СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕСТНО-РАЗДРАЖАЮЩЕГО И СОГРЕВАЮЩЕГО СРЕДСТВА Российский патент 2008 года по МПК A61K36/42 A61P19/00 

Изобретение относится к медицине и касается способов получения препаратов из растительного сырья, которое может быть использовано в качестве наружного местно-раздражающего и согревающего средства при заболеваниях суставов и мышц, для растирания при невралгиях, радикулитах, миозитах, люмбаго, ишиасе.

Известны наружные местно-раздражающие и отвлекающие средства, действующие на нервные окончания кожи - настойка перца стручкового, препараты на ее основе: мазь от обморожения, капситрин и др.; горчичники, мазь «Финалгон» [РЛС-Аптекарь / Под ред. Крылова Ю.Ф. - М., 2001. - 1584 с; Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. - М.: Медицина, 1988. - T.1. - С.350-351].

Наиболее близким прототипом является лекарственное средство - мазь от обморожения на основе настойки стручкового перца (ВФС 42-1336-83) [РЛС-Аптекарь / Под ред. Крылова Ю.Ф. - М., 1993. - С.550]. Мазь состоит из настойки стручкового перца, вазелина, сала свиного, ланолина безводного, масла касторового, масла камфорного 10%, кислоты муравьиной, раствора аммиака 25%, мыла жидкого калийного и действует на нервные окончания кожи, оказывая местно-раздражающее и согревающее действие.

Раздражающее и согревающее действие обусловлено содержанием в мази настойки перца (содержит алкалоид капсаицин, вызывающий раздражение нервных окончаний [Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения / Под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. - С.-Пб.: Специальная литература, 1999. - С.219-220]), камфорного масла, кислоты муравьиной.

Известен способ получения местно-раздражающего и согревающего средства, мази от обморожения, заключающийся в смешивании вазелина, сала свиного, ланолина безводного, масла касторового, масла камфорного 10%, настойки стручкового перца (1:5), кислоты муравьиной, раствора аммиака 25%, 1,9 г мыла жидкого калийного в соотношении 71:9,45:1,3:1,0:6,2:7,4:0,3:1,45.

Настойку стручкового перца получают из растительного сырья - плодов стручкового перца. Их экстрагируют 90% спиртом этиловым в соотношении 1:5. В качестве способа экстрагирования используют перколяцию. Процесс проводят в одном диффузоре. [Муравьев И.А. Технология лекарств. В 2-х т. - М.: Медицина, 1980. - T.1. - С.180-181.]

Настойка перца стручкового обладает сильным запахом и может вызывать раздражение слизистых оболочек верхних дыхательных путей и сильное чихание. [Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. - М.: ВШ, 1983. - С.345-346.] Масло камфорное также может вызывать раздражение верхних дыхательных путей. В связи с этим применение данной мази у людей с аллергическими заболеваниями и повышенной чувствительностью к запахам ограниченно.

Вместе с тем, перечень препаратов, обладающих наружным местно-раздражающим и согревающим действием, ограничен [Машковский М.Д., 1988; РЛС-Аптекарь. 2001] из-за отсутствия соответствующей базы растений. Следовательно, расширение арсенала препаратов растительного происхождения, характеризующихся раздражающим и согревающим действием, является актуальной задачей.

Целью предлагаемого изобретения является разработка способа получения местно-раздражающего и согревающего средства из корней брионии белой, характеризующегося отсутствием раздражающего запаха.

Поставленная задача достигается тем, что для получения целевого продукта исходное сырье - обезжиренные смесью хлороформ-этанол (2:1) корни брионии белой (Bryonia alba L., семейство Cucurbitaceae) - экстрагируется 70% этиловым спиртом при температуре 18-20°С, при соотношении сырье:экстрагент 1:2,0 в течение 144 часов в шести диффузорах. В дальнейшем для получения мази смешивают вазелин, ланолин безводный и экстракт брионии в соотношении 85:10:5.

В литературе отсутствуют данные о возможности применения экстракта брионии белой в качестве раздражающего и согревающего средства. Предлагаемое наружное местно-раздражающее и согревающее средство можно использовать в медицинской практике для лечения заболеваний суставов и мышц, сопровождающихся болью. Данное свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники. Таким образом, предлагаемое решение соответствует критериям изобретения - «новизна», «изобретательский уровень», «промышленно применимо».

