1-ФЕНИЛ-2-ГЕТЕРОАРИЛЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛА, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, А ТАКЖЕ СОДЕРЖАЩИЕ ЭТИ ПРОИЗВОДНЫЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ Российский патент 2008 года по МПК C07D401/04 C07D409/04 C07D413/14 C07D417/14 A61K31/4164 A61P37/00 

Настоящее изобретение относится к новым производным бензимидазола, к способу их получения и к их применению для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний, связанных с активацией микроглии, и для лечения опосредуемых Т-клетками иммунологических заболеваний, а также к фармацевтическим препаратам, содержащим эти новые производные бензимидазола.

Иммунная система охватывает большое число различных клеток и сложных тканевых структур, которые взаимодействуют между собой преимущественно посредством растворимых факторов. Известно, что возникновение многих иммунологических заболеваний обусловлено дисбалансом растворимых факторов иммунитета, например цитокинов (Mosmann и Coffman, Ann. Rev.Immunol, 7, 1989, cc.145-173; Street и Mosmann, FASEB J., 5, 1991, cc.171-177; Lucey и др., Clin. Microbiol. Rev., 4, 1996, cc.532-562; Powrie и Coffman, Trends Pharmacol. Sci., 14, 1993, cc.164-168; Singh и др., Immunolog. Res., 20, 1999, cc.164-168). Так, например, существует множество свидетельств касательно той роли, которую γ-интерферон и интерлейкин 12 играют в патогенезе аутоиммунных заболеваний. Особо в этом отношении следует назвать заболевания, для которых характерна опосредуемая Т-клетками (Т-лимфоцитами) воспалительная реакция, например множественный склероз, диабет, хронические воспалительные заболевания кишечника. Интерлейкин 12 (IL-12), являющийся одним из представителей цитокинов, продуцируется фагоцитами, например макрофагами/моноцитами, дендритами, В-клетками и иными антиген-презентирующими клетками (АПК), и влияет как на функцию естественных клеток-киллеров (NK-клеток), так и на функцию Т-лимфоцитов. IL-12 может стимулировать продуцирование γ-интерферона (IFNγ) в клетках обоих указанных типов. Т-лимфоциты можно в первом приближении подразделить на две категории, для которых характерна экспрессия определенных поверхностных антигенов (CD4 и CD8), а именно на CD4-позитивные Т-клетки (Т-клетки-хелперы) и СD8-позитивные Т-клетки (цитотоксические Т-клетки). СD4-клетки в свою очередь можно подразделить на Т-клетки-хелперы типа 1 (Th1) и Т-клетки-хелперы типа 2 (Th2). Именно опосредуемые Th1-клетками иммунные ответы связаны с патогенезом многочисленных иммунных, прежде всего аутоиммунных, заболеваний, таких, например, как инсулинозависимый сахарный диабет типа I (ИЗСД), множественный склероз, аллергическая контактная экзема, псориаз, ревматоидный артрит, хронические воспалительные заболевания кишечника (болезнь Крона, язвенный колит), волчаночные заболевания и иные коллагенозы, а также острые реакции отторжения при аллотрансплантации (реакция "хозяин против трансплантата", реакция "трансплантат против хозяина").

В отношении интерлейкина 12 известно, что он играет наиважнейшую роль в регуляции ответа Th1-клеток. Интерлейкин 12 индуцирует в этих клетках продуцирование главным образом IL-2, IFNγ, TNFα и TNFβ (Mosmann и Sad, Immunol Today, 17, 1996, cc.138-146; Gately и др., Annu. Rev. Immunol, 16, 1998, cc.495-521). Именно IFNγ является эффективным медиатором оказываемого IL-12 действия. Избыточное продуцирование γ-интерферона может отвечать, например, за возникновение аутоиммунных заболеваний, связанных с МНС II (от англ. "major histocompatibility complex", главный комплекс гистосовместимости). Помимо этого существует также достаточно большое число явных свидетельств касательно той патологической роли, которую γ-интерферон играет при аллергических заболеваниях, а также при саркоидозе и псориазе (A.Billiau, Adv.Immunol, 62, 1996, cc.61-130; Basham и др., J.Immunol., 130, 1983, cc.1492-1494; Hu и др., Immunology, 98, 1999, cc.379-385; J.P.Seery, Arthritis Res., 2, 2000, cc.437-440). Кроме того, интерлейкин 12 и индуцированный интерлейкином 12/интерлейкином 18 γ-интерферон из NK-клеток играют важную роль в патомеханизме не опосредуемых Т-клетками воспалительных реакций (таких, например, как синдром токсического шока, эндотоксинемия, сепсис, септический шок, острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), "ответ на введение первой дозы" ("first dose response") при терапии антителами, например после введения ОКТ3 при аллотрансплантации) (Kum и др., Infect Immun., 69, 2001, cc.7544-7549; Arad и др., J. Leukoc. Biol. 69, 2001, cc.921-927; Hultgren и др., Arthritis Res., 3, 2001, cc.41-47, Arndt и др., Am. J.Respir. Cell. Mol. Biol., 22, 2000, cc.708-713; Grohmann и др., J.Immunol., 164, 2000, cc.4197-4203; Muraille и др., Int. Immunol., 11, 1999, cc.1403-1410). IL-12 играет также определенную роль при воспалениях, в основе которых лежат не выявленные в настоящее время патомеханизмы (например, при эклампсии) (Hayakawa и др., J.Reprod. Immunol., 47, 2000, cc.121-138; Daniel и др., Am. J.Reprod. Immunol., 39, 1998, cc.376-380).

Наряду с интерлейкином 12 и IFNγ определенная роль в патогенезе иммунных заболеваний и системных воспалительных реакций приписывается и иным цитокинам, таким, например, как TNFα (α-фактор некроза опухоли). TNFα играет важную патологическую роль при инфекционных заболеваниях (таких как сепсис, синдром токсического шока (Tracey и др., Nature, 330, 1987, cc.662-664; Basger и др., Circ. Shock, 27, 1989, cc.51-61; Hinshaw и др., Circ. Shock, 30, 1990, cc.279-292; A. Waage, Lancet, 351, 1998, с.603; Cohen и др., Lancet, 351, 1998, с.1731)), но также и при многочисленных иных иммуноопосредованных заболеваниях.

Для лечения опосредуемых IL-12 заболеваний и для ослабления острых симптомов таких заболеваний часто используют кортикостероиды, проявляющиеся при применении которых побочные действия и прежде всего при длительной терапии часто являются причиной прекращения курса лечения.

Ключевой фазой воспалительного процесса практически всех дегенеративных заболеваний центральной нервной системы является активация глиальных макрофагов, или микроглии. Глиальные макрофаги в течение длительного периода времени могут оставаться в активированном состоянии, в котором они продуцируют и секретируют различные воспалительные факторы, например реакционноспособные кислород-/азотсодержащие промежуточные продукты, протеазы, цитокины, факторы комплемента и нейротоксины. Такие факторы в свою очередь приводят к дисфункции и перерождению нервных клеток. Активацию микроглии могут вызывать различные стимулы, такие, например, как Аβ-петид (β-амилоид, D.M.Araujo и С.М.Cotman, Brain Res. 569, 1992, cc.141-145 (1992)), прион-протеин, цитокины или клеточные фрагменты (С.К.Combs и др., J.Neurosci. 19, 1999, cc.928-939, P.L.Wood, Neuroinflammation: Mechanisms and Management, изд-во Humana Press, 1998).

Бензимидазолы, которые ингибируют активацию микроглии после стимуляции Аβ-пептидом, описаны в заявке WO 01/51473. Из этой заявки известно также, что бензимидазолы, которые ингибируют активацию микроглии, используются для лечения нейровоспалительных заболеваний, например СПИД-деменции, бокового амиотрофического склероза, болезни Крейтцфельда-Якоба, болезни Дауна, болезни диффузных телец Леви, болезни Хантингтона, лейкодистрофии, множественного склероза, болезни Паркинсона, болезни Пика, болезни Альцгеймера, апоплексии, височной эпилепсии и различных опухолей.

В ЕР 0104727 А1 описаны производные бензимидазола, которые не замещены в положении 1, а в положении 2 содержат алкильную группу. Заместителями в бензольном кольце этих производных являются, в частности, пиридилоксиостаток, пиридилалкильный остаток, пиридилалкилоксиостаток и пиридилоксиалкандиильный остаток.

В заявке WO 01/21634 А1 описаны далее производные бензимидазола, которые в положении 1 содержат алкандииламидогруппу, а в положении 2 содержат, в частности, замещенный фенильный или гетероарильный остаток и которые в аннелированном бензольном кольце могут быть замещены, в частности, по меньшей мере одним замещенным алкоксиостатком, алкиламиноостатком, алкилсульфонильным остатком или алкилсульфоксидным остатком. В указанной заявке говорится, что эти соединения могут в качестве действующего вещества в составе лекарственных средств использоваться при целом ряде различных показаний.

В патенте US 5552426 описаны замещенные бензимидазолы, которые в положении 1 содержат, в частности, фенильный или нафтильный остаток, а в положении 2 содержат, в частности, фенильный или гетероциклический остаток. Аннелированное бензольное кольцо таких бензимидазолов предпочтительно замещено алкокси- или аминоалкоксиостатком. Согласно приведенной в указанном патенте информации подобные соединения эффективны при заболеваниях, в основе которых лежит связанная с β-амилоидным пептидом нейротоксичность.

В заявке WO 97/12613 А1 описаны различные подавляющие воспалительный процесс и препятствующие развитию артериосклероза средства. В качестве примера обладающих подобными свойствами действующих веществ в этой заявке указаны производные бензимидазола, которые в положении 1 замещены, в частности, фенильным или замещенным фенильным остатком, а в положении 2 замещены алкоксиостатком. Заместителями в бензольном кольце у таких биологически активных соединений могут служить, в частности, алкильные остатки, нитроостатки, атомы галогена, алкоксиостатки, аминоостатки, сложноэфирные остатки, амидные остатки, алкандиилалкоксиостатки и алкандииламиноостатки.

В заявке ЕР 0520200 А2 описаны производные бензимидазола, которые в положении 1 содержат замещенные арильные остатки, а в положении 2 содержат одно- либо двузамещенные или незамещенные аминогруппы. Бензольное кольцо бензимидазольного скелета может быть замещено галогеном, трифторметилом и/или цианогруппой. Такие соединения предназначены для лечения заболеваний, связанных с повышенной активацией Са-каналов.

