Способ получения алкеновых производных или их солей Советский патент 1989 года по МПК C07C11/02 

Изобретение относится к получению новых соединений, а именно алкеновых производных общей формулы

/ R,-(O) -

(CHi nCIhRl

где водород шти гидроксил;

водород,гидроксил,метоксил, или 2-(N,H-димeтилaминo)этoк сил;

хлор или бром; п 1 или 2,

или их солей, которые обладают эстро- генной, антиэстрогенной, прогеста- новойи противоопухолевой активностью и могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - разработка на основе известного метода способа получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами,

, и м е р 1.а 4- (Тетрагидро- пиран-2-ил)окси -1 ,2-дифенилбутан- -1-он,

Смесь, содержащую 19,6 г дезокси- бензоина,20,9 г тетрагидропиран-2-ил- эфир-защищенного бромэтанола, 1,0 г ТЭБАХ и 50 мл 48%-ного раствора гидроокиси натрия, перемешивают в течение 2 ч при 75°С, Далее добавляют воду, продукт экстрагируют в толуоле. Раствор толуола промывают водой и сушат сульфатом натрия , В заключе- ние растворитель выпариваюту Получают количественный выход, но маслообразный продукт , содержит около 20% О-алкилированного продукта,

Ь. Получение А-(Тетрагидропи- ран-2-ил)окси2-1,1,2-трифенилбу- тан-1-ола.

Готовят комплекс Гриньяра-в без, водных .условиях с использованием 3,6 г магниевой стружки в 25 мл безводного тетрагидрофурана, которые pea гируют с 23,6 г бромбензола в 50 мл безводного тетрагидрофурана. Далее добавляют остаток, полученныйпосле выпа15ивания на стадии а , в 75 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную смесь кипятят . с обратным холодильником в течение 2ч, Охлажденную смесь выливают в насыщенный/раствор хлорида аммония. После перемешивания встряхиванием отделяют органичес- кий слой. Процесс экстракции повторя- ют с использованием эфира. Далее органические слои объединяют и суша сульфатом натрия, В заключение растворитель выпаривают,, ... . с. 1 ,1 ,2-Трифенилбутан-1.,-4-диол. Остаток, полученный в результате выпаривания на стадии в, подвергают

5

0

5

0

5

0

5

0

5

растворению в смеси, содержащей 400 мл абсолютного этанола, 10 г концентрированной серной кислоты и 75мл воды. Эту смесь перемешивают в течение 2-4 при комнатной температуре,затем полученный раствор нейтрализуют с использованием 2 М раствора гидроокиси натрия. Далее,этанол выпаривают, и к остатку добавляют воду. Затем полученный продукт экстрагируют в этилацетате. Этилацетатный раствор сушат сульфатом натрия, и растворитель выпаривают. Полученный продукт пepeкpиcтaлJтизoвывaют из толуола. Выход составляет 16,5 г (52% от дезокси- бензоина), т.пл, 185-187 С,

Спектр-ПМР () S : 2,06 (2Н, SK); 3,83 (2Н,Т); 3,92 (1Н, Т); 4,76 (2Н, с); 6,85-7,45 (13Н,М); 7,68 (2Н, gg).

Пример2, а. 4-(Teтpaгидpo- пиpaн-2-ил)oкcи 2-фeнил-l-(4-мeтoкcи- фeнил )-бутан-1-он,

Соединение получают из 22,6 г 4-метоксидезоксибензоина и 20,9 г тетрагидропиран-2-ил-эфир-защищенно- го бромэтанола в соответствии с методикой, , описанной В примере 1,

b,4-(Тетр аги др о пир ан- 2-ил ) ок си - -1,2-дифенил41-(4-метоксифенил)бу- тан-1-оп (RR,SS и RS. SR).

Изомеры (RR, SS) получают из остатка после выпаривания, приготовленного в примере la и 28,1 г 4-бромани- зола в соответствии с методикой, описанной в примере 1Ъ,

Изомеры (RS,SR) получают из остатка после выпаривания, приготовленного в примере 1Ь, и 23,6 г бромбензола в соответствии с той же самой методикой, что и указанные выше изомеры (RR, SS),.,

c,1,2-Дифенил-1-(4-метоксифенил)бу- тан-1,4-диол (RR,SS и RS,SR),

Изомеры (RR,SS) получают из остатка после выпаривания изомеров (RR,SS), произведенных на стадии b в соответствии с методикой, описанной в примере 1с. Продукт подвергают .перекрис-. таллизации из толуола Выход составляет 13,9 г (40% от дезоксибензоина). Т.пл,124- 2б с,

(RS,SR)-изомеры получают в результате выпаривания остатка () изомеров, полученных на стадии а в соответствии с той же самой методикой, что и (RS,SS)-изoмepы,yкaзaнныe выше,.

Продукт подвергают перекристаллизации из тйлуола. Выход составляет 16,0 г (46% от А-метоксибензои- на). Т.пл. 72-174°С.

d. 1,2-Дифeнил-l-(4-мeтoкcи- фeнил)- -бyтeн-A-oл (Z и Е),

Смесь изомеров (Z,E), Реакцию осуществляют в безводных условиях. Вначале 34,8 г 1,2-дифенил-1-(4-ме- Q {OKсифенил) бутан-I ,4-диола растворяют в 200 мл ангидрида уксусной кислоты. Далее добавляют 30 мл ацетил- хлорида. Полученную смесь выпаривав ют в течение 2 часов при 1 , после че- 5 го растворитель выпаривают (промежу- точный продукт представляет собой чистый (г,Е)-4-ацетокси-1,2-дифенил-1-(4- метоксифенил)-1-бутен). Далее добавпри комнатной температуре. Растворитель выпаривают, и остаток, полученный после вьптаривания, растворяют в 1 орячем петролейном эфире. Нерастворимый материап удаляют фильтрацией. Маточ 1ый раствор выпаривают и остаток, полученный после выпаривания, перекристаллизовывают из метанола. Выход щэодукта составляет 26,7 г (68%). Т.пл.116-118°С.

Спектр ПНР (CDC1,) : 3,01(2Н,т); 3,28 (2Н,т); 3,67 (ЗН,с); 6,54 (2Н,д); 6,8 (2Н,д); 7,17 (5Н,с); 7,32 (5Н,с).

