СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ ГЕМОСТАЗА У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ОТ КОРОВ, ПЕРЕНЕСШИХ ОТРАВЛЕНИЕ ПАСЛЕНАМИ ВО ВРЕМЯ БЕРЕМЕННОСТИ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/00 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации гемостаза у новорожденных телят от коров, перенесших отравление пасленами во время беременности, не существует.

Известно, что многие растения из семейства пасленовых встречаются в кормах в виде примесей или используются в качестве корма для животных. К ним относятся паслены и картофель. Действующим началом пасленовых является ядовитый гликоалкалоид соланин. Особенно много его содержится в картофельной ботве и в позеленевших или испорченных клубнях (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. Проф. И.Г.Шарабина. М.: Агропромиздат, 1985. - 527 с.).

Соланин обладает раздражающими и гемолитическими свойствами. Поступая с кормом в пищеварительный тракт, яд обусловливает воспаление слизистых оболочек. Всасываясь в кровь, соланин вызывает гемолиз эритроцитов и нарушения функции центральной нервной системы.

Патологоанатомические изменения представлены множественными кровоизлияниями в различных органах и тканях, геморрагическим воспалением желудочно-кишечного тракта с выраженной гиперемией, кровоизлияниями и отеком слизистой оболочки, наличием кровянистого содержимого, признаками нефрита и дистрофическими изменениями миокарда и печени.

Однако наиболее опасны последствия отравления беременных коров. Новорожденные телята от этих коров нередко имеют геморрагический диатез, в основе которого лежит тромбоцитопатия с недостаточностью пула хранения аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата в тромбоцитах. Вследствие этого у этих животных развивается недостаточность секреции биологически активных веществ из кровяных пластинок во время агрегации тромбоцитов, приводящая к неполноценности самой агрегации, несостоятельности тромбоцитарного тромба, снижению эффективности всего гемостаза и развитию кровоточивости. Это ослабляет новорожденных телят, способствуя анемизации, астенизации, присоединению инфекции и задержке роста.

В литературе имеются рекомендации по назначению «Фосфопага» для дезинфекции помещений: больниц, коровников, птицеферм, обработки зерновых культур, картофеля перед посевом и перед хранением для лучшей сохранности урожая (К.М.Ефимов, П.А.Гембицкий, А.Г.Снежко. Полигуанидины - класс малотоксичных дезсредств прологированного действия. // Журнал Дезинфекционное дело, 2000. - №4. - с.32-36, сайт www.ruscience.newmail.ru/journals/jmed.htm; Наумов М.М., Медведев И.Н., Ефимов К.М. и др. Практические рекомендации по применению «Биопага-Д» в ветеринарии. Москва, 2006. - 22 с.). Однако никогда ранее препарат «Фосфопаг» не применялся у новорожденных телят с целью нормализации имеющегося у них снижения пула хранения тромбоцитов и нормализации агрегации тромбоцитов с коллагеном, тромбином, адреналином.

Целью изобретения является определение способа нормализации гемостаза у новорожденных телят от коров, перенесших отравление пасленами во время беременности.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для нормализации гемостаза через нормализацию пула хранения АДФ и АТФ в тромбоцитах у новорожденных телят от коров, перенесших отравление пасленами во время беременности, назначается 0,05% «Фосфопаг» по 150,0 мл в сутки на 10 дней, включаясь в схему выпаивания.

Способ осуществляется следующим образом. С целью определения содержания в тромбоцитах АТФ и АДФ и величины их секреции под влиянием коллагена используется метод тонкослойной хроматографии на пластинах Силуфол, позволяющий оценить ультраструктурные характеристики интактных тромбоцитов и характера межтромбоцитарного взаимодействия на основных стадиях развития гемостатического процесса (Ермолаева Т.А., Головина О.Г., Пономаренко В.М. и соавт. Лабор. дело, 1993. - №6. - с.45-53) с последующей спектрофотометрией кислоторастворимых элюатов при длине волны 257 нм. Метод является прямым биохимическим методом оценки эффективности процесса секреции тромбоцитов по разнице в содержании АТФ и АДФ в тромбоцитах до и после секреции, выраженной в % к первоначальному их содержанию в клетках.

