ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ ОПУХОЛЕЙ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ Российский патент 2008 года по МПК C07J41/00 C07C245/22 A61K31/655 A61K31/566 

Настоящее изобретение относится к новым соединениям на основе эстрогенов и антиэстрогенов, пригодным в качестве химиотерапевтических агентов против опухолей, к способам их получения и к их применению для лечения заболеваний, особенно рака.

Здоровые клетки, раковые клетки и клетки метастазов половых органов содержат рецепторы эстрогенов (= цитоплазматические белки), смотри "The nuclear recepnor ligand-binding domain: structures and function" in Curr. Opin. Cell Biol. 10, 384-391 (1998). OH группы половых гормонов обладают способностью связываться с рецепторами эстрогенов, поэтому природные и синтетические женские половые гормоны (эстрогены) и их антагонисты (антиэстрогены) обладают сродством к тканям половых органов (молочной железы, матки, яичников, предстательной железы).

Рецепторы эстрогенов особенно сильно накапливаются в раковых клетках опухолей половых органов, например в опухолях молочной железы и их метастазах (Е.V.Angerer. The estrogen receptor as a target for rational drug design, pages 5, 49 and 137, Springer-Verlag, Heidelberg, 1995). Ранее были предприняты попытки использовать рецепторы эстрогенов в качестве мишеней для активных агентов посредством связывания, например, природного женского полового гормона эстрадиола или синтетического гормона диэтилстилбестрола с активной группой, например, с группой, имеющей нефункциональный азот, в надежде, что молекула на основе эстрогена будет переносить в опухоль активную группу, которая затем сможет уничтожить опухоль (G.Leclercq. Breast Cancer - Experimental and Clinical Aspects, 287-293, Pergamon, Oxford, 1980; H.Hamacher. Potentielle Antineoplastika III, Arch. Pharm. 311, 184-195, Verlag Chemie, Weinheim, 1978). Однако все эти попытки не имели успеха.

В разработке активных агентов против опухолей половых органов человека, для того чтобы можно было достичь действительно значимых результатов испытаний, необходима животная модель, близкородственная опухолям человека. Известные "опухоли Хаггинса" (С.Huggins et al., Rapid induction of mammary carcinoma in the rat and the influence of hormones, J. Exper. Med. 109, 25 (1959)) можно легко генерировать и подавлять, например, при помощи эндокринных манипуляций и обычной химиотерапии (например Эндоксаном^® = моногидратом циклофосфамида). В противоположность этому, для индукции опухолей, генерированных бензидином, у самок крыс линии Wistar, требуется больше времени, и они являются (также как опухоли молочной железы человека) только на приблизительно 50% гормонозависимыми; на них (также как на опухоли молочной железы человека) невозможно эффективно воздействовать посредством химиотерапии и других методов лечения, известных в данной области техники. Следовательно, мы нашли требуемую подходящую животную модель на крысах линии Wistar с опухолями молочной железы, индуцированными бензидином.

Неожиданно обнаружено, что эстрогены и антиэстрогены, несущие диалкилтриазенильные группы, после применения на крысах с опухолями молочной железы вызывают их перерождение. Терапия, избирательно направленная на ткань опухоли молочной железы, не приводит к побочным эффектам, известным в данной области техники, таким как повреждение костного мозга и кишечного эпителия. Диалкилфенилтриазены известны как в общем случае неселективные цитостатики; смотри Proc. Soc. Exper. Biol. Med. 90, 484 (1955); но подобно алкилирующим агентам (эндоксан) они вмешиваются в пролиферацию всех клеток организма подряд.

Кроме того, 4-(3,3-диметил-1-триазенил)-3-метокси-эстра-1,3,5(10)-триен-17-он известен как промежуточное соединение при получении фтористого соединения (замена триазенила на фтор); смотри J. Org. Chem. 46 (12), 2520-2528 (1981).

Таким образом, объектом данного изобретения являются эстрогены и антиэстрогены, в которых каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой, за исключением 4-(3,3-диметил-1-триазенил)-3-метоксиэстра-1,3,5(10)-триен-17-она.

В рамках данного изобретения термины "эстрогены" и "антиэстрогены" включают как природные, так и синтетические соединения с эстрогенной и антиэстрогенной активностью. В качестве соединений с эстрогенной и антиэстрогенной активностью соответственно, замещение которых диалкилтриазенильными группами приводит к получению соединений по данному изобретению, пригодны в сущности все соединения, у которых "показатель занятости рецептора", который получают при помощи 10 мг/л исследуемого вещества в разделе "Данные по конкурентному ингибированию в отношении 6,7-дитритий-эстрадиола на рецепторе эстрогенов", описанном ниже, составляет максимум 0,9, предпочтительно максимум 0,7, особенно предпочтительно максимум 0,3.

В рамках данного изобретения термин "замещенный по ядру" относится к одному или более ароматическим кольцам соединений на основе эстрогенов и антиэстрогенов.

Не будучи связанным с конкретной теорией, достижение по изобретению можно объяснить в общеупотребительных терминах следующим образом: очевидно триазенильные группы могут связываться с рецепторами эстрогенов аналогично OH-группам. Для доставки эффективных групп к мишени, то есть ткани опухоли, в качестве носителя используют эстрогенную и антиэстрогенную молекулярную группировку, придающую гормоноподобнуго специфичность соединениям по изобретению. В раковых клетках эффективные группы вызывают онколизис раковых клеток.

Соединениям по изобретению можно придать некоторые требуемые свойства путем введения определенных групп; например, степень водорастворимости соединений можно по желанию регулировать в широких пределах путем введения гидрофильных групп. Соли щелочных металлов и аммония соединений по изобретению с гидрофильными группами хорошо растворимы в воде.

Одним преимуществом соединений с гидрофильными группами по изобретению является то, что по сравнению с рецепторами эстрогенов они могут накапливаться в избытке в раковых клетках в количествах, требуемых для терапии, и то, что их избыток можно быстро вывести из организма. Таким образом, токсические побочные эффекты минимизированы.

Благодаря гормоноподобной специфичности соединений по изобретению требуются относительно небольшие их количества.

В качестве носителей согласно изобретению могут быть использованы производные эстрогенов и антиэстрогенов, таких как, например, группы стероидов, стильбенов, гексестролов, фенил-1,2-бис(2,6-дихлорфенил)-1,2-бис(этиленаминоэтанов), трифенилэтиленов, фенилбензофуранов, фенилбензотиофенов, которые замещены главным образом в положении 3 бензоильной группой, 4,5-бис-фенил-имидазолов, 2,3-диарилпиперазинов и 4,5-фенил-2-имидазолинов. Некоторые типы приведенных в качестве примеров носителей будут обсуждаться ниже.

Соединения по изобретению включают, например, стероидтриазены формулы

где

R¹ представляет собой водород, N=N-NR^7AR^7B, O(CR⁸R⁹)_nCO₂H, CO₂Н или SO₃H,

R² представляет собой OH, OCH₃, N=N-NR^7AR^7B или O(CR⁸R⁹)nCO₂H,

R³ представляет собой водород, N=N-NR^7AR^7B, O(CR⁸R⁹)_nCO₂H, CO₂Н или SO₃H,

R⁴ и R⁶ независимо друг от друга представляют собой водород, O(CR⁸R⁹)_nCO₂H, (CR⁸R⁹)_nCO₂H или С₆Н₄OCH₂CO₂Н и

R⁴, кроме того, представляет собой (CH₂)₁₀CON(С₁-С₄алкил)₂,

R⁵ представляет собой водород или OH,

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил,

R⁸ и R⁹ независимо друг от друга представляют собой водород, метил или этил,

Х представляет собой СО, CHOH или С(OH)-С≡СН и

n представляет собой целое число от 1 до 10,

при условии, что только один из остатков R¹-R³ представляет собой N=N-NR^7AR^7B,

и их соли, сольваты и сольваты этих солей.