В заявке WO 97/33873 А1 также описаны производные бензимидазола, используемые для лечения цистита. Эти соединения могут содержать в положении 1, в частности, фенильные, нафтильные и ненасыщенные гетероциклические остатки. В положении 2 такие производные могут быть замещены алкоксиостатком, фенилалкоксиостатком, нафтилалкоксиостатком, гетероциклалкоксиостатком или ненасыщенным гетероциклалкоксиостатком. Бензольное кольцо скелета этих производных может быть замещено нитроостатками, алканоильными остатками, аминоостатками, алкильными остатками, алкоксиостатками, циклоалкильными остатками, гетероциклическими остатками, ненасыщенными гетероциклическими остатками, атомами галогена, алкилтиоостатками, гидроксиалкилиденильными остатками, гидроксиалкилидениламиноостатками, аминоалкилиденильными остатками, аминоалкоксиостатками, гидроксиалкильными остатками, гетероциклалкоксиостатками, аминоалкилиденильными остатками или трифторметильными остатками.

В заявке ЕР 0531883 А1 описаны конденсированные 5-членные гетероциклы, например замещенные производные бензимидазола, при этом такие соединения согласно общему их описанию в положении 1 предпочтительно замещены замещенным алкильным остатком, а в положении 2 замещены, например, O-алкандиильным, S-алкандиильным, NH-алкандиильным, N(алкил)алкандиильным, SO-алкандиильным или SO₂-алкандиилльным остатком. Описанные в этой заявке соединения должны предположительно обладать антитромбической активностью.

Один из возможных, описанных в литературе подходов по терапии воспалительных заболеваний нервной системы состоит в настоящее время в применении нестероидных подавляющих воспалительный процесс ингибиторов (ингибиторов СОХ II) (P.L.McGeer, Roger, Neurology, 42, 1992, cc.447-449; J.Rogers, L.C.Kirby, S.R.Hempleman, D.L.Berry, P.L. McGeer, A.W.Kaszniak, J.Zalinski, M.Cofield, L.Mansukhani, P.Wilson, F.Kogan, Neurology, 43, 1993, cc.1609-1611; К.Andersen, L.J.Launer, A.Ott, A.W.Hoes, M.M.B.Breteler, A.Hofman, Neurology, 45, 1995, cc.1441-1445; J.C.S.Breitner, B.A.Gau, K.A.Welsh, B.L.Plassman, W.M.McDonald, M.J.Helms, J.C.Anthony, Neurology 44, 1994, cc.227-232; The Canadian Study of Health and Aging, Neurology, 44, 1994, cc.2073-2079), модуляторов цитокинов (P.L.McGeer, E.G.McGeer, Brain Res. Rev.21, 1995, cc.195-218; E.G.McGeer, P.L.McGeer, CNS Drugs, 7, 1997, cc.214-228; F.C.Barone и G.Z.Feuerstein, J.Cerebral Blood Flow and Metabolism, 19, 1999, cc.819-834) и ингибиторов пути активации комплемента (S.Chen., R.C.A.Frederickson и K.R.Brunden, Neurobiol. Aging, 1996; E.G.McGeer, P.L.McGeer, Drugs, 55, 1998, cc.739-746).

Известные, применяемые для терапии иммунологических заболеваний соединения, такие, например, как стероиды, часто воздействуют на несколько факторов в иммунной системе и в результате вызывают многочисленные побочные действия. Исходя из этого в основу настоящего изобретения была положена задача предложить вещества, которые благодаря их активности в отношении микроглии обладали бы способностью ингибировать активность цитокинов, не вызывая при этом серьезных токсических побочных действий.

Указанная задача решается с помощью предлагаемых в изобретении новых производных бензимидазола согласно п.1 формулы изобретения, а также за счет применения предлагаемого в изобретении производного бензимидазола для получения лекарственного средства, предназначенного для прерывания продуцирования IL-12 и IFNγ в клетках моноцитарного происхождения, соответственно Т-клетках и NK-клетках.

Ингибиторы микроглии благодаря их способности прерывать продуцирование IL-12 и TNFα в моноцитах/макрофагах/дендритах и продуцирование IFNγ в Т-клетках и NK-клетках пригодны для лечения разнообразных заболеваний, вызванных повышенным продуцированном цитокинов, таких как TNFα и -β, IFNγ, IL-2 и IL-12, например воспалительных заболеваний, не основанных на нейровоспалении, аутоиммунных заболеваний, аллергических и инфекционных заболеваний, вызванных токсинами воспалений, фармакологически спровоцированных воспалительных реакций, а также патофизиологически релевантных воспалительных реакций не выявленного в настоящее время генеза.

В соответствии с этим в изобретении предлагаются производные бензимидазола следующей общей структурной формулы I

в которой R¹ обозначает фенильную группу, которая необязательно содержит до трех заместителей, независимо друг от друга выбранных из группы, включающей F, Cl, Br, J, OH, OR⁴, OCOR⁴, SR⁴, SOR⁴, SO₂R⁴, R⁴, NH₂, NHR⁴ и NR⁴R^4', или два смежных заместителя при R¹ совместно образуют группу -O-СН₂-O-, -O-СН₂-СН₂-O- или -СН₂-СН₂-СН₂-,

R² обозначает моноциклическую или бициклическую 5-10-членную гетероарильную группу, которая содержит 1-2 гетероатома, выбранных из N, S и О, и которая необязательно содержит до двух заместителей, независимо друг от друга выбранных из группы, включающей F, Cl, Br, J, ОН, OR⁴, OCOR⁴, COR⁴, SR⁴, SOR⁴, SO₂R⁴ и R⁴, или два смежных заместителя при R² совместно образуют группу -O-СН₂-O-, -O-СН₂-СН₂-O- или -СН₂-СН₂-СН₂-,

R³ обозначает Н, ОН или О-С_1-6алкил,

R⁴ и R^4' независимо друг от друга обозначают С_1-4перфторалкил или С_1-6алкил,

А обозначает С_2-6алкиленовую группу, которая необязательно замещена =O, ОН, О-С_1-3алкилом, NH₂, NH-С_1-3алкилом, NH-С_1-3алканоилом, N(С_1-3алкилом)₂ или N(С_1-3алкил)(С_1-3алканоилом),

В обозначает группу СООН, CONH₂, CONHNH₂, CONHR⁵ или CONR⁵R^5', в каждом случае присоединенную к атому углерода группы А,

R⁵ и R^5' независимо друг от друга обозначают остаток, выбранный из группы, включающей С_1-6алкил, С_2-6алкенил, С_2-6алкинил, где один С-атом может быть заменен на О, S, SO, SO₂, NH, N-С_1-3алкил или N-С_1-3алканоил, (С_0-3алкандиил-С_3-7циклоалкил), где в пятичленном циклоалкильном кольце одним кольцевым членом может являться кольцевой N-атом или кольцевой O-атом, а в шести- или семичленном циклоалкильном кольце одним или двумя кольцевыми членами могут являться соответственно кольцевой N- и/или кольцевой O-атомы, при этом кольцевые N-атомы необязательно могут быть замещены С_1-3алкилом или С_1-3алканоилом, а также включающей (С_0-3алкандиилфенил) и (С_0-3алкандиилгетероарил), где гетероарильная группа является пяти- или шестичленной и содержит один или два гетероатома, выбранных из группы, включающей N, S и О, при этом все вышеуказанные алкильные и циклоалкильные остатки необязательно могут содержать до двух заместителей, выбранных из группы, включающей CF₃, C₂F₅, ОН, О-С_1-3алкил, NH₂, NH-С_1-3алкил, NH-С_1-3алканоил, N(С_1-3алкил)₂, N(С_1-3алкил)(С_1-3алканоил), СООН, CONH₂ и СОО-С_1-3алкил, а все вышеуказанные фенильные и гетероарильные группы необязательно могут содержать до двух заместителей, выбранных из группы, включающей F, Cl, Br, СН₃, С₂Н₅, ОН, ОСН₃, ОС₂Н₅, NO₂, N(СН₃)₂, CF₃, C₂F₅ и SO₂NH₂, или

R⁵ и R^5' совместно с N-атомом образуют пяти-семичленное гетероциклическое кольцо, которое может содержать еще один N-, О- или S-атом и которое может быть замещено С_1-4алкилом, (С_0-2алкандиил-С_1-4алкоксигруппой), С_1-4алкоксикарбонилом, аминокарбонилом или фенилом,

а также их оптические или геометрические изомеры или таутомеры или их фармацевтически приемлемые соли, за исключением следующих соединений:

6-[[1-фенил-2-(пиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты и

6-[[1-фенил-2-(бензотиен-2-ил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты.

Предпочтительными являются соединения, в которых R¹ обозначает фенильную группу, которая необязательно содержит до двух заместителей, независимо друг от друга выбранных из группы, включающей F, Cl, ОН, OR⁴, OCOR⁴, SR⁴ и R⁴, или два смежных заместителя при R¹ образуют группу -O-СН₂-O- или -СН₂-СН₂-СН₂-.

Предпочтительны также производные бензимидазола, в которых R² обозначает моноциклическую 5-6-членную гетероарильную группу, которая содержит 1-2 гетероатома, выбранных из группы, включающей N, S и О, и которая необязательно содержит до двух заместителей, независимо друг от друга выбранных из F, Cl, OR⁴, OCOR⁴, SR⁴, SOR⁴, SO₂R⁴ и R⁴, или два смежных заместителя при R² образуют группу -O-СН₂-O- или СН₂-СН₂-СН₂-.

Предпочтительны далее производные бензимидазола, в которых R³ обозначает Н.

К числу предпочтительных относятся и производные бензимидазола, в которых R⁴ и R^4' независимо друг от друга обозначают С_1-2перфторалкил или С_1-4алкил.

Предпочтительны также производные бензимидазола, в которых R⁵ и R^5' независимо друг от друга обозначают С_1-6алкил, где один атом углерода может быть заменен на О, S, SO или SO₂, С_3-5циклоалкил-С_0-3алкилен, где в 5-членном циклоалкильном кольце одним кольцевым членом может являться N-атом или O-атом, при этом кольцевой атом азота необязательно замещен С_1-3алкилом или С_1-3алканоилом, или С_0-2алкилен-(5-6-членный гетероарил с 1-2 гетероатомами из числа N, S и О), при этом все вышеуказанные алкильные и циклоалкильные остатки могут быть замещены группой CF₃, группой ОН, группой NH₂, NH-С_1-3алкилом, NH-С_1-3алканоилом, N(С_1-3алкилом)₂, N(С_1-3алкил)(С_1-3алканоилом), группой СООН или группой CONH₂, а все вышеуказанные гетероарильные группы могут быть замещены одним или двумя заместителями, выбранными из группы, включающей F, Cl, СН₃, С₂Н₅, ОСН₃, ОС₂Н₅, CF₃ и С₂F₅, или R⁵ и R^5' совместно с атомом азота образуют 5-7-членный гетероцикл, который может содержать еще один атом кислорода, азота или серы и может быть замещен С_1-4алкилом или С_1-4алкокси-С_0-2алкилом.

