связаны с иммунной системой слизистых оболочек. Лимфоидные структуры и диффузные лимфоциты свойственны всем основным типам слизистых оболочек, в том числе и урогенитального тракта. Для лимфоидных скоплений, локализующихся в урогенитальном тракте, характерно диффузное распределение лимфоидных клеток в эпителиальном пласте и в подслизистом слое (в основном плазматические клетки и В-лимфоциты).

В слизистой оболочке урогенитального тракта содержатся два типа нелимфоидных клеток, выполняющих иммунологические функции. Дендритные клетки слизистых оболочек обладают высокой способностью связывать антиген. Активация этих клеток происходит после миграции в лимфатические узлы, или местно, в условиях воспаления под действием цитокинов. Другой тип - это сами эпителиальные клетки. В покоящемся состоянии они не имеют признаков иммуноцитов, а активируются при воспалительных процессах и секретируют цитокины и стимулируют пролиферацию CD8+ лимфоцитов. В моче также присутствуют продукты активации В-клеток - иммуноглобулины.

Таким образом, моча при прохождении слизистой оболочки урогенитального тракта содержит в себе клеточные элементы, ответственные за иммунное состояние организма человека.

Известен способ оценки состояния организма по общему клиническому анализу мочи. При исчезновении патологических примесей в моче (белка, лейкоцитов в осадке мочи) можно судить о способности организма противостоять воспалительному процессу (Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987, с.47-66).

Однако эти показатели отражают в основном патологическое состояние органов мочевыделительной системы, то есть не отражают иммунное состояние в целом.

В современной практике клинико-иммунологических исследований основным объектом исследований является кровь - как ее клеточные, так и неклеточные компоненты (сыворотка). Кровь и присутствующие в ней клетки, в частности лимфоциты, будучи наиболее доступными для исследования, изучены особенно подробно. Однако они представляют лишь около 0,1% от общего пула лимфоцитов, и свойства циркулирующих лимфоцитов могут не вполне объективно отражать состояние этих клеток в органах иммунной системы.

Для идентификации мембранных маркеров клеток используют метод проточной цитофлюориметрии, стимулированной появлением рынка моноклональных антител. Для определения концентрации растворимых молекул в современной клинической иммунологии используется иммуноферментный анализ. Число таких базисных подходов, удовлетворяющих современным научным и техническим требованиям, в клинической иммунологии невелико. Они оказываются малодоступными из-за дороговизны приборов и тест-систем.

Известен способ определения степени выраженности иммунологических расстройств организма, включающий определение значения иммунологического показателя, который устанавливают при исследовании биологической жидкости больного и здорового пациентов (A.M. Земсков «Комбинированная иммунокоррекция». М.: Наука, 1994, с.234-237).

В данном способе в качестве биологической жидкости используют кровь или сыворотку крови, в которой иммуноферментным методом (Сб. «Клиническая иммунология и аллергология», том 1, под ред. Л. Йегера. М.: Медицина, 1990, с.276-305) определяют субстанции лимфоцитов с использованием чувствительных моноклональных антител к ряду CD-маркеров (CD3+, CD4+ CD3+, CD8+ СD3+, СD19+); определяют уровень сывороточных иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM), фагоцитарную активность нейтрофилов (фагоцитарное число, количество активных фагоцитов, абсолютный фагоцитарный показатель).

Данный способ инвазивен. Он является достаточно дорогим, трудоемким, так как основан на оценке количественных показателей, определение которых занимает продолжительное время и имеет недостаток, свойственный всем функциональным тестам - необходимость культивирования клеток в стерильных условиях, для чего необходима специализированная лаборатория, оснащенная современным оборудованием.

Поставленной задачей было устранение данного недостатка и создание неинвазивного, легковоспроизводимого, дешевого и достоверного способа, дающего качественную оценку иммунного статуса организма.