Масс-спектр: т/е 392/394 (), 299(65), 221(79), 191(94), 121(100), 91(50),

Пример 3. а. 4- (Тетрагидро- пиран-2-ил) ,2-дифенил- -4-| 4ляют 200 мл 94%-ного этанола, 20 мл 20 (2-(N,N-димeтил-a шнo)этoкcи фeнил бy- воды и 45 мл 20%-ного раствора гидро- тан-1-ол (RR,SS и RS, SR)

(R,R и SS) изомеры получают из вы- паренног о осадка, полученного в примере 1а, и 36,6 г l-6poM-4- 2-(N,NT

окиси натрия к указанному остатку, образовавшемуся после выпаривания, Полученную смесь кипятят с обратным

нейтрализуют 2 М хлористоводородной кислотой, после чего этанол выпаривают. К остатку добавляют воду, и продукт экстраг ируют в этилацетате

35

40

холодильником, в течение 1 ч. РаствЬр 25 диметиламино)этокси | бензола по методике примера I.

(RS,SR) изомеры получают следующим путем.

Ь. 1 ,2-ДифенИл-1- 4- 2-(К,К-диме- Этилацетатный раствор сушат над суль- ЗО тиламино)этокси фенилJ6yTaH-1,4-диол фатом натрия, и растворитель выпари- (RR,SS и .RS,SR). вают. Выход чистой смеси изомеров (Z:E в соотношении 7:3) является коли- чественныму-Т.пл. 91-105 С,

Остаток, полученный после выпари- вaшiя смеси изомеров, перекристалли- зовывают из смеси, состоящей из гек- сана и этанола, в соотношении 95:5,. после чего получают 14,5 г (44%) (Е-)-изомера, т,пл.121-123 ,С.

Спектр ,)| : 1,28 ().; 2,73(2Н,т);3,57 (2Н,т); 8,63 (ЗН,с); 6,53 (2Н,д); 6,80 (2Н,д); 7,15 (5Н,м); 7,29 (5Н,с).тиламино)этокси1фенил -1-бутен-4-олМасс-спектр т/е: () ,299(100), дд (Z и Е). 221 (46), 191 (70), 121 (46).91 (60).По методике примера 2d получают

(Е)-изомер. Т.пл. 107-110°С.

Спектр ПМР (CDCl) S : 1,31 (lH,c), 2,80 (2Н,т), 3,6 (2Н,т); 3,81 (ЗН,. с); 6,80-7,35 (14Н,м).

е. 4-Бром-1,2-дифенил-1-(4-метокг сифенил)1-бутен (Z) .

33,0 г (Z)-l ,2-дифенил- 1-(4-меток- сифенил)- -бутен-4-ола растворяют в 500 мл безводного ацетонитрила.Далее при перемешивании добавляют 39,3 г трифенилфосфипа и 49,8 г

(RR,SS)-изoмepы получают из выпаренного осадка (RR,SS)-изoмepoв, полученных на стадии а соответственно по методике примера 2 с, исключая только то, что используют 20 г концентрированной серной кислоты. Выход 19,5 г (48% из дезоксиб нзиона).Т.пл. 165-167 с (из толуола).

(ИЗ,5К)-изомеры были получены таким же путем. Т.пл. 139-14 °С (из толуола) .

с. 1,2-Дифенил-1 - 4- , N-димесмесь изомеров Z и Е.

Выделение (Z)-H3OMepa, как свободного основания.

50

55

Смесь изомеров (Z:E в соотношении 2:1) подвергают перекристаллизации из толуола, в результате чего получают 15,9 -г (41%) (Z)-H30Mepa, имеющего Т.пл. 110-112°С.

Спектр ПМР (CDCl) : 2,28(6Н,с); 2,60 (2Н,т); 2,7(2Н,т); 3,53 (2Н,т); 3,89 :(2Н,т); 6,53 (2Н,д); 6,78 (2Н,д); 7,12 (5Н,с), 7,28 (5Н,с).

тетрабромида углерода. Процесс перемешивания проводят в течение 1 ч

при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, и остаток, полученный после вьптаривания, растворяют в 1 орячем петролейном эфире. Нерастворимый материап удаляют фильтрацией. Маточ 1ый раствор выпаривают и остаток, полученный после выпаривания, перекристаллизовывают из метанола. Выход щэодукта составляет 26,7 г (68%). Т.пл.116-118°С.

Спектр ПНР (CDC1,) : 3,01(2Н,т); 3,28 (2Н,т); 3,67 (ЗН,с); 6,54 (2Н,д) 6,8 (2Н,д); 7,17 (5Н,с); 7,32 (5Н,с).

Масс-спектр: т/е 392/394 (), 299(65), 221(79), 191(94), 121(100), 91(50),

Пример 3. а. 4- (Тетрагидро- пиран-2-ил) ,2-дифенил- -4-| 4(2-(N,N-димeтил-a шнo)этoкcи фeнил бy тан-1-ол (RR,SS и RS, SR)

Ь. 1 ,2-ДифенИл-1- 4- 2-(К,К-диме- тиламино)этокси фенилJ6yTaH-1,4-диол (RR,SS и .RS,SR).

тиламино)этокси1фенил -1-бутен-4-ол(RR,SS)-изoмepы получают из выпаренного осадка (RR,SS)-изoмepoв, полученных на стадии а соответственно по методике примера 2 с, исключая только то, что используют 20 г концентрированной серной кислоты. Выход 19,5 г (48% из дезоксиб нзиона).Т.пл. 165-167 с (из толуола).

(ИЗ,5К)-изомеры были получены таким же путем. Т.пл. 139-14 °С (из тоуола) .

с. 1,2-Дифенил-1 - 4- , N-димесмесь изомеров Z и Е.

Выделение (Z)-H3OMepa, как свободного основания.

Смесь изомеров (Z:E в соотношении 2:1) подвергают перекристаллизации из толуола, в результате чего получают 15,9 -г (41%) (Z)-H30Mepa, имеющего Т.пл. 110-112°С.

Спектр ПМР (CDCl) : 2,28(6Н,с); 2,60 (2Н,т); 2,7(2Н,т); 3,53 (2Н,т); 3,89 :(2Н,т); 6,53 (2Н,д); 6,78 (2Н,д); 7,12 (5Н,с), 7,28 (5Н,с).

