СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРДИОТРОПНОГО СРЕДСТВА Российский патент 2002 года по МПК A61K35/78 A61P9/04 

Изобретение относится к медицине и касается способов получения препаратов из растительного сырья, которое может быть использовано для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, сопровождающихся хронической сердечной недостаточностью.

Известны средства, улучшающие функциональное состояние сердца при его декомпенсации - лантозид, целанид, дигоксин, кордигит и другие [РЛС-Аптекарь /Под ред. Крылова Ю.Ф. - М., 2001. - 1584 с.; Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. М. : Медицина, 1985. - С. 81-83; Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2-х т. - М.: Медицина, 1988. - T. 1. - С. 395.].

Наиболее близким по природе происхождения (прототипом) является лекарственное средство адонизид (новогаленовый препарат из травы горицвета весеннего), обладающий кардиотропный активностью. Адонизид по характеру действия занимает промежуточное место между строфантином - К и препаратами наперстянки. Он оказывает на сердце положительное инотропное (повышение функции сократительности), отрицательное хронотропное (замедление частоты сердечных сокращений) и отрицательное батмотропное действие (понижение возбудимости сердечной мышцы). Известен способ получения кардиотропного средства адонизид, заключающийся в экстракции растительного сырья горицвета весеннего смесью хлороформа и 95% этилового спирта в соотношении 95:5, с последующей очисткой от балластных веществ [Технология лекарственных форм: В 2-х т. /Под ред. Ивановой Л.А. - М.: Медицина, 1991. - T.1. - C. 430-431].

Адонизид, препараты наперстянки относятся к гликозидам и поэтому их существенным недостатком является кумулятивное и гепатотоксическое действие. В этой связи длительное применение таких препаратов нежелательно и рекомендуется их чередование с другими лекарственными препаратами во избежание побочных эффектов.

Вместе с тем, перечень препаратов, обладающих кардиотропных эффектом, ограничен [Машковский М.Д., 1988; РЛС-Аптекарь. 2001] из-за отсутствия соответствующей базы растений. Следовательно, расширение арсенала препаратов растительного происхождения, характеризующихся кардиотропными свойствами, является актуальной задачей.

Целью предлагаемого изобретения является разработка способа получения кардиотропного средства из пажитника сенного, характеризующегося отсутствием гепатоксического действия.

Поставленная задача достигается тем, что для получения целевого продукта исходное сырье - семена пажитника сенного (Trigo-nella foenum graecum L.), обрабатываются 95% этиловым спиртом при температуре 18-20^oС, при соотношении сырье: экстрагент 1:1 в течение 144 часов в шести диффузорах.

В литературе отсутствуют данные о возможности применения экстракта пажитника сенного в качестве кардиотропного средства. Предлагаемое кардиотропное средство можно использовать в медицинской практике для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, сопровождающихся нарушением кровообращения. Данное свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники. Таким образом, предлагаемое решение соответствует критериям изобретения - "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Применение в качестве экстрагента 95% этилового спирта обусловлено наиболее полным извлечением действующих веществ. Температурный режим, соотношение сырье: экстрагент, число диффузоров, время экспозиции являются оптимальными и подобраны экспериментальным путем.

Кардиотропное средство получают следующим образом: измельченные семена пажитника сенного (Trigonella foenum graecum L.) и экстрагент, 95% этиловый спирт делят на шесть равных частей. Первую порцию сырья экстрагируют чистым экстрагентом, а каждую последующую (вторую, третью, четвертую, пятую, шестую) экстрагируют вытяжкой, полученной при экстрагировании предыдущей порции сырья. Соотношение сырье: экстрагент при этом равно 1:1 с учетом поглощения сырья. Продолжительность процесса 144 часа. Полученное извлечение (жидкий экстракт) поцеживают через 4 слоя марли, отстаивают при температуре не выше 10^oС не менее 2-х суток. Выход экстракта по действующим веществам составляет 77,2%. Содержание стероидных соединений в препарате, в пересчете на диосгенин, составляет 2,07±0,001%.

Пример конкретного выполнения способа.

Пример.

Приготовление экстракта проводили в шести перколяторах. В каждый из шести перколяторов укладывали измельченные семена пажитника сенного массой 20,0 кг. Объем экстрагента, вводимого в батарею перколяторов на каждой ступени экстракции, составляет 40,2 л. Объем каждого извлечения, отбираемого из шестого, головного перколятора, равен 20 л.

1 день. В работу вводили перколяторы 1 и 2. В 8 часов утра в перколятор 1 заливали 40,2 л экстрагента и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали кран перколятора 1 и сливали извлечение в сборник 1. В перколятор 1 вводят 40,2 л экстрагента и продолжали сливать жидкую фазу до ее полного накопления в сборнике 1 объемом 20 л. После чего кран перколятора 1 закрывали, а извлечение из сборника 1 переливали в перколятор 2. Перколяторы 1 и 2 оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня (около 16 часов).