Предпочтительны далее производные бензимидазола, в которых А обозначает неразветвленный С_3-6алкилен.

Предпочтительны также производные бензимидазола, в которых В обозначает группу СООН или CONH₂, в каждом случае присоединенную к атому углерода группы А.

К особо предпочтительным относятся следующие конкретные бензимидазолы:

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(4-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

5-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

6-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1H-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

5-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

6-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

N-(3-метоксипропил)-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]-1-морфолин-1-илгексан-1-он,

N-метил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N,N-диметил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1H-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N-циклопропил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N-метил-6-[[1-(4-метилфенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-фенил-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]-1-(тиазолидин-3-ил)гексан-1-он,

N-(2-метоксиэтил)-5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид,

N,N-диметил-5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид,

5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси] пентанамид и

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(2-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота.

В объем настоящего изобретения включены также физиологически совместимые соли указанных выше соединений, прежде всего кислые соли предлагаемых в изобретении производных бензимидазола, когда они представлены в виде азотистых оснований, а также основные соли предлагаемых в изобретении производных, когда они представлены в виде карбоновых кислот.

Предлагаемые в изобретении производные бензимидазола могут иметь один или несколько асимметрических центров, и поэтому такие соединения могут существовать в нескольких изомерных формах. Соединения формулы I могут быть также представлены в виде таутомеров, стереоизомеров или геометрических изомеров. В объем изобретения в соответствии с этим включены также все возможные изомеры, такие как Е- и Z-изомеры, S- и R-энантиомеры, диастереомеры, рацематы и их смеси, в том числе таутомерных соединений. Все такие изомерные соединения, даже если в каждом конкретном случае это и не оговорено особо, являются составной частью настоящего изобретения.

Смеси изомеров можно по обычным методам, таким, например, как кристаллизация, хроматография или солеобразование, разделять на энантиомеры, соответственно на E/Z-изомеры.

Содержащиеся в предлагаемых в изобретении бензимидазольных соединениях гетероарильные группы состоят из 5-10 скелетных атомов и могут содержать 1 или 2 гетероатома. Такими гетероатомами являются кислород (О), азот (N) и сера (S).

В качестве примеров моноциклических гетероарильных групп можно назвать пирролил, тиенил, фуранил, имидазолил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, пиразолил, пиридил, пиримидинил и пиридазинил.

Примерами бициклической гетероарильной группы являются индолил, изоиндолил, бензотиофенил, бензофуранил, бензимидазолил, индазолил, хинолил, изохинолил, фталазинил, хиназолинил, циннолинил, хиноксалинил и нафтиридинил. Когда гетероарильная группа образуют часть заместителя R¹, связь с атомом N бензимидазола осуществляется через атом углерода.

Гетероарильные остатки могут быть любым образом присоединены к бензимидазольному скелету или к иной группе, например в виде 2-, 3- либо 4-пиридинила, в виде 2- либо 3-тиенила или в виде 1-имидазолила.

Алкильные группы могут иметь прямую или разветвленную цепь. В качестве примера таких алкильных групп можно назвать метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил, трет-пентил, неопентил, н-гексил и втор-гексил.

Перфорированными алкильными остатками являются предпочтительно CF₃ и C₂F₅.

Под циклоалкильными группами в каждом случае подразумеваются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил или циклогептил.

В качестве примеров насыщенного гетероциклического кольца, соответственно в качестве примеров циклоалкила с одним или несколькими гетероатомами можно назвать пиперидин, пирролидин, тетрагидрофуран, морфолин, пиперазин, гексагидроазепин, а также 2,6-диметилморфолин, N-фенилпиперазин, 2-метоксиметилпирролидин, пиперидин-4-карбонамид, тиоморфолин и тиазолидин, при этом связь может осуществляться через присутствующие при определенных условиях кольцевые N-атомы.

Примерами неразветвленного или разветвленного, содержащего до шести С-атомов алкилена в качестве значений заместителя А являются этилен, пропилен, бутилен, пентилен, гексилен, а также 1-метилэтилен, 1-этилэтилен, 1-метилпропилен, 2-метилпропилен, 1-метилбутилен, 2-метилбутилен, 1-этилбутилен, 2-этилбутилен, 1-метилпентилен, 2-метилпентилен, 3-метилпентилен и аналогичные соединения.

А может быть двузамещен, предпочтительно однозамещен, группой ОН, группой NH₂, NH-С_1-3алкилом или NH-С_1-3алканоилом.

Для образования физиологически совместимых кислых солей предлагаемых в изобретении производных бензимидазола, когда они представлены в виде азотистых оснований, пригодны неорганические и органические кислоты, такие, например, как щавелевая кислота, молочная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, уксусная кислота, малеиновая кислота, винная кислота, фосфорная кислота, соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, n-толуолсульфоновая кислота и метансульфоновая кислота.

При наличии в предлагаемых в изобретении соединениях кислотных групп, прежде всего групп карбоновых кислот, возможно также образование солей с неорганическими или органическими основаниями, которые известны по их применению для образования физиологически совместимых солей и в качестве примера которых можно назвать гидроксиды щелочных металлов, прежде всего гидроксид натрия и гидроксид калия, гидроксиды щелочноземельных металлов, такие как гидроксид кальция, а также аммиак и амины, такие как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, N-метилглюкамин и трис(гидроксиметил)метиламин.

Соединения формулы I ингибируют активацию микроглии и продуцирование интерлейкина 12 (IL-12) и γ-интерферона (IFNγ). В соответствии с этим изобретение относится также к применению соединения формулы I, а также его оптических или геометрических изомеров или его таутомеров либо физиологически приемлемой соли для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики связанного с активацией микроглии заболевания, прежде всего вызванного избыточным продуцированном IL-12 и IFNγ заболевания, и для индукции продуцирования интерлейкина 10 (IL-10).

В одном из предпочтительных вариантов предлагаемые в изобретении соединения используются для лечения опосредуемого Т-клетками, в частности опосредуемого клетками Th-1, иммунологического заболевания и не опосредуемых Т-клетками воспалительных реакций. Предлагаемые в изобретении соединения используются прежде всего для получения лекарственного средства, предназначенного для прерывания продуцирования IL-12 и IFNγ в клетках моноцитарного происхождения, соответственно Т-клетках и NK-клетках. Предлагаемые в изобретении соединения благодаря их способности прерывать продуцирование IL-12 и TNFα в моноцитах/макрофагах и продуцирование IFNγ в Т-клетках пригодны для лечения разнообразных заболеваний, вызванных повышенным продуцированном цитокинов, таких как TNFα и -β, IFNγ, IL-2 и IL-12, например воспалительных заболеваний, не основанных на нейровоспалении, аутоиммунных заболеваний, аллергических и инфекционных заболеваний, вызванных токсинами воспалений, фармакологически спровоцированных воспалительных реакций, а также патофизиологически релевантных воспалительных реакций не выявленного в настоящее время генеза.

В качестве примера воспалительных и аутоиммунных заболеваний можно назвать хронические воспалительные заболевания кишечника (болезнь Крона, язвенный колит), артрит, аллергическую контактную экзему, псориаз, пемфигус, астму, множественный склероз, диабет, инсулинозависимый сахарный диабет типа I, ревматоидный артрит, волчаночные заболевания и иные коллагенозы, болезнь Грейвса, зоб Хасимото, реакцию "трансплантат против хозяина" и отторжение трансплантата.

Примерами аллергических, инфекционных, вызванных токсинами и вызванных ишемией заболеваний являются саркоидоз, астма, гиперчувствительный пневмонит, сепсис, септический шок, эндотоксиновый бактериально-токсический шок, синдром токсического шока, токсическая печеночная недостаточность, ОРДС (острый респираторный дистресс-синдром), эклампсия, кахексия, острые вирусные инфекции (например, инфекционный мононуклеоз, молниеносный гепатит), повреждение органов после реперфузии.

Примером фармакологически спровоцированного воспаления с патофизиологической релевантностью служит "ответ на введение первой дозы" ("first dose response") после введения в организм Т-клеточных антител, таких как ОКТ3.

В качестве примера системных воспалительных реакций не выявленного в настоящее время генеза можно назвать эклампсию.

К числу нейровоспалительных заболеваний, связанных с активацией микроглии, относятся, например, СПИД-деменция, боковой амиотрофический склероз, болезнь Крейтцфельда-Якоба, болезнь Дауна, болезнь диффузных телец Леви, болезнь Хантингтона, лейкодистрофия, множественный склероз, болезнь Паркинсона, болезнь Пика, болезнь Альцгеймера, апоплексия, височная эпилепсия и различные опухоли. В соответствии с этим изобретение относится также к применению предлагаемых в нем производных бензимидазола для лечения этих заболеваний, а также для их профилактики.

Согласно изобретению к эффективным ингибиторам микроглии относятся соединения, которые ингибируют активность микроглии при стимуляции Аβ-пептидом по меньшей мере на 20%, а активность цитокинов ингибируют по меньшей мере на 30%. Биологические свойства ингибиторов микроглии можно исследовать известными специалистам в данной области методами, например рассмотренными ниже и описанными в WO 01/51473 методами исследования.

В примере 29 описана методика, в соответствии с которой можно оценить ингибирование активации микроглии. При этом для активации микроглии можно использовать различные стимулы, например Аβ-петид (β-амилоид, D.M.Araujo и С.М.Cotman, Brain Res. 569, 1992, cc.141-145 (1992)), прион-протеин, цитокины или клеточные фрагменты (С.К.Combs и др., J.Neurosci. 19, 1999, cc.928-939, P.L.Wood, Neuroinflammation: Mechanisms and Management, изд-во Humana Press, 1998).

Стимуляция с помощью Аβ-пептида соответствует патофизиологической ситуации при болезни Альцгеймера. В этом исследовании при стимуляции с помощью Аβ-пептида предлагаемые в изобретении соединения проявляют ингибирующее действие на активацию микроглии. Ингибирующее действие предлагаемых в изобретении соединений на активацию микроглии проявляется в значительном снижении продуцирования и секреции цитокинов, например интерлейкина 1β (Il-1β) и α-фактора некроза опухоли (TNFα) (по результатам твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) и анализа экспрессии мРНК), и в пониженной секреции реакционноспособных кислород-/азотсодержащих промежуточных продуктов. В соответствии с этим обеспечивается одновременное ингибирование нескольких воспалительных факторов.

Эффективность предлагаемых в изобретении соединений in vivo определяли с помощью МСАО-модели на крысах. Подобная модель позволяет сымитировать состояние, соответствующее апоплексии. Предлагаемые в изобретении соединения снижают активацию микроглии, происходящую при острых патологических изменениях в головном мозге животных.