Стероидтриазены (I) могут быть получены, например, путем диазотирования аминопроизводных формулы

где один из остатков R¹-R³ представляет собой NH₂, а остальные R¹-R⁶ и Х имеют значения, приведенные в описании формулы (I), или их солей и путем взаимодействия полученных солей диазония формулы

где

R имеет формулу (II), в которой один из остатков R¹-R³ представляет собой (N₂)⁺, а другие переменные имеют значения, приведенные в описании формулы (II), и Y^- представляет собой анион кислоты, с диалкиламинами и при необходимости с высвобождением кислот из полученных солей.

При использовании, например, 2-амино-3-карбоксиметокси-эстрадиола в качестве исходного вещества взаимодействие может быть проиллюстрировано посредством следующей формульной схемы 1:

Аминостероиды, используемые в качестве исходных веществ, либо известны, либо могут быть получены аналогично известным способам получения.

Примеры аминостероидов (II) включают, например:

1-амино-3-оксиуксусный эстрадиол, 2-амино-3-оксиуксусный эстрадиол, 4-амино-3-оксиуксусный эстрадиол, 1-амино-3-оксиуксусный эстрон, 2-амино-3-оксиуксусный эстрон, 4-амино-3-оксиуксусный эстрон, 1-амино-3-метоксиэстрадиол, 2-амино-3-метоксиэстрадиол, 4-амино-3-метоксиэстрадиол, 1-амино-3-метоксиэстрон, 2-амино-3-метоксиэстрон, 4-амино-3-метоксиэстрон, 1-амино-3-оксиуксусный эстриол, 2-амино-3-оксиуксусный эстриол, 4-амино-3-оксиуксусный эстриол, 1-амино-3-оксиуксусный этинилэстрадиол, 2-амино-3-оксиуксусный этинилэстрадиол, 4-амино-3-оксиуксусный этинилэстрадиол, 2-амино-4-сульфоновый эстрадиол, 4-амино-2-сульфоновый эстрадиол, 2-амино-4-сульфоновый эстрон и 4-амино-2-сульфоновый эстрон.

Путем замещения OH-группы в эстроне триазенильной группой (смотри пример 11) получают эффективный противораковый химиотерапевтический агент, который проявляет очень хорошее действие в низкой дозировке в отношении карциномы молочной железы крысы. Следовательно, можно сделать вывод, что триазенильная группа неожиданно может замещать необходимую OH-группу в качестве адгезионной группы на рецепторе эстрогенов. Если для противоопухолевого действия необходимо максимально использовать связывающие свойства OH-группы (или ее эфиров) на рецепторе эстрогенов, триазенильную группу предпочтительно вводят согласно изобретению в положение 2 или 4.

Как уже упоминалось выше, для растворимости в воде может быть желательно вводить в соединения по изобретению гидрофильные группы. Предпочтительными в качестве гидрофильных групп являются сульфонатные и карбоксилатные группы, а также C₁-С₆остатки, несущие подобные группы. Даже если можно рассматривать несколько положений для дополнительного замещения, особенно легко замещения можно проводить по ароматическому кольцу - путем, например, сульфонирования ядра или этерификации фенольных гидроксильных групп.

Что касается сведений о положении замещения, руководящими могут служить сведения о том, что эстрон, эстрадиол или этинилэстрадиол обладают значительным сродством к рецептору эстрогенов, даже когда в положениях 2, 4, 7 и 11 находятся объемные заместители (Р.W.Jungblut et al., Hormon-Rezeptoren, Kolloquium der Gesellschaft für physiologische Chemie vom 05-08.04.1967 in Mosbach/Baden; M.Görlich, Arch. Geschwulstforschung 37/2, 161-170 (1971)).

Следовательно, эти положения также являются предпочтительными для замещения.

Например, группа карбоксиалкокси, например группа карбоксиметокси, может находиться в положении 3 в качестве солюбилизирующей группы [(пролекарство) в виде соли]. Если в одном из положений 2 или 4 находится триазенильная группа, тогда второе положение (4 или 2) может нести солюбилизирующую группу, например соль группы карбоксиалкокси или сульфоновой кислоты. Положения 7 и 11 могут быть использованы для дополнительных заместителей и могут нести, например, дополнительные солюбилизирующие группы (например, группы карбоксиалкокси); таким образом, если это необходимо, существует возможность достижения требуемых селективностей путем введения заместителей.

Соединения, в которых фенольная OH-группа этерифицирована, действуют как пролекарство, то есть можно ожидать, что адгезия на рецепторе эстрогенов поддерживается посредством группы карбоксиметокси в положении 3; смотри, например, местранол (Е.Mutschler, Arzneimittelwirkungen, Lehrbuch der Pharmakologie und Toxikologie, page 368, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft, Stuttgart, 1997). Как и при получении химиотерапевтических агентов, в данном случае важно только, чтобы активный агент связывался с рецептором эстрогенов, и неважно, представляет собой носитель эстроген или антиэстроген.

Эстрогенные стероиды являются примерами того, как активные агенты, высокоспецифичные и высокоэффективные в отношении карцином молочной железы, которые оптимальным образом связываются с рецептором эстрогенов, могут быть синтезированы из эстрогенов путем введения диалкилтриазенильной группы. Также следует предполагать, что такие активные агенты, благодаря их связыванию с рецептором эстрогенов, эффективны в отношении всех карцином половых органов (матки, яичников, предстательной железы), содержащих рецепторы эстрогенов.

Стильбены: производные от стильбенов противораковые химиотерапевтические агенты, диэтилстилбестрол и гексестрол

Также соединениями по изобретению являются, например, цис- и транс-стильбены и гексестролы формулы

где

R представляет собой водород, метил или этил,

R¹ представляет собой водород, хлор, метил, этил, СН₂CO₂Н, СН(СН₃)CO₂Н, OCH₂СО₂Н, OCH(СН₃)CO₂Н или SO₃Н,

R² представляет собой OH, OCH₃, OCH₂CO₂Н, OCH(СН₃)CO₂Н или N=N-NR^7AR^7B,

R³ представляет собой водород, хлор, предпочтительно в положении 6, или N=N-NR^7AR^7B,

R⁴ представляет собой водород, метил, этил, СН₂СО₂Н или СН(СН₃)CO₂Н и

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил,

при условии, что либо R², либо R³ представляет собой N=N-NR^7AR^7B, и указанные пунктиром связи показывают, что соединения включают производные как этана, так и этилена и их соли, сольваты и сольваты этих солей.

