СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ОРГАНОСОХРАНЯЮЩЕГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/48 G01N33/52 

Описание патента на изобретение RU2319963C1

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при определении наиболее рациональной тактики лечения больных с раком мочевого пузыря (РМП), представляющим собой солидное новообразование.

Известен способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения, а именно химиотерапии (XT), больным лимфогранулематозом и распространенным раком молочной железы, также являющимся солидным новообразованием; согласно способу определяют число нейтрофилов крови пациента и при уровне числа нейтрофилов от 1,8 до 10,0×109 кл/л исследуют лейкоциты периферической крови после гамма-облучения в дозе 2 Гр, инкубируют облученную и необлученную пробы в течение 3 ч при 37°С, определяют в них содержание ДНК лейкоцитов и рассчитывают показатель чувствительности (S) как отношение концентрации ДНК для лейкоцитов необлученной пробы к концентрации ДНК лейкоцитов облученной пробы и при величине нейтрофилов в пределах 1,8-10,0×109 кл/л и значении величины S-показателя ниже 1,0 считают, что больному, в случае первичного генерализованного лимфогранулематоза, показано проведение комбинированной терапии по схеме ВЕАСОРР - блеомецином, этопозидом, доксорубицином, циклофосфамидом, винкристином, прокарбозином и преднизолоном, при значении величины S-показателя ниже 0,8 считают, что больному, в случае первичного распространенного рака молочной железы, показано проведение стандартного курса комбинированной химиотерапии по схеме CMF - циклофосфаном, метотрексатом, 5-фторурацилом, а при значении S-показателя выше 0,8 считают, что больному, в случае первичного распространенного рака молочной железы, показано проведение курса комбинированной химиотерапии по схеме FAC - 5-фторурацилом, доксорубицином, циклофосфаном, RU 2212035 C2.

Данный способ малоэффективен при определении показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП.

Радикальным методом лечения инвазивного рака мочевого пузыря (РМП) является цистэктомия. В то же время следует учитывать, что РМП - болезнь пожилого возраста, и не всем больным можно выполнить такую радикальную операцию из-за сопутствующей патологии. Кроме того, известно о снижении качества жизни после удаления мочевого пузыря. В результате многие пациенты, получив информацию о необходимости полного удаления этого органа, отказываются от предлагаемого лечения. Вместе с тем к настоящему времени установлено, что не всем больным с инвазивным и местно-распространенным РМП необходимо полное удаление органа и в определенной группе больных можно добиться регрессии опухоли, используя консервативные методы лечения. Однако при органосохраняющем лечении мочевого пузыря возрастает степень риска, связанная с возможным рецидивом заболевания, развитием регионарных или отдаленных метастазов. Прогнозировать эффективность такого лечения и дальнейшее развитие болезни пока еще очень трудно. Одним из подходов в решении этой проблемы представляется целенаправленный отбор больных для органосохраняющего лечения. Несмотря на наличие таких высокоинформативных методов исследования, как компьютерная и ядерно-магнитно-резонансная томография, разница при определении распространенности опухолевого поражения до и после лечения довольно существенна. Ошибка при установлении клинического диагноза встречается в 45-70% случаев, что в значительной степени осложняет прогноз течения болезни.

К настоящему времени известно, что своеобразным критерием отбора больных для органосохраняющего лечения может быть ответ на индукционную химиотерапию (XT), который коррелирует с чувствительностью РМП к комбинированному лечению. Выживаемость больных, имевших полный ответ на XT, была выше, чем у резистентных. Однако определение наиболее раннего ответа на такую индукционную XT требует, по крайней мере, 6-14-дневного периода и, кроме того, возникают сложности при необходимости изменения последующей тактики лечения у пациентов, не имевших достаточной величины (полноты) ответа или имевших частичный ответ на подведенную XT (у которых должна быть проведена радикальная цистэктомия после такого лечения).

Известен способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП путем взятия пробы крови, выделения лимфоцитов, гамма-облучения лимфоцитов части этой пробы in vitro, инкубации лимфоцитов облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания лимфоцитов ДНК-специфичным флуоресцентным красителем; затем определяют содержание ДНК в облученных и необлученных лимфоцитах и при установлении снижения содержания ДНК в облученных лимфоцитах в сравнении с необлученными считают, что больному показано органосохраняющее лечение, в частности химиолучевая терапия, см. М.Ozsahin и др. «Radiation-Induced Late Toxicity Can Be Predicted by CD4 and CD8 T-Lymphocyte Apoptosis: Results of a Prospective Study in 399 Individual Consenting Patients», I.J.Radiation Oncology. Biology. Physics. Volume 57, Number 2, Supplement, 2003, USA, p.p.203-204 (копия ссылки прилагается).