Ингибирующее действие на продуцирование цитокинов оценивают, например, определяя количество TNFα и интерлейкина 12 в стимулированных липополисахаридом (ЛПС) клетках ТНР-1. Предлагаемые в изобретении соединения ингибируют продуцирование TNFα и интерлейкина 12 в стимулированных липополисахаридом (ЛПС) клетках ТНР-1.

Для определения влияния, которое предлагаемые в изобретении соединения оказывают на активацию Т-клеток, исследуют, например, секрецию IFNγ. Предлагаемые в изобретении соединения ингибируют продуцирование IFNγ периферическими одноядерными клетками крови.

Настоящее изобретение относится далее к фармацевтическим средствам, содержащим одно или несколько предлагаемых в изобретении соединений общей формулы I, а также один или несколько носителей. Такие предлагаемые в изобретении фармацевтические средства, соответственно составы получают в зависимости от предполагаемого пути их введения в организм в необходимой дозировке по известным методам с использованием обычных твердых или жидких носителей или разбавителей, а также обычных фармацевтических и технологических вспомогательных веществ. Предпочтительные композиции представлены в виде лекарственной формы, пригодной для перорального, энтерального или парентерального, например внутрибрюшинного, внутривенного, внутримышечного или чрескожного, введения. Примерами подобных лекарственных форм являются таблетки, филм-таблетки, драже, пилюли, капсулы, порошки, пасты, мази, примочки, жидкие препараты, такие как сиропы, гели, жидкие препараты для инъекций, например, для внутрибрюшинных, внутривенных, внутримышечных или чрескожных инъекций, и иные лекарственные формы. К числу других лекарственных форм относятся также депо-формы, в частности имплантируемые формы применения, а также суппозитории. При этом из подобных отдельных лекарственных форм предлагаемые в изобретении производные в зависимости от их типа высвобождаются в организм постепенно либо во всем количестве за короткий промежуток времени.

Для перорального применения в качестве фармацевтических препаратов могут использоваться капсулы, пилюли, таблетки, драже и жидкие препараты или иные известные лекарственные формы для перорального введения. В этом случае лекарственные средства можно приготавливать в виде препаратов, которые либо за короткий промежуток времени высвобождают действующие вещества и выделяют их в организм, либо обладают пролонгированным действием, обеспечивающим более длительное, медленное поступление действующего вещества в организм. В состав подобных разовых дозированных лекарственных форм наряду по меньшей мере с одним производным бензимидазола может входить один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, например вещества для регулирования реологических свойств лекарственного средства, поверхностно-активные вещества, гидротропные солюбилизаторы, микрокапсулы, микрочастицы, грануляты, разбавители, связующие, такие как крахмал, сахар, сорбит и желатин, а также наполнители, такие как кремниевая кислота и тальк, смазывающие вещества, красители, ароматизаторы и иные вещества.

Соответствующие таблетки можно изготавливать, например, смешением действующего вещества с известными вспомогательными веществами, например с инертными разбавителями, такими как декстроза, сахар, сорбит, маннит, поливинилпирролидон, разрыхлителями, такими как кукурузный крахмал или альгиновая кислота, связующими, такими как крахмал или желатин, смазывающими веществами, такими как карбоксиполиметилен, карбоксиметилцеллюлоза, фталат ацетилцеллюлозы или поливинилацетат. Таблетки могут также иметь многослойную структуру.

Соответствующим образом можно также получать драже нанесением на изготовленные аналогично таблеткам ядра покрытий из обычно применяемых в качестве оболочек драже материалов, таких, например, как поливинилпирролидон или шеллак, гуммиарабик, тальк, оксид титана или сахар. При этом оболочка драже также может иметь многослойную структуру, для получения которой можно использовать вспомогательные вещества, указанные выше для таблеток.

Содержащие действующие вещества капсулы можно изготавливать, например, смешением действующего вещества с инертным носителем, таким как лактоза или сорбит, и расфасовыванием полученной смеси в желатиновые капсулы.

Предлагаемые в изобретении производные бензимидазола можно также использовать в лекарственной форме в виде раствора, который предназначен для перорального приема и который наряду с биологически активным производным бензимидазола содержит в качестве ингредиентов фармацевтически приемлемое масло и/или фармацевтически приемлемое липофильное поверхностно-активное вещество, и/или фармацевтически приемлемое гидрофильное поверхностно-активное вещество, и/или фармацевтически приемлемый смешивающийся с водой растворитель.

Для повышения биодоступности предлагаемых в изобретении действующих веществ такие соединения можно также использовать в виде клатратов с циклодекстриновым каркасом. С этой целью предлагаемые в изобретении соединения подвергают взаимодействию с α-, β- или γ-циклодекстрином либо с его производными.

Использование паст, мазей, примочек и предназначенных для наружного применения жидких препаратов предполагает наличие у них таких свойств, которые обеспечивают поступление предлагаемых в изобретении соединений в организм в достаточном количестве. В состав подобных лекарственных форм входят вспомогательные вещества, например вещества для регулирования реологических свойств лекарственных средств, поверхностно-активные вещества, консерванты, гидротропные солюбилизаторы, разбавители, вещества для улучшения проницаемости предлагаемых в изобретении производных бензимидазола через кожу, красители, ароматизаторы и защитные средства для кожи, такие как кондиционеры и регуляторы влажности. В лекарственном средстве совместно с предлагаемыми в изобретении соединениями могут также содержаться и другие действующие вещества (Ullmanns Enzyklopädie der technischen Chemie, 1953, т.4, cc.1-39; J.Pharm. Sci., 52, 1963, cc.918 и далее; Н.V.Czetsch-Lindenwald, Hilfsstoffe für Pharmazie und angrenzende Gebiete, Pharm. Ind., 2, 1961, cc.72 и далее; Dr. H.P.Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete, изд-во Cantor AG, Aulendorf/Württ., 1971).

Предлагаемые в изобретении соединения можно также применять в виде соответствующих растворов, например в виде физиологического раствора поваренной соли, в качестве растворов для инфузии или инъекций. Для парентерального введения действующие вещества могут присутствовать в растворенном или суспендированном в физиологически совместимом разбавителе виде. В качестве таких разбавителей пригодны прежде всего масляные растворы, например растворы в кунжутном масле, касторовом масле и хлопковом масле. Для повышения растворимости можно добавлять гидротропные солюбилизаторы, такие, например, как бензилбензоат или бензиловый спирт.

Для приготовления препарата для инъекции может использоваться любой жидкий носитель, в котором предлагаемые в изобретении соединения присутствуют в растворенном или эмульгированном виде. В состав подобных жидких препаратов часто включают также вещества для регулирования вязкости, поверхностно-активные вещества, консерванты, гидротропные солюбилизаторы, разбавители и другие добавки, придающие раствору изотоничность. Совместно с производными бензимидазола в составе таких препаратов в организм можно вводить и другие действующие вещества.

Предлагаемые в изобретении соединения можно также внедрять в соответствующий материал с получением трансдермальной системы и тем самым вводить их в организм чрескожно. В этом случае производные бензимидазола вводят в организм, например подкожно, в виде депо-инъекции или препарата-имплантата. Подобным препаратам можно придавать такие свойства, которые обеспечивают замедленное высвобождение действующего вещества. С этой целью могут использоваться известные решения, например растворяющиеся или снабженные мембраной депо-формы. В качестве инертных материалов имплантаты могут также содержать, например, биоразлагаемые полимеры или синтетические силиконы, например кремнийорганический каучук. Для чрескожного введения производные бензимидазола можно далее заделывать, например, в пластырь.

Назначаемая пациенту доза предлагаемых в изобретении соединений общей формулы I определяется лечащим врачом и зависит среди прочего от конкретно вводимого в организм соединения, от пути введения, от подвергаемого лечению заболевания и от степени его тяжести. Суточная доза действующего вещества не превышает 1000 мг, предпочтительно не превышает 100 мг, и может быть рассчитана на однократное введение в день в виде разовой дозы либо разделена на несколько меньших доз из расчета на два или более приемов в день.

Бензимидазолы формулы I можно получать различными путями по известным из соответствующей литературы методам.

В качестве возможных методов получения предлагаемых в изобретении соединений наряду с другими следует упомянуть рассмотренные ниже.

1. Восстановлением замещенных в орто-положении уходящими группами (предпочтительно галогензамещенных) нитробензольных производных (А) ариламинами (В) при различных реакционных условиях, например путем нагрева реагентов в отсутствие или в присутствии приемлемого инертного растворителя, в частности алкилбензолов, можно получать N-арил-2-нитробензолы (С). Растворителем может также служить используемый в качестве реагента амин при его применении в избытке. Реакции проводят без или же в присутствии оснований (например, карбоната калия, гидрида натрия). В реакциях можно также использовать другие вспомогательные вещества, например медные соли. Примеры касательно проведения реакций в соответствии с рассмотренной выше методикой можно найти в многочисленных посвященных этой тематике работах, например у D.Jerchel, H.Fischer, M.Graft, Ann. Chem., 575, 1952, с.162; в CAS, 53 (2138); у R.-A. Abramovitch, Can. J. Chem., 38, 1960, с.2273.

СХЕМА 1

Полученные таким путем N-арилнитроанилиновые производные (С) можно различными методами переводить в 1,2-дизамещенные бензимидазолы (Е) по следующей схеме:

СХЕМА 2

Нитрогруппу (С) предпочтительно восстанавливать путем гидрирования в полярных растворителях, таких как уксусная кислота, низшие спирты или эфиры уксусной кислоты, с добавлением катализаторов, таких как никель Ренея или палладий на угле, либо путем химического восстановления, например оловом в соляной кислоте, SnCl₂ (F.D.Bellamy, Tet. Lett., 1984] или Fe в уксусной кислоте (D.C.Owslly, J.J.Bloomfield, Synthesis, 118, 1977, с.150).

Из диаминов (D) их взаимодействием с производными карбоновых кислот, такими как ортоэфиры, иминоэфиры, ангидриды кислот, альдегиды, или же со свободными карбоновыми кислотами при кислотном катализе либо без него и/или в присутствии либо в отсутствие обезвоживающих средств можно получить бензимидазолы (Е). В качестве примера при этом можно назвать получение 1,2-дифенилбензимидазола из бензойной кислоты и N-фенил-о-фенилендиамина с применением трифенилфосфиноксида и ангидрида трифторметансульфоновой кислоты (J.B.Hendrickson, M.S.Hussoin, J.Org. Chem., 52, 1987, с.4137).

При использовании ароматических альдегидов в качестве растворителя применяют, например, нитробензол с целью обеспечить возможность окисления первоначально образующегося бензимидазолина in situ. Циклизация до бензимидазолов возможна также в том случае, когда ароматические альдегиды в виде бисульфитных аддуктов подвергают взаимодействию с диаминами (D).