7 15

Выделение (г)-изомера в виде хло- ристоводородной соли. Смесь изомеров (Z:E в соотношении 2:) подвергают растворению в этаноле, и затем добавляют избыточное количество концентрированной хлористоводородной кислоты. Растворитель выпаривают , и далее,полученный остаток дважды подвергаютг . - перекристаллизации из этанола, в результате чего получают 12,3 г (29%) (Е)-изомера в виде хлористоводородной соли, Т,пл, 166-168°С (из ацетона).

Гидрохлорид (Z)-изомера также получают из (Z) изомерного основания. (Z)-изoмep растворяют в этаноле Далее пропускают через раствор газообразный хлористый водород, В заключение растворитель выпаривают.

Выделение СЁ)изомера,

Маточные растворы, полученные при выделении гидрохлорида (Z)-изoмepa,

Соль лимонной кислоты может быть получена следующим образом, 15Вначале 40,6 г (Z)-изoмepa-, в виде свободного основания, растворяют в 175 мл теплого ацетона и 24,5 г лимонной кислоты в 100 мл теплого ацетона. Затем растворы соединяют, 20 и смесь охпаждаютч Цитрат собирают фильтрацией, его температура плавления 160-162 С,

(Е)-изомер, Соединение.получают из СЕ)-1,2-дифенил-1- 4- 2-(Н,Ыобъединяют и растворитель выпаривают, 25 диметштамино)этокси фенил 1-бутен- Выпаренный остаток подвергают пере- -4-ола, по той же самой методике,что

и соответствующий (Z)-изoмep, Хло-- ристоводородную соль кристаллизуют из толуола. Выход составляет 35,8 г (81%), т,пл, 183- 85 С, Этот продукт может быть отделен от солевой формы по той же самой методике, что и соответствующий (Z)-изомерk Температура плавления равна 69-71 С. (из гексана % спектр ЯМР (с Clj): 2,34(бН,с) 2,74 (2Н,т); 2,97 (2Н,т);3,43 (2Н,т) 4,08 (2Н,т); 6,80-7,30 (14Н,м).

кристаллизации из ацетона, в результате чего получают 9,7 г (23%) (Е)- изомера в виде соли гидрохпорида, Т,пл. 235-237 С, (Е)-изомер может 30 быть отделен от соли тем же самым способом, что и смесь изомеров, указанных вьппе. Температура плавления (Е)-изомера, как свободного основания, составляет 129-131 С (из толуо- эс JJ

ла).

.Спектр ПИР;(CDC1,)S :2,31 (2Н,с); 2,71 (2Н,т); 2,78 (2Н,т);,3,57 (2Н,т); 4,05 (2H,T)j 6,87 (2Н,т); 6,94 U5H/C); 7,10 (5Н,с); 7,21 (2Н,д).40

d. 4-Хлор-1 ,2-дифенш1-1 (N,N : диметиламино)- этокси фенш -1-бутен (Z и Е).

(Z)-изомер. Реакцию проводят в безводных условиях. Вначале 42,4 г 45 (Z)-l,2-дифенил-1- 4-С2-(К,Н-диметил- амино) этокси фенш1| -1 -бутен-4-ола растворяют в 250 мл хлороформа. Далее по каплям добавляют 23,8 г тио- нилхлорида. Полученную смесь кипятят с обратньм холодильником в течение 3 ч. Из полученного продукта выпаривают растворитель и затем продукт перекристаллизовывают из этилацетата

50

8

0

раствора карбоната натрия, поате че- то продукт экстрагируют в толуоле Толуольный раствор сушат, и растворитель выпаривают, Т.пл. 108-110 С (из ацетона).

Спектр ПМР CCDCI,) : 2,27 (бН,с); 2,63 (2Н,т)1 2,91 (2Н,т); 3,41 (2Н,т); 3,92 (2Н,т); 6,54 (2Н,д); 6,79 (2Н,с); 7,15 (5Н,с); 7,31 (5Н,с).

Масс-спектр: т/е 405/407 (И ,7/3), 72 (20), 58 (100).

Соль лимонной кислоты может быть получена следующим образом, 5Вначале 40,6 г (Z)-изoмepa-, в виде свободного основания, растворяют в 175 мл теплого ацетона и 24,5 г лимонной кислоты в 100 мл теплого ацетона. Затем растворы соединяют, 0 и смесь охпаждаютч Цитрат собирают фильтрацией, его температура плавления 160-162 С,

(Е)-изомер, Соединение.получают из СЕ)-1,2-дифенил-1- 4- 2-(Н,Ы5 диметштамино)этокси фенил 1-бутен- -4-ола, по той же самой методике,что

диметштамино)этокси фенил 1-бутен- -4-ола, по той же самой методике,что

и соответствующий (Z)-изoмep, Хло-- ристоводородную соль кристаллизуют из толуола. Выход составляет 35,8 г (81%), т,пл, 183- 85 С, Этот продукт может быть отделен от солевой формы по той же самой методике, что и соответствующий (Z)-изомерk Температура плавления равна 69-71 С. (из гексана) % спектр ЯМР (с Clj): 2,34(бН,с); 2,74 (2Н,т); 2,97 (2Н,т);3,43 (2Н,т); 4,08 (2Н,т); 6,80-7,30 (14Н,м).

Масс-спектр: т/е 405/407 (), . 72 (19), 58 (100).

П р И м е р 4. а, 4-Бензилокси- - 1,2-дифенилбутан-1-он.

Соединение получают из 19,5 г дезоксибензоина и 21,5 г бензилэфй рно- го защищенного бромэтанола в соответ-; ствии с методикой, указанной в примере 1а, ..

Ь. 4-Бенвилокси-1,2-дифенш1-1-(4- тетрагидропиран-2-ил-окси фенил)бу- тан-1-ол (RR,SS).

