СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ТКАНИ ЯИЧНИКА К ТРАНСПЛАНТАЦИИ У ПАЦИЕНТОК СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ОРГАНОВ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 2008 года по МПК A01N1/02 A61K35/54 

Изобретение относится к криобиологии и медицине и может найти применение в онкологии у пациенток, имеющих злокачественные новообразования органов репродуктивной системы. Изобретение позволяет подготовить ткань яичника к трансплантации с ее дальнейшим проведением для восстановления гормонального фона и репродуктивной функции.

Лечение злокачественных новообразований органов репродуктивной системы пациенток включает в себя хирургическое лечение и последующую химио- и лучевую терапию. При таком лечении не всегда удается вывести яичники из зоны облучения, что приводит к выраженному угнетению функции яичников у женщин и гибели фолликулярного аппарата.

В связи с этим современные методы лечения онкологических больных репродуктивного возраста преследуют цель сохранения гормонального фона и возможности иметь генетически собственного ребенка.

При этом особое значение предлагаемый способ имеет для детей, прошедших курс лечения по поводу лимфомы Ходжкина, поскольку последствием лечения этого онкологического заболевания у девочек является бесплодие.

До настоящего времени проблема социально-психологической реабилитации онкологических пациенток не решена. С каждым годом среди онкологических больных увеличивается доля женщин репродуктивного возраста, не реализовавших свою репродуктивную функцию.

Современные возможности криобиологии позволяют осуществлять криоконсервацию овариальной ткани с последующим хранением ее в жидком азоте многие годы.

Метод криоконсервации овариальной ткани перед оперативным или терапевтическим лечением является единственным методом, позволяющим сохранить ткань яичника и в дальнейшем восстановить у пациенток репродуктивную функцию и предоставить возможность иметь генетически собственного ребенка.

Известно, что с помощью криоконсервации ткани яичника человека можно сохранять жизнеспособность и гормональную активность ткани яичника на многие годы. Клиническое применение ткани яичника после размораживания позволяет отказаться от заместительной гормональной терапии, повысить уровень рождаемости и преодолеть социально-психологические проблемы реабилитации онкологических пациенток. Особенно это актуально в случаях наличия противопоказаний у пациентки к заместительной гормональной терапии.

Известен способ консервации ткани яичника человека путем инкубирования его в растворе криопротекторов различной концентрации с использованием пошагового охлаждения в два этапа: сначала со скоростью 1°/мин до -15°С, далее со скоростью 10°/мин до -196°С и помещением в жидкий азот [Пушкарь Н.С. и др. Низкотемпературная консервация и трансплантация яичника. Рига, 1972, с.480].

Кроме того, известен способ консервации ткани яичника человека [а.с. SU №1017251, МКИ А01N 1/00, опубл. 1983.15.05] путем помещения ткани яичника с криопротекторами в герметичные полиэтиленовые ампулы и инкубирования в них в течение 30-40 мин. При этом замораживание проводят в два этапа: первый этап ведут со скоростью 0,5-2°/мин до (-6)-(-8)°С, после чего осуществляют изотермическую выдержку в течение 8-10 мин, и второй этап ведут со скоростью 9-10°/мин до (-40)-(-50)°С, после чего погружают в жидкий азот. Размораживание осуществляют в два этапа: от -196°С до (-60)-(-70)°С путем погружения в спиртовую баню с температурой -70°С на 5-7 мин, затем от (-60)-(-70)°С до 0-(+1)°С в водяной бане при +40°С.

К недостаткам вышеуказанных способов следует отнести то, что в результате применения этих способов происходит значительная потеря клеточных элементов ткани яичника после размораживания, что не позволяет сохранить гормональную активность ткани яичника. Данные нарушения приводят к потере функциональной активности ткани яичника после трансплантации. Необходимо отметить также, что клиническое применение криоконсервированной ткани яичника известными способами на практике может вызвать ряд проблем.

Одной из ключевых проблем сохранения овариальной ткани для трансплантации является возникновение ишемии и некроза ткани после операции. Ткань, лишенную нормальной оксигенации, можно сохранить за счет снижения метаболизма, что достигается с помощью гипотермии, которая обеспечивает сохранение ткани вследствие замедления нормальных катаболических процессов и снижении потребности в кислороде.

Эту проблему успешно решает известный метод помещения ткани яичника после резекции на лед в коммерческую IVF среду (Medicult) [Schmidt K.L., Byskow A.G., Nyboe A.A. {et al} // Hum. Reprod. - 2003. - Vol.18 - P.1158-1164], после чего ткань яичника возможно транспортировать на большие расстояния.

Согласно методу, предложенному K.L.Schmidt et al., после резекции овариальную ткань транспортируют на льду в коммерческой IVF среде (Medicult), что позволяет успешно сохранить примордиальные, первичные и вторичные фолликулы.

Однако к недостаткам способа, описанного K.L.Schmidt et al., следует отнести то, что IVF среда быстро теряет свою рН, что может оказать токсическое действие на находящуюся в ней ткань яичника.

Известен метод криоконсервации овариальной ткани у пациенток со злокачественными и доброкачественными новообразованиями органов репродуктивной системы [Быстрова О.В., Диникина Ю.В., Тапильская Н.И., Лисянская А.С., Манихас Г.М. Журнал Акушерства и женских болезней, том LV, выпуск 4/2006, с.63-69], являющийся наиболее близким аналогом-прототипом для предлагаемого способа подготовки ткани яичника к трансплантации.

Согласно способу, принятому в качестве прототипа, ткань яичника после резекции обрабатывают физиологическим раствором. В качестве среды для транспортировки ткани используют фосфатный буфер Дюльбеко с 2,5% сывороточным альбумином человека (HAS), после чего выполняют отделение кортикального слоя от медуллярной части и нарезку фрагментов размером 5×10 мм и толщиной 1 мм на холодном столе в буфере Дюльбеко с альбумином.

Затем проводят по коммерческим средам для криоконсервации (Medicult) с восходящей концентрацией криопротекторов (пропандиол и сахароза).

После этого осуществляют криоконсервацию путем замораживания ткани в криовиолах со стартовой температурой +4°С и пошаговым охлаждением 2°С/мин до -9°С, инициацию кристаллизации при -9°С и выполнение пошагового охлаждения 0,3°С/мин до - 40°С, 10°С/мин до - 140°С, затем погружают в криобанк с жидким азотом (-196°С) и хранят до момента размораживания с обязательным этапом контрольного размораживания одного фрагмента ткани с целью оценки качества криоконсервации.

Известный способ позволяет сохранить ткань яичника во время транспортировки, криоконсервации, что ведет к сохранению функциональной активности ткани яичника после трансплантации. Вместе с тем, успешное использование размороженной ткани яичника для трансплантации возможно при наличии сохраненной архитектоники ткани, структурной целостности фолликулов и компонентов стромы, что подтверждается гистологическим заключением, содержащим эти сведения.