2 день. В работу вводили перколяторы 3 и 4. В 8 часов утра открывали краны перколяторов 1 и 2 и проводили слив извлечений. В перколятор 1 вводили 40,2 л экстрагента и продолжали слив извлечения до полного его накопления в сборник 1 объемом 20 л. После чего кран перколятора 1 закрывали. Извлечение из сборника 1 переносили в перколятор 2 и накапливали в сборнике 2 извлечение объемом 20 л после чего закрывали кран перколятора 2. Извлечение из сборника 2 переносили в перколятор 3 и оставляют настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов 1-3 и проводили слив извлечений. В перколятор 1 вводили 40,2 л экстрагента и продолжали слив извлечения до его накопления в сборнике 1 объемом 20 л. После чего кран перколятора 1 закрывали. Извлечение из сборника 1 переносили в перколятор 2. Слив извлечения из сборника 2 объемом 20 л переносили в перколятор 3, а слив извлечения из сборника 3 объемом 20 л переносили в перколятор 4. Перколяторы 1-4 оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня.

3 день. В работу вводили перколяторы 5 и 6. В 8 часов утра открывают краны перколяторов 1 и 2 и проводили слив извлечения. В перколятор 1 вводили 40,2 л экстрагента. Слив извлечения из сборника 1 объемом 20 л переносили в перколятор 2. Слив извлечения из сборника 2 объемом 20 л переносили в перколятор 3, слив извлечения из сборника 3 объемом 20 л переносили в перколятор 4. Слив извлечения из сборника 4 объемом 20 л переносили в перколятор 5. Перколяторы 1-5 оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывают краны перколяторов 1-5 и проводили слив из I-й порции извлечения. В перколятор 1 вводили 40,2 л экстрагента. Слив извлечения из сборника 1 объемом 20 мл переносили в перколятор 2, слив извлечения из сборника 2 объемом 20 мл переносили в перколятор 3, слив извлечения из сборника 3 объемом 20 мл переносили в перколятор 4. Слив извлечения из сборника 4 объемом 20 мл переносили в перколятор 5. Слив извлечения из сборника 5 объемом 20 мл переносили в перколятор 6. Перколяторы 1-6 оставляли настаиваться до 8 часов следующего дня.

4 день. Проводят съем 1 и 2 порции экстракта, выводят из работы перколяторы 1 и 2. В 8 часов утра открывали краны перколяторов 1-6 и проводили слив извлечений. Объем каждого извлечения должен составлять 20 л. Извлечение 13 сборника 6 переносили в отстойник. Перколятор 1 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора 1 разгружали и переносят в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников 1-5, объемом каждое 20 мл, переносили на очередную ступень экстракции, в перколяторы 2-6, и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов 2-6 и проводили слив извлечений. Извлечение из сборника 6 переносили в отстойник. Перколятор 2 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора 2 разгружали и переносили в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников 2-5, объемом каждое 20 мл, переносили на очередную ступень экстракции в перколяторы 3-6 и оставляли настаиваться до 8 часов утра следующего дня.

5 день. Производили съем 3 и 4 порции экстракта, выводили из работы перколяторы 3 и 4. В 8 часов утра открывали краны перколяторов 3-6 и проводили слив извлечений. Объем каждого извлечения должен составлять 20 мл. Извлечение 13 сборника 6 переносили в отстойник. Перколятор 3 разгружали и переносили истощенное сырье в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников 3-5, объемом каждое 20 мл, переносили на очередную ступень экстракции перколяторы 4-6 и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов 4-6 и проводили слив извлечений. Извлечение из сборника 6 переносили в отстойник. Перколятор 4 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора 4 разгружали и переносили в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников 4-5, объемом каждое 20 мл, переносили на очередную ступень экстракции в перколяторы 5-6 и оставляли настаиваться до 8 часов следующего дня.

6 день. Производили съем 5 и 6 порции экстракта, выводили из работы перколяторы 5 и 6. В 8 часов утра открывали краны перколяторов 5-6 и проводили слив извлечений. Объем каждого извлечения должен составлять 20 мл. Извлечение из сборника 6 переносили в отстойник. Перколятор 5 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора 5 разгружали и переносили в колбу для отгонки спирта. Извлечения из сборников 5, объемом 20 мл, переносили в перколятор 6 и оставляли настаиваться до 16 часов.

В 16 часов открывали краны перколяторов 6 и проводили слив извлечения. Извлечение из сборника 6, объемом 20 мл, переносили в отстойник. Перколятор 6 выводили из работы. Истощенное сырье из перколятора 6 разгружали и переносили в колбу для отгонки спирта. Все шесть извлечений объединяли, перемешивали и отстаивали при температуре не выше 10^oС в течение 2 суток, после чего отфильтровывали и проводили оценку качества.