Соединение получают из остатка,полученного пооле выпаривания, как указано в примере 4а, и из 38,6 г тетра- гидропиран-2-ил эфирного защищенного 4- бромфенола в соответствии с методи

Изобретение касается ациклических ненасыщенных соединений , в частности, способов получения алмкеновых производных общей формулы R₄-CH₂-(CH₂M)_N-C(-C₆H₄-N-R₁)-C(-C₆H₄-N-R₂)*M99.(-C₆H₄-N-R₃), где N=1 или 2

R₁ и MR₂-H или OH

R₃-H, OH, OCH₃ или 2-(NM,N-диметиламино)-этоксил

R₄-CI или BR, или их м солей, обладающих эстрогенной, антиэстрогенной, прогестановмой и противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых активных соединений указанного класса. Синтез ведут реакцией соединения формулы R₅-CH₂-(CH₂)_N-CH(-C₆H₄-N-R₆)-C(O)-C₆H₄-N-R₇, где N имеет указанные значения

R₅-тетрагидропиран-2-илокси или бензилокси

R₆-H или тетрагидропиран-2-илокси

R₇-H, метокси или тетрагидропиран-2-илокси, с соединением общей формулы R₈-C₆H₄-N-MG BR, где R₈-H, метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси или тетрагидропиран-2-илокси. Образующееся соединение, в котором R₈-тетрагидропиран-2-илокси или бензилокси, подвергают кислотному гидролизу с последующей дегидратацией и замещением гидроксильной группы на CI или BR и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли. Испытания показывают, что максимальный эстрогенный эффект соединения примера 1 слабее, чем у гексестрола и диэтилстильбэстрола, но оно может антагонизировать эстрогенный эффект этих соединений при их совместном применении. Кроме того, это соединение ингибирует рост MCF - 7 опухоли клеток IN VITRO. Так, увеличение числа выживших клеток в 2 раза по сравнению с контролем наблюдается при концентрации в 10 раз меньшей, чем для гексестрола и диэтилстильбэстрола. 5 табл.

Выход хлористоводородной соли состав- „ кой, описанной в примере 1Ь, ляет 36,7 г (83%). Продукт имеет темг-,с, 4-Бензшшкси-1,2-дифeнил-l-(4пepaтypy точки плавления, равную 194-196°С. Этот продукт может быть отделен от солевой формы с помощью 1 М

оксифенил)-бутан-1-ол (RR,SS),

Соединение получают из остатка, полученного выпариванием из стадии а

кой, описанной в примере 1Ь, с, 4-Бензшшкси-1,2-дифeнил-l-(4оксифенил)-бутан-1-ол (RR,SS),

Соединение получают из остатка, полученного выпариванием из стадии а.

в соответствии с методикой, описанной- в примере 1с,

d, 1 ,2-Ди4)енил-1-(4-оксифенил)бу- тан-1,4-диол.

Остаток, полученный после выпаривания на стадии Ь, подвергают растворению в 300 мл 9А%-ного этанола. Далее добавляют 2 г катализатора - 5%

Выделение (Z) изомерл. Смесь гидроокиси натрия с метиленхтюридным маточным раствором помещают в разделительную воронку. Слой метиленхлорида удаляют, а водный слой нейтрализуют с помощью концентрированной хлористо- водородной кислоты,, после чего осуществляют экстракцию с использованием палладия, нанесенного на активирован- Q этилацетата, Этилацетатный раствор су- ный уголь. Полученную реакционнуюшат над сульфатом натрия, растворисмесь перемешивают при комнатной тем- тель выпаривают. (г)-Изомер подвергают пературе в атмосфере водорода до техперекристаллизации из смеси метанолпор, пока, не израсходуется I эквивалент вода в соотношении 50:50. Выход сос- водорода. Катализатор отфильтровывают. 15 тавляет 6,2 г (31%), продукт имеет Далее растворитель выпаривают, и полученный продукт кристаллизуют из толуо- . Выход составляет 12,7 г (38% от , дезоаксибензоина), т.пл. 192-194 с.

е. 1,2-Дифенил-2-(4-оксифенш1)-1- 20 ° )1Н,с).

бутен-А-ол (Ей Е).Масс-спектр: та/е 315 (М ,35),

По методике примера 2d получают названное соедине гае. Выход чистой смеси изомеров (Z:E в соотношении 1:1) составляют 22,.8 г (72%), т.пл.164-. .

Отделение(Ё)-изомера. Вначале 20,0 г смеси изомеров подверга- ;ют растворению в теплом метилен-, хлориде, затем добавляют и. 5ыточное количество 2 М раствора гидроокиси натрия. После смещения или встряхивания смесь подвергают фильтрации. Осадок, который представляет собой (Е)

изомер в форме натриевой соли суспен- г 6,42 (2Н,д); 6,70 (2Н,д); 7,15(5Н,с); дируют в 2 М хлористоводородной кислоте. Далее (Е)-изомер экстрагируют в этипацетате как свободный феноло

т,пл.169-171 С,

Спектр ПНР (aneTOH-dg) & : 2,70 (2Н,т); 3,52 (2Н,т); 6,48 (2,д); 6,74 (2Н,д); 7,15 (5Н.,с); 7,32

285 (38), 207 (54); 191 (37); 107 (40), 91 (100).

Натриевую соль (г)-изомера полу- 25 чают как описано выше для (Е)-изоме- ра. Т,го1,205-217 с,

f. 4-хлор-1,2-дифeнил-l-(4-oкcи- фeнил)-l-бyтeн (Z и Е).

Используя методику примера 3d-, по- 30 лучают количественный выход, т,ш1, 85-87 С (из метанола).

г

Спектр ПМР (CDjOD )5 : 2,67 , (2Н,т); 3,38 (2Н,т); 4,76 (1,с);

,-. .,

7,30 (5Н,с).

Масс-спектр: т/е: 334/336 (М 94/32), 285 (71), 207 (78), 191 (56), 183 (199) i 107 (55),. 91 (86).

Этилацетатный раствор сушат сульфатом

натрия, и растворитель выпаривают, 40 (Е)-Изомер перекристаллизовывают из смеси вода-метанол, в соотношении 50:50, Выход составляет 7,2 г (36%)

т.пл. 165-167°С, , -- ,. - Спектр ПМР (СВ,СОС1,)У 2,78(2Н,т) ;45 ный выход, Т,пл, 109-1 ,

(Е)-изомер, (Е)-Изомер п по той же самой методике, ч но выше для (2)-изомера, По продукт промывают :петролейн ром. Был достигнут почти ко

3,54 (2Н,т); 6,83 (2Н,д); 6,90-7,35 (12Н,м); 8,32 (Ш.с).

Масс-спектр: га/е 316 (М ,64), 285 (100), 207 (87), 191 (58); 107 (55), 91 (94).

