СРЕДСТВО ДЛЯ МОДУЛЯЦИИ ДОФАМИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА ПРИ МЕНОПАУЗЕ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/565 A61K31/57 A61P25/00 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано как средство для коррекции изменений дофаминовых рецепторов головного мозга при менопаузе.

Известны средства, действующие на дофаминовые рецепторы головного мозга: нейролептики - блокаторы дофаминовых рецепторов головного мозга (галоперидол, дроперидол, клозапин и т.д.), противопаркинсонические средства - блокирующие дофаминовые рецепторы (ропинирол) и стимулирующие дофаминовые рецепторы (бромокриптин) (Д.А.Харкевич/Фармакология // Москва, "ГЭОТАР-Медиа", 2005). Однако модуляторов для коррекции изменений дофаминовых рецепторов головного мозга, применяемых в период менопаузы, нет.

Задачей изобретения является расширение арсенала лекарственных средств, влияющих на дофаминовые рецепторы.

Технический результат - получение средства, повышающего аффинность и снижающего плотность дофаминовых рецепторов головного мозга при менопаузе.

Сущность изобретения: применение препарата Фемостон в качестве средства, нормализующего аффинность и плотность дофаминовых рецепторов головного мозга при менопаузе.

В качестве средств сравнения использовались известные препараты женских половых гормонов: 17β-эстрадиол и дидрогестерон.

Влияние фемостона и препаратов сравнения на дофаминовые рецепторы мозга изучали на крысах-самках массой 140-160 г., полученных из питомника лабораторных животных п.Чишмы.

Для оценки изменений плотности и аффинности дофаминовых рецепторов мозга при менопаузе и влияния фемостона при данной патологии использовали экспериментальную модель хирургической овариэктомии. В течение двух недель животные получали перорально 17β-эстрадиол, дидрогестерон в дозировке 0,13 и 0,65 мкг/кг/сут, и фемостон (1/10 и 2/20) в тех же дозировках соответственно. Животных забивали путем декапитации под легким эфирным наркозом. Выделяли головной мозг, гомогенезировали, выделяли мембранную фракцию гомогената мозга путем дифференциального ультрацентрифугирования. Все манипуляции проводились быстро, строго на холоде.

Плотность дофаминовых рецепторов определяли радиолигандным методом (Lim D.К. et al / Comparative studies of muscarinic and dopamine receptors in three strains of rat. // Eur. J. Pharmacol. 1989. V.165, pp.279-289).

Для определения общего связывания [³H]-спиперона мембранный препарат с конечным содержанием белка 0,3-1 мг/мл инкубировали в триплете с [³Н]-спипероном в концентрациях 0,5 и 2 нМ. Неспецифическое связывание определяли точно так же, но в присутствии 1000-кратного избытка немеченого галоперидола (блокатор дофаминовых рецепторов). Специфическое связывание вычисляли как разницу между общим и неспецифическим связыванием. Содержание мест связывания выражали в фемтомолях лиганда. Белок определяли по Лоури (Lowry О. Н. et al / Protein measurement with Folin phenol reagent.// J. Biol. Chem. - 1951. - 193).

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими чертежами, где на фиг.1 изображен уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрациях 0,5 и 2нМ с МФГМ после ложной и хирургической овариэктомии в динамике; на фиг.2 - влияние препаратов женских половых гормонов на уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГМ после хирургической овариэктомии.

В результате проведенных исследований установили (фиг.1), что через неделю после ложной овариэктомии уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с мембранной фракцией гомогената мозга снизился в 4 раза по сравнению с интактными животными. В концентрации 2 нМ специфическое связывание [³H]-спиперона с МФГМ также было ниже (в 3 раза), чем в мозговой ткани крыс, не подвергшихся оперативному вмешательству. Полученные данные свидетельствуют о том, что ложная овариэктомия снижает плотность и аффинность дофаминовых рецепторов мозга. Возможно, это обусловлено влиянием послеоперационного стресса или действием эфира. Выявленные изменения сохранились и в последующий срок исследований. Так через две недели количество мест связывания [³Н]-спиперона с МФГМ в концентрации 0,5 нМ оставалось на том же уровне.