Для решения этой задачи в способе определения степени выраженности иммунологических расстройств организма, включающем определение значения иммунологического показателя, который устанавливают при исследовании биологической жидкости больного и здорового пациентов, предложено в качестве биологической жидкости использовать пробу утренней мочи, а за иммунологический показатель принимать соотношение площади, заполненной анизотропными кристаллами солей на поле высушенной капли мочи больного и здорового пациентов, и при значении этого показателя 67-99%, оценивать первую степень расстройства иммунного состояния организма, при значении 34-66% - оценивать вторую степень, а при значении 1-33% - третью степень расстройства иммунного состояния организма.

В идею разработки данного способа было положено явление биоминерализации (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Морфология биологических жидкостей человека. М., 2001, с.216-218). Биоминерализация - это физиологический механизм формирования органо-минеральных агрегатов в тканях организма, действующий с момента его зарождения и активно участвующий в метаболических процессах. Биоминерализация обеспечивает нейтрализацию и выведение продуктов обмена веществ, общую и локальную защиту тканей организма от действия патогенных факторов. У здоровых людей динамическое взаимодействие органических и минеральных структур в функционально-активных тканях уравновешено. При патологических состояниях избыточное моно- или полифокальное накопление продуктов деградации создает условия для отложения и кристаллизации в этих участках минеральных веществ. В результате в различных органах и тканях - почках, желчном пузыре, суставных сочленениях и др. - формируются органо-минеральные агрегаты. По своей сущности образование таких агрегатов является защитно-приспособительным механизмом, направленным на перевод биологически активных органических метаболитов в инертные минерализованные формы.

Если формирование конкрементов в различных органах - крайне выраженный процесс биоминерализации, приводящий к макроскопическим изменениям в органе, то явление формирования органо-минеральных агрегатов в микромасштабах отражает готовность организма в защите тканей от действия патогенных факторов.

При наличии в высушенной капле мочи преимущественно анизотропных кристаллов солей судят о физиологическом состоянии иммунитета, так как организм человека выступает как хозяин, адекватно регулирующий его взаимоотношения с сапрофитной микрофлорой слизистых оболочек.

На фиг.1 изображена морфологическая картина высушенной капли мочи здорового человека, где центральная и промежуточная зоны полностью заполнены анизотропными кристаллами солей (пример 1).

На фиг.2 изображена морфологическая картина высушенной капли пробы мочи, где центральная, частично промежуточная зоны и мелкие единичные включения представлены анизотропными кристаллами солей (пример 2). Это составляет 68% от площади, заполненной анизотропными кристаллами солей здорового человека - фиг.1.

На фиг.3 изображена морфологическая картина высушенной капли пробы мочи, где частично центральная, частично промежуточная зоны и мелкие единичные включения представлены анизотропными кристаллами солей (пример 3). Это составляет 35% от площади, заполненной анизотропными кристаллами солей здорового человека - фиг.1.

На фиг.4 изображена морфологическая картина высушенной капли пробы мочи, где всего лишь 5% площади представлено анизотропными кристаллами солей (единичные анизотропные кристаллы) (пример 4).

Осуществление способа показано на конкретных клинических примерах.

Пример 1.

Пациент А., 26 лет. Обследование при ежегодной диспансеризации.

При исследовании степени выраженности иммунологических расстройств организма у данного пациента была отобрана проба утренней мочи. В пробу мочи добавили 10% раствора белка, в соотношении 4:1 соответственно. Каплю полученной смеси в количестве 0,02 мл нанесли на предметное стекло, высушили при температуре 20°С в течение 20 часов, затем микроскопировали при скрещенных поляризаторах. Исследуемая морфологическая картина высушенной капли представлена кристаллами солей, которые заполняют полностью центральную и промежуточную зоны до краевой белковой зоны.

Это говорит о том, что у данного пациента биоминерализация полностью обеспечивает нейтрализацию и выведение продуктов обмена веществ, общую и локальную защиту тканей организма от действия патогенных факторов. Динамическое взаимодействие органических и минеральных структур в функционально-активных тканях уравновешено, что свидетельствует о нормальном иммунном состоянии организма.

При определении фагоцитарной активности нейтрофилов установлены параметры нормы, то есть пациент практически здоров, что подтверждает результаты исследования предложенным способом.

Пример 2.

Пациент Т., 66 лет. Обследование при ежегодной диспансеризации.