2. Другой метод получения бензимидазолов (Е) описан у Т.Benincori и F.Sannicolo в J.Heterocyclic Chem. 25, 1988, с.1029, который позволяет реализовать самые разнообразные схемы замещения обоими арильными заместителями, а также замещения в бензольном кольце бензимидазола. Для специалиста в данной области очевидно, что такие заместители должны быть совместимы с используемыми на различных стадиях в последовательности синтеза реагентами и реакционными условиями. При необходимости заместители можно в последующем модифицировать. В получаемом продукте в этом случае всегда присутствует функциональная гидроксигруппа, находящаяся в положении 6 бензимидазола (см. структурную формулу F)

3. В завершение следует упомянуть, что в некоторых случаях существует возможность прямого N-арилирования предварительно полученных бензимидазолов, например, по методу, описанному у M.J.Sansone, M.S.Kwiatek в US 4933397, или по методу, описанному у D.M.T.Chan, K.L.Monaco, R.-P.Wang, M.P.Winters в Tet. Lett. 39, 1998, с.2933, либо у А.Р.Combs, S.Saubern, M.Rafalski, P.Y.S.Lam, Tet. Lett. 40, 1999, с.1623.

Для специалиста в данной области очевидно, что заместители R должны быть совместимы с используемыми на различных стадиях в последовательности синтеза реагентами и реакционными условиями. При определенных условиях заместители можно в последующем модифицировать.

Если структурный элемент В-А-O (формула I) в защищенном или незащищенном виде из-за несовместимости с реакционными условиями, преобладающими в процессе синтеза соответствующего бензимидазола, либо по иным, связанным с процессом его синтеза причинам, встраивают лишь по завершении синтеза бензимидазола, то в зависимости от присутствующих заместителей R³ в бензольном кольце бензимидазола возможны различные подходы по встраиванию структурного элемента В-А-O (формула I), при этом, как очевидно для специалистов в данной области, необходимо учитывать сочетаемость используемых методов с арильными заместителями и конкретными остатками, значения которых имеет R³.

Ниже рассмотрены некоторые возможные методы встраивания структурного элемента В-А-O.

Кислород может в свободном виде (например, R обозначает ОН в формуле (А)) или же в защищенном виде, например в виде алкилового эфира (см., например, B.D.Jerchel, H.Fischer, M.Graft, Ann. Chem., 575, 1952, с.162), изначально присутствовать в качестве заместителя в процессе синтеза бензимидазола. Гидроксильную группу можно высвобождать путем отщепления алкилового эфира, например, обработкой концентрированной бромистоводородной кислотой, при определенных условиях с помощью гидротропных солюбилизаторов, таких как галогенированные углеводороды, или же трибромидом бора в инертных растворителях, например в дихлорметане. Гидроксильную функциональную группу можно по известным методам взаимодействием с необязательно содержащими концевую группу В (формула I) или ее предшественник алкилгалогенидами превращать в простые эфиры, при этом взаимодействие с алкилирующими агентами предпочтительно проводить при температуре в интервале от 0 до 120°С в полярных растворителях, например в диметилформамиде, диметилсульфоксиде, простых эфирах, таких как тетрагидрофуран, или же в низших кетонах, таких как ацетон или метилэтилкетон, с добавлением оснований, таких как гидриды щелочных и щелочноземельных металлов, предпочтительно, однако, гидрид натрия, или с добавлением карбонатов щелочных металлов, таких как карбонат калия или цезия. Помимо этого реакцию можно проводить в двухфазной системе при межфазном катализе с растворением при этом реагентов в приемлемом инертном органическом растворителе, например в галогеналканах, предпочтительно, однако, в дихлорметане. Другой фазой служит твердый гидроксид щелочного металла, предпочтительно гидроксид натрия или калия, или же концентрированный водный раствор соответствующего гидроксида. В качестве межфазных катализаторов используют, например, четвертичные аммониевые соли. Реакции при межфазном катализе предпочтительно проводить при комнатной температуре.

Так, например, в одном из возможных методов соединение формулы А (где R обозначает ОН) растворяют в диметилформамиде и при добавлении карбоната цезия подвергают взаимодействию с метиловым эфиром 6-бромгексановой кислоты при температуре в интервале от 0 до 50°С. Расщеплять сложный эфир путем кислотного или оснòвного гидролиза можно известными специалистам методами, например в присутствии оснòвных катализаторов, таких как карбонаты или гидроксиды щелочных либо щелочноземельных металлов в воде или в водном растворе спирта. В качестве спиртов при этом используются алифатические спирты, например метанол, этанол, бутанол и иные, предпочтительно, однако, метанол. Помимо этого можно использовать и водные растворы простых эфиров, например тетрагидрофурана. В качестве примера карбонатов и гидроксидов щелочных металлов можно назвать литиевые, натриевые и калиевые соли. Предпочтительны при этом литиевые и натриевые соли. Для применения в качестве карбонатов и гидроксидов щелочноземельных металлов пригодны, например, карбонат кальция, гидроксид кальция и карбонат бария. Реакцию обычно проводят в интервале температур от -10 до 70°С, предпочтительно, однако, при 25°С. Сложный эфир можно, однако, расщеплять и в кислых условиях, например в водной соляной кислоте, необязательно с помощью гидротропного солюбилизатора, например низшего спирта, предпочтительна метанола.

Из присутствующего в алкилирующем агенте или же образованного в последующем нитрила можно путем гидролиза образовать функциональную карбоксильную группу. Алкилирующие агенты могут также содержать функциональные группы, такие, например, как функциональная гидроксильная группа, в свободном или защищенном виде, которые после перевода в уходящие группы, такие, например, как тозилат, мезилат, бромид или иодид, можно заменять, например, на аминогруппу или алкильные группы. Алкилирующие агенты могут содержать и такие функциональные группы, как, например, атомы галогена или необязательно защищенные аминогруппы, которые в этом случае можно подвергать дальнейшей модификации.

В зависимости от требуемой схемы замещения заместители R³ могут изначально присутствовать в используемых в процессе синтеза структурных фрагментах либо их по мере необходимости встраивают, соответственно образуют из присутствующих приемлемых предшественников в подходящий момент в процессе синтеза соответствующего соединения.

Производные формулы I в виде свободных кислот или их предшественники в виде сложных эфиров можно различными, известными из литературы методами переводить в амидные производные формулы I.

Производные формулы I в виде свободных кислот можно также с использованием приемлемых количеств соответствующих неорганических оснований при нейтрализации переводить в соли. Так, например, при растворении соответствующих кислот в воде, содержащей стехиометрические количества основания, после выпаривания воды или после добавления смешивающегося с водой растворителя, например спирта или ацетона, можно получить твердую соль.

Соли с аминами можно получать традиционными методами. С этой целью соответствующую кислоту растворяют в приемлемом растворителе, например в этаноле, ацетоне, диэтиловом эфире или бензоле, и к этому раствору добавляют от одного до пяти эквивалентов соответствующего амина. Образующаяся при этом соль обычно выпадает в осадок в твердом виде или ее обычным образом выделяют после выпаривания растворителя.

Клатраты с α-, β- или γ-циклодекстрином получают аналогично методу, описанному в WO 87/05294. Предпочтительно при этом использовать β-циклодекстрин. Липосомы получают по методу, описанному в журнале "Pharmazie in unserer Zeit", 11, 1982, с.98.

Ниже в качестве примера описано получение некоторых соединений-предшественников, промежуточных продуктов и конечных продуктов. Если в последующем описании получение тех или иных исходных соединений не рассматривается, то подразумевается, что такие исходные соединения либо являются известными и имеющимися в продаже соединениями, либо их получают аналогично представленным в настоящем описании методам.

Предлагаемые в изобретении соединения получают, например, следующими методами.

Общая методика 1: восстановление нитрогрупп

Восстанавливаемое соединение растворяют в этилацетате, тетрагидрофуране, метаноле или этаноле либо в смеси указанных растворителей и гидрируют при нормальном давлении в присутствии 2-5% (в пересчете на нитросоединение) палладия на угле (10%-ного). По завершении процесса поглощения водорода смесь подвергают вакуум-фильтрации, остаток промывают этилацетатом, метанолом или этанолом и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученной сырой продукт, как правило, без дополнительной очистки используют в последующей реакции.

Общая методика 2: отщепление простого эфира с помощью бромистоводородной кислоты

5 г арилметилового эфира смешивают с 160 мл 48%-ной водной HBr и в течение 1-5 ч кипятят с обратным холодильником. После охлаждения смесь фильтруют. Остаток растворяют в этилацетате и трижды экстрагируют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия. После сушки над сульфатом натрия концентрируют в вакууме. Остаток при необходимости очищают кристаллизацией или колоночной хроматографией на силикагеле.

Общая методика 3: алкилирование гидроксибензимидазольных производных и фенольных производных алкилгалогенидами

Раствор 1,85 ммоля гидроксибензимидазольного производного в 12 мл N,N-диметилформамида смешивают с 1,85 ммолями карбоната цезия и 2,24 ммолями алкилбромида или алкилиодида. При использовании алкилбромида необязательно добавляют 1,85 ммоля иодида натрия. Смесь перемешивают в течение 12-96 ч, после чего сливают в воду, растворяют в этилацетате, органическую фазу четырежды промывают водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Альтернативно такой водной переработке реакционную смесь можно смешивать с дихлорметаном, отделять фильтрацией выпавшие в осадок соли и концентрировать фильтрат в вакууме. Вне зависимости от выбранного метода переработки остаток очищают кристаллизацией или колоночной хроматографией на силикагеле.

Общая методика 4: омыление алкиловых эфиров карбоновых кислот

0,77 ммоля алкилового эфира карбоновой кислоты растворяют в 5 мл метанола и 5 мл тетрагидрофурана и смешивают с 5 мл 0,5 н. водного раствора гидроксида лития или натрия. После перемешивания в течение 2-12 ч смесь практически досуха концентрируют в вакууме, нейтрализуют добавлением водной соляной кислоты и экстрагируют этилацетатом. Далее сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Остаток при необходимости очищают колоночной хроматографией на силикагеле.

Общая методика 5: циклизация до бензимидазолов с помощью альдегидов

1 ммоль 1,2-диаминобензольного производного растворяют в 3 мл нитробензола. К этому раствору добавляют 1 ммоль арил-, соответственно гетероарилальдегида. Далее нагревают до 150°С, выдерживая при этой температуре в течение 2-6 ч, а затем смеси дают охладиться. Остаток без дополнительной переработки непосредственно очищают колоночной хроматографией на силикагеле.

Общая методика 6: перевод эфиров карбоновых кислот в амиды карбоновых кислот

0,36 ммоля амина растворяют в 3 мл толуола и при охлаждении на ледяной бане смешивают с 0,18 мл добавляемого по каплям 2-молярного раствора триметилалюминия в толуоле. Далее смешивают с раствором из 0,33 ммолей метилового эфира карбоновой кислоты в 3 мл толуола и перемешивают в течение 2-8 ч при 95°С. Для переработки после охлаждения добавляют воду, трижды экстрагируют этилацетатом, объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле.

