СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ АУТОИММУННОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ Российский патент 2008 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к созданию модели аутоиммунного заболевания с поражением слюнных желез, и может быть использовано для создания новых методов лечения и изучения патогенеза воспалительных заболеваний слюнных желез.

Известны способы моделирования различных заболеваний у лабораторных (экспериментальных) животных, по клинической патологии приближенные к аналогичным заболеваниям человека. Эти способы помогают исследователям изучать течение конкретного заболевания и находить новые методики лечения с разработкой различных фармакологических препаратов.

Известен способ моделирования хронического иммунного воспаления у крыс с субплантарным введением в правую заднюю лапку 0,1 мл адьюванта Фрейда (2,5 мг/мл вакцины БЦЖ на вазелиновом масле) [см. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2000, с.237].

Недостатки описанного известного способа заключаются в:

- использовании вазелинового масла - синтетического производного очищенной фракции нефти после отгонки керосина;

- увеличении токсичности препарата при использовании достаточно высоких концентраций вакцины БЦЖ;

- проявлении иммунной реакции только в местах введения смеси;

- отсутствии возможности получения лимфоцитарной инфильтрации слюнных желез, характерной для аутоиммунного процесса.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к заявляемому изобретению является способ моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, включающий приготовление дозы химико-фармацевтического препарата, выбор области воздействия с последующим инъекционным введением в нее приготовленной дозы. В качестве области воздействия выбрана околоушная слюнная железа, в которую инъекционно вводят предварительно приготовленную дозу химико-фармацевтического препарата - раствора гомологичной ткани. В полученной модели наблюдалось повреждение паренхимы и мононуклеарная инфильтрация - проявления аутоиммунного паротита [см. White S.C. - Archiv. Pathological Anatomy, Abt В., Zellpath., Bd.17, s.70-84, 1974].

Недостатками способа-прототипа являются сложность приготовления вводимого препарата и локальный характер полученных изменений без генерализованных проявлений, характерных для аутоиммунного заболевания слюнных желез.

Задачей настоящего изобретения является создание достоверного способа моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, по клиническим, морфологическим и иммунологическим признакам приближенного к аналогичным изменениям при заболевании человека.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, включающем приготовление дозы химико-фармацевтического препарата, выбор области воздействия с последующим инъекционным введением в нее приготовленной дозы, СОГЛАСНО ИЗОБРЕТЕНИЮ дозу химико-фармацевтического препарата готовят в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина; в качестве области воздействия используют проекцию околоушных слюнных желез, в которую осуществляют разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата с завершением формирования аутоиммунного процесса через 14 суток.

Условия и параметры заявляемого способа необходимы и достаточны для решения поставленной задачи, а именно формирования аутоиммунного процесса с характерными генерализованными проявлениями в слюнных железах. При этом использование в инъекционной смеси глицерина - природного соединения, находящегося в тканях животных и являющегося источником жиров и масел, а также идеальным проводящим вектором через мембраны клеток, позволило уменьшить количество вакцины БЦЖ по сравнению с известным аналогом [см. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2000, с.237] и значительно снизить токсичность смеси.

Анализ известных технических решений позволяет сделать вывод о том, что предлагаемое изобретение не известно из уровня исследуемой техники, что свидетельствует о его соответствии критерию «новизна».

Сущность настоящего изобретения для специалиста не следует явным образом из уровня техники, что позволяет сделать вывод о его соответствии критерию «изобретательский уровень».

Возможность использования заявляемого способа для моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных с применением промышленно выпускаемых доступных препаратов и химических веществ в условиях отечественных стоматологических клиник свидетельствует о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».

Предлагаемый способ прошел доклинические испытания в условиях Уральской государственной медицинской академии (г.Екатеринбург).

Эффективность практического использования заявляемого способа для моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных иллюстрируется примером.

ПРИМЕР. Моделирование аутоиммунного заболевания слюнных желез.

В качестве лабораторных животных использовали крыс линии «Vistar» со средней массой 344,0±6,4 г (15 групп по 7 особей в каждой группе).

Для приготовления инъекционной смеси применяли промышленно выпускаемые химико-фармацевтические препараты:

- глицерин (ЧДА С₃H₈О₃, ГОСТ 6259-75, изм. - 1,2, партия 348, ЗАО НПО «Экрос», г.С.-Петербург, дата изготовления 04.04, срок годности 3 года);

- вакцина БЦЖ (вакцина туберкулиновая (БЦЖ)сухая, НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи, РАМН, Москва, ФСП 42-0180-2424 02, 03-73024, 30 ноября 2005 г., с. №529, к. №1954; дата изг. 09.04, срок годности до 10.06);

- вода для инъекций (Р №001280/ 01-2002 от 08.04.2002, ОАО «Новосибхимфарм»).

Дозу химико-фармацевтического препарата готовили в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина простым перемешиванием компонентов.

В выбранную область воздействия - проекцию околоушной слюнной железы крысы (область воздействия ограничивали путем наложения трафарета в виде квадратной рамки со стороной квадрата 20 мм) осуществляли разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата.

Одновременно моделировали аутоиммунное заболевание слюнных желез у экспериментальных животных по способу-прототипу [см. White S.C. - Archiv. Pathological Anatomy, Abt B., Zellpath., Bd.17, s.70-84, 1974].

После завершения процессов моделирования аутоиммунного заболевания проводили исследования в экспериментальных группах и в группе сравнения (здоровые животные) на 7, 14, 21, 28 сутки по следующим параметрам:

- морфологическое исследование слюнных желез;

- клиническое исследование крови;

- биохимическое исследование крови;

- иммунологическое исследование крови;

- реакции поведения.

В результате исследований с использованием статистического анализа установлено, что формирование аутоиммунного процесса в заявляемом способе завершилось через 14 суток.

Результаты исследований на 14-ые сутки (в заявляемом способе и способе-прототипе) приведены в таблице.

Как видно из приведенного примера и данных таблицы, использование заявляемого способа по сравнению с известным способом, взятым за прототип [см. White S.C. - Archiv Pathological Anotomy, AbtB., Zellpath.,Bd.17, s.70-84, 1974], обеспечивает следующие технические и общественно-полезные преимущества:

- достоверность способа моделирования, по клиническим, морфологическим и иммунологическим признакам приближенного к аналогичным изменениям при заболевании человека;

- нетоксичность и доступность применяемых химико-фармацевтических препаратов;

- простота приготовления используемой смеси;

-простота осуществления способа, не требующая специальной подготовки медицинского персонала.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к моделированию аутоиммунного заболевания слюнных желез. Для этого готовят дозу химико-фармацевтического препарата в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина. Затем в проекцию околоушных слюнных желез экспериментальных животных осуществляют разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата. При этом завершение формирования аутоиммунного процесса происходит через 14 суток. Способ обеспечивает создание адекватной модели по клиническим, морфологическим и иммунологическим признакам, приближенной к аналогичным изменениям при заболевании человека; при этом доступен и прост. 1 табл.

Способ моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, включающий приготовление дозы химико-фармацевтического препарата, выбор области воздействия с последующим инъекционным введением в нее приготовленной дозы, отличающийся тем, что дозу химико-фармацевтического препарата готовят в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина; в качестве области воздействия используют проекцию околоушных слюнных желез, в которую осуществляют разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата с завершением формирования аутоиммунного процесса через 14 суток.