| название |
год |
авторы |
номер документа |
| ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИЕ БЕЛКИ И ХРОМОПРОТЕИНЫ ИЗ ВИДОВ HYDROZOA, НЕ ОТНОСЯЩИХСЯ К AEQUOREA, И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ |
2003 |
- Лукьянов Сергей Анатольевич
- Шагин Дмитрий Алексеевич
- Янушевич Юрий Григорьевич
|
RU2338785C2 |
| МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ЗЕЛЕНЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
2006 |
- Лукьянов Сергей Анатольевич
|
RU2412250C2 |
| НОВЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ БЕЛКИ ИЗ ENTACMAEA QUADRICOLOR И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ |
2007 |
- Лукьянов Сергей Анатольевич
- Чудаков Дмитрий Михайлович
|
RU2395581C2 |
| ВЫДЕЛЕННАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ ОПЕРАТИВНО СЛИТЫЙ ИНТРАМОЛЕКУЛЯРНЫЙ ДИМЕР БЕЛКА KillerRed, КАССЕТА ЭКСПРЕССИИ, КЛЕТКА, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК И СОДЕРЖАЩАЯ КАССЕТУ ЭКСПРЕССИИ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК |
2011 |
- Лукьянов Константин Анатольевич
- Серебровская Екатерина Олеговна
- Лукьянов Сергей Анатольевич
|
RU2491342C1 |
| ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИЕ БЕЛКИ ИЗ ВЕСЛОНОГИХ РАКООБРАЗНЫХ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
2003 |
- Барсова Екатерина Владимировна
- Лукьянов Сергей Анатольевич
|
RU2345137C2 |
| ВЫДЕЛЕННАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛОК KillerRed (ВАРИАНТЫ), ВЫДЕЛЕННЫЙ БЕЛОК (ВАРИАНТЫ), КАССЕТА ЭКСПРЕССИИ, КЛЕТКА, СОДЕРЖАЩАЯ КАССЕТУ ЭКСПРЕССИИ |
2011 |
- Лукьянов Константин Анатольевич
- Серебровская Екатерина Олеговна
- Лукьянов Сергей Анатольевич
|
RU2458129C1 |
| ВЫДЕЛЕННАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА, КАССЕТА ЭКСПРЕССИИ, КЛЕТКА, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ БИОСЕНСОР, ВЫДЕЛЕННЫЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА, ВЫДЕЛЕННАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР, ОПЕРАТИВНО СЛИТАЯ С НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТОЙ, КОДИРУЮЩЕЙ СИГНАЛ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ |
2011 |
- Билан Дмитрий Сергеевич
- Белоусов Всеволод Вадимович
- Лукьянов Сергей Анатольевич
|
RU2493260C2 |
| КРАСНЫЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА В ЖИВЫХ КЛЕТКАХ |
2013 |
- Белоусов Всеволод Вадимович
- Ермакова Юлия Геннадиевна
- Ениколопов Григорий Николаевич
|
RU2535336C1 |
| ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК, ЯВЛЯЮЩИЙСЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ БИОСЕНСОРОМ ДЛЯ ОДНОВРЕМЕННОЙ ДЕТЕКЦИИ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА И ФОСФАТИДИЛИНОЗИТОЛ-3,4,5-ТРИФОСФАТА, НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ ТАКОЙ БЕЛОК, КАССЕТА ЭКСПРЕССИИ И ЭУКАРИОТИЧЕСКАЯ КЛЕТКА-ХОЗЯИН |
2012 |
- Белоусов Всеволод Вадимович
- Мишина Наталия Михайловна
- Чудаков Дмитрий Михайлович
|
RU2498996C1 |
| ВЫДЕЛЕННАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР, КАССЕТА ЭКСПРЕССИИ, КЛЕТКА ПРОДУЦИРУЮЩАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР, ВЫДЕЛЕННЫЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БИОСЕНСОР |
2012 |
- Билан Дмитрий Сергеевич
- Белоусов Всеволод Вадимович
- Лукьянов Сергей Анатольевич
|
RU2515903C2 |
Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано для мечения белков, клеток и организмов. Путем введения замен в нуклеиновую кислоту Aequorea coerulescens, кодирующую бесцветный GFP-подобный белок acGFP, получена нуклеиновая кислота, кодирующая флуоресцентный белок. Кассета экспрессии, содержащая данную нуклеиновую кислоту под контролем регуляторных элементов, обеспечивает биосинтез флуоресцентного белка в клетке. С помощью данной генетической конструкции получены трансгенный организм и клетка, продуцирующие флуоресцентный белок, кодируемый указанной нуклеиновой кислотой. Данный флуоресцентный белок используют в способах мечения клетки, внутриклеточной структуры и белка, а также для регистрации транскрипционной активности промотора. Применение изобретения позволяет расширить арсенал маркировочных средств, используемых в биохимии, молекулярной биологии и медицинской диагностике. 10 н. и 1 з.п. ф-лы, 25 ил.
1. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая флуоресцентный полипептид, имеющая нуклеотидную последовательность, по существу, соответствующую открытой рамке считывания аминокислотной последовательности кодируемого флуоресцентного полипептида, где указанная выделенная нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из:
(a) нуклеиновой кислоты, полученной из нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок Aequorea coerulescens acGFP, характеризующийся аминокислотной последовательностью, показанной на фиг. 1, путем введения замен в положения нуклеиновой кислоты Aequorea coerulescens, приводящих к по меньшей мере одной из замен E222G, Y220L, Н148Т или H148S и необязательно к одной или более заменам, выбранным из группы, состоящей из V111, N19D, Т62А, F64L, К101Е, Е115К, N121S, F165L, Е172К, Е172А, Т206А, F221L, Y237I, K238Q в указанной аминокислотной последовательности кодируемого полипептида, и к возникновению у кодируемого полипептида способности к флуоресценции;
(b) нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность, выбранную из группы аминокислотных последовательностей, показанных на фиг. 3, 5, 6, 7, 9, 12, 15, 17, 19 и 21.
2. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы нуклеотидных последовательностей, показанных на фиг. 3, 5, 6, 7, 9, 12, 15, 17, 19, 21 и 23, или нуклеотидную последовательность, отличающуюся от указанной вследствие вырожденности генетического кода.3. Кассета экспрессии, содержащая нуклеиновую кислоту по п.1 под контролем регуляторных элементов, необходимых для экспрессии нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине, которая будучи интегрированной в геном клетки или при введении в клетку в виде внехромосомного элемента, способна обеспечить экспрессию флуоресцентного полипептида, кодируемого нуклеиновой кислотой по п.1.4. Клетка, продуцирующая флуоресцентный полипептид, кодируемый нуклеиновой кислотой по п.3, содержащая кассету экспрессии по п.3 в виде внехромосомного элемента или элемента, интегрированного в геном этой клетки.5. Выделенный полипептид, способный к флуоресценции и кодируемый нуклеиновой кислотой по п.1.6. Слитый полипептид, способный к флуоресценции, состоящий из полипептида по п.5 и партнера слияния, представляющего собой направляющий к мишени пептид или сигнальный пептид.7. Трансгенный организм, содержащий кассету экспрессии по п.3 в виде внехромосомного элемента или интегрированную в геном и способный экспрессировать флуоресцентный полипептид по п.5.8. Способ мечения белка, включающий связывание указанного белка с полипептидом по п.5 путем создания нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид по п.5, оперативно связанной с нуклеиновой кислотой, кодирующей указанный белок, и получение флуоресцентного слитого белка по п.6.9. Способ мечения клетки, включающей трансфекцию клетки кассетой по п.3 и продуцирование клеткой флуоресцентного пептида по п.5.10. Способ мечения внутриклеточной структуры, включающий (а) трансфекцию клетки экспрессионной кассетой, содержащей нуклеиновую кислоту по п.1, слитую с нуклеиновой кислотой, кодирующей сигнал клеточной локализации, специфичный в отношении клеточной структуры, подлежащей мечению, под контролем регуляторных элементов, обеспечивающих продуцирование флуоресцентного полипептида по п.5, слитого с сигналом клеточной локализации, и (b) экспрессию флуоресцентного слитого пептида в клетке.11. Способ регистрации транскрипционной активности промотора, включающий (а) продуцирование пептида по п.5 в клетке путем ее трансфекции экспрессирующей кассетой по п.3, содержащей промотор, ответственный в природе за экспрессию изучаемого гена; (b) регистрацию клеточной флуоресценции.