Пример 1

6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) 3-(4-Метилфенил)амино-4-нитрофенол

5,4 г 3-фтор-4-нитрофенола смешивали с 4,8 мл 4-метиланилина и перемешивали в течение 6 ч при 120°С. После охлаждения растворяли в этилацетате и воде и трижды экстрагировали 1 н. водной соляной кислотой. Объединенные водные фазы трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и кристаллизовали остаток.

MS (EI): 244 (пик молекулярного иона).

б) Метиловый эфир 6-[3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенил]оксигексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенола с метиловым эфиром 6-бромгексановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 372 (пик молекулярного иона).

в) Метиловый эфир 6-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенил]оксигексановой кислоты в соответствии с общей методикой 1.

MS (EI): 342 (пик молекулярного иона).

г) Метиловый эфир 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]гексановой кислоты с 3-пиридилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 429 (пик молекулярного иона).

д) 6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 415 (пик молекулярного иона).

Пример 2

5-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

а) Метиловый эфир 5-[3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенил]оксипентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенола с метиловым эфиром 5-бромпентановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 358 (пик молекулярного иона).

б) Метиловый эфир 5-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенил]оксипентановой кислоты в соответствии с общей методикой 1.

MS (EI): 328 (пик молекулярного иона).

в) Метиловый эфир 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 5-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]пентановой кислоты с 3-пиридилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 415 (пик молекулярного иона).

г) 5-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 401 (пик молекулярного иона).

Пример 3

4-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

а) Метиловый эфир 4-[3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенил]оксимасляной кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенола с метиловым эфиром 4-броммасляной кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 344 (пик молекулярного иона).

б) Метиловый эфир 4-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]масляной кислоты

Указанное соединение получали из метилового эфира 4-[3-(4-метилфенил)амино-4-нитрофенил]оксимасляной кислоты в соответствии с общей методикой 1.

MS (EI): 314 (пик молекулярного иона).

в) Метиловый эфир 4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси] масляной кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 4-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]масляной кислоты с 3-пиридилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 401 (пик молекулярного иона).

г) 4-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 387 (пик молекулярного иона).

Пример 4

6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(4-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) Метиловый эфир 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(4-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]гексановой кислоты с 4-пиридилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 429 (пик молекулярного иона).

б) 6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(4-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(4-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 415 (пик молекулярного иона).

Пример 5

6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) Метиловый эфир 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил] окси] гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]гексановой кислоты с 3-тиенилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 434 (пик молекулярного иона).

б) 6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 420 (пик молекулярного иона).

Пример 6

5-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

а) Метиловый эфир 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 5-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]пентановой кислоты с 3-тиенилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 420 (пик молекулярного иона).

б) 5-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 406 (пик молекулярного иона).

Пример 7

4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

а) Метиловый эфир 4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 4-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]масляной кислоты с 3-тиофенкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI):406 (пик молекулярного иона).

б) 4-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси] масляная кислота

Указанное соединение получали взаимодействием из метилового эфира 4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 392 (пик молекулярного иона).

Пример 8

5-[[1-Фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

а) 4-Метокси-N²-фенил-о-фенилендиамин

Указанное соединение получали из (5-метокси-2-нитрофенил)фениламина [Kottenhahn и др., J.Org. Chem., 28; 1963; cc.3114-3118; Banthorpe, Cooper, J.Chem. Soc. B, 1968, с.605] в соответствии с общей методикой 1.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ (в част./млн)=3,42 s (широкий) (2Н); 3,72 s (3Н); 5,33 s (широкий) (1Н); 6,56 dd (J=10, 2 Гц, 1H); 6,76 d (J=10 Гц, 1Н); 6,79 d (J=2 Гц, 1Н); 6,82-6,90 m (3Н); 7,25 dd (J=8, 8 Гц, 2Н).

б) 6-Метокси-1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол

Указанное соединение получали взаимодействием 4-метокси-N²-фенил-о-фенилендиамина с тиофен-3-карбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 306 (пик молекулярного иона).

в) 6-Гидрокси-1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол

Указанное соединение получали из 6-метокси-1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола в соответствии с общей методикой 2.

MS (EI): 292 (пик молекулярного иона).

г) Метиловый эфир 5-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 5-бромпентановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 406 (пик молекулярного иона).

д) 5-[[1-Фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 392 (пик молекулярного иона).

Пример 9

4-[[1-Фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

а) Метиловый эфир 4-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 4-броммасляной кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 392 (пик молекулярного иона).

б) 4-[[1-Фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 4-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 378 (пик молекулярного иона).

Пример 10

6-[[1-Фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) Метиловый эфир 6-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 6-бромгексановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 420 (пик молекулярного иона).

б) 6-[[1-Фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 406 (пик молекулярного иона).

Пример 11

6-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) (5-Хлор-2-нитрофенил)-(4-фторфенил)амин

50 г 1-хлор-3,4-динитробензола в 250 мл этанола смешивали с 50 мл 4-фторанилина и перемешивали в течение 35 ч при 60°С. После концентрирования до половины объема смесь распределяли между водой и дихлорметаном. После промывки органической фазы 1 н. водной соляной кислотой ее сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. После хроматографии остатка на силикагеле получили 62,33 г (5-хлор-2-нитрофенил)-(4-фторфенил)амина.

¹H-ЯМР (CDCl₃): δ=6,71 dd (J=9, 2 Гц, 1Н); 6,97 d (J=2 Гц, 1Н); 7,13 dd (J=9, 9 Гц, 2Н); 7,22 dd (J=9, 6 Гц, 2Н); 8,15 d (J=10 Гц, 1Н); 9,45 s (шир.) (1H).

б) (5-Метокси-2-нитрофенил)-(4-фторфенил)амин

К раствору 6,6 г натрия в 450 мл метанола добавляли 36,44 г (5-хлор-2-нитрофенил)-(4-фторфенил)амина и реакционную смесь в течение 16 ч кипятили с обратным холодильником. После перемешивания в течение последующих 30 ч при 60°С реакционную смесь охлаждали и кристаллический продукт отделяли вакуум-фильтрацией. Таким путем получили 34 г (5-метокси-2-нитрофенил)-(4-фторфенил)амина.

¹H-ЯМР (CDCl₃): δ=3,72 s (3Н); 6,44 dd (J=9, 2 Гц, 1H); 6,48 d (J=2 Гц, 1H); 7,13 dd (J=9, 9 Гц, 2Н); 7,27 dd (9, 6 Гц, 2Н); 8,20 d (J=9 Гц, 1H); 9,65 s (шир.) (1H).

в) N²-(4-Фторфенил)-4-метоксибензол-1,2-диамин

33,5 г (0,128 мл) (5-метокси-2-нитрофенил)-(4-фторфенил)амина подвергали химическому превращению в соответствии с общей методикой 1. Сырой продукт без очистки использовали в последующей реакции.

¹H-ЯМР (CDCl₃): δ (в част./млн)=3,70 s (3Н); 6,49 d (шир.) (J=9 Гц, 1H); 6,68 d (J=2 Гц, 1H); 6,78-6,97 m (5H).

г) 6-Метокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол

7,48 г тиофен-3-альдегида в течение двух часов перемешивали в 65 мл 40%-ного раствора NaHSO₃. После добавления 15 г N²-(4-фторфенил)-4-метоксибензол-1,2-диамина в 50 мл этанола смесь кипятили в течение 4 ч и затем перемешивали в течение ночи. Далее смесь распределяли между водой и этилацетатом и органическую фазу промывали водой. После сушки над сульфатом натрия и концентрирования фильтрата получили 18,1 г сырого 6-метокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола.

t_пл 154-158°С.

д) 6-гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол

18 г (55,5 ммоля) 6-метокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола подвергали химическому превращению аналогично общей методике 2. В результате получили 12,65 г (40 ммолей) сырого 6-гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола.

t_пл 212-218°С.

е) Метиловый эфир 6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 6-бромгексановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

t_пл 131-134°С.

ж) 6-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

t_пл 170-175°С.

Пример 12

5-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

а) Метиловый эфир 5-[[1-(4-фторфенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 5-бромпентановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

t_пл 90,5-92,5°C.

б) 5-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[[1-(4-фторфенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

t_пл 184-189°С.

Пример 13

6-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) 6-Метокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол

Указанное соединение получали взаимодействием N²-(4-фторфенил)-4-метоксибензол-1,2-диамина с пиридин-3-карбальдегидом аналогично примеру 11 г.

t_пл 132,5-134°С.

б) 6-Гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол

Указанное соединение получали из 6-метокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола в соответствии с общей методикой 2.

t_пл 238-241°С.

в) Метиловый эфир 6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 6-бромгексановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

t_пл 105,5-111,5°С.

г) 6-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

t_пл 127,5-129°C.

Пример 14

5-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

а) Метиловый эфир 5-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 5-бромпентановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

t_пл 52-55°C.

б) 5-[[1-(4-Фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

t_пл 181,5-183°С.

Пример 15

5-[[1-Фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

а) 6-Метокси-1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол

Указанное соединение получали взаимодействием 4-метокси-N²-фенил-о-фенилендиамина с пиридин-3-карбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 301 (пик молекулярного иона).

б) 6-Гидрокси-1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол

Указанное соединение получали из 6-метокси-1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола в соответствии с общей методикой 2.

¹H-ЯМР (D₆-ДМСО): δ (в част./млн)=6,52 d (J=2 Гц, 1Н); 6,81 dd (J=8, 2 Гц, 1Н); 7,34-7,48 m (3Н); 7,53-7,68 m (4H); 7,80 (ddd, J=8, 2,1 Гц, 1Н); 8,53 dd (J=2,1 Гц, 1H); 8,67 d (J=1 Гц, 1H); 9,42 (s, 1H).

в) Метиловый эфир 5-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 5-бромпентановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 401 (пик молекулярного иона).

г) 5-[[1-Фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 5-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

¹Н-ЯМР (CD₃OD): δ (в част./млн)=1,72-1,88 m (4H); 2,30 t (J=8 Гц, 2Н); 3,98 t (J=8 Гц, 2Н); 6,72 d (J=2 Гц, 1H); 7,03 dd (J=8, 2 Гц, 1H); 7,40-7,48 m (3Н); 7,55-7,65 m (3H); 7,70 (d, J=8 Гц, 1Н); 7,92 ddd (J=8, 2, 1 Гц, 1Н); 8,53 dd (J=8, 2 Гц, 1Н); 8,70 dd (J=2,1 Гц, 1Н).