Натриевая соль может быть получена как описано выше. Другой метод заключается в растворе}ши чистого (Е)-изомера в этаноле, добавлении эквивалентного.количества(гидроокиси натрия в этаноле и выпаривании растворителя. Натриевую соль промывают ацетоном. Полученная при этом соль имеет т,ш1, 215-226°С,

Спектр ПМР () : 2 3,42 (2Н,т); 4,79 (1Н,с); 6 6,93 (5Н,с); 7,12 (2Н,д); 7

Пример5, 4-р(Тетра 50 ран-2-ил) ,2-бис 4-( ропиран-2-ил)окси1 фенил бут

a, Соединение получают и 4,4 -бис(тетрагидропнран-2-ш дезоксибензоина и 20,9 г те

55 пиран-2-ил-эфир-защищенного нола в соответствии с методи .санной в примере 1а,

b.4-(Тетрагидропиран-21-фенил-1,2-бис 4-(тетрагид

вода в соотношении 50:50. Выход сос тавляет 6,2 г (31%), продукт имеет

т,пл.169-171 С,

Спектр ПНР (aneTOH-dg) & : 2,70 (2Н,т); 3,52 (2Н,т); 6,48 (2,д); 6,74 (2Н,д); 7,15 (5Н.,с); 7,32

Масс-спектр: та/е 315 (М ,35),

285 (38), 207 (54); 191 (37); 107 (40), 91 (100).

Натриевую соль (г)-изомера полу- 25 чают как описано выше для (Е)-изоме- ра. Т,го1,205-217 с,

f. 4-хлор-1,2-дифeнил-l-(4-oкcи- фeнил)-l-бyтeн (Z и Е).

Используя методику примера 3d-, по 30 лучают количественный выход, т,ш1, 85-87 С (из метанола).

г

Спектр ПМР (CDjOD )5 : 2,67 , (2Н,т); 3,38 (2Н,т); 4,76 (1,с);

6,42 (2Н,д); 6,70 (2Н,д); 7,15(5Н,с);

,-. .,

- , -- ,. - 7,30 (5Н,с).

Масс-спектр: т/е: 334/336 (М 94/32), 285 (71), 207 (78), 191 (56), 183 (199) i 107 (55),. 91 (86).

(Е)-изомер, (Е)-Изомер получают по той же самой методике, что указано выше для (2)-изомера, Полученный продукт промывают :петролейным эфиром. Был достигнут почти количественный выход, Т,пл, 109-1 ,

Спектр ПМР () : 2,96 (2Н,т); 3,42 (2Н,т); 4,79 (1Н,с); 6,79 (2Н,д); 6,93 (5Н,с); 7,12 (2Н,д); 7,12(5Н,с),

Пример5, 4-р(Тетрагидропи- ран-2-ил) ,2-бис 4-(тетрагид- ропиран-2-ил)окси1 фенил бутан-1-он,

a, Соединение получают из 39,6 г 4,4 -бис(тетрагидропнран-2-шт)окси- дезоксибензоина и 20,9 г тетрагидропиран-2-ил-эфир-защищенного бромэта- нола в соответствии с методикой, опи- санной в примере 1а,

b.4-(Тетрагидропиран-2ил)oKCHj - 1-фенил-1,2-бис 4-(тетрагидропи-

ран-2-ил) окси фенил бутан- 1-ол (RS, SR).

Соединение получают из остатка, проиэведенно1 о в результате выпаривания в примере 5а, и 23,6 г бромбензо ла в соответствии-с методикой, описанной в примере 1Ь.

c,1-Фенил-1,2-биc(4-oкcифeнил)- бyтaн-l ,А-диол (RS,SR).

Соединение получают из остатка, полученного после выпаривания на стадии b в соответствии с методикой, описанной в примере 1с, Полученный продукт перёкристаллизовывают из тол ола. Выход составляет 8,4 г (24% от 4,4 -бис |(тетрагидропиран-2-йл -ок- си дезоксибензоина) , продукт имеет т.ш1.213-215°С.

d,1-Фенил-1,2-бис(4-оксифенил)- 1-бутан-4-ол (Z,E).

35,0 г 1-фенил-1 ,2-биc(4-oкcифe нил)бyтaн-l ,4-диола дефлегмируют в течение 1,5 ч в смеси, содержащей 250 мл этанола и 10 мл концентрирог ванной хлористоводородной кислоты. Раствор обрабатывают древесным углем После фильтрации растворитель выпаривают, а остаток после выпаривания подвергают рекристаллизации из толуола. Выход смеси изомеров (Z;E 1:1) составил 19,2 г (58%), а т.пл. 182- 1964.

ПМР-спектр (CD,00) : 2,64 (1Н,т) 2,74 (1Н,т); 3,50 (2Н,т) 4,77 (ЗН,с 6,38-7,33 (13Н,м).

Примерб,

а-, 5- (Тетрагидропиран-2-ил)окс1 1,2-дифенилпентан-1-он.

Соединение получают из 19,6 г дезоксибензоина и 22,3 г тетрагидро- пиран-2-ил-эфир-защищенного 3-бром- пропанола в соответствии с методикой описанной в примере 1а,

Ь.. 5- (Тетрагидропиран-2-ил)окси 1,2-дифенил-1 - |4- (тетрагидропиран- 2-ил)окси |фёнил пентан-1-ол (RR , SS) ,

Соединение получают из остатка выпаривания, полученного в примере 6а, и 38,6 г тетрагидропиран-2-ил- зфир-защищенного 4-бром фенола в соответствии с методикой, описанной в примере 1Ъ.

с. 1 ,.2-Дифенил-1-(4-оксифенил)пе тан-1,5-диол (RR,SS).

Соединение получают в результате выпаривания остатка, произведенного на стадии Ь, с помощью того же самого метода, что и 1,1,2-трифенилб у-

0

0

5

5

,

тан-1,4-диол в примере 1с, Полученный продукт перёкристаллизовывают из толуола. Выход составляет 11,1 г (32% от бензоксибензоина),продукт имеет т.пл, 182-184 с,

d. 1,2-Дифенил-1-(4-оксифенил)- 1-пентен-5-ол (Z и Е).

Используя методику примера 2d, в результате получают смесь производных пентенола (Z:E в соотношении 1:1), Выход составляет 5,6 г (17%) т,пл, 157-163°С,

Изомеры разделяют по методике, описанной в примере 5е для их гомологов.

(Е)-Изомер подвергают перекристаллизации из смеси метанол:вода в соотношении 2:3, т,ш1, 167-169 С,

Спектр ПНР ()S : 1,36-1,74 (2Н,м); 2,44-2,67 (2Н,м); 3,42 (2Н,т); 4,75 (2Н, с); 7,76 (2Н,м); 6,91 (5Н,мс); 7,05 (ЗН,д); 7, 9 (5Н,с).