Для установления кардиотропных свойств экстракта пажитника проведены 2 серии эксперимента. Кардиотропный эффект изучали по показателям хронотропного и инотропного эффекта.

Хронотропный эффект оценивали по числу сердечных сокращений в минуту. Эксперимент проводили на белых беспородных крысах обоего пола, содержащихся в общевиварийном режиме, массой 200-220 г с помощью кардиографа ЭК1Т-0,3М. Раствор экстракта вводили в объеме 1,0 мл в желудок через зонд. Кардиограмму снимали до введения и через 2 часа после введения вещества. Для исключения влияния высоких концентраций спирта (95%) на слизистую желудка и ЦНС, экстракт упаривали до 1/3 объема, а затем доводили объем до исходного физиологическим раствором. В контроле вводили 30% этиловый спирт.

Инотропной эффект оценивали по электрокардиограмме (ЭКГ) по степени укорочения интервала Q-T и уменьшению вольтажа зубца Т. В группе животных, получавших экстракт в дозе 20 мг/кг, отмечалось укорочение интервала Q-T и снижение вольтажа зубца Т, что свидетельствует об усилении положительного инотропного эффекта. Поскольку количественная оценка изменений в характере кардиограммы затруднительна, инотропный эффект дополнительно оценивали с помощью миографа. Опыты проводили на изолированном сердце лягушки, на которое наносили 1% раствор экстракта пажитника сенного.

Статистическую обработку результатов всех серий опытов проводили с использованием метода вариационной статистики с использованием коэффициента Стьюдента. Результаты исследований представлены в примерах 1-5.

Примеры кардиотропной активности препарата.

Пример 1.

Введение опытным группам животных (крысы) экстракта пажитника сенного в дозе 20 мг/кг приводило к снижению частоты сердечных сокращений (ЧСС) на 32,8% по сравнению с контролем (таблица 1).

Пример 2.

Введение опытным группам животных (крысы) адонизида в дозе 20 мг/кг приводило к снижению частоты сердечных сокращений (ЧСС) на 32,1% по сравнению с контролем (таблица 1).

Пример 3.

Нанесение 1% раствора экстракта пажитника сенного на изолированное сердце опытных групп животных (лягушки) приводило к увеличению силы сердечных сокращений (ССС) на 18,91% по сравнению с контролем (таблица 2).

Пример 4.

Нанесение 1% раствора адонизида на изолированное сердце опытных групп животных (лягушки) приводило к увеличению силы сердечных сокращений (ССС) на 17,35% по сравнению с контролем (таблица 2).

Таким образом, экстракт пажитника сенного, приготовленный с использованием 95% этанола, обладает выраженным кардиотропным действием и не уступает прототипу (адонизиду) по способности снижать частоту сердечных сокращений и увеличивать их силу.

Параллельно с изучением кардиотропного действия экстракта пажитника сенного нами была изучена его острая токсичность. Результаты исследования представлены в примере 5.

Пример 5.

Опыты проводили на белых беспородных мышах массой 15-20 г. Экстракт сгущали, а затем вводили мышам в виде водного раствора внутрь через зонд. Изучались дозы 1000; 1500; 2000; 2500; 3000 мг/кг. Наблюдение за животными проводили в течение 7 дней. На каждую дозу брали 6 животных. В I группе животных, получавших исследуемое вещество в дозе 1000 мг/кг, за период наблюдения погибших животных не было. Во II группе погибло 1 животное (доза 1500 мг/кг). В III группе (доза 2000 мг/кг) погибло 50% животных (из 6 животных - 3), в IV группе (доза 2500 мг/кг)- из 6 животных -4. В V группе (доза 3000 мг/кг) погибли все животные. Таким образом, исходя из расчетов по Керберу, острая токсичность составляет 2083 мг/кг. Расчеты представлены в таблице 3.

Таким образом, экстракт пажитника сенного относится к 3 классу вредных веществ по степени опасности 1 (умеренно опасные вещества) [Лечение острых отравлений /Под ред. М.Л. Тараховского - Киев: Здоровье, 1982. - С. 7] или к классу "малотоксичные вещества" по комбинированной табуляции классов токсичности (по Hodge и Sterner) [Методы определения токсичности и опасности химических веществ /Под ред. И.В.Саноцкого. - М.: Медицина, 1970. - С.16].

Изобретение относится к медицине. Жидкую вытяжку из семян пажитника сенного получают путем экстракции 95%-ным этиловым спиртом при соотношении сырье: экстрагент 1:1 при 18-20^oС в течение 144 ч в 6 диффузорах. Изобретение позволяет получать продукт с отсутствием гепатотоксического действия. 3 табл.

Способ получения экстракта жидкого из растительного сырья, обладающего кардиотропным действием, отличающийся тем, что экстрагируют семена пажитника сенного 95%-ным этиловым спиртом при соотношении сырье: экстрагент= 1: 1 в течение 144 ч при 18-20^oС в шести диффузорах.