Пример 16

4-[[1-Фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

а) Метиловый эфир 4-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 4-броммасляной кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 387 (пик молекулярного иона).

б) 4-[[1-Фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 4-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляной кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 373 (пик молекулярного иона).

Пример 17

6-[[1-Фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) Метиловый эфир 6-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием 6-гидрокси-1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазола с метиловым эфиром 6-бромгексановой кислоты в соответствии с общей методикой 3.

MS (EI): 415 (пик молекулярного иона).

б) 6-[[1-Фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 401 (пик молекулярного иона).

Пример 18

N-(3-Метоксипропил)-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с 3-метоксипропиламином в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 486 (пик молекулярного иона).

Пример 19

6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]-1-морфолин-1-илгексан-1-он

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с морфолином в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 442 (пик молекулярного иона).

Пример 20

N-Метил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси] гексанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с гидрохлоридом N-метиламина в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 428 (пик молекулярного иона).

Пример 21

N,N-Диметил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил] окси] гексанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с гидрохлоридом диметиламина в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 442 (пик молекулярного иона).

Пример 22

6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с хлоридом аммония в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 414 (пик молекулярного иона).

Пример 23

N-Циклопропил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(-3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с циклопропиламином в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 459 (пик молекулярного иона).

Пример 24

N-Метил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси] гексанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты с гидрохлоридом N-метиламина в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 433 (пик молекулярного иона).

Пример 25

N-(2-Метоксиэтил)-5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты с 2-метоксиэтиламином в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 458 (пик молекулярного иона).

Пример 26

N,N-Диметил-5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты (пример 56в) с диметиламином в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 428 (пик молекулярного иона).

Пример 27

5-[[1-(4-Метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановой кислоты с хлоридом аммония в соответствии с общей методикой 6.

MS (EI): 400 (пик молекулярного иона).

Пример 28

6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(2-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

а) Метиловый эфир 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(2-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты

Указанное соединение получали взаимодействием метилового эфира 6-[[4-амино-3-((4-метилфенил)амино)фенил]окси]гексановой кислоты с 2-тиенилкарбальдегидом в соответствии с общей методикой 5.

MS (EI): 434 (пик молекулярного иона).

б) 6-[[1-(4-Метилфенил)-2-(2-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота

Указанное соединение получали из метилового эфира 6-[[1-(4-метилфенил)-2-(2-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты в соответствии с общей методикой 4.

MS (EI): 420 (пик молекулярного иона).

Пример 29: ингибирование активации микроглии

Для получения активированной Аβ-пептидом микроглии in vitro первичные клетки микроглии (глиальные макрофаги) крыс инкубировали с синтетическим Аβ-пептидом.

Для имитации отложений Аβ-пептида синтетический Аβ-пептид высушивали на 96-луночном планшете для выращивания культур ткани. С этой целью маточный раствор пептида с его концентрацией 2 мг/мл H₂O разбавляли H₂O в пропорции 1:50. Для покрытия 96-луночных планшетов использовали по 30 мкл этого разбавленного раствора пептида из расчета на одну лунку и оставляли на ночь для высыхания при комнатной температуре.

Первичные клетки микроглии крыс выделяли из смешанных культур глиальных клеток, полученных из головного мозга крыс Р3. Для получения смешанных культур глиальных клеток у 3-дневных крыс выделяли головной мозг и удаляли мозговую оболочку. Разделение клеток на отдельные клетки осуществляли путем обработки трипсином (0,25%-ный раствор трипсина, 15 мин при 37°С). После отделения неразложившихся фрагментов ткани с помощью найлоновой сетки с размером ячеек 40 мкм выделенные клетки отделяли центрифугированием (800 об/мин в течение 10 мин). Клеточный дебрис ресуспендировали в культуральной среде и переносили в 100-миллилитровые чашки для выращивания культур ткани (1 головной мозг на одну чашку). Клетки культивировали при 37°С и 5% СО₂ в течение 5-7 дней в среде DMEM (среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко, с глутамином), дополненной пенициллином (50 ед/мл), стрептомицином (40 мкг/мл) и 10 об.% фетальной телячьей сыворотки (ФТС). Во время этой инкубации образовывался адгезивный клеточный покров, состоявший в основном из астроцитов. Глиальные макрофаги, которые пролиферировали на этом покрове в виде не- или слабоадгезивных клеток, собирали путем инкубации на шейкере (420 об/мин в течение 1 ч).

Для активации микроглии Аβ-пептидом глиальные макрофаги высевали на покрытые Аβ-пептидом планшеты для выращивания культур ткани в количестве 2,5×10⁴ клеток на лунку и инкубировали при 37°С и 5% CO₂ в течение 7 дней в среде DMEM (с глутамином), дополненной пенициллином (50 ед/мл), стрептомицином (40 мкг/мл) и 10 об.% ФТС. На 5-й день добавляли одно из предлагаемых в изобретении соединений в различных концентрациях (0,1, 0,3, 1,3 и 10 мкМ).

Для количественной оценки реакционной способности микроглии на 7-й день культивирования определяли метаболическую активность по степени восстановления МТС [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(сульфофенил)-2Н-тетразолий, реактив Оуэна, J.A.Baltrop и др., Bioorg. & Med. Chem. Lett. 1, 1991, с.6111]. Данные о степени ингибирования выражали в процентах по отношению к контролю, обработанному только ДМСО. Результаты этого опыта свидетельствуют о том, что предлагаемые в изобретении соединения ингибируют активацию микроглии.

Пример 30: инфаркт головного мозга у крыс (МСАО-модель)

Активность предлагаемых в изобретении соединений in vivo исследовали моделированием мозговой ишемии (апоплексии) на животных, т.е. с использованием так называемой МСАО-модели (от англ. "permanent middle cerebral artery occlusion", постоянная окклюзия средней мозговой артерии). При использовании подобной модели односторонняя закупорка средней мозговой артерии (МСА) инициирует инфаркт головного мозга, обусловленный недостаточным снабжением соответствующего участка или отдела головного мозга кислородом и питательными веществами. Такое недостаточное снабжение кислородом и питательными веществами приводит к ярко выраженной гибели клеток, а также к последующей интенсивной активации микроглии. Однако подобная активация микроглии достигает максимальной степени лишь по истечении нескольких дней и может сохраняться в течение нескольких недель. Предлагаемые в изобретении соединения для исследования их эффективности ингибировать активацию микроглии вводили внутрибрюшинно через 1-6 дней после окклюзии средней мозговой артерии. На 7-й день животных подвергали перфузии и умерщвляли. Степень активации микроглии определяли модифицированным иммуногистохимическим методом. С этой целью полученные с помощью микротома типа Vibratom срезы зафиксированного головного мозга инкубировали с антителами, распознающими рецептор CR3 для комплемента, соответственно комплекс МНС II на активированной микроглии. Связывание первичных антител количественно оценивали с помощью детекторной системы для иммуноферментного анализа. В этом опыте обработка предлагаемыми в изобретении соединениями приводила к снижению активации микроглии в пораженном инфарктом полушарии головного мозга.

Пример 31: ингибирующее действие на продуцирование TNFα и IL-12 в клетках ТНР-1

Ингибирующее действие предлагаемых в изобретении соединений на продуцирование цитокинов можно исследовать, например, определением количества TNFα и интерлейкина 12 в стимулированных липополисахаридом (ЛПС) клетках ТНР-1.

С этой целью клетки ТНР-1 (полученные из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Company, Роквиль, шт. Мэриленд)) в количестве 2,5×10⁶ клеток из расчета на 1 мл среды RPMI 1640 (фирма Life Technologies), дополненной 10% ФТС (Life Technologies, кат. №10270-106), высевали на 96-луночные плоскодонные культуральные планшеты (фирма ТРР, продукт №9296) (в количестве 100 мкл на лунку). Далее к клеткам добавляли предлагаемые в изобретении соединения в различных концентрациях и предварительно инкубировали в течение 30 мин. Тестируемые вещества предварительно разводили в инкубационной среде. Тестируемые вещества добавляли в виде их раствора двойной концентрации (в количестве 100 мкл на лунку). Клетки стимулировали в течение ночи при 37°С липополисахаридом (фирма Sigma, кат. №L2630, из серотипа Е.Coli 0111.B4), который использовали в количестве 0,1 мкг/мл. После этого среду собирали и количественно оценивали содержание в ней TNFα, соответственно интерлейкина 12. Содержание TNFα определяли с использованием имеющегося в продаже набора для определения TNFα фирмы CIS bio international (продукт №62TNFPEB). Содержание интерлейкина 12 определяли с помощью технологии "ORIGEN" (разработанной фирмой IGEN International, Inc., Гайзерсбург, шт. Мэриленд). Рассчитанное значение IC₅₀ соответствует той концентрации тестируемого вещества, которая необходима для ингибирования уровня продуцирования TNFα, соответственно интерлейкина 12 на 50% от максимального уровня их продуцирования.

По результатам этого эксперимента было установлено, что предлагаемые в изобретении соединения ингибируют продуцирование TNFα и интерлейкина 12 в стимулированных липополисахаридом (ЛПС) клетках ТНР-1.

Пример 32: ингибирующее действие на продуцирование IFNγ периферическими одноядерными клетками крови

Влияние предлагаемых в изобретении соединений на активацию Т-клеток можно исследовать, например, анализом секреции IFNγ.

Для выделения периферических одноядерных клеток крови использовали человеческую цельную кровь (для отбора крови использовали систему S-Monovette "Coagulation 9 NC/10 ml" с цитратом натрия, фирма Sarstedt). Клетки крови обогащали путем центрифугирования с градиентом плотности. С этой целью в пробирки LEUCOSEP (фирма Greiner, кат. №227290) предварительно вносили по 15 мл Histopaque-1077 (фирма Sigma, кат. №Н8880) и центрифугировали в течение 30 с при 1000g. После этого добавляли по 15 мл цельной крови и центрифугировали в течение 10 мин при 1000g. Затем верхний слой плазмы удаляли с помощью пипетки, а расположенный под ним слой клеток (периферические одноядерные клетки крови) переносили в 15-миллилитровые пробирки (фирма Falcon) и несколько раз промывали 10 мл сбалансированного солевого раствора Хэнкса (без Mg²⁺ и Са²⁺, кат. №14175-53). В завершение клеточный дебрис ресуспендировали в культуральной среде RPMI 1640, дополненной 25 мМ Hepes (2-N-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-гидроксипропансульфоновая кислота, фирма Life Technologies, кат. №52400-041), 10% ФТС (фирма Life Technologies, кат. №10270-106) и 0,4% раствора пенициллина и стрептомицина (фирма Life Technologies, кат. №15140-106) (1×10⁶ клеток/мл). По 100 мкл суспензии клеток распределяли по 96-луночным плоскодонным культуральным планшетам (фирма ТРР, продукт №9296) и стимулировали антителами к CD3, которые использовали в концентрации 2,5 мкг/мл. Далее добавляли предлагаемые в изобретении соединения в различных концентрациях и предварительно инкубировали в течение 30 мин. Клетки стимулировали в течение 24 ч. После этого среду собирали и количественно оценивали содержание в ней IFNγ. Содержание IFNγ определяли с помощью технологии "ORIGEN" (разработанной фирмой IGEN International, Inc., Гайзерсбург, шт. Мэриленд). Рассчитанное значение IC₅₀ соответствует той концентрации тестируемого вещества, которая необходима для ингибирования уровня продуцирования IFNγ на 50% от максимального уровня его продуцирования.