Масс-спектр: т/е 330 (М ,100), 265 (39), 207 (73), 183 (89), 107 (57), 91 (90).

(Z)-Изомер перёкристаллизовывают из смеси: вода-метанол в соотношении 1:2, продукт имеет т,ш1. 164-167°С,

Спектр ПНР (СВзОВ )S : 1,35-1,72 (2Н,м); 2,77-2,5 (2Н,м).; 3,39 (2Н,т); 4,74 (2Н,с); 6,40 (2Н,д); 6,68(2Н,д);

285 (19), 207 (70), 183 (97), 115(76), 91 (81).

е, 5-Хлор-1,2-дифенил-1-(4-окси- фенил)-пентен (Z,E).

Используя «етодику примера 3d, получают в результате смесь, состоящую из (Z)- и (Е)-изомеров. Изомерную смесь подвергают перекристаллизации из петролейного эфира с получением в результате 7,7 г (22%) (Z)-изoмepa, продукт имеет т,пл,116-118 С,

Спектр ПНР ()S : 1,56-1,94 (м) ; 2,74-2,66 (2Н,м); 3,35 (2Н,т); 4,74 (1Н, с); 6,41 (2Н,д); 6,49 (2Н,д);

Смесь, содержащую 38,7 г (Z)-l,2- гс дифенил-1 - 4- (N, N-диметил амино) этокси |фенил-бутен-4-ола, 52,4 г три- фенилфосфина, 66,4 г тетрабромида углерода и 400 мл сухого ацетонитри- ла встряхивают в течение 2 ч при 22 С,

30

40

45

50

после чего o6pa3OBaBiirHiicfl продукт в виде осадка отделяют фильтрацией.

Выход 21.) г (А7%), т.пл, ПА- 116 С (перекристаллизация из метанола) .5

Спектр ПМР (CDC1,)S : 2,27 (бН,с), 2,63 (2Н,т); 2,88-3,09 (2Н,м); 3,19роксипрогестерона или молекул, под иерг аемых исследованию. Также были изучены такие комбинации как молек ла + эстрадиол и молекула + медро- ксипрогестерон. Количество живущих клеток спустя 4 ч, 24 ч и 48 ч инкубации определяют методом би.оломи

3,40 (211,м); 3,92 (2Н,т); 6,54 (2Н,д); ценции (внутриклеточное определе6,79 (2Н,д); 7,15 (2Н,с); 7,31

(5Н,с).

Т.пл.цитрата 165-167 С.

Соединения I проявляют эстроген- ную, антиэстрог енную, прогестановую и противоопухолевую активность.

Средство к эстрогенным рецепторам определяют на основе способности молекул конкурировать с ЗН-меченым и

10 ние АТФ). Противоопухолевый эффект исследуют в живом орх анизме по отн шению к вызванной ДМВА-аденокарци- номе молочной железы крысы, способ ной к трансплантации молочной желе

5 и аденокарциноме яичников, и спосо ной к трансплантации пр-остатическо чешуйчатой клеточной карциномы, в соответствии со следующими методам Аденокарцинома молочной железы

5 и аденокарциноме яичников, и способной к трансплантации пр-остатической чешуйчатой клеточной карциномы, в соответствии со следующими методами. Аденокарцинома молочной железы

17-бетаэстрадиолом, в препаратах.цито- зола маток крыс. После инкубации ли- 20 была вызвана с помощью ДМВА у самок ганды, не связанные с рецептором, икрыс в возрасте 35-40 дней. Обработлиганды, связагшые с рецептором, подвергают разделению с помощью известного метода с использованием декстрана

ка молекулами, подвергаемыми исследо ванию, была начата-после того, как удавалось пальпировать опухоли. Раз- 25 мер опухоли и количество опухолей оценивали два раза в неделю. Размеры опухолей в контрольной группе, обработанных только растворителем, сравнивали с опухолями в группах, поди активированного угля.

Эстроген-антиэстрогенный (прогес- теронный) эффект в живом организме был определен следующим образом.

Эстрогенные свойства молекул бьши

определены с помощью подкожного вво- ЗО вергаемых исследованию.

да молекул, суспендированных в кунжутном масле, неразвивщимся мышам в возрасте 21 день, в течение трех последовательных дней. На четвертый день

Активность молекул против других опухолей была исследована путем вве дения молекул с помощью желудочной трубки животным, которым бьта осущ

мышей умерщвляли, и производили взвещи- ствлена имплантация способной к

вание матки. Эстраднол (положительный контроль) увеличивал вес матки. Все матки коррелируют с эстрогенным эф-, фектом молекул.

Антиэстрогенные эффекты молекул были определены аналогичным образом на нёрйзвившихся мышах, :. В этом случае также была исследована способность молекул ингибировать увеличение веса матки, вызванное эстрог еном.

Прогестановые эффекты бьши изуче- ,ны аналогичным образом как и эстррген- ные. Ацетат медроксипрогестерона, который приводит к увеличению ве- . са матки, был использован для cpafe - нения.

Пр отивоопухолевый эффект бьш изучен вне организма следующим образом.

35

трансплантации мышиной саркомы матк

или простатической крысиной адено- саркомы.

Ежедневно или два раза в неделю

40 производили ввод препарата. При этом использовалиMNRI мыши (самки весом п мерно 20 г) и крысы породы Фищер-344 (самцы весом примерно 200 г). Эстрам устинфосат- использовали в качестве

45 позитивного контроля . Трансплантированная крысам эдепокарцинома молоч ной железы была развита-путем инокуляции элементов, вызванной ДМВА карциномы, подкожно здоровым взрослым

50 самкам крыс. Опухоль, которая давала

существенный рост, использовали для iдальнейшей трансплантации. Другие способные к трансплантации опухоли

были инокулированы подкожно, в виде

Рост MCF-7 клеточной линии (аде- промытой клеточной суспензии (Ю нокарцинома молочной железы людей.

клеток/животные).