Данный способ принят в качестве прототипа настоящего изобретения.

Недостатком этого способа является то, что учитываются реакции только в лимфоцитах, которые составляют при солидных опухолях не более 30% от общего числа лейкоцитов. Это не всегда позволяет сделать достоверное заключение о наличии показаний к проведению органосохраняющего лечения. В частности, в указанном выше источнике (М.Ozsahin и др., р.203) отмечается, что при РМП реакция CD4 лимфоцитов на тест облучения недостоверна (p=NS for CD4).

Таким образом, способ-прототип не обладает достаточной надежностью при определении показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП.

Задачей настоящего изобретения является повышение надежности способа определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП.

Согласно изобретению в способе определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря путем взятия пробы крови, гамма-облучения части этой пробы in vitro, инкубации облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания ДНК компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, определяют количество лейкоцитов Lo в облученной части пробы крови, количество лейкоцитов Lн в необлученной части пробы крови и отношение Lo/Lн, затем осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определяют ИДо - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисляют ИДн/ИДо и Lo/Lн, и при значениях обоих указанных отношений более 1,0 считают показанным проведение органосохраняющего лечения.

Заявителем не выявлены источники, содержащие информацию о технических решениях, идентичных настоящему изобретению, что позволяет сделать вывод о его соответствии критерию «новизна».

Определение суммарной концентрации ДНК в пробе крови позволяет более полно оценить реакции на облучение, так как учитывает все ДНК-содержащие компоненты, а не только реакции в лимфоцитах. Значительное количество ДНК содержится в гранулоцитах крови, которые могут составлять до 70% всех периферических лейкоцитов, кроме того, в кровотоке онкологических больных имеются ДНК-содержащие опухолевые клетки, наконец, также известно о наличии циркулирующей ДНК в плазме/сыворотке крови. Каждый из перечисленных компонентов дает свой вклад в повышение надежности способа.

Указанные обстоятельства позволяют сделать вывод о соответствии заявленного изобретения критерию «изобретательский уровень».

Заявленный способ реализуют следующим образом.

У больного РМП берут 2,0 мл венозной крови, добавляют гепарин до 25 ед/мл, а также 2,0 мл раствора Хенкса. Смесь делят на две примерно равные части. Одну часть подвергают гамма-облучению в дозе 2 Гр, другая часть смеси остается необлученной. Обе части инкубируют при 37°С в течение 3 часов. После этого в каждой части пробы определяют общее количество лейкоцитов с помощью камеры Горяева и вычисляют отношение количества лейкоцитов в облученной части пробы (Ло) к количеству лейкоцитов в необлученной части пробы (Лн). Перед окрашиванием 0,05 мл каждой части пробы обрабатывают 10-кратным объемом лизирующей смеси, содержащей 0,5% тритон Х-100, 2М NaCl, 0,1 М Na2EDTA и 0,01 М трис при рН 8,0 в течение 3-5 минут до просветления. Далее осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, в частности, 4:6-диамидино-2-фенилиндолом (ДАФИ). Для этого измеряют интенсивность флуоресценции при λВОЗБ=350 нм и λЭМ=450 нм у лизированной пробы (I0), затем к пробе добавляют 0,05 мл раствора ДАФИ в концентрации 4 мкг/мл и измеряют интенсивность флуоресценции - I1, после чего к пробе добавляют 0,02 мл раствора стандартной ДНК в известной концентрации и определяют интенсивность флуоресценции - I2. Концентрацию ДНК, нормированную на один лейкоцит (Л) в анализируемых пробах, рассчитывают по формуле:

где К - коэффициент, зависящий от разбавления проб и стандарта, а также от концентрации стандарта (К - при одинаковых условиях измерения является величиной постоянной).

Определив индексы ИДн в необлученной и ИДо в облученной частях пробы, вычисляют отношение ИДн/ИДо.

При значениях Lo/Lн и ИДн/ИДо более 1,0 считают целесообразным проведение органосохраняющего лечения.

Пример 1.

Анамнез - больной К-в B.C. 54 года. Поступил в Клинику ЦНИРРИ с диагнозом: «переходноклеточный РМП», Т2-стадия.