1. На дно хроматографической банки выливают растворитель за 2-3 часа до помещения в них пластин и быстро и плотно закрывают банку стеклом шлифованной поверхностью вниз. Состав растворителя: 1:4 диоксан изопропанол, 25% аммиак, дистиллированная вода в соотношении 4:2:1:4 (на 1 литр - 44 мл растворителя, на 1,5 л - 66 мл).

2. Разводят маточную суспензию коллагена буфером Михаэлиса до определенной функциональной концентрации, дающей 50%-ное падение оптической плотности при исследовании коллагеновой агрегации тромбоцитов в группе здоровых новорожденных телят.

3. Готовят пластины Силуфол необходимого размера: длина - 13,5 мм, ширина - 7,5 см.

4. Для исследования берут кровь из вены животного 22,0 мл, стабилизируют ее цитратом натрия в соотношении 4:1. Получают плазму, богатую тромбоцитами (центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин). Стандартизуют плазму до уровня тромбоцитов 250-300×10⁹/литр.

В 2 силиконированные центрифужные пробирки наливают 5 мл тромбоцитарной плазмы исследуемого, материал для измерения уровня адениновых нуклеотидов до секреции (I пробирка) и после секреции (II пробирка). В первую их них (контроль) добавляют 0,55 мл раствора рН 7,4 и 0,3 мл 1% этилен-диамин-тетрауксусной кислоты (ЭДТА), рН 7,4. Во вторую пробирку (опыт), находящуюся на водяной бане при 37°С, добавляют 0,55 мл суспензии коллагена и производят быстрое перемешивание ее стеклянной палочкой в течение 10 мин. Реакцию тромбоцитарной секреции останавливают добавлением 0,3 мл 1% ЭДТА, рН 7,4.

Дальнейшие манипуляции с материалом в первой и второй пробирках проводят одинаково.

- Получают осадок тромбоцитов центрифугированием при 4000 об/мин×20 минут.

- Проводят двукратное отмывание осадка от белков плазмы буфером Филипса.

- Депротеинизация осуществляется к осадкам тромбоцитов 0,04 мл 6% хлорной кислоты и перемешиванием стеклянной палочкой в течение 10 минут в ванночке со льдом.

- Центрифугируют при 4000 об/мин×10 минут при 0°С.

- Выбирают надосадок носиком дозатора на 0,02 мл в эппендорфовские микропробирки, погруженные в ледяную баню.

- Нейтрализация материала во льду (примерно 0,01 мл) добавлением 2 М K₂СО₃ при перемешивании стеклянным капилляром в течение 8 минут под контролем фильтровальной бумаги до рН 7-8.

- Осаждение образовавшегося осадка в эппендорфовских пробирках, закрытых крышечками при 1500 об/мин×30 секунд.

- Набирают надосадок в носики дозаторов, которые ставятся в горизонтальном положении в штативы.

- Материал из контрольной и опытной систем наносят на стартовую линию 2-х пластин, отстоящую на 2 см от одного ее края.

- Подсушивают струей холодного воздуха и ставят вертикально в банку для хроматографии так, чтобы пластины не касались друг друга.

- Когда фронт растворителя на 0,5 см будет не достигать верхнего края пластины, их осторожно вымывают, подсушивают струей холодного воздуха и просматривают в хроматоскопе в ультрафиолетовом свете. Если прослеживаются 2 или 3 черных пятна, параллельных стартовой полосе, т.е. прошло хорошее разделение адениновых нуклеидов, то пятна АТФ (первое от старта) и АДФ (второе от старта) легко обводят простым карандашом и соскабливают их, помещая в центрифужные пробирки. Соскобы заливают 3 мл 0,1 м HCl на сутки, в течение которых происходит экстракция кислоторастворимых адениновых нуклеидов.

- Через 24 часа материал центрифугируется 20 минут при 1500 об/мин. кислоторастворимые элюаты, содержащие адениновые нуклеитиды, переносятся в чистые пробирки и спектрофотометрируются против контроля (0,1 м HCl) при 257 нм.

- Нормальные значения содержания АТФ и АДФ до секреции 5,2-5,5 ммоль/10^-11 тр. и 3,4-3,8 ммоль/10^-11 тр. соответственно, нормальная секреция составляет 32-34% и 35-38% соответственно.