Применение в качестве экстрагента 70% спирта этилового обусловлено наиболее полным извлечением действующих веществ - кукурбитацинов. Температурный режим, соотношение сырье:экстрагент, число диффузоров, время экспозиции являются оптимальными и подобраны экспериментальным путем.

Местно-раздражающее и согревающее средство получают следующим образом: измельченные до 3 мм, обезжиренные корни брионии белой (Bryonia alba L.) и экстрагент, 70% этиловый спирт делят на шесть равных частей. Первую порцию сырья экстрагируют чистым экстрагентом, а каждую последующую (вторую, третью, четвертую, пятую, шестую) экстрагируют вытяжкой, полученной при экстрагировании предыдущей порции сырья. Соотношение сырье:экстрагент при этом равно 1:2,0 с учетом поглощения сырья. Продолжительность процесса 144 часа. Полученное извлечение (жидкий экстракт) процеживают через 4 слоя марли, отстаивают при температуре не выше 10°С не менее 2 суток. Выход экстракта по действующим веществам составляет 85%. Содержание кукурбитацинов в препарате (экстракт брионии 1:2,0) составляет 1,07±0,02%; выход 81,99%. Содержание кукурбитацинов в сырье, корнях брионии белой, при этом составляет 2,61±0,08%. В фарфоровой или эмалированной емкости при температуре 50-55°С сплавляют 85 частей вазелина, 10 частей ланолина безводного, охлаждают до температуры 25-30°С и смешивают с 5 частями экстракта брионии 1:2 до получения однородной массы.

Пример конкретного выполнения способа.

416,6 кг корней брионии, измельченных до 3 мм, загружали в аппарат Сокслета и экстрагировали смесью хлороформ-этанол (2:1) в течение 7-10 часов. Обезжиренные корни брионии белой сушили при 20°С и использовали для приготовления спиртового извлечения.

Приготовление экстракта из обезжиренных корней брионии белой проводили в шести перколяторах. В каждый из шести перколяторов укладывали измельченные обезжиренные корни брионии белой массой 8,35 кг. Объем экстрагента, вводимого в батарею перколяторов на каждой ступени экстракции, составлял 32,6 л. Объем каждого извлечения, отбираемого из шестого, головного перколятора, был равен 16,7 л.

1 день. В работу вводили перколяторы №1 и №2. В 8 часов утра в перколятор №1 заливали 32,6 л экстрагента - 70% спирта этилового и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали кран перколятора №1 и сливали извлечение - 16,7 л в сборник №1. В перколятор №1 вводят 32,6 л экстрагента 70% спирта этилового и продолжали сливать жидкую фазу до ее полного накопления в сборнике №1 объемом 32,6 л. После чего кран перколятора №1 закрывали, а извлечение из сборника №1 переливали в перколятор №2. Перколяторы №1 и №2 оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня (около 16 часов).

2 день. В работу вводили перколяторы №3 и №4. В 8 часов утра открывали краны перколяторов №1 и №2 и проводили слив извлечений по 16,7 л. В перколятор №1 вводили 32,6 л экстрагента - 70% спирта этилового и продолжали слив извлечения до полного его накопления в сборник №1 объемом 32,6 л. После чего кран перколятора №1 закрывали. Извлечение из сборника №1 переносили в перколятор №2 и накапливали в сборнике №2 извлечение объемом 32,6 л после чего закрывали кран перколятора №2. Извлечение из сборника №2 переносили в перколятор №3 и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов №№1-3 и проводили слив извлечений - по 16,7 л. В перколятор №1 вводили 32,6 л экстрагента - 70% спирта этилового и продолжали слив извлечения до его накопления в сборнике №1 объемом 32,6 л. После чего кран перколятора №1 закрывали. Извлечение из сборника №1 переносили в перколятор №2 и накапливали в сборнике №2 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №2. Слив извлечения из сборника №2 объемом 32,6 л переносили в перколятор №3 и накапливали в сборнике №3 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №3. Слив извлечения из сборника №3 объемом 32,6 л переносили в перколятор №4. Перколяторы №№1-4 оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня.