Уровень специфического связывания [³Н]-спиперона с МФГМ в концентрации 2 нМ повысился, но не достиг уровня интактных животных. Следовательно, уменьшение аффинности и плотности дофаминовых рецепторов мозга после ложной овариэктомии сохраняется на протяжении всего срока наблюдений (2 недели), поэтому в качестве контроля целесообразно использовать ложнооперированных животных. Уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрации 0,5 нМ через неделю после хирургической овариэктомии возрос в 3 раза, а в концентрации 2 нМ - в 24 раза относительно ложнооперированных животных. Через две недели после овариэктомии уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с мембранной фракцией гомогената мозга повысился в 4 раза по сравнению с ложнооперированными крысами и достиг уровня интактных животных. Уровень связывания [³H]-спиперона в концентрации 2 нМ увеличился в 30 раз по сравнению с ложнооперированными животными и в 92 раза по сравнению с интактными животными. Следовательно, овариэктомия повышает аффинность и плотность дофаминовых рецепторов головного мозга у крыс.

Изучение влияния женских половых гормонов на аффинность дофаминовых рецепторов показало (фиг.2), что у овариэктомированных крыс, получавших 17β-эстрадиол, уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрации 0,5 нМ увеличился в 2,5 раза относительно овариэктомированных крыс, не получавших препарат, и в 9 раз относительно ложнооперированных животных. При ежедневном введении дидрогестерона уровень связывания [³H]-спиперона в концентрации 0,5 нМ также увеличился (в 2 раза) по сравнению с овариэктомированными животными, получавшими плацебо, и в 9 раз относительно крыс, подвергшихся ложной овариэктомии. Введение фемостона привело к повышению уровня специфического связывания [³H]-спиперона в 2 раза по отношению к овариэктомированным крысам, не получавшим гормонотерапию, и в 8 раз по сравнению с ложнооперированными животными. Таким образом, применение женских стероидных гормонов приводит к еще большему повышению аффинности дофаминовых рецепторов головного мозга у крыс после хирургической овариэктомии.

При изучении влияния женских половых гормонов на плотность дофаминовых рецепторов были получены следующие данные. У животных, ежедневно в течение двух недель получавших 17β-эстрадиол, уровень связывания [³H]-спиперона в концентрации 2 нМ повышается в 2 раза по отношению к овариоэктомированным крысам, получавшим плацебо, и в 53 раза по сравнению с ложнооперированными животными. Дидрогестерон оказывает аналогичное действие, повышая уровень специфического связывания [³H]-спиперона в концентрации 2 нМ в 2 раза относительно овариоэктомированных животных, не получавших препарат, и в 63 раза относительно ложнооперированных крыс. У крыс, получавших фемостон, плотность дофаминовых рецепторов мозга снижалась в 8 раз по сравнению с овариэктомированными животными, не получавшими гормон, но оставалась выше, чем у ложнооперированных крыс, при этом достигла уровня интактных животных. Следовательно, 17β-эстрадиол и дидрогестерон повышают аффинность и плотность дофаминовых рецепторов в мозговой ткани у овариэктомированных животных, тогда как фемостон, увеличивая аффинность Д2-рецепторов дофамина, снижает их плотность, приближая ее к уровню интактных животных.

Исследованиями авторов установлено, что в результате хирургической овариоэктомии происходит повышение аффинности и плотности дофаминовых рецепторов головного мозга крыс, фемостон снижает плотность и повышает аффинность дофаминовых рецепторов мозга крыс, подвергшихся овариэктомии, приближая их к физиологической норме.

Таким образом, комбинированный двухфазный гормональный препарат Фемостон является наиболее оптимальным средством для фармакологической коррекции дофаминовых рецепторов головного мозга при менопаузе.

Предложено средство для модуляции дофаминовых рецепторов головного мозга при менопаузе - фемостон. Показано, что при менопаузе и после овариэктомии повышается аффинность и плотность дофаминовых рецепторов головного мозга. Использование изобретения обеспечивает снижение этих показателей у крыс до уровня интактных животных. 2 ил.

Применение препарата Фемостон в качестве средства, нормализующего аффинность и плотность дофаминовых рецепторов головного мозга при менопаузе.