известная как зависящая от эстрогена) оценивают в присутствии или в отсутствии эстрадиола, ацетата медроксипрогестерона или молекул, под- иерг аемых исследованию. Также были изучены такие комбинации как молекула + эстрадиол и молекула + медро- ксипрогестерон. Количество живущих клеток спустя 4 ч, 24 ч и 48 ч инкубации определяют методом би.оломинесние АТФ). Противоопухолевый эффект исследуют в живом орх анизме по отношению к вызванной ДМВА-аденокарци- номе молочной железы крысы, способной к трансплантации молочной железы,

и аденокарциноме яичников, и способной к трансплантации пр-остатической чешуйчатой клеточной карциномы, в соответствии со следующими методами. Аденокарцинома молочной железы

была вызвана с помощью ДМВА у самок крыс в возрасте 35-40 дней. Обработка молекулами, подвергаемыми исследованию, была начата-после того, как удавалось пальпировать опухоли. Раз- мер опухоли и количество опухолей оценивали два раза в неделю. Размеры опухолей в контрольной группе, обработанных только растворителем, сравнивали с опухолями в группах, подАктивность молекул против других опухолей была исследована путем введения молекул с помощью желудочной трубки животным, которым бьта осуще ствлена имплантация способной к

- ствлена имплантация способной к

35

трансплантации мышиной саркомы матки

или простатической крысиной адено- саркомы.

Ежедневно или два раза в неделю

40 производили ввод препарата. При этом использовалиMNRI мыши (самки весом примерно 20 г) и крысы породы Фищер-344 (самцы весом примерно 200 г). Эстрам- устинфосат- использовали в качестве

45 позитивного контроля . Трансплантированная крысам эдепокарцинома молочной железы была развита-путем инокуляции элементов, вызванной ДМВА карциномы, подкожно здоровым взрослым

50 самкам крыс. Опухоль, которая давала

существенный рост, использовали для iдальнейшей трансплантации. Другие способные к трансплантации опухоли

промытой клеточной суспензии (Ю

клеток/животные).

Соединещ1я I показали хорошее средство к эстрогенным рецепторам,что

15

бьию измерено с помощью метода,использующего декстранактивированный уголь.

Полученные результаты приведены в табл. 1 .

Эстрогенный эффект соединений I, измеренный исходя из их способности увеличивать вес матки неразвивпшхся мышей, бьш всегда значительно меньше зстрогенного эффекта эстрадиола, который был использован дпя положительного контроля,

Эстрогенный эффект соединений 1 и 2 может быть обнаружен только при более высоких концентрациях. При дозировке, равной 5 мг/кг живого веса, эффект первого был на 50% меньше, чем эффект эстрадиола при дозировке 0,05 мг/кг живого веса.

Соединения 1-3 (табл,1) обладают антиэстрогенными эффектами, что было измерено ito их способности ингибиро- вать увеличение веса матки неразвит: вшихся мышей, вызванной эстрадио- лом.

Соединение 1 при дозе, равной 0,5 мг/кг живого веса, и соединения 2 и 3 при дозировке, равной 5 мг/кг живого веса, вызывают соответственцо 27, 25, 20%-ное ингибирование эффек- та увеличения веса матки у мьшей,вызванное i , эстрадиолом.

l/V . , /

Прогестановые эффекты соединения I ; были определены, как описано ранее. Ацетат медроксипрогестерона используемый в качестве положительного конт роля вызывай ингибирование веса матки неразвившихся мьш1ей до 40%.

Соединение I, кроме того, обладает антиэстрогенными и эстрогенными свойствами, и как было установлено, также обладает прогестановыми свойства7

50

ми, -и вызывает незначительное ингиби- j молочной железы крыс, вызванной ДМВА.

Противоопухолевый эффект соединения 1 обнаружен в диапазоне доз от 1,0 до 30 мг/кг живого веса. При наиболее высокой дозе было установлено, что рост опухоли полностью прекращался (см,табл,4). б

Размер относится к произведению (ширина) X (высота) опухоли. Скорость роста определяется разницей между размерами по сравнению с теми размерами, которые бьти в первый день лечения, Противоопухолевый эффект меньший, чем тот, которьпй проявляет соединение 1 против рака iioрование медроксипрогестерона при наиболее низких изученных доз,

В табл,2 и 3 представлены обобщенные данные эстрогенных (антиэстроген-, ных и прогестановых эффектов). Процентные данные относятся к увеличению (снижению веса маток мышей).

Противоопухолевые эффекты соединений I бьиш испытаны вне организма по отношению к линии MCF-7 человеческой клеточной аденокраценомы молочной же-; лезы, и в живом организме против аденокарциномы молочной железы крыс,I вызванной даВА карциномы яичников

55

1508955

крыс, карпиновым простоты крыс и саркомы матки мьшей,

В табл,3 приведены данные по противоопухолевым эффектам определенных соединений формулы I. Представленные результаты показывают следующее:

Эффект Ю,-. -концентрация соедиy j

нения, при которой обеспечивается 50% ингибирование роста клеток +++ X ++ 5 X 5 + 5 X 10 М

5 X 10- МОбобщенные данные зстрогенных/ан- тизстрогенных и прогестановых эффектов соединений I приведены ниже. 0 Опыт Соединение 1 (табл.1) Эстрогенный

Прогестановый

Антиэстрогеновое,27%

снижение

5

0

Без добавок

С эстрадиолом0,05 X 0,05 мг/кг живого

веса-. . .

С медрокси-Слабое ингибирование, прогрстеро- 14% снижение по срав- номнению с контрольным

0,06 мг/кг

живого вет.:

са.

Соединения, подвергнутые испытаниям, оказались очень эффектив1)ыми вне организма по отношению к MCF-7 клеткам молочной железы и путем увеличения концентрации гибель клеточной 0 линии была достигнута с помощью каждого из соединений.

Противоопухолевые эффекты соеди , - II

5

I

«II

кия I в живом организме определен при испытаниях против аденокарциномы

50

55

17

лочной железы вызванног о ДМВА, наблюдался для соединения 2.

Эффект соединения 1 против карциномы яичников у крыс и саркомы матки у мышей был испытан на способах к трансплантации опухолях с использованием методов, описанных выше. Спустя две недели лечения при дозе 100 мг/к живого веса размер саркомы матки бьш на 30% меньше, чем соответствующий параметр у контрольных экземпляров, и спустя 10 дней лечения при дозе 5 мг/кг живого веса размер карциномы яичников крьГс бьт на 20% меньше по сравнению с контрольными экземплярами.

Острая токсичность LDjg , у мышей изменяется от 1000 до 3200 мг/кг живого веса для соединений, подвергае- мых исследованию. Клиническая дозировка дуя взрослого человека при оральном виде изменяется в диапазоне от 10 до 200 мг в день.