К 2,0 мл гепаринизированной (25 ед/мл) цельной венозной пробы крови пациента добавили 2,0 мл раствора Хенкса. Получившуюся смесь разделили на 2 части. Одну из них облучили в дозе 2 Гр на гамма-установке «Луч-1» (мощность дозы 0,4 Гр/мин), другая служила контролем. Обе части пробы инкубировали при 37°С в течение 3 ч в термостате. После этого в обеих пробах определяли концентрации лейкоцитов с помощью камеры Горяева и отношение Lo/Lн=1,10.

Затем в обеих частях пробы определяли концентрацию ДНК с помощью флуоресцентного красителя. Для этого к 0,05 мл пробы проинкубированной крови добавляли 0.5 мл лизирующей смеси, содержащей 0,5% тритон Х-100, 2М NaCl, 0,1 М Na2EDTA и 0,01 М трис при рН 8,0, в течение 3-5 мин до просветления и 0,05 мл лизированной пробы добавляли к 1,0 мл трис-буфера. Интенсивность флуоресценции образца измеряли на спектрофлуориметре фирмы «Хитачи» (Япония) Model-850 λВОЗБ=350 нм и λЭМ=450 нм. В данном случае у необлученной лизированной пробы I0=8,5, затем к пробе добавляли 0,05 мл раствора ДАФИ в концентрации 4 мкг/мл и измеряли интенсивность флуоресценции - I1=28,3, после чего к пробе добавили 0,02 мл раствора соницированной ДНК тимуса теленка фирмы «Серва» (Германия) в концентрации 25 мкг/мл и определили интенсивность флуоресценции - I2=45,4.

Определив количество ДНК в расчете на 1 лейкоцит, в необлученной и облученной пробах рассчитали величину ИДн/ИДо=1,44. Так как значения ИДн/ИДо и Lo/Lн больше 1,0, было сделано заключение о возможном проведении комбинированной органосохраняющей терапии больному К-ву. Последующее определение длительности безрецидивного периода показало, что рецидивов заболевания у больного не было в течение 23 мес.

Для сравнения приводим результаты лечения другого больного, которому в соответствии с нашими показаниями комбинированное органосохраняющее лечение не было рекомендовано, но оно все-таки было проведено.

Анамнез - больной Ж-в Н.Ф. 79 лет. Поступил в клинику ЦНИРРИ с диагнозом: «переходноклеточный РМП», Т2-стадия.

Величина Lo/Lн=0,83, а величина ИДн/ИДо=0,86, что не являлось показанием проведения органосохраняющего комбинированного лечения. Несмотря на это, такое лечение было осуществлено, и в результате обнаружилось, что рецидив заболевания произошел уже через 2 месяца после окончания органосохраняющей терапии, что привело к осложнению всего лечения.

Результаты определения показаний к проведению органосохраняющего лечения 20 больных и данные клинических наблюдений, полученные в результате лечения, продемонстрировали, что у больных с Lo/Lн>1,0 и ИДн/ИДо>1,0 длительность безрецидивного периода после органосохраняющей терапии составляла 14,5±3,0 месяцев. В то же время 16 больным с Lo/Lн<1,0 и/или ИДн/ИДо<1 была проведена, несмотря на рекомендации, следующие из заявленного способа, органосохраняющая терапия. В этом случае длительность безрецидивного периода составила 6,5±0,7 месяцев.