Эти соединения VI могут быть получены, например, путем диазотирования аминопроизводных формулы

где

R³ представляет собой водород или NH₂ и

R⁴ представляет собой водород, метил, этил, CH₂CO₂H или СН(СН₃)CO₂Н,

при условии, что либо R², либо R³ представляет собой NH₂ и R, R¹, R², R^7А, R^7В и указанные пунктиром связи имеют значения, приведенные в описании формулы (VI),

или их солей и путем взаимодействия полученных солей диазония формулы

где

R⁵ имеет формулу (VII), в которой один из двух остатков R² и R³ представляет собой (N₂)⁺ соответственно, другие переменные имеют значения, приведенные в описании формулы (VII), и Y^- представляет собой анион кислоты,

с диалкиламинами и при необходимости путем высвобождения кислот из полученных солей.

При использовании, например, 3,3'-диамино-диэтилстилбестрола (Н.Hamacher, Potentielle Antineoplastika III, Arch. Pharm. 311, 184-195, Weinheim 1978) в качестве исходного вещества взаимодействие может быть проиллюстрировано посредством следующей формульной схемы 2:

При дополнительном взаимодействии 3,3'-ди-(диалкилтриазенил)-диэтилстилбестрола с 1 или 2 эквивалентами алкилирующего агента формулы

где

R⁶ представляет собой C₁-С₃алкил, СН₂СО₂СН₃ или СН(СН₃)СО₂СН₃ и

Y представляет собой отщепляемую группу алкилирующих агентов, могут быть получены соответствующие продукты алкилирования; смотри следующую формульную схему 3:

Если R⁶ в вышеуказанной схеме формул 3 представляет собой, например, СН₂СО₂СН₃, тогда может быть получена динатриевая соль из бис-эфира посредством основного гидролиза, например, при помощи NaOH (формульная схема 4):

Другие соединения по изобретению представляют собой, например, производные трифенилэтилена формулы

где

R представляет собой водород, хлор, хлорметил или этил,

R¹ представляет собой OCH₂CO₂Н или OCH(СН₃)CO₂Н,

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой водород, SO₃Н или N=N-NR^7AR^7B,

R³ и R⁵ независимо друг от друга представляют собой водород, OH, OCH₃, OCH₂CO₂Н, OCH(СН₃)CO₂Н или N=N-NR^7AR^7B и

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил, при условии, что только один из остатков R²-R⁵ представляет собой N=N-NR^7AR^7B,

и их соли, сольваты и сольваты этих солей.

Соединения XVI по изобретению могут быть получены, например, путем диазотирования аминопроизводных формулы

где

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой водород, NH₂ или SO₃H,

R³ и R⁵ независимо друг от друга представляют собой водород, NH₂, OH, OCH₃, OCH₂CO₂Н или OCH(СН₃)CO₂Н и

R и R¹ имеют значения, приведенные в описании формулы (XVI), при условии, что только один из остатков R²-R⁵ представляет собой NH₂, или их солей

и путем взаимодействия полученных солей диазония формулы

где

R⁶ представляет собой формулу (XVIa), в которой один из остатков R²-R⁵ представляет собой (N₂)⁺, а другие переменные имеют значения, приведенные в описании формулы (XVIa), и Y^- представляет собой анион кислоты, с диалкиламинами и при необходимости путем высвобождения кислот из полученных солей.

При использовании, например, аминосоединения XVIII в качестве исходного вещества взаимодействие может быть проиллюстрировано посредством следующей формульной схемы 5:

Посредством основного гидролиза метилового эфира XIX, согласно схеме реакции 6, может быть получена натриевая соль XX:

Приведенным выше в качестве примера способом противораковые химиотерапевтические агенты могут быть получены из любых эстрофильных соединений путем введения триазенильной группы, например:

Стрелки указывают предпочтительные положения для триазенильных (Tr) и солюбилизирующих групп (sb).

Следовательно, еще одним объектом изобретения является способ получения эстрогенов и антиэстрогенов, при котором каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой, вследствие чего по меньшей мере один диалкилтриазенильный заместитель вводят в одно или более чем одно ароматическое кольцо соединения с эстрогенной или антиэстрогенной активностью, за исключением получения 4-(3,3-диметил-1-триазенил)-3-метоксиэстра-1,3,5(10)-триен-17-она.

В рамках данного изобретения предпочтительными в качестве солей являются физиологически приемлемые соли.

Физиологически приемлемые соли, предпочтительно физиологически приемлемые соли соединений I, II, VI, VII, XVI и XVIa, включают соли обычных оснований, таких как, например, соли щелочных металлов (например, соли натрия и калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и магния) и соли аммония, производные аммиака или органических аминов с числом атомов С от 1 до 16, таких как, например, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, трис-гидроксиэтиламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, прокаин, дибензиламин, N-метилморфолин, дигидроабиетиламин, аргинин, лизин, этилендиамин и метилпиперидин.

В рамках изобретения такие формы соединений упоминаются как сольваты, образующие комплекс с молекулами растворителя посредством координации в твердой или жидкой фазе. Гидраты представляют собой частную сольватов, в которой имеет место координация с водой. Алкил как таковой и "алкил" или "алк" в диалкиламине и карбоксиалкокси представляют собой линейный или разветвленный алкильный остаток, в общем случае с 1-6, 1-4 или 1-3 атомами С, например метил, этил, н-пропил, изопропил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил.

Диазотирование известно, например, из Organikum, 10. Ed., VEB Deutscher Verlag der Wissenschaften, Berlin 1971, 580-600.

Анионы кислот в рамках изобретения представляют собой главным образом анионы неорганических кислот, карбоновых кислот и сульфоновых кислот, например соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталиндисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.

Отщепляемые группы алкилирующих агентов в рамках изобретения включают, например, хлорид, бромид и сульфат.

Дополнительным объектом изобретения являются эстрогены и антиэстрогены, в которых каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой, для лечения заболеваний.

Дополнительным объектом изобретения является применение эстрогенов и антиэстрогенов, в которых каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой, против опухолей половых органов людей и животных.

Дополнительным объектом изобретения является способ борьбы с опухолями половых органов людей и животных посредством применения достаточного количества по меньшей мере одного соединения из группы эстрогенов и антиэстрогенов, в котором каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой.

Дополнительным объектом изобретения является применение эстрогенов и антиэстрогенов, в которых каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой, для изготовления фармацевтических препаратов против опухолей половых органов людей и животных.

Дополнительным объектом изобретения являются фармацевтические препараты, содержащие по меньшей мере одно соединение группы эстрогенов и антиэстрогенов, в котором каждая молекула является замещенной по ядру по меньшей мере одной диалкилтриазенильной группой, при необходимости вместе с одним или более фармакологически приемлемыми адъювантами или субстратами, а также их применение для вышеуказанных целей.

Соединения по изобретению могут быть эффективными при системном и/или местном применении. С этой целью их можно применять посредством подходящего пути введения, например посредством перорального, парентерального, пульмонального, назального, сублингвального, лингвального, трансбуккального, ректального, трансдермального, конъюнктивального, ушного пути введения или в качестве имплантата.

Для осуществления этих путей применения активный агент можно вводить в подходящих формах.

Подходящими для перорального применения являются известные формы применения, которые доставляют активный агент быстро и/или в модифицированной форме, такие как, например, пилюли (не покрытые оболочкой, а также покрытые оболочкой пилюли), например пилюли или покрытые оболочкой пилюли с оболочками, устойчивыми к желудочному соку, капсулы, покрытые сахаром пилюли, грануляты, гранулы, порошки, эмульсии, суспензии, растворы и аэрозоли.