Исследование мочи указанным способом показало, что морфологическая картина высушенной капли представлена: в центральной зоне анизотропными кристаллами солей, в промежуточной - частично анизотропными кристаллами солей и единичными мелкими включениями анизотропных кристаллов, что составляет 68% от площади, заполненной анизотропными кристаллами солей здорового человека, и свидетельствует о 1 степени выраженности иммунологического расстройства организма (фиг.2).

Следовательно, у данного пациента организм не может полностью подавить рост сапрофитной микрофлоры или своевременно вывести продукты ее жизнедеятельности со слизистых оболочек урогенитального тракта.

При обследовании больного установлена 1 степень снижения фагоцитарной активности нейтрофилов, наличие возрастной соматической патологии (хронический бронхит, хронический простатит).

Пример 3.

Больной О., 34 лет. Периодическое поступление на стационарное лечение по поводу обострения течения апластической анемии.

Исследование морфологической картины высушенной капли мочи показало, что центральная зона частично заполнена анизотропными кристаллами солей, кроме того, центральная и промежуточная зоны имеют единичные анизотропные кристаллы, что в сумме составляет 35% от площади, заполненной анизотропными кристаллами здорового человека (фиг.3).

Следовательно, в образце мочи главенствует микрофлора, представленная аморфной субстанцией, а на долю кристаллов солей приходится небольшая часть. Этот факт объясняется тем, что с мочой выбрасывается большое количество токсичных веществ, метаболитов, то есть веществ органической природы, которые должны быть усвоены сапрофитной микрофлорой и выведены из организма. Однако этих токсичных веществ слишком много, что вызывает активное размножение микрофлоры и неспособность организма ее подавить.

Диагноз - 2 степень выраженности иммунологического расстройства организма.

При исследовании крови пациента установлена 2 степень снижения фагоцитарной активности нейтрофилов, общее снижение уровня иммуноглобулинов, что подтверждает вывод предыдущих исследований.

Пример 4.

Больной Р., 28 лет. ВИЧ-инфекция. Стадия обострения. Синдром приобретенного иммунодефицита.

Исследование мочи указанным способом показало, что морфологическая картина высушенной капли как в центральной зоне, так и промежуточной, полностью представлена аморфной субстанцией с незначительным количеством анизотропных мелких кристаллов солей, что составляет всего 5% (фиг.4). Заключение: 3 степень выраженности иммунологического расстройства организма.

При исследовании крови больного установлено резкое снижение фагоцитарной активности нейтрофилов 3 степени, общее снижение уровня иммуноглобулинов.

Таким образом, при исследовании структуры мочи, а именно по способности макроорганизма регулировать активность микрофлоры, обитающей в норме на его слизистых оболочках, можно качественно, в ранние сроки оценивать состояние иммунной защиты организма.

Способ неинвазивен, технически прост, может быть широко использован в практике всех клинико-диагностических лабораторий лечебно-профилактических учреждений.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования. Сущность способа определения степени выраженности иммунологических расстройств организма заключается в том, что исследуют пробы утренней мочи больного и здорового человека, определяют иммунологический показатель как соотношение площади, заполненной анизотропными кристаллами солей на поле высушенной капли мочи больного и здорового пациентов. При значении этого показателя 67-99% оценивают первую степень расстройства иммунного состояния организма, при значении 34-66% оценивают вторую степень, а при значении 1-33% - третью степень расстройства иммунного состояния организма. Способ неинвазивен, технически прост. Использование способа позволяет качественно, в короткие сроки оценить иммунный статус организма. 4 ил.

Способ определения степени выраженности иммунологических расстройств организма, включающий определение значения иммунологического показателя, который устанавливают при исследовании биологической жидкости больного и здорового пациентов, отличающийся тем, что в качестве биологической жидкости используют пробу утренней мочи, а за иммунологический показатель принимают соотношение площади, заполненной анизотропными кристаллами солей на поле высушенной капли мочи больного и здорового пациентов, и при значении этого показателя 67-99%, оценивают первую степень расстройства иммунного состояния организма, при значении 34-66% оценивают вторую степень, а при значении 1-33% - третью степень расстройства иммунного состояния организма.