3 день. В работу вводили перколяторы №5 и №6. В 8 часов утра открывали краны перколяторов №№1-4 и проводили слив извлечения. В перколятор №1 вводили 32,6 л экстрагента - 70% спирта этилового и продолжали слив извлечения до полного его накопления в сборник №1 объемом 32,6 л. После чего кран перколятора №1 закрывали. Извлечение из сборника №1 переносили в перколятор №2 и накапливали в сборнике №2 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №2. Извлечение из сборника №2 переносили в перколятор №3 и накапливали в сборнике №3 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №3. Извлечение из сборника №3 переносили в перколятор №4 и накапливали в сборнике №4 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №4. Извлечение из сборника №4 переносили в перколятор №5. Перколяторы №№1-5 оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов №№1-5 и проводили слив из 1-й порции извлечения. В перколятор №1 вводили 32,6 л экстрагента - 70% спирта этилового и продолжали слив извлечения до полного его накопления в сборник №1 объемом 32,6 л. После чего кран перколятора №1 закрывали. Извлечение из сборника №1 переносили в перколятор №2 и накапливали в сборнике №2 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №2. Извлечение из сборника №2 переносили в перколятор №3 и накапливали в сборнике №3 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №3. Извлечение из сборника №3 переносили в перколятор №4 и накапливали в сборнике №4 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №4. Извлечение из сборника №4 переносили в перколятор №5 и накапливали в сборнике №5 извлечение объемом 32,6 л, после чего закрывали кран перколятора №5.

Слив извлечения из сборника №5 объемом 32,6 л переносили в перколятор №6. Перколяторы №№1-6 оставляли настаиваться до 8 часов следующего дня.

4 день. Проводили съем 1 и 2 порции экстракта, выводили из работы перколяторы №1 и №2. В 8 часов утра открывали краны перколяторов №№1-6 и проводили слив извлечений. Объем каждого извлечения составлял 16,7 л. Извлечение из сборника №6 переносили в отстойник. Перколятор №1 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора №1 перегружали в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников №№1-5, объемом каждое 16,7 л, переносили на очередную ступень экстракции, в перколяторы №№2-6, и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов №№2-6 и проводили слив извлечений. Извлечение из сборника №6 переносили в отстойник. Перколятор №2 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора №2 перегружали в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников №№2-5, объемом каждое 16,7 л, переносили на очередную ступень экстракции в перколяторы №№3-6 и оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня.

5 день. Производили съем 3 и 4 порции экстракта, выводили из работы перколяторы №3 и №4. В 8 часов утра открывали краны перколяторов №№3-6 и проводили слив извлечений. Объем каждого извлечения составлял 16,7 л. Извлечение из сборника №6 переносили в отстойник. Перколятор №3 разгружали, и истощенное сырье переносили в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников №№3-5, объемом каждое 16,7 л, переносили на очередную ступень экстракции, в перколяторы №№4-6, и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов №№4-6 и проводили слив извлечений. Извлечение из сборника №6 переносили в отстойник, слив извлечения из сборника №4 объемом 16,7 л переносили в перколятор №5. Слив извлечения из сборника №5 объемом 16,7 л переносили в перколятор №6. Перколятор №4 разгружали, и истощенное сырье переносили в колбу для отгонки спирта.

Перколяторы №№5-6 оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня.

6 день. Производили съем 5 и 6 порции экстракта, выводили из работы перколяторы №5 и №6. В 8 часов утра открывали краны перколяторов №№5-6 и проводили слив извлечений. Объем каждого извлечения должен составлять 16,7 л. Извлечение из сборника №6 переносили в отстойник. Перколятор №5 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора №5 перегружали в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников №5, объемом 16,7 л, переносили в перколятор №6 и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали кран перколятора №6 и проводили слив извлечения. Извлечение из сборника №6, объемом 16,7 л, переносили в отстойник. Перколятор №6 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора №6 перегружали в колбу для отгонки спирта. Все шесть извлечений объединяли - 100,2 л, перемешивали и отстаивали при температуре не выше 10°С в течение 2 суток, после чего отфильтровывали и проводили оценку качества.

В фарфоровой или эмалированной емкости при температуре 50-55°С сплавляли 85 частей вазелина, 10 частей ланолина безводного, охлаждали до температуры 25-30°С и смешивали с 5 частями экстракта брионии до получения однородной массы.

При изучении местно-раздражающих и согревающих свойств целевого продукта для сравнения изучали мазь на основе экстракта брионии белой, мазь от обморожения промышленного производства, мазь «Финалгон» промышленного производства, контроль (основа) и проводили 2 серии эксперимента.