Парентеральное применение можно осуществлять, исключая стадию всасывания (внутривенным, внутриартериальным, внутрисердечным, интраспинальным или интралюмбальным путем) или включая стадию всасывания (внутримышечным, подкожным, внутрикожным, чрескожным или интраперитонеальным путем). Подходящими для парентерального применения формами применения являются, например, инъекционные и инфузионные препараты в форме растворов, суспензий, эмульсий, лиофилизатов и стерильных порошков.

Подходящими для других путей применения являются, например, ингаляционные лекарственные препараты (например, порошковые ингаляционные средства, небулайзеры), назальные капли/растворы, спреи; таблетки или капсулы для применения посредством лингвального, сублингвального, трансбуккального пути введения, суппозитории, ушные и глазные препараты, вагинальные капсулы, водные суспензии (лосьоны, перемешиваемые смеси), липофильные суспензии, мази, кремы, молочко, пасты, дисперсионные порошки или имплантаты.

Активные агенты могут быть превращены в упомянутые формы применения известным способом. Это можно осуществить посредством применения инертных, нетоксичных, фармацевтически пригодных адъювантов. Они включают в себя, например, субстраты (например, микрокристаллическую целлюлозу), растворители (например, жидкие полиэтиленгликоли), эмульгаторы (например, додецилсульфат натрия), диспергирующие вещества (например, поливинилпирролидон), синтетические и природные биополимеры (например, альбумин), стабилизаторы (например, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота), красители (например, минеральные пигменты, такие как оксиды железа) или ароматизаторы и/или отдушки.

В общем случае для введения в случае парентерального применения для достижения эффективных результатов рекомендуются количества от приблизительно 1 до 20 мг/кг, предпочтительно от приблизительно 2,5 до 10 мг/кг массы тела. В случае перорального применения количество составляет от приблизительно 1 до 70 мг/кг, предпочтительно от приблизительно 1 до 30 мг/кг массы тела.

Тем не менее при необходимости может быть нужным отклониться от указанных количеств, в зависимости от массы тела, пути применения, индивидуальной реакции на активный агент, вида препарата и момента времени или периода времени, в который происходит применение. Таким образом, в некоторых случаях может быть достаточным применить меньше вышеупомянутого минимального количества, тогда как в других случаях следует превысить упомянутое максимальное количество. В случае применения больших количеств может быть целесообразным разделить их на несколько отдельных доз в течение дня.

Генерация исследуемых опухолей

20 самок крыс линии Wistar обрабатывают бензидином. Первая доза бензидина составляет 150 мг/кг; затем дозы понижают до 100 мг/кг в неделю. Затем в течение 14 дней следуют дозы по 75 мг/кг. Это приводит к общей дозе от 1,225 г/кг.

В итоге генерируется 29 карцином молочной железы. Средняя ожидаемая продолжительность жизни обработанных бензидином крыс линии Wistar составляет 325 суток.

После генерации первой опухоли (около 0,5 г) применение бензидина прекращают. После этого карциномы молочной железы относительно быстро увеличиваются. Размер опухоли определяют тактильно; опытные экспериментаторы могут определить его с точностью до 0,1 г. Опухоли больше 0,5 г используют для исследований.

Данные по конкурентному ингибированию соединениями по изобретению в отношении 6,7-дитритий-эстрадиола на рецепторе эстрогенов

В данных исследованиях используют 6,7-дитритрий-эстрадиол с удельной активностью 0,5 Ки/ммоль.

Образцы тканей толщиной 0,7 мм и площадью 0,5 см² из ткани карциномы матки и молочной железы крысы готовят с помощью режущего инструмента для тканей. Карцинома для образцов ткани должна иметь минимальную массу 1,5 г.

Обработанные образцы ткани

Образцы ткани карциномы матки и молочной железы обрабатывают в обычном физиологическом солевом растворе с концентрациями 5, 10, 15, 20, 35 и 50 мг/л соединения по изобретению. Затем все образцы тканей промывают и снова инкубируют в течение 1 часа в физиологическом растворе, содержащем 10^-9 моль/л 6,7-дитритий-эстрадиола = физиологическая концентрация.

Контроль

Образцы ткани, такие как указано выше, но не обработанные, инкубируют в течение 1 часа в обычном физиологическом солевом растворе.

После инкубирования все образцы ткани промывают и помещают в 4%-ный формальдегид. Затем их сушат, взвешивают и сжигают. Золу растворяют в сцинтилляционной жидкости и в жидкостном сцинтилляционном счетчике определяют активность. Число световых вспышек на миллиграмм сухого вещества золы за определенный промежуток времени является мерой количества инкорпорированного 6,7-дитритрий-эстрадиола и, следовательно, косвенной мерой количества рецепторов эстрогенов, которые замещены соединением по изобретению. Отношение числа световых вспышек, полученного от крыс, обработанных согласно изобретению, к числу световых вспышек, полученному от необработанных крыс, в контексте данного изобретения упоминается как "показатель занятости рецепторов" (означает: занятых эстрадиолом). Отсюда следует, что чем меньше это отношение, тем сильнее соединение по изобретению занимает рецепторы эстрогенов; эстрадиол, используемый в данном исследовании, может занимать только те рецепторы, которые не заняты (соединением по изобретению).

Природа исследуемых тканей такова, что число рецепторов эстрогенов на образец ткани варьируется в некотором диапазоне. Так, например, число рецепторов эстрогенов в образцах соседних тканей опухоли молочной железы (из-за различной плотности ткани опухоли) может быть разным. Поэтому рекомендуется исследовать 3 образца одновременно и рассчитывать среднее значение.

Если количество соединения по изобретению, выбранное для исследования, относительно высокое, рецепторы, которые могут быть заняты соединениями по изобретению, уже заняты начальным количеством, и увеличение не приводит к значительному эффекту.

Качественные данные по цитотоксическому действию соединений по изобретению в отношении клеток опухоли молочной железы

С помощью этого тимидинового теста можно легко проверить рост опухоли: если тимидин больше не включается в клетку, то рост опухоли прекращается.

Необработанных крыс и крыс, обработанных соединениями по изобретению, кормят тимидином, меченным тритием.

Авторадиограмма показывает много меченых клеток в ткани опухоли необработанной контрольной группы. Клетки, меченные тритием, можно распознать по большому количеству черных точек на авторадиограмме (сильное осаждение серебра на фотопластинке). Эти точки являются признаком сильного роста клеток опухоли и связанного с этим включения нуклеозида тимидина.

В случае крыс, обработанных соединениями по изобретению, небольшие опухоли медленно исчезают, тогда как в случае больших опухолей имеет место некроз.

Карциномы молочных желез крыс, которые обрабатывали в течение 20 суток соединением по изобретению в количестве 20 мг/кг в сутки, не показывают, после кормления меченным тритием тимидином, на авторадиограмме никакого дополнительного включения тимидина, то есть рост клеток опухоли по меньшей мере прекращается.

Проценты, приведенные в следующих примерах, если не оговорено иное, представляют собой массовые проценты; доли представляют собой массовые доли. Соотношения растворителей, коэффициенты разбавления и приведенные концентрации растворов жидкость/жидкость в каждом случае относятся к объему.

Примеры

Примеры получения исходных веществ (обозначенных "А") и примеры получения

Чистоту всех получаемых веществ исследовали посредством тонкослойной хроматографии (диоксид кремния 60 F 254, Merck, Darmstadt). Записывали спектры ЯМР всех исходных веществ, полученных авторами изобретения, и всех соединений по изобретению; они соответствуют предполагаемым структурам.