Похожие патенты RU2319963C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ У ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ ПУТЕМ ПРЕДИКЦИИ ЕЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ 2012
  • Иванов Сергей Дмитриевич
  • Корытова Луиза Ибрагимовна
  • Ямшанов Владимир Александрович
  • Жабина Резифа Мидхатовна
  • Пеганова Юлия Альбертовна
  • Семенов Александр Леонидович
RU2506591C1
Способ выявления инвазии перивезикальной клетчатки при раке мочевого пузыря с использованием динамической магнитно-резонансной цистографии 2017
  • Фролова Ирина Григорьевна
  • Григорьев Евгений Геннадьевич
  • Слонимская Елена Михайловна
  • Усынин Егвений Анатольевич
RU2688310C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ПЕРВИЧНОМ ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗЕ 1997
  • Иванов С.Д.
  • Корытова Л.И.
  • Ямшанов В.А.
  • Ильин Н.В.
RU2129274C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ХИМИОТЕРАПИИ ПЕРВИЧНЫМ БОЛЬНЫМ ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ И РАСПРОСТРАНЕННЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 2001
  • Иванов С.Д.
  • Ямшанов В.А.
  • Хазова Т.В.
  • Корытова Л.И.
  • Гершанович М.Л.
  • Филатова Л.В.
RU2212035C2
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНВАЗИВНОГО РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ 2004
  • Гранов А.М.
  • Жаринов Г.М.
  • Некласова Н.Ю.
  • Агафонова М.В.
  • Гранов Д.А.
  • Зверев О.Г.
RU2257219C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА РАДИАЦИОННО-ХИМИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЙ 1995
  • Иванов С.Д.
  • Кованько Е.Г.
RU2105977C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ РЕЦИДИВНОГО ИНВАЗИВНОГО РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ 2009
  • Павлов Валентин Николаевич
  • Измайлов Адель Альбертович
  • Измайлова Светлана Михайловна
  • Викторова Татьяна Викторовна
  • Галимзянов Виталий Захитович
  • Кутлияров Линат Миниханович
RU2393772C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ С ПОМОЩЬЮ ОНКОМАРКЕРА TFDP1 (ВАРИАНТЫ) И НАБОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ 2011
  • Заболотнева Анастасия Александровна
  • Шегай Петр Викторович
  • Гайфуллин Нуршат Минуллаевич
  • Русаков Игорь Георгиевич
  • Алексеев Борис Яковлевич
  • Буздин Антон Александрович
RU2463354C1
Способ прогнозирования течения рака мочевого пузыря 2017
  • Лоран Олег Борисович
  • Синякова Любовь Александровна
  • Косов Владимир Алексеевич
  • Гундорова Людмила Викторовна
  • Косова Инга Владимировна
  • Погодина Ирина Евгеньевна
  • Колбасов Дмитрий Николаевич
RU2641170C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ С ПОМОЩЬЮ ОНКОМАРКЕРА NUSAP1 2011
  • Заболотнева Анастасия Александровна
  • Шегай Петр Викторович
  • Гайфуллин Нуршат Минуллаевич
  • Русаков Игорь Георгиевич
  • Алексеев Борис Яковлевич
  • Буздин Антон Александрович
RU2468372C1

Реферат патента 2008 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ОРГАНОСОХРАНЯЮЩЕГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ

Изобретение относится к медицине, биохимии, а именно к онкологии. Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря включает взятие пробы крови, гамма-облучение части этой пробы in vitro, инкубации облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания ДНК компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, далее определяют количество лейкоцитов Lo в облученной части пробы крови, количество лейкоцитов Lн в необлученной части пробы крови и отношение Lo/Lн, затем осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определяют ИДо - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисляют ИДн/ИДо и Lo/Lн, и при значениях обоих указанных отношений более 1,0 считают показанным проведение органосохраняющего лечения. Изобретение обеспечивает повышение надежности способа.

Формула изобретения RU 2 319 963 C1

Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря путем взятия пробы крови, гамма-облучения части этой пробы in vitro, инкубации облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания ДНК компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, отличающийся тем, что определяют количество лейкоцитов Lo в облученной части пробы крови, количество лейкоцитов Lн в необлученной части пробы крови и отношение Lo/Lн затем осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определяют ИДо - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисляют ИДн/ИДо и Lo/Lн и при значениях обоих указанных отношений более 1,0 считают показанным проведение органосохраняющего лечения.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2008 года RU2319963C1

Ozsahin M et al
I.J.Radiation Oncology, Biology, Physics
Способ получения на волокне оливково-зеленой окраски путем образования никелевого лака азокрасителя 1920
  • Ворожцов Н.Н.
SU57A1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ХИМИОТЕРАПИИ ПЕРВИЧНЫМ БОЛЬНЫМ ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ И РАСПРОСТРАНЕННЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 2001
  • Иванов С.Д.
  • Ямшанов В.А.
  • Хазова Т.В.
  • Корытова Л.И.
  • Гершанович М.Л.
  • Филатова Л.В.
RU2212035C2
Kopjar N et al
"Assessment of chemotherapy-induced DNA damage in peripheral blood leukocytes of cancer patients using the alkaline comet assay", Teratog Carcinog Mutagen., 2002, 22(1):13-30 PMID 11754384 (реферат)

RU 2 319 963 C1

Авторы

Иванов Сергей Дмитриевич

Ямшанов Владимир Александрович

Маслюкова Елизавета Александровна

Даты

2008-03-20Публикация

2007-01-11Подача