Местно-раздражающие и согревающие свойства в первой серии эксперимента исследовали с помощью теста на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМтест) [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под редакцией В.П. Фисенко. - М., 2004. - 352С.]. Хорионаллантоисная оболочка представляет собой тонкую прозрачную оболочку, пронизанную большим количеством кровеносных сосудов и капилляров. На модели хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона можно предварительно определить способность веществ или препаратов из них раздражать и слизистые оболочки млекопитающих. Для эксперимента использовали развивающиеся эмбрионы яиц домашних кур в возрасте 9-10 дней. Яйца выдерживали в инкубаторе при температуре 37,8°С и влажности 62,5%. Перед опытом инкубированные яйца выдерживали в течение 24 часов в стационарном положении тупым концом вверх, для чего, за сутки до опыта, их переносили из инкубатора в термостат. Перед началом работы яйцо укрепляли на подставке тупым концом вверх, скорлупу вскрывали в центре тупого конца зубоврачебным бором. Затем скорлупу отламывали маленькими кусочками с помощью пинцета, постепенно высвобождая от скорлупы всю воздушную камеру. Открытую воздушную камеру смачивали изотоническим раствором хлорида натрия 0,9%, при температуре 37,8°С. Раствор отсасывали микропипеткой и с помощью пинцетов удаляли хорионаллантоисную оболочку. Исследуемые мази: с брионией, от обморожения, «Финалгон» и основа (вазелин:ланолин безводный 85:10) относятся по растворимости в воде к 3 группе - вещества нерастворимые в воде при концентрации 100 г/л, поэтому их наносили без растворения в воде, предварительно подогревая до температуры 37,8°С. Каждая изучаемая мазь наносилась на хорионаллантоисную оболочку в количестве 0,3 г. Наблюдение за состоянием сосудов оболочки под каплей основы осуществляли через бинокулярный микроскоп. Время наблюдения составляло 50 секунд. Каждая мазь тестировалась не менее чем в 5 повторностях. Результаты исследований представлены в примерах 1, 2, 3, 4 и таблице 1.

Примеры местно-раздражающей активности препарата.

Пример 1.

На хорионаллантоисную оболочку наносили 0,3 г расплавленной основы (вазелин:ланолин безводный 85:10). Основа для мази (фиг.1, табл.1) не нарушала прозрачности тонкой оболочки. Сеть кровеносных сосудов и капилляров нормально функционировала. По классификации веществ по степени раздражения основа для мази относится к 1 классу - отсутствие раздражения.

Пример 2.

На оболочку наносили 0,3 г расплавленной мази с экстрактом брионии. Мазь с экстрактом брионии (фиг.2, табл.1) вызывала тромбоз в мелких сосудах с остановкой кровотока крови и мелкие точечные кровоизлияния по всей обработанной поверхности. Наблюдали гиперемию. По классификации веществ по степени раздражения мазь с экстрактом брионии относится к 4 классу сильная степень раздражения.

Пример 3.

На оболочку наносили 0,3 г расплавленной мази от обморожения. Мазь от обморожения (фиг.3, табл.1) вызывала тромбоз в мелких сосудах с остановкой кровотока крови и мелкие точечные кровоизлияния по всей обработанной поверхности. Наблюдали гиперемию. По классификации веществ по степени раздражения мазь от обморожения относится к 4 классу - сильная степень раздражения.

Пример 4.

На оболочку наносили 0,3 г расплавленной мази «Финалгон». Мазь «Финалгон» (фиг.4, табл.1) вызывала коагуляцию и лизис мелких и средних сосудов, множественные кровоизлияния и тромбоз с остановкой кровотока. По классификации веществ по степени раздражения мазь «Финалгон» относится к 5 классу - очень сильная степень раздражения.

Местно-раздражающие и согревающие свойства во второй серии эксперимента исследовали с помощью теста на коже теплокровных животных [Сернов Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии /Сернов Л.Н., Гацура В.В. М., 2000. - 352 с.; Убашеев И.О. Раны и их лечение в тибетской медицине/ И.О. Убашеев, В.Э. Назаров-Рыгдалон, С.М. Баторова, К.С. Лоншакова. - Новосибирск: Наука, 1990. - С.106-108]. Эксперименты проводили на крысах-самцах массой 250,0-270,0 г линии Вистар. Под легким эфирным наркозом животным выбривали участки и намечали 4 поля диаметром 2,5 см. Эти участки предварительно трижды обрабатывали 20% водным раствором формальдегидом (после полного испарения при каждом воздействии). Затем на поля с помощью аппликатора накладывали тонким слоем (в дозе 2000 мг/200,0) изучаемые мази: основу, с экстрактом брионии, от обморожения, «Финалгон». Поля прикрывались фланелевыми прокладками для более тесного контакта мазей с кожей животного. Затем в подмышечную область (ямку) животного вводили 0,25% раствор азур-А. Через 5 и 16 часов компрессы удаляли и определяли интенсивность окрашивания полей в баллах. Результаты эксперимента представлены в примерах 5, 6, 7, 8 и таблице 2.