I. Стероиды: Реакционная схема осуществляемых взаимодействий:

Нитрированные эстроны, эстрадиолы, используемые в качестве исходных веществ, и аминосоединения, получаемые здесь, либо известны, либо могут быть получены аналогично известным способам (смотри St. Kraychy, Am. Soc. 81, 1702 (1959)).

Пример А1: получение 2- и 4-нитроэстрона

К раствору 40 г эстрона в 1000 мл чистой уксусной кислоты при температуре от 35 до 40°С при медленном перемешивании по каплям добавляют 16,48 мл концентрированной азотной кислоты. Все перемешивают в течение 24 часов. 4-Нитроэстрон осаждается в виде светло-желтых кристаллов, его извлекают отсасыванием и перекристаллизовывают из этанола.

Выход: 9 г 4-нитроэстрона; точка плавления 270°С.

Фильтрат смешивают с 4000 мл воды, осажденный неочищенный продукт извлекают отсасыванием и сушат (выход: 45 г). Очистку проводят посредством колоночной хроматографии на оксиде алюминия (Fa.Woelm), АКТ. St. I acidic. Неочищенный продукт растворяют в 300 мл бензола при нагревании (максимум 15 г) и медленно наносят пипеткой на подготовленную колонку (высота 120 см, диаметр 4,5 см). Затем его элюируют бензолом с DC контролем. Раствор концентрируют и выделяют оставшийся 2-нитроэстрон.

Выход (с 3 колонок): 25 г 2-нитроэстрона; точка плавления 180°С.

Пример А2: 2-нитро-3-метоксиэстрон

К раствору 16 г 2-нитроэстрона из примера А1, 750 мл этанола и 750 мл 10%-ного водного раствора гидроксида калия при 35°С в течение 6 часов в атмосфере азота по каплям добавляют 480 мл диметилсульфата. Это гарантирует, что раствор останется основным; при необходимости по каплям добавляют 45%-ный водный раствор гидроксида калия. Перемешивают до тех пор, пока раствор остается светло-желтым и основным. Затем раствор охлаждают до приблизительно 5°С, осажденный продукт извлекают отсасыванием и промывают разбавленным водным раствором гидроксида калия и водой, сушат и перекристаллизовывают из смеси этанол/толуол (1:1).

Выход: 15,7 г; точка плавления 154°С,

Пример A3: 3-метокси-4-нитроэстрон

Соединение, указанное в заголовке, получают из соединения примера А1 согласно примеру А2.

Выход: 2,1 г; точка плавления 259°С.

Пример А4: 2-амино-3-метоксиэстрон

Раствор 5 г 2-нитро-3-метоксиэстрона из примера А2, 4 г тиосульфата натрия, 800 мл ацетона и 160 мл 0,5 н. гидроксида натрия нагревают с обратным холодильником в течение 35 минут, добавляют раствор 3,2 г тиосульфата натрия в 160 мл 0,5 н. гидроксида натрия и полученный раствор нагревают с обратным холодильником в течение 50 минут. Затем добавляют 400 мл воды, а ацетон удаляют при пониженном давлении. Полученную суспензию охлаждают и кристаллы извлекают отсасыванием, промывают водой, сушат и перекристаллизовывают из метанола.

Выход: 4,2 г; точка плавления 155°С.

Пример А5: 3-метокси-4-аминоэстрон

Соединение, указанное в заголовке, получают из соединения примера A3 согласно примеру А4.

Выход: 0,6 г; точка плавления 183°С.

Пример А6: 2-амино-3-метоксиэстрол

Смесь 1 г 2-амино-3-метоксиэстрона из примера А4, 200 мл метанола и 0,44 г боргидрида натрия перемешивают при 40-50°С с DC контролем до завершения реакции (14 часов). Затем добавляют 4 мл чистой уксусной кислоты и метанол удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в разбавленной соляной кислоте при нагревании, указанное в заголовке соединение осаждают гидроксидом натрия, суспензию охлаждают и осажденный продукт извлекают отсасыванием и сушат.

Выход: 0,6 г; точка плавления 160°С.

Пример А7: 3-метокси-4-аминоэстрол

Соединение, указанное в заголовке, получают из соединения примера А5 согласно примеру А6.

Выход: 0,4 г; точка плавления 176°С.

Пример 8: 2-(1,1-диметилтриазенил)-3-метоксиэстрон

При температуре 0-4°С раствор 0,55 г нитрита натрия в 3 мл воды по каплям добавляют к раствору 2,3 г 2-амино-3-метоксиэстрона из примера А4, 160 мл воды и 1,2 мл концентрированной (37%) соляной кислоты. Затем полученный раствор соли диазония быстро переносят при 0-4°С в раствор 0,95 г карбоната натрия, 1 мл 40%-ного водного раствора диметиламина и 40 мл воды. После перемешивания в течение 1 часа твердый продукт извлекают отсасыванием, сушат и перекристаллизовывают из небольшого количества толуола.

Выход: 1,5 г; точка плавления 168°С.

Пример 9: 3-метокси-4-(1,1-диметилтриазенил)-эстрон

Соединение, указанное в заголовке, получают из соединения примера А5 согласно примеру 8.

Выход: 1,5 г; точка плавления 142°С.

Пример 10: 2-(1,1-диметилтриазенил)-3-метоксиэстрол

Соединение, указанное в заголовке, получают из соединения примера А6 согласно примеру 8.

Выход: 3 г; точка плавления 135°С.

Пример 11: 3-(1,1-диметилтриазенил)-эстрон

К раствору 2,7 г 3-аминоэстрона, 40 мл воды и 2 мл концентрированной соляной кислоты (37%) при температуре от 0 до 4°С по каплям добавляют раствор 0,7 г нитрита натрия и 10 мл воды. Затем полученный раствор соли диазония переносят в раствор 1,2 г карбоната натрия, 1,2 мл 40%-ного водного раствора диметиламина и 20 мл воды. После перемешивания в течение 1 часа соединение, указанное в заголовке, извлекают отсасыванием, сушат и перекристаллизовывают из небольшого количества лигроина.

Выход: 2 г; точка плавления 168°С.

Пример 12: 3-(1,1-диметилтриазенил)-эстрол

К раствору 1 г 3-(1,1-диметилтриазенил)-эстрона из примера 11 в 200 мл метанола добавляют 0,44 г боргидрида натрия. Раствор перемешивают при температуре от 40 до 50°С с DC контролем до завершения реакции (14 часов). Затем добавляют 4 мл чистой уксусной кислоты и метанол удаляют при пониженном давлении. Остаток отмучивают с водой, соединение, указанное в заголовке, извлекают отсасыванием и сушат.

Выход: 1 г; точка плавления 138°С.

II. Стильбены

Стильбены из примеров получали посредством реакции получения олефинов Виттига (G.Wittig, Angew. Chem. 68, 505).

При синтезе нитростильбенов посредством реакции получения олефинов Виттига впервые было обнаружено, что если пара-замещенные бензальдегиды заменить на орто-замещенные бензальдегиды, в результате реакции получения олефинов Виттига увеличиваются фракции цис-стильбены. Если этилацетатная группа расположена в орто-положении по отношению к альдегидной группе, цис-стильбены получаются в 100% количестве.

Цис-фракция очевидно зависит от типа и величины заместителя на бензольном ядре альдегида.