Для нормализации гемостаза через нормализацию пула хранения АДФ и АГФ в тромбоцитах у новорожденных телят от коров, перенесших отравление пасленами во время беременности, назначается 0,05% «Фосфопаг» по 150,0 мл однократно в сутки на 10 дней, включаясь в схему выпаивания. Раствор 0,05% «Фосфопага» готовят путем разведения 5 г сухой формы препарата в 10 литрах дистиллированной воды.

Способ позволяет нормализовать первичный гемостаз у новорожденных телят от коров, перенесших во время беременности отравление пасленами, в течение 10 дневного периода лечения, переводя его на уровень, характерный для здоровых телят. При соблюдении в последующем режима рационального питания риск рецидивирования геморрагии исключен, что обеспечивает поддержание первичного гемостаза в оптимальном режиме функционирования, способствуя нормальному росту и развитию телят.

Пример 1. Новорожденный теленок №22 с геморрагическим диатезом, 3 сутки жизни, рожденный от коровы, перенесшей во время беременности отравление пасленами, обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь с оценкой пула хранения АДФ - 0,5 ммоль/10^-11 тр. и АТФ 3,1 ммоль/10^-11 тр. с секрецией 20% и 22% соответственно и агрегационной активностью тромбоцитов с рядом индукторов (коллаген 45,0 с, тромбин 58,0 с, адреналин 143,0 с), оказавшейся пониженной.

Полученные результаты указывали на дефицит пула хранения АДФ и АТФ в тромбоцитах с ослаблением агрегации тромбоцитов.

Теленку назначен 0,05% «Фосфопаг» 150,0 мл в день на 10 дней. Это позволило через 10 суток полностью нормализовать пул хранения в тромбоцитах теленка - АТФ 5,4 ммоль/10^-11 тр., АДФ 3,5 ммоль/10^-11 тр., с секрецией 33% и 34% соответственно, нормализовав агрегационную активность тромбоцитов с рядом индукторов (коллаген 35,0 с, тромбин 56,0 с, адреналин 101,2 с), купировав геморрагический синдром.

В дальнейшем данного теленка было рекомендовано содержать на рациональном режиме питания, что исключило отклонения в его развитии.

Пример 2. Новорожденный теленок №28 с геморрагическим диатезом, 3 сутки жизни, рожденный от коровы, перенесшей во время беременности отравление пасленами, обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь с оценкой пула хранения АДФ - 0,6 ммоль/10^-11 тр. и АТФ 3,3 ммоль/10^-11 тр. с секрецией 21% и 23% соответственно и агрегационной активностью тромбоцитов с рядом индукторов (коллаген 44,0 с, тромбин 60,0 с, адреналин 150,0 с), оказавшейся пониженной.

Полученные результаты указывали на дефицит пула хранения АДФ и АТФ в тромбоцитах с ослаблением агрегации тромбоцитов.

Теленку назначен 0,05% «Фосфопаг» 150,0 мл в день на 10 дней. Это позволило через 10 суток полностью нормализовать пул хранения в тромбоцитах теленка - АТФ 5,5 ммоль/10^-11 тр., АДФ 3,6 ммоль/10^-11 тр., с секрецией 32% и 36% соответственно, нормализовав агрегационную активность тромбоцитов с рядом индукторов (коллаген 36,0 с, тромбин 54,0 с, адреналин 100,6 с), купировав геморрагический синдром.

В дальнейшем данного теленка было рекомендовано содержать на рациональном режиме питания, что исключило отклонения в его развитии.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к гематологии. Способ предусматривает исследование крови. Назначение и использование 0,05% «Фосфопага» по 150,0 мл в сутки на 10 дней в схеме выпаивания. Способ позволяет нормализовать первичный гемостаз у новорожденных телят от коров, перенесших во время беременности отравление пасленами, в течение 10 дневного периода лечения, переводя его на уровень, характерный для здоровья телят.

Способ нормализации гемостаза у новорожденных телят от коров, перенесших отравление пасленами во время беременности, предусматривающий использование 0,05% «Фосфопага» по 150,0 мл в сутки в течение 10 дней в схеме выпаивания.