По результатам этого эксперимента было установлено, что предлагаемые в изобретении соединения ингибируют продуцирование IFNγ периферическими одноядерными клетками крови.

Пример 33: ингибирующее действие на продуцирование TNFα и IL-12 HD периферическими одноядерными клетками крови

Ингибирующее действие предлагаемых в изобретении соединений на продуцирование TNFα и IL-12 HD р70 можно исследовать, например, определением количества TNFα и IL-12 HD р70 в стимулированных липополисахаридом (ЛПС) и γ-интерфероном (IFNγ) периферических одноядерных клетках крови.

Для выделения периферических одноядерных клеток крови использовали человеческую цельную кровь (для отбора крови использовали систему S-Monovette "Coagulation 9 NC/10 ml" с цитратом натрия, фирма Sarstedt). Лимфоциты и моноциты обогащали путем центрифугирования с градиентом плотности. С этой целью в 50-миллилитровые пробирки LEUCOSEP (фирма Greiner, кат. №227290) предварительно вносили по 15 мл Histopaque-1077 (фирма Sigma, кат. №Н8880) и центрифугированием в течение 30 с при 250g вытесняли вниз через находящуюся в пробирках фритту. После этого добавляли 20 мл цельной крови и центрифугировали в течение 15 мин при 800g и комнатной температуре. После центрифугирования надосадочную жидкость (плазму и тромбоциты) удаляли с помощью пипетки и отбрасывали, а расположенный под ней слой клеток (лимфоциты и моноциты) переносили в 50-миллилитровые центрифужные пробирки (фирма Falcon) и затем трижды промывали в культуральной среде VLE RPMI 1640 (фирма Seromed, №FG1415) (центрифугирование циклами по 10 мин при 250g и комнатной температуре). В завершение клеточный дебрис ресуспендировали в культуральной среде VLE RPMI 1640 (фирма Seromed, №FG1415), дополненной 10% ФТС (фирма Life Technologies, кат. №16000-044, с низким содержанием эндотоксина, инактивированная нагреванием в течение 1 ч при 56°С) и раствором пенициллина и стрептомицина в концентрации 50 мкг/мл (фирма Life Technologies, кат. №15140-106), и после подсчета клеток с помощью окрашивания трипановым синим их концентрацию доводили до 3×10⁶ клеток на 1 мл. Далее по 100 мкл суспензии клеток распределяли по 96-луночным плоскодонным культуральным планшетам (фирма Costar, продукт №3599). После этого к находящимся на планшетах клеткам добавляли по 100 мкл раствора для стимуляции тройной концентрации (3 мкг/мл ЛПС из серотипа Е.coli 0127:В8, фирма Sigma, кат. №L-4516, и 30 нг/мл IFNγ 1b, Imukin, фирма Boehringer Ingelheim). После этого добавляли предлагаемые в изобретении соединения в различных концентрациях в виде их раствора тройной концентрации (100 мкл на лунку). Клетки стимулировали при 37°С и 5% СО₂ в течение 24 ч. Затем собирали надосадочную жидкость культуры клеток и с помощью коммерчески доступных наборов для ELISA-анализа фирм BioSource International (TNF-α EASIA, кат. №KAC1752) и R & D Systems (Quantikine^TM HS IL-12, кат. №HS 120) определяли концентрацию в ней TNFα и IL-12 HD р70. Рассчитанное значение IC₅₀ соответствует той концентрации тестируемого вещества, которая необходима для ингибирования уровня продуцирования TNFα, соответственно интерлейкина 12 HD р70 на 50% от максимального уровня их продуцирования.

По результатам этого эксперимента было установлено, что предлагаемые в изобретении соединения ингибируют продуцирование TNFα и IL-12 HD р70 периферическими одноядерными клетками крови.

Пример 34: индукция продуцирования IL-10 периферическими одноядерными клетками крови

Способность предлагаемых в изобретении соединений индуцировать продуцирование IL-10 можно исследовать, например, определением количества IL-10 в стимулированных фитогемагглютинином (ФГА) или липополисахаридом (ЛПС) периферических одноядерных клетках крови.

Для выделения периферических одноядерных клеток крови использовали человеческую цельную кровь (для отбора крови использовали систему S-Monovette "Coagulation 9 NC/10 ml" с цитратом натрия, фирма Sarstedt). Лимфоциты и моноциты обогащали путем центрифугирования с градиентом плотности. С этой целью в 50-миллилитровые пробирки LEUCOSEP (фирма Greiner, кат. №227290) предварительно вносили по 15 мл Histopaque-1077 (фирма Sigma, кат. №Н8880) и центрифугированием в течение 30 с при 250g вытесняли вниз через находящуюся в пробирках фритту. После этого добавляли 20 мл цельной крови и центрифугировали в течение 15 мин при 800g и комнатной температуре. После центрифугирования надосадочную жидкость (плазму и тромбоциты) удаляли с помощью пипетки и отбрасывали, а расположенный под ней слой клеток (лимфоциты и моноциты) переносили в 50-миллилитровые центрифужные пробирки (фирма Falcon) и затем трижды промывали в культуральной среде VLE RPMI 1640 (фирма Seromed, №FG1415) (центрифугирование циклами по 10 мин при 250g и комнатной температуре). В завершение клеточный дебрис ресуспендировали в культуральной среде VLE RPMI 1640 (фирма Seromed, №FG1415), дополненной 10% ФТС (фирма Life Technologies, кат. №16000-044, с низким содержанием эндотоксина, инактивированная нагреванием в течение 1 ч при 56°С) и раствором пенициллина и стрептомицина в концентрации 50 мкг/мл (фирма Life Technologies, кат. №15140-106), и после подсчета клеток с помощью окрашивания трипановым синим их концентрацию доводили до 3×10⁶ клеток на 1 мл. Далее по 100 мкл суспензии клеток распределяли по 96-луночным плоскодонным культуральным планшетам (фирма Costar, продукт №3599). После этого к находящимся на планшетах клеткам добавляли по 100 мкл раствора для стимуляции тройной концентрации (3 мкг/мл ЛПС из серотипа Е.coli 0127:В8, фирма Sigma, кат. №L-4516, соответственно 300 мкг/мл фитогемагглютинина PHA-L, фирма Biochrom KG, кат. №М5030). После этого добавляли предлагаемые в изобретении соединения в различных концентрациях в виде их раствора тройной концентрации (100 мкл на лунку). Клетки стимулировали при 37°С и 5% СО₂ в течение 24 ч. Затем собирали надосадочную жидкость культуры клеток и количественно оценивали содержание в ней IL-10. Концентрацию IL-10 определяли с помощью коммерчески доступного набора для ELISA-анализа фирмы BioSource International (Human IL-10, кат. №KHC0101C). Рассчитанное значение ЕС₅₀ соответствует той концентрации тестируемого вещества, которая необходима для повышения уровня секреции IL-10 на 50% от максимальной степени увеличения их секреции.

По результатам этого эксперимента было установлено, что предлагаемые в изобретении соединения повышают продуцирование IL-10 периферическими одноядерными клетками крови.

Изобретение относится к новым производным бензимидазола общей формулы I

R¹ обозначает фенильную группу, которая необязательно содержит до трех заместителей, независимо друг от друга выбранных из группы, включающей F, Cl, Br, J, R⁴; R² обозначает моноциклическую или бициклическую 5-10-членную гетероарильную группу, которая содержит 1-2 гетероатома, выбранных из N, S и О; R³ обозначает Н; R⁴ обозначает C_1-6алкил; А обозначает С_2-6алкиленовую группу; В обозначает группу СООН, CONH₂, CONHR⁵ или CONR⁵R^5', в каждом случае присоединенную к атому углерода группы А; R⁵ и R^5' независимо друг от друга обозначают остаток, выбранный из группы, включающей C_1-6алкил, где один С-атом может быть заменен на О, и (С_0-3алкандиил-С_3-7циклоалкил), а также к их фармацевтически приемлемым солям, за исключением следующих соединений: 6-[[1-фенил-2-(пиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты и 6-[[1-фенил-2-(бензотиен-2-ил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты. Изобретение также относится к фармацевтическим средствам и к применению соединений общей формулы I. Технический результат - получение новых биологически активных соединений и фармацевтических средств на их основе, обладающих ингибирующим действием на активацию микроглии. 3 н. и 7 з.п. ф-лы.

1. Производные бензимидазола общей формулы I

R¹ обозначает фенильную группу, которая необязательно содержит до трех заместителей, независимо друг от друга выбранных из группы, включающей F, Cl, Br, J, R⁴,

R² обозначает моноциклическую или бициклическую 5-10-членную гетероарильную группу, которая содержит 1-2 гетероатома, выбранных из N, S и О,

R³ обозначает Н,

R⁴ обозначает C_1-6алкил,

А обозначает С_2-6алкиленовую группу,

В обозначает группу СООН, CONH₂, CONHR⁵ или CONR⁵R^5', в каждом случае присоединенную к атому углерода группы А,

R⁵ и R^5' независимо друг от друга обозначают остаток, выбранный из группы, включающей C_1-6алкил, где один С-атом может быть заменен на О, и (С_0-3алкандиил-С_3-7циклоалкил),

а также их фармацевтически приемлемые соли,

за исключением следующих соединений:

6-[[1-фенил-2-(пиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты и

6-[[1-фенил-2-(бензотиен-2-ил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановой кислоты.

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(4-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

5-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

6-[[1-фенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

6-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

5-[[1-(4-фторфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

5-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентановая кислота,

4-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]масляная кислота,

6-[[1-фенил-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота,

N-(3-метоксипропил)-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]-1-морфолин-1-илгексан-1-он,

N-метил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N,N-диметил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N-циклопропил-6-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N-метил-6-[[1-(4-метилфенил-2-(3-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексанамид,

N-(2-метоксиэтил)-5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид,

N,N-диметил-5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид,

5-[[1-(4-метилфенил)-2-(3-пиридинил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]пентанамид,

6-[[1-(4-метилфенил)-2-(2-тиенил)-1Н-бензимидазол-6-ил]окси]гексановая кислота.