Соединения, используемые в качестве исходных веществ, либо известны, либо могут быть получены аналогично известным способам.

Реакционная схема осуществляемых взаимодействий:

Пример А13: (4-нитробензил)-трифенилфосфония хлорид

Раствор 263 г (1 моль) трифенилфосфина, 172 г (1 моль) 4-нитробензилхлорида и толуола перемешивают в течение 15 часов при температуре кипения. Реакционную смесь охлаждают, кристаллы извлекают отсасыванием и промывают толуолом

Выход: 344 г; точка плавления 280°С.

Пример А14: (2-формилфенокси)-этилацетат

При 50°С при перемешивании по каплям добавляют 167 г (1 моль) бромэтилацетата к раствору 122 г (1 моль) 2-гидрокисбензальдегида, 1 моль метилата натрия (в метанольном растворе) и 1,5 л ацетонитрила, раствор перемешивают в течение 7 часов при 70°С. Затем реакционный раствор переносят в 2 л ледяной воды. Отделившееся масло экстрагируют 500 мл дихлорметана, органическую фазу сушат над сульфатом натрия и дихлорметан удаляют под вакуумом. Оставшееся масло кристаллизуют.

Выход: 180 г; точка плавления 48°С.

Пример А15: (4-формилфенокси)-этилацетат

Соединение получают согласно примеру А14 из 4-гидроксибензальдегида.

Выход: 195 г; точка плавления 43°С.

Пример А16: {2-[(Z)-2-(4-нитрофенил)-этенил]-фенокси}-этилацетат

218 г соли фосфония из примера А13 и 0,5 моль раствора метилата натрия одновременно порциями добавляют (после соответствующего обесцвечивания) к раствору 104 г (0,5 моль) альдегида из примера А14 и 750 мл этанола при температуре от 0 до 5°С. После обесцвечивания реакционного раствора его отделяют от нерастворенной части. Из фильтрата удаляют растворитель и остаток отмучивают с 400 мл трис-(диметиламид)-фосфорной кислотой. При 0°С трифенилфосфиноксид выпадает в осадок из раствора, и его извлекают отсасыванием. После добавления к фильтрату 2 л ледяной воды осажденное масло экстрагируют 3 л бензола, растворитель удаляют, остаток перемешивают с 500 мл изопропанола и после охлаждения кристаллический продукт извлекают отсасыванием.

Выход: 105 г чистого цис-соединения; точка плавления 70°С.

Пример А17: {2-[(Е)- и {2-[(Z)-2-(4-нитрофенил)-этенил]-фенокси)-этилацетат

При температуре от 0 до 5°С 218 г соли фосфония из примера А13 и 0,5 моль раствора метилата натрия одновременно порциями добавляют (после соответствующего обесцвечивания) к раствору 104 г (0,5 моль) альдегида из примера А15 и 750 мл этанола. После обесцвечивания реакционного раствора осажденные кристаллы извлекают отсасыванием и перекристаллизовывают из этанола. Это чистое транс-соединение.

Выход: 51 г; точка плавления 118°С.

Для выделения цис-фракции действуют, как описано в примере А16.

Выход: 48 г; точка плавления 59°С.

Пример А18: 2-[(Е)- и 2-[(Z)-2-(4-нитрофенил)-этенил]-бензолсульфонат натрия

К раствору 83,2 г (0,4 моль) бензальдегид-2-сульфоната натрия в 500 мл метанола добавляют 0,4 моль метилата натрия (в метанольном растворе). К полученному раствору при 0°С при перемешивании по каплям добавляют раствор 173 г соли фосфония из примера А13 и 400 мл метанола. После обесцвечивания реакционного раствора растворитель удаляют под вакуумом, остаток суспендируют в 300 мл воды и извлекают отсасыванием на холоде. Твердый продукт суспендируют в 1 л диэтилового эфира, извлекают отсасыванием, сушат на воздухе и затем кипятят с 1,3 л нитрометана и извлекают отсасыванием из нерастворенного остатка (транс-соединение). Цис-соединение кристаллизуется во время охлаждения.

Выход цис-соединения: 53 г; точка плавления 247°С (из нитрометана).

Выход транс-соединения: 20 г; точка плавления 323°С.

Пример А19: 2-[(Е)-2-(4-аминофенил)-этенил]-бензолсульфонат натрия

К раствору 16 г цис-нитросоединения из примера А18 в 60 мл этанола при 80°С по каплям добавляют раствор 17,5 г Na₂S×9Н₂О и 20 мл воды и перемешивают в течение 1 часа. Затем растворитель удаляют под вакуумом и остаток перекристаллизовывают из нитрометана.

Выход: 13 г; точка плавления >360°С.

Пример А20: {2-[(Z)-2-(4-аминофенил)-этенил]-фенокси}-этилацетат

Раствор 16 г хлорида аммония в 60 мл воды при максимум 30°С при перемешивании медленно по каплям добавляют к смеси 65,4 г (0,2 моль) нитросоединения из примера А16, 800 мл ацетона и 200 г цинковой пыли. Затем все перемешивают в течение 20 часов. Затем цинк извлекают отсасыванием и промывают 1 л ацетона при нагревании. Ацетоновые растворы концентрируют. Остаток растворяют в 800 мл воды и 25 мл концентрированной соляной кислоты и сразу же дважды экстрагируют этилацетатом. Затем его быстро слегка защелачивают гидроксидом натрия и сразу же еще раз экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и растворитель удаляют под вакуумом.

Выход: 55 г, коричневое масло. Неочищенный продукт затем обрабатывают.

Пример А21: {2-[(Е)-4-{4-аминофенил)-этенил]-фенокси}-этилацетат

Соединение, указанное в заголовке, получают из транс-нитростильбена из примера А17 согласно примеру A20.

Выход: 45 г, желтые кристаллы; точка плавления 118°С.

Пример А22: {2-[(Z)-4-(4-аминофенил)-этенил]-фенокси}-этилацетат

Соединение, указанное в заголовке, получают из цис-нитростильбена из примера А17 согласно примеру А20.

Выход: 35 г, желтое масло.

Пример А23: [4-((Z)-2-{4-[(1Е)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-этилацетат

В горячую смесь с температурой 50°С из 80 мл воды, 600 мл этанола и 60 мл концентрированной соляной кислоты быстро переносят 71 г цис-аминостильбена из примера А22; смесь интенсивно перемешивают и быстро охлаждают до 0°С. Затем сразу же смешивают с раствором 18 г нитрита натрия и 70 мл воды и перемешивают в течение 1 часа при 0°С. Затем этот раствор быстро смешивают при интенсивном перемешивании при 0°С со смесью 80 г 40%-ного водного раствора диметиламина, 120 г карбоната натрия и 1 л воды. Перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре, продукт реакции извлекают отсасыванием, сушат и далее обрабатывают как неочищенный продукт.

Выход: 63 г.

Пример 24: [4-((Е)-2-{4-[(1Е)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-этилацетат

Соединение, указанное в заголовке, получают из 0,033 моль транс-аминостильбена из примера А21 согласно примеру 23.

Выход: 7 г, точка плавления 113°С.

Пример 25: [2-((Е)-2-{4-[(1Z)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-этилацетат

Соединение, указанное в заголовке, получают из 0,2 моль цис-аминостильбена из примера А20 согласно примеру 23. Светло-желтое масло далее обрабатывают как неочищенный продукт.