Проведено .сравнение биологической активности соединения I (торемифена) с диэтилстильбэстсролом и гексестро- лом,

Методы роста MCF-7 клеточной лини

и

эстроген-антиэстрох Бнного (прогр.ес-зо соединения I, обладающие высокой

теронного) эффекта, основанного на взвешивании матки, описаны выше,

Бьиш получены следующие результаты

Разница между соединением 1 и гек- сестролом так же как и между соедине- кием 1 и диэтилстильбэстролом изучена утеротрофическим анализом на мышах и эстрогенной рецепторной положительной клеточной линии грудной железы человека.

Утеротрофический анализ, описывающий эстрогенные свойства молекул и клеточных культур, показывает активность молекул, ингибирующих рост раковой опухоли.

В утеротрофическом анализе; гексестрол и диэтилстильбэстрол 6bUIH

введены подкожно мышам в дозах 5 и 50 (КГ/КГ. Т оремифен был введен в количестве 50, 500 и 5000 /иг/кг. Размер матки (вес,в мг) делится на вес животного (выраженного в г) в аж- дой группе,данные представлены в ;табл,5.

В клеточных культурах используют эстрогенную рецепторную положитель- нуюраковую клеточную линию грудной железы человека,MCF-7 клетку культивиро- . : вали в присутствии гексестрола,диэтил

0

5

0

5

стильбэстрола и торемифелл. Концентрации каждого соединения были 10-10, 10-9, 10-8, 10-7, 10-6 и 10-5 моль/л. Число живых клеток за-, писывали при каждой концентрации и вычисляли в процентах контроля (без добавления гормонов).

Из данных табл.5 видно, что максимальный эстрогенный эффект торемифе-- на даже при высоких слабее,чем. :у гексестрола и диэтилстильбэстро- рола; торемифен способен антагонизи- ровать эстрогенный эффект гексестрола и диэтилстильбэстрол.

Все три соединения могут ингибиро- вать рост МСР-7 опухоли клеток in vitro по способу в зависимости от. концентрации: торемифен более действенный ингибитор роста к.г1еточной опухоли, чем гексестрол и диэтилстиль-/ бэстрол. Так концентрация торемифена, которая увеличивает число выживших клеток в половину при сравнении с контролем, в 10 раз ниже чем концентрация гексестрола и диэтилcтшIЬ- . бэстрола.

Таким образом, предлагаемый спо- . соб позволяет синтезировать новые

эстрогенной, антиэстрогенной , прот. гестановой и противоопухолевой активностью.

Формула изобретения

Способ получения алкеновых изводных общей формулы

проо с с

о

fcH2)nCH2R/t

где

R.

R.0

R

п

1

водород или гидроксил;.

-водород,гидроксил,ме-:- токсил или 2-(N,N-димeтил.- амино)этоксил;

-хлор или бром, или 2,

или их солей, отличающий- с я тем, что соединение общей форMyjlbf

-сн-с(CH2)

191508955

тетрагидропиран-2-илокси или бензилокси; водород или тетрагидропи- ран-2-илокси;

F, R - водород, метокСШ1 или тетра1 идропиран-2-илокси j п - имеет указанные значения,

лодвергают взаимодействию с соединением общей формулы

где К„- водород, метоксил, 2- диме иламино) этоксил

(N,Nr

или

тетрагидропиран-2-илокси5 образуквдееся соединение общей фор мулы

ОН / -с:

(CH2)nCH iR5

где RJ Rg R и

RSтетрагидропи-ран-2-илокси или бензилокги;

п имеет указанные значения,, подвергают кислотному гидролизу, образующееся соединение общей формулы .

Coefq - нения

Исследуемое соединение

4-XIIOp-lэ2-дифeнил- l/4- 2-(N,N-Димeтилaминo)этoкcиJ фенил 1 бутен (Z)-изомер

4-Бром- ,2-дифенил-1--Г4-Г2-(К,К- диметил амино) этокси фени: }-1 -бу- тен, (Е)-изомер

4-Хпор-1,2-дифeнил- -(4-oкcифe- нил)-l-бyтeн (Z)-изомер

4-Хлор-1,2-дифснил-1- 4- 2-(К,Nдиметил амино)-этокси фенил -1-бу- тен, (Е)-изомер

Концентрация соединения, при котором имело место 50% замещение (ин- гибирование) эстрадиола (ингибирование)- 10 М (слабое сродство)g 10 (ингибирование) - 10 М (слабое сродство) Ю М ингибирование) -ЮМ (слабое сродство) нет заметного ингибирования

(

где

R,R и R имеют указанные зна

чения,

подвергают дегидратации с последующим замещением в соединении общей формулы

,®

5/

(CH2lnCH..OH

где R,, R имеют указанные значения,гидроксильной группы на хлор или бром и выделяют целевой продукт в свободном виде или в виде соли Приоритет; по признакам

Т .а б л и ц а 1 j

Сродство

+++

+++ ++

+++ ++

+ , +

21150895522

Таблица

Обобщенные данные по эстрогевной/антиэстрогеннон и прогестановым эффектом соединений Т

о

Эстрогенное, 2% увеличение

Антиэстрдг генное,25% снижение

ТаблицаЗ

Противоопухолевый эффект соединений I против MCF-7 клеточной лшнии

Соединение (табл,I)

1 2 4 3

Таблица

Размер и рост опухолей, вызванных ДМВА, во время обработки соединением 1, по сравнению с контрольной группой

3,914

4,716

8,509

11 ,622

16,176

17,473

22,695

35,115

32,803

Эстрогенное, 20% увеличениеАнтиэстроген- ное, снижение менее 10%

Нет эффекта

Противоопухолевый эффект

+++ +++ +++ ++

1,5188

1,6739

1,3070

1,0474

0,1179

0,820

0,0721

-0,0891

0,09316

0,1193

О

0,1551 -0,2118 -0,4714 -О ,.5 39 2 -0,5762 -0,5851 -0,5682 -0,5640 -0,5379

Таблица

jЭффект гексестрола, ;диэтилстильбэстрола i

и торемифена в объеме недоразвитой (18 дней) ышинoй матки. Число животных в каждой группе 5

Группа

Доза,/иг/кг день

-

+ +

Нет гормонов 5 50

50 50 500

5000

50+500

50+500

Вес матки (мг) Вес животного (г)

7,1±0,4

17,9+3,2

28,1±1,8

27,9±3,0

32,6±3,1 10,5+1,3 2-1,6+1,5 24,1+2,7

21,4+2,4 21,1+0,7