БИОПРЕПАРАТ ВЕТЕРИНАРНОГО НАЗНАЧЕНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ЕГО ПРИМЕНЕНИЕМ Российский патент 2008 года по МПК A61K35/66 A61K36/00 

Изобретение относится к ветеринарии, касается иммунопробиотического препарата и может быть использовано для профилактики и коррекции функциональных расстройств и заболеваний у новорожденных телят, связанных с воздействием на организм стрессовых и истощающих факторов окружающей среды.

Известно, что препараты на основе таких растений, как женьшень, родиола розовая, заманиха, лук, чеснок, лимон, черная смородина, эхинацея пурпурная и др. могут стимулировать защитные силы организма и повышать общую сопротивляемость к заболеваниям [1], но их действие характеризуется однонаправленностью (тонизирующее, успокаивающее, противовоспалительное, эпителизирующее, спазмолитическое и др.), поскольку лечебные свойства лекарственных растений зависят от присутствия в них веществ с уникальным фармакологическим действием, которые содержатся лишь в лекарственных растениях определенных видов или в близких видах ботанического семейства и придают лекарственным растениям строго определенную биологическую активность.

Известны композиции лечебно-профилактических средств из растительного сырья, имеющие широкий диапазон лечебно-оздоровительного действия, включая действие на факторы естественной резистентности, например препарат тетраиммунофит - фитоэкстракционный препарат из травы зверобоя, листа сены, плодов шиповника и корнеплодов свеклы, обладающий иммуностимулирующим действием на гуморальный иммунный ответ [2], или фитопрепарат, представляющий собой водный экстракт из трав зверобоя продырявленного, чабреца, мяты перечной и мать-и-мачехи [3]. Общим недостатком препаратов из растительного сырья при использовании их для профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят является недостаточная эффективность вследствие физиологической особенности их организма.

При рождении кишечник теленка стерилен, и заселение микрофлорой - бифидо- и лактобактериями, которые составляют 80-90% от общего числа микроорганизмов кишечника при нормобиозе и поддерживают колонизационную резистентность, происходит постепенно к 20-25 дню. В первые дни жизни кишечник заселяется микрофлорой родовых путей и так называемой хлевной микрофлорой, представленной преимущественно энтеробактериями, энтерококками и другими аэробами, что создает условия для возникновения желудочно-кишечных заболеваний c симптомокомплексом диареи.

Для снижения влияния инфекционных агентов, восстановления кишечного нормобиоза и метаболических срывов в ветеринарной практике широко применяют пробиотики, например лактобактерин (лиофилизированная микробная масса живых антагонистически активных лактобактерий Lb.fermenti и Lb.plantarum) [4], бифидобактерин (лиофилизированная масса антагонистически активных бифидобактерий B.bifidum №1, №791 и ЛВА-3) [5], лактобифадол (смесь живых ацидофильных и бифидобактерий, высушенных сорбционным методом на естественном растительном носителе), бифитрилак (лиофилизированные штаммы Lactobacillus bulgaris, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium bifidum) [6] и др. Основным недостатком пробиотиков является то, что их применение для профилактики желудочно-кишечных болезней не всегда сопровождается положительным эффектом из-за ограниченности спектра антагонистической активности и иммунодефицитного состояния телят.

Известны пробиотические препараты с активными фитокомлексами, например кормовая добавка «Веленол», включающая пробиотический препарат Лактобифадол и БАД «Спирулина ВЭЛ» [7], препарат для молодняка сельскохозяйственных животных, включающий пробиотический препарат бифидобактерин и криопорошок овса [8]. Активные фитокомплексы, входящие в состав известных препаратов, представляют собой компоненты, необходимые для нормальной микрофлоры кишечника (пищевые субстраты и регуляторы метаболизма собственной кишечной микрофлоры), но они не обладают выраженными иммунотропными свойствами.

В качестве предпочтительного аналога нами рассматривается пробиотический препарат «Байкал ЭМ-1», включающий симбиозный комплекс из 86 штаммов микроорганизмов. Недостатком препарата является необходимость длительного курса (30 дней), однако наиболее опасные периоды жизни телят ограничиваются первыми 12-15 сутками [9].

Цель изобретения - биопрепарат, обладающий пробиотической и иммуномодулирующей активностью, для неспецифической профилактики болезней новорожденных телят, связанных с физиологическими дисбактериозами и иммунодефицитами.

Поставленная цель достигается тем, что предложен биопрепарат для перорального применения, обладающий пробиотическими и иммунокорректирующими свойствами, содержащий пробиотический препарат «Байкал ЭМ-1» и дополнительно настой фитосбора «Алфит-8» и отвар сабельника болотного (Comarum palustre L.), из расчета суточной дозы:

пробиотик «Байкал ЭМ-1»5,0-20,0 млнастой фитосбора «Алфит-8»1,0-2,0 г в 250,0 мл дистиллированной водыотвар сабельника болотного (Comarum palustre L.)0,2 г в 10,0 мл дистиллированной воды,

который применяют перорально в течение 12-15 дней, начиная со второй выпойки молозива.

Фитосбор «Алфит-8» включает в качестве растительных ингредиентов траву тысячелистника обыкновенного, корень бадана толстолистного, траву копеечника чайного, лист крапивы двудомной, траву пастушьей сумки и траву пустырника пятилопастного. Данная композиция содержит комплексы биологически активных веществ, обладающих противовоспалительными и кровоостанавливающими свойствами, а также общеукрепляющим действием.

Сабельник болотный (корни и корневища) содержит эфирное масло, дубильные вещества, сапонины, витамин С, каротин, флавоноиды и органические кислоты.

Растительные компоненты заявленного биопрепарата включают пребиотические соединения (полисахариды, аминокислоты, антиоксиданты, органические кислоты), а также различные вещества, обладающие фармакологическим действием, в частности эфирные масла (обладают противомикробным действием широкого спектра, преимущественно на кокковую микрофлору, механизм которого состоит в основном в деструкции мембраны бактерий с последующим нарушением обмена, аэробного дыхания, процессов синтеза), гликозиды (повышают неспецифическую резистентность к широкому кругу неблагоприятных воздействий через оптимизацию энергетики (улучшение трансмембранного переноса глюкозы, включение в энергетический обмен липидов, усиление глюконеогенеза из шлаков обмена), адаптивных синтезов РНК и энзимов, «нужных» в данный момент для усиления функций защиты), флавоноиды (обладают помимо прочего антиоксидантной и мембраностабилизирующей активностью, что в сочетании с противовоспалительным действием обеспечивает защиту гепатоцитов от повреждающего инфекционного и токсического влияния разнообразных вредных факторов), полисахариды, органические кислоты (поддерживают кислотно-щелочное равновесие). Особый интерес с точки зрения влияния на иммунитет и естественную резистентность имеют микроэлементы, в частности Cu (содержание в листьях крапивы двудомной, траве пастушьей сумки, корнях и корневищах сабельника болотного - 43,3 мкг/г), Мо (содержание в траве пастушьей сумки - 88,0 мкг/г), Cr (содержание в корнях и корневищах сабельника болотного - 30,4 мкг/г), Мл (содержание в листьях крапивы двудомной - 62,5 мкг/г; корнях корневищах сабельника болотного - 50,3 мкг/г), Zn (содержание в корнях и корневищах сабельника болотного - 48,7 мкг/г), Se (содержание в листьях крапивы двудомной - 22,9 мкг/г), а также витамины А, Е, F (тысячелистник обыкновенный), С (крапива двудомная, сабельник болотный).

Биопрепарат получают смешиванием расчетных количеств пробиотика Байкал-ЭМ-1, настоя фитосбора «Алфит 8» и отвара корней и корневищ сабельника болотного. Настой фитосбора «Алфит 8» и отвар корней и корневищ сабельника болотного готовят фармакопейным способом в соотношении сырья к извлекателю 1:250 и 1:50 соответственно.

Пример. Приготовление настоя фитосбора «Алфит-8»: в эмалированную посуду поместили 1,0 г фитосбора «Алфит 8», добавили 250 мл дистиллированной воды комнатной температуры, настаивали на кипящей водяной бане в течение 15 минут и охладили при комнатной температуре. Приготовление отвара корней и корневищ сабельника болотного: в эмалированную посуду поместили 0,2 г измельченных корней и корневищ сабельника болотного, добавили 10 мл дистиллированной воды комнатной температуры, настаивали на кипящей водяной бане в течение 30 минут и охладили при комнатной температуре, после чего процедили через холст, отжимая сырье, прибавили воду до требуемого объема извлечения. В 250 мл настоя фитосбора «Алфит 8» влили 10 мл пробиотика «Байкал ЭМ-1», все хорошо перемешали, после чего добавили 10 мл отвара корней и корневищ сабельника болотного.

В таблице 1 приведены варианты заявленного биопрепарата, включающие соотношения с разными количествами исходных компонентов. Каждый вариант биопрепарата испытывали на отдельной группе новорожденных телят по 10 голов в каждой, подобранных по принципу аналогов, начиная со второго кормления в течение 12 дней. Первую дозу биопрепарата назначали за-20-30 минут до второго кормления. Телятам контрольной группы назначали лактобактерин в соответствии с наставлением по его применению. Эффективность определяли на основании данных клинического обследования. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 1
Варианты биопрепарата для новорожденных телят (из расчета на суточную дозу)Исходные ингредиентыСоставыКоличество компонентов из расчета на 1 дозу1234Пробиотик «Байкал ЭМ-1»,мл5.010,020,025,0Настой фитосбора «Алфит 8», г в 250,0 мл дистиллированной воды0,51,02,02,5Отвар Сабельника болотного (корни и корневища), г в 10,0 мл дистиллированной воды0,20,20,20,2

Таблица 2
Эффективность биопрепарата в зависимости от соотношения исходных компонентов (из расчета на суточную дозу)ПоказателиКонтроль (лактобактерин)СоставыИсходные компоненты:Количество из расчета на суточную дозу1234Пробиотик «Байкал ЭМ-1», мл 5,010,020,025,0Настой фитосбора «Алфит 8», г в 250,0 мл дистиллированной воды 0,51,02,02,5Отвар сабельника болотного (корни и корневища), г в 10,0 мл дистиллированной воды 0,20,20,20,2Заболело, гол. диагноз4 токсическая диспепсия3 диспепсия2 диспепсия1 диспепсия1 диспепсияПало, гол.21---Эффективность, %60,070,080,090,090,0Сохранность, %80,090,0100,0100,0100,0

Как видно из таблицы 2, соотношения исходных компонентов составов 1 и 4 нецелесообразны из-за неадекватности затрат. Оптимальным является соотношение исходных компонентов состава 3.

Пример 1. Влияние биопрепарата на иммунонологический статус новорожденных телят определяли в двух сериях опытов: 1 серия - хозяйство, длительно неблагополучное по желудочно-кишечным болезням новорожденных телят (заболеваемость - 75-87%, падеж 17-22%), 2 серия - хозяйство, относительно благополучное по желудочно-кишечным болезням телят (заболеваемость - 19-22%, падеж - 1,0-1,5%). По принципу аналогов формировали по две группы нормально развитых новорожденных телят (масса тела 30-32 кг, длина туловища более 80 см, равномерный шерстный покров по всему туловищу, наличие в ротовой полости не менее 6 резцов, время появления рефлексов движения и сосания - в течение 30 минут после рождения): опытную и контрольную. Телятам опытной группы, начиная со второй выпойки молозива, в течение 12 дней назначили внутрь биопрепарат при следующем соотношении компонентов (из расчета на суточную дозу): пробиотик «Байкал ЭМ-1» - 20,0 мл; настой фитосбора «Алфит-8» - 2,0 г в 250,0 мл дистиллированной воды; отвар сабельника болотного - 0,2 г в 10,0 мл дистиллированной воды. Параметры иммунологического статуса телят изучали по окончанию опыта по общепринятым в биологии современным тестам. Результаты представлены в таблице 3.

При анализе иммунобиологических показателей (таблица 3) установили у животных опытных групп повышение основных показателей клеточного и гуморального иммунитета. Важное практическое значение имело увеличение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови подопытных телят, что свидетельствовало о лучшей усвояемости новорожденными молозивных и более раннем начале синтеза собственных иммуноглобулинов.

Таблица 3
Влияние биопрепарата на иммунологический статус телятПоказателиНаучно-производственный опыт1 серия - хозяйство, неблагополучное по желудочно-кишечным болезням телят2 серия - хозяйство, благополучное по желудочно-кишечным болезням телятОпытная группаКонтрольная группаОпытная группаКонтрольная группаТ-лимфоциты, %18,0±1,215,6±0,924,1±1,117,6±0,4В-лимфоциты, %8,5±1,16,2±1,17,5±0,46,5±0,3Бактерицидная активность, %89,2±1,254,3±1,399,2±1,267,6±1,2Лизоцимная активность, %4,2±0,43,0±0,34,5±0,23,6±0,3Иммуноглобулины, мг/мл    G16,62±3,3013,50±0,8216,8±1,014,2±1,2M1,9±0,41,5±0,32,10±0,181,5±0,18Общий белок, г %5,9±0,45,5±0,26,2±0,105,8±0,3

Пример 2. Эффективность профилактики с применением биопрепарата в соответствии с изобретением в сравнении с известными средствами (пробиотики «Байкал ЭМ-1, бифидобактерин в комплексе с криопорошком овса) определяли на новорожденных телятах, распределенных по принципу аналогов на группы. Схемы профилактических обработок: 1 группа - начиная со второй выпойки молозива, в течение 15 дней внутрь биопрепарат в соответствии с изобретением при следующем соотношении компонентов (из расчета на суточную дозу): пробиотик «Байкал ЭМ-1» - 20,0 мл; настой фитосбора «Алфит-8» - 2,0 г в 250,0 мл дистиллированной воды; отвар сабельника болотного - 0,2 г в 10,0 мл дистиллированной воды. 2 группа - начиная со второй выпойки молозива, в течение 15 дней внутрь пробиотик «Байкал ЭМ-1» в дозе 20 мл; 3 группа - начиная со второй выпойки молозива, в течение 15 дней внутрь бифидобактерин в комплексе с криопорошком овса (1:10) в дозе 12 г. Контроль - лактобактерин в соответствии с наставлением по его применению. Эффективность оценивали по данным клинического обследования и бактериологических исследований. Пробы фекалий отбирали спустя 2 и 15 суток после рождения. Для изоляции микроорганизмов использовали дифференциально-диагностические среды: Эндо, кровяной агар, висмут-сульфит-агар, селенитовую. Количество бифидо- и лактобактерий (количество колониеобразующих единиц (КОЕ/г) определяли методом разведений на среде Блаурока и МРС-4. Результаты представлены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4
Эффективность биопрепарата в соответствии с изобретением в сравнении с известными пробиотическими препаратамиПоказателиГруппы животных1-n=242-n=253-n=244-n=28Примененный препаратБиопрепарат в соответствии с изобретениемПробиотик «Байкал ЭМ-1»Бифидобактерин криопорошок овса (1:10)ЛактобактеринЗаболело, гол.1435Профилактическая эффективность, %95,884,087,582,1Форма переболевания, %    легкая1322тяжелая 113Пало, гол.0112Сохранность, %1009695,892,9Продолжительность лечения, дней3,53,54,06,5Среднесуточный прирост массы тела, г637,0±93,0612,0±25,0629,0±27,00468,0±67,0

Таблица 5
Результаты бактериологических исследований фекалий телятГруппыСрок обследования (сут. после рождения)Видовой состав микрофлоры содержимого кишечника, КОЕ/гE.coliProteusKlebsielaCitrobacterлактобактериибифидобактерии1 группа - биопрепарат в соответствии с210⁵-10⁷+10³10³-10⁶10⁹-10¹⁰10⁶-10⁸изобретением1510⁴--10³10⁸-10¹⁰10⁸-10¹¹2 группа - Байкал ЭМ-1210⁵-10⁷+10³10³-10⁶10⁸-10¹⁰10⁵-10⁸ 1510⁵--10³10⁹-10¹⁰10⁸-10¹⁰3 группа -210⁶-10⁸+10³10³-10⁶10⁷-10⁹10⁶-10⁷бифидобактерин + криопорошок овса (1:10)1510⁶+-10³10⁸-10¹⁰10⁷-10⁹Контроль210⁶-10⁷+10^s10³-10⁶ 1510⁹-10¹⁰+----

Клинические данные (таблица 4) подтвердили эффективность профилактики с применением биопрепарата в соответствии с изобретением в сравнении с известными пробиотическими препаратами (пробиотиком «Байкал ЭМ-1, бифидобактерином в комплексе с криопорошком овса и лактобактерин), что выражалось в снижении заболеваемости на 11,8, 8,3 и 13,7% соответственно, повышении сохранности до 100% (по сравнению с 96, 95,8 и 92,9% соответственно) и среднесуточного прироста массы тела. Биопрепарат в соответствии с изобретением в большей степени, чем известные пробиотические препараты, стимулировал размножение лактобацилл и бифидобактерий и ингибировал рост условно патогенной микрофлоры, что обеспечивало колонизационную резистентность, иммуностимулирующий эффект и недопущение возникновения желудочно-кишечных заболеваний.

Проведенные исследования, включая показатели иммунологического мониторинга, подтвердили, что заявленный биопрепарат обладает хорошей биодоступностью для организма новорожденных телят, нормализует обменные процессы, повышает иммунитет и естественную резистентность, что обеспечивает возможность широкого диапазона его использования при хорошей переносимости и отсутствии побочных реакций.

Источники информации

1. Виноградова Т.А. и др. Практическая фитотерапия, СПб, 1998.

2. Л.А. Макарадзе // Ветеринария, 1999, №3.

3. RU №2250110С1, 2005.

4. Наставление по применению лактобактерина сухого в ветеринарии, утв. ГУВ Госагропрома СССР 19.05.1989.

5. Временное наставление по применению бифидобактерина сухого в ветеринарии, утв. ГУВ Госагропрома СССР 19.05.1989.

6. №97101157 А, 1999.

7. Материалы научно-практической конференции 14-16.09.2004 г. Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» С.-Петербург-Ломоносов. 2004, с.192-193.

8. RU №2231362 С2, 27.06.2004.

9. Временное наставление по применению пробиотика Байкал ЭМ-1 в ветеринарии, утв. 22.12.2005.

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для получения биопрепарата, обладающего пробиотической и иммуномодулирующей активностью. Биопрепарат содержит из расчета на суточную дозу: пробиотик «Байкал ЭМ-1» - 5,0-20,0 мл, настой фитосбора «Алфит-8» - 1,0-2,0 г в 250,0 мл дистиллированной воды и отвар сабельника болотного (Comarum palustre L.) - 0,2 г в 10,0 мл дистиллированной воды. Для профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденным телятам вводят биопрепарат перорально в течение 12-15 дней, начиная со второй выпойки молозива. Изобретение позволяет эффективно использовать биопрепарат, обладающий одновременно пробиотическими и иммунокорректирующими свойствами, для неспецифической профилактики болезней новорожденных телят, связанных с иммунодефицитами и развивающимися вследствие этого дисбактериозами. 2 н.п. ф-лы, 5 табл.

1. Биопрепарат ветеринарного назначения, включающий пробиотик «Байкал ЭМ-1», отличающийся тем, что он дополнительно содержит настой фитосбора «Алфит-8» и отвар сабельника болотного (Comarum palustre L.) из расчета на суточную дозу:

пробиотик «Байкал ЭМ-1» - 5,0-20,0 мл,

настой фитосбора «Алфит-8» - 1,0-2,0 г в 250,0 мл дистиллированной воды и

отвар сабельника болотного (Comarum palustre L.) - 0,2 г в 10,0 мл дистиллированной воды.