Выход: 55 г.

Пример 26: [2-((Z)-2-{4-[(1Е)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-ацетат натрия

С кипящим раствором 35,3 г триазенилстильбенового эфира из примера 25 и 850 мл этанола смешивают 50 г 10%-ного раствора гидроксида натрия и нагревают с обратным холодильником в течение еще 20 минут. Затем добавляют 300 мл воды и 350 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Соединение, указанное в заголовке, выпадает в осадок, его извлекают отсасыванием, сушат и перекристаллизовывают из ацетонитрила.

Выход: 33 г, бежевое; точка плавления 72°С.

Пример 27: [4-((Z)-2-{4-[(1Z)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-ацетат натрия

С кипящим раствором 35,3 г транс-триазенилстильбенового эфира из примера 24 и 850 мл этанола смешивают 50 г 10%-ного раствора гидроксида натрия и нагревают с обратным холодильником в течение еще 20 минут. Затем добавляют 300 мл воды, а осажденную натриевую соль извлекают отсасыванием.

Выход: 30 г.

Пример 28: [4-((Z)-2-{4-[(1Z)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-уксусная кислота

5 г соединения из примера 27 растворяют в смеси 250 мл трис-(диметиламид)-фосфорной кислоты и 250 мл воды при нагревании. Затем охлаждают до 40°С и извлекают отсасыванием. Фильтрат охлаждают до 30°С и смешивают с 60 мл чистой уксусной кислоты. При дальнейшем охлаждении сразу же добавляют 50 мл ледяной воды и 30 мл чистой уксусной кислоты. Через 10 минут соединение, указанное в заголовке, извлекают отсасыванием.

Выход: 3 г; точка плавления 170°С.

Пример 29: триэтаноламмония [4-((Z)-2-{4-[(1Z)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-этенил)-фенокси]-ацетат

Соединение из примера 28 в форме соли триэтаноламина подвергают биологическому исследованию в виде 10%-ного водного раствора.

Пример 30: дигидрат 2-((Z)-2-{4-[(1Е)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил)-этенил)-бензолсульфоната натрия

К раствору 15 г цис-аминостильбена из примера А19, 10 мл воды и 24 мл концентрированной соляной кислоты при 0°С по каплям добавляют раствор 3,5 г нитрита натрия и 5 мл воды, перемешивают в течение 10 минут и полученный раствор соли диазония быстро по каплям добавляют в раствор 30 г карбоната натрия, 60 мл воды и 7 г 40%-ного водного раствора диметиламина. Перемешивают в течение 40 минут, кристаллический продукт реакции извлекают отсасыванием и перекристаллизовывают из ацетонитрила.

Выход: 17 г.

III. Производные трифенилэтилена

Реакционная схема:

Пример А31: 1-[бром-(4-метилфенил)-метил]-4-метилбензол

В суспензию 100 г бис-(4-метоксифенил)-карбинола и 46 г хлорида кальция в 1,7 л бензола вводят до насыщения бромистый водород. Полученную соль извлекают отсасыванием и фильтрат концентрируют.

Выход: 98 г.

Пример А32: [бис(4-метоксифенил)-метил]-трифенилфосфония бромид

Соединение, указанное в заголовке, получают из бромида примера А31 согласно примеру А13.

Выход: 99 г.

Пример А33: 1-[2,2-бис(4-метоксифенил)-винил]-4-нитробензол

Соединение, указанное в заголовке, получают из соли фосфония из примера А32 и 4-нитробензальдегида согласно примеру А17.

Выход: 14 г.

Пример А34: 4-[1-(4-гидроксифенил)-2-(4-нитрофенил)-винил]-фенол

К смеси 150 г соединения из примера А33 и 300 мл пиридина по каплям добавляют 380 г концентрированной соляной кислоты. Затем реакционный раствор нагревают до 150°С в течение 3 часов. Затем его выливают на 2 л ледяной воды, доводят до явно кислой реакции соляной кислотой, и соединение, указанное в заголовке, извлекают отсасыванием, промывают водой и сушат.

Выход: 110 г.

Пример А35: {4-[1-[4-{2-этокси-2-оксоэтокси)-фенил]-2-(4-нитрофенил)-винил]-фенокси}-этилацетат

Соединение, указанное в заголовке, получают из фенола примера А34 согласно примеру А14.

Выход: 14 г.

Пример А36: {4-[1-[4-(2-этокси-2-оксоэтокси)-фенил]-2-{4-аминофенил)-винил]-фенокси}-этилацетат

Соединение, указанное в заголовке, получают из нитросоединения примера А35 согласно примеру А20.

Выход: 13 г.

Пример А37: динатрия (4-{2-(4-аминофенил)-1-[4-(2-оксидо-2-оксоэтокси)-фенил]-винил}-фенокси)-ацетат

Смесь 13 г эфира из примера А35, 20 мл воды и 5,3 г гидроксида калия нагревают в течение 5 часов с обратным холодильником. Затем образовавшийся спирт удаляют, кристаллический остаток отмучивают с 50 мл воды, извлекают отсасыванием и сушат.

Выход: 10 г.

Пример 38: динатрия (4-{2-{4-[(1Е)-3,3-диметил-1-триазенил]-фенил}-1-[4-(2-оксидо-2-оксоэтокси)-фенил]-винил}-фенокси)-ацетат

К смеси 10 г динатриевой соли из примера А37, 2 г гидроксида натрия, 1,7 г нитрита натрия и 50 мл воды при температуре 0-5°С по каплям добавляют раствор 100 мл воды, 130 мл диметилформамида и 16 мл концентрированной соляной кислоты. Полученный водный раствор соли диазония при температуре 0-5°С добавляют в раствор 23 г карбоната натрия, 14 мл 40%-ного водного раствора диметиламина и 50 мл воды. Затем смесь концентрируют досуха. Остаток растворяют в необходимом количестве воды и смешивают со 100 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Выпавшее в осадок кристаллическое соединение, указанное в заголовке, извлекают отсасыванием и сушат.

Выход: 5,7 г.

Примеры in vivo

Все эксперименты были проведены на самках крыс Wistar при стандартных условиях содержания с контролируемым светом и температурой. Животные получали воду и пищу по желанию.

Раковую опухоль молочной железы вызывали в соответствии с методом, описанным в Steinhoff[x]. Вкратце, самки крыс (возраст 90-100 дней) получали начальную дозу 150 мг/кг бензидина подкожной инъекцией. Последующие еженедельные дозы 100 мг/кг бензидина давали в течение 6 недель.

Начиная с 8-й недели с момента первой инъекции бензидина наличие раковой опухоли молочной железы проверяли пальпацией. Множество ощутимых опухолей было обнаружено на 10-й неделе после начала введения бензидина. Локализацию индивидуальных опухолей и появление новых опухолей регистрировали во времени.

Объем индивидуальных опухолей измеряли микромером и рассчитывали согласно методу Томайко и Райнолдса, используя формулу V(мм³)=0,5234·(длина·ширина·высота). Масса опухоли оценивали, исходя из полученного объема из расчета 1 г/см³ плотности. Для каждого животного рассчитывали массу каждой опухоли и определяли опухолевую нагрузку, которая составляет сумму масс всех индивидуальных опухолей отдельно взятого животного.

Животных с массой опухоли в 0,5-0,8 г случайным образом делили на две группы: подопытная группа и контрольная группа (обработка растворителем). В среднем в каждой группе рост и эффект терапии оценивали на 12-24 животных.