Пример 5.

На кожу крысы наносили 0,3 г расплавленной основы (вазелин:ланолин безводный 85:10), окрашивания не наблюдали - отсутствие раздражающего эффекта (0-1 балл, табл.2).

Пример 6.

На кожу крысы наносили 0,3 г расплавленной мази с экстрактом брионии, наблюдали глубокое равномерное окрашивание. Мазь с экстрактом брионии по интенсивности окрашивания кожи имеет умеренный раздражающий эффект (6 баллов, табл.2).

Пример 7.

На кожу крысы наносили 0,3 г расплавленной мази от обморожения, наблюдали глубокое равномерное окрашивание. Мазь от обморожения по интенсивности окрашивания кожи имеет умеренный раздражающий эффект (6 баллов, табл.2).

Пример 8.

На кожу крысы наносили 0,3 г расплавленной мази «Финалгон», наблюдали ишемический центр с выраженным голубым ореолом. Мазь «Финалгон» по интенсивности окрашивания кожи имеет выраженный раздражающий эффект (8 баллов, табл.2).

Таблица 1Раздражающая активность мазей с брионией, от обморожения, «Финалгон» и основы (вазелин:ланолин безводный 85:10) (ХЕТ-КАМтест)Наименование мазиРаздражающая активность (классы)№ опытаСреднее значение из 5 опытов12345Контроль (вазелин:ланолин безводный 85:10)111111Мазь с брионией444444Мазь от обморожения444444Мазь «Финалгон»555555

Таблица 2Раздражающая активность мазей с брионией, от обморожения, «Финалгон» и основы (вазелин:ланолин безводный 85:10) (тест на коже теплокровных животных - крыс-самцов)Наименование мазиРаздражающая активность (баллы)№ опытаСреднее значение из 5 опытов12345Контроль (вазелин:ланолин безводный 85:10010110,6Мазь с брионией666666Мазь от обморожения666666Мазь «Финалгон»888888

Изобретение относится к медицине. Проводят экстракцию растительного сырья и последующее смешивание экстракта с вазелином и ланолином безводным. Предварительно растительное сырье - корни брионии белой - измельчают до размера частиц не более 3 мм, обезжиривают смесью хлороформ-этанол (2:1) в течение 7-10 часов с последующим удалением растворителя, высушенный шрот экстрагируют 70% этиловым спиртом при температуре 18-20°С, при соотношении сырье:экстрагент 1:2,0 в течение 144 часов в шести диффузорах; затем при температуре 50-55°С сплавляют вазелин и ланолин безводный в соотношении 85:10, смесь охлаждают до температуры 25-30°С; полученную смесь смешивают с 5 частями полученного жидкого экстракта корней брионии белой. Изобретение позволяет получать средство, не имеющее раздражающего запаха. 2 табл., 4 ил.

Способ получения мази, обладающей наружным раздражающим и согревающим действием, путем экстракции растительного сырья и последующего смешивания экстракта с вазелином и ланолином безводным, отличающийся тем, что растительное сырье - корни брионии белой - измельчают до размера частиц не более 3 мм, обезжиривают смесью хлороформ-этанол (2:1) в течение 7-10 ч с последующим удалением растворителя, далее высушенный шрот из корней брионии белой экстрагируют 70% этиловым спиртом при температуре 18-20°С, при соотношении сырье: экстрагент 1:2,0 в течение 144 ч в шести диффузорах, причем первую порцию сырья экстрагируют чистым экстрагентом, а каждую последующую - вторую, третью, четвертую, пятую, шестую экстрагируют вытяжкой, полученной при экстрагировании предыдущей порции сырья, затем при температуре 50-55°С сплавляют вазелин и ланолин безводный в соотношении 85:10, смесь охлаждают до температуры 25-30°С, полученную смесь смешивают с 5 частями полученного жидкого экстракта корней брионии белой.