Экспериментальные соединения растворяли в физиологическом растворе и вводили через желудочный зонд по схеме 5 дней в неделю в течение периода времени максимально 7 недель. Дозовые уровни, выбранные для отдельных соединений, основывались на переносимости соединений и противоопухолевой эффективности, выявленных в предварительных скрининговых экспериментах. Введенные дозы указаны в тексте на графических материалах.

Влияние терапии на рост опухоли оценивали обычно раз в неделю, в некоторых случаях в отдельные моменты времени проводили дополнительную оценку. Для оценки был использован вышеописаный метод. Влияние терапии экспериментальными соединениями оценивали на индивидуальных опухолях. Средние массы опухолей рассчитывали в заданный момент времени и представляли на диаграммах. Когда опухолевая нагрузка отдельного животного превышала 7 г массы опухоли, животное умерщвляли.

Репрезентативный пример контрольной группы изображен на Фиг.1; данные по эффективности экспериментальных соединений представлены на Фиг.2-10. Химическая структура соответствующего тестированного соединения изображена в виде вставки в изображение.

Оценка

Индуцированные бензидином опухоли у крыс растут быстро, если остаются без терапии (Фиг.1). В сравнении с другими моделями химически индуцированных опухолей у крыс, индукция бензидином приводит к индукции эстроген-резистентных и отвечающих на эстроген опухолей в сравнимых количествах. Следовательно, в этой модели антиэстрогенные соединения только частично эффективны (к примеру, приводят к снижению роста опухоли, но не к ремиссии), так как только часть опухолей реагирует на антиэстрогенную терапию.

Введение 1-фенил-3,3-диметилтриазена ясно показывает, что сильное и селективное противоопухолевое действие на опухоль молочной железы не является классовым эффектом триазеновых соединений (Фиг.2). 1-фенил-3,3-диметилтриазен был неактивен в качестве противоопухолевого агента в этой модели животной опухоли. При уровне дозирования в 100 мг/кг/день наблюдалось уменьшение массы животных на 20-25% по сравнению с контрольной группой и общий вид животных показывал, что были достигнуты границы переносимости. Одно из животных умерло на 18-й день обработки.

В противоположность этому все протестированные примеры заявленных классов соединений (Фиг.3-11) проявили не только кратковременное уменьшение скорости роста опухолей по сравнению с контрольной группой, но при продолжении терапии в течение нескольких недель скорость роста опухоли прогрессивно уменьшалась и было достигнута частичная или полная ремиссия опухолей при указанных дозах. Интересно то, что все опухоли у индивидуальных животных показали реакцию на терапию тестируемыми соединениями. Индивидуальные опухоли различались в плане задержки начала противоопухолевой активности, но к 42 дню терапии во всех опухолях наблюдалось по меньшей мере уменьшение роста опухоли либо частичная/полная ремиссия опухолей при некропсии.

В пределах проверенных дозировок наблюдалась хорошая переносимость соединений. И хотя в подвергнутых терапии группах наблюдалось снижение массы в пределах 10-15%, внешний вид и состояние животных не привлекали особого внимания. Ни у каких животных не наблюдалось признаков связанной с соединениями токсичности, что свидетельствует о том, что заявленные соединения обладают сильным противоопухолевым действием и достаточно широким терапевтическим окном, что делает заявленные соединения многообещающими кандидатами для возможного клинического применения.

Изобретение описывает четыре группы диалкилтриазенилнесущих эстрогенов и антиэстрогенов, пригодных для применения в качестве химиотерапевтических лекарственных средств для лечения карцином половых органов людей и животных. 7 н.п. ф-лы, 11 ил.

1. Диалкилтриазенильное производное, выбранное из группы, состоящей из соединения формулы (I)

где R¹ представляет собой водород, N=N-NR^7AR^7B, O(CR⁸R⁹)_nCO₂H, CO₂Н или SO₃Н,

R² представляет собой ОН, ОСН₃, N=N-NR^7AR^7B или O(CR⁸R⁹)_nCO₂H,

R³ представляет собой водород, N=N-NR^7AR^7B, O(CR⁸R⁹)_nCO₂H, CO₂H или SO₃H,

R⁴ и R⁶ независимо друг от друга представляют собой водород, O(CR⁸R⁹)_nСО₂Н, (CR⁸R⁹)_nCO₂H или С₆Н₄OCH₂CO₂Н и

R⁴ кроме того представляет собой (СН₂)₁₀CON(С₁-С₄алкил)₂,

R⁵ представляет собой водород или ОН,

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил,

R⁸ и R⁹ независимо друг от друга представляют собой водород, метил или этил,

Х представляет собой СО, СНОН или С(ОН)-С=СН, и

n представляет собой целое число от 1 до 10,

при условии что только один из остатков R¹-R³ представляет собой N=N-NR^7AR^7B;

соединения формулы (VI)

где R представляет собой водород, метил или этил,

R¹ представляет собой водород, хлор, метил, этил, CH₂CO₂H, СН(СН₃)CO₂Н, ОСН₂CO₂Н, ОСН(СН₃)CO₂Н или SO₃Н,

R² представляет собой ОН, ОСН₃, ОСН₂CO₂Н, ОСН(СН₃)CO₂Н или N=N-NR^7AR^7B,

R³ представляет собой водород, хлор, предпочтительно в положении 6, или N=N-NR^7AR^7B,

R⁴ представляет собой водород, метил, этил, СН₂CO₂Н или СН(СН₃)CO₂Н, и

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил,

при условии что либо R², либо R³ представляет собой N=N-NR^7AR^7B, a пунктирные связи показывают, что соединения включают производные как этана, так и этилена;

соединения формулы (XVI)

где R представляет собой водород, хлор, хлорметил или этил,

R¹ представляет собой ОСН₂CO₂Н или ОСН(СН₃)CO₂Н,

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой водород, SO₃H или N=N-NR^7AR^7B,

R³ и R⁵ независимо друг от друга представляют собой водород, ОН, ОСН₃, ОСН₂СО₂Н, ОСН(СН₃)CO₂Н или N=N-NR^7AR^7B, и

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил,

при условии что только один из остатков R²-R⁵ представляет собой N=N-NR^7AR^7B;

соединения формулы (XXII)

где R представляет собой CH₂CO₂Н, СН(СН₃)CO₂Н, SO₃Н или N=N-NR^7AR^7B;

R¹ представляет собой водород, ОСН₂CO₂Н ОСН(СН₃)CO₂Н, SO₃Н или N=N-NR^7AR^7B;

R² представляет собой ОСН₃, СН₂CO₂Н, СН(СН₃)CO₂Н, SO₃Н;

R³ представляет собой водород, СН₂CO₂Н, СН(СН₃)CO₂Н, SO₃Н или N=N-NR^7AR^7B;

R^5/6 представляет собой Н или N=N-NR^7AR^7B;

R⁴ представляет собой ОН, ОСН₃, СН₂CO₂Н, СН(СН₃)CO₂Н или SO₃Н;

R^7A и R^7B независимо друг от друга представляют собой алкил,

при условии что только один из R или R³, или R^5/6 представляет собой N=N-NR^7AR^7B;

и их соли, сольваты и сольваты этих солей,

за исключением 4-(3,3-диметил-1-триазенил)-3-метокси-экстра-1,3,5(10)-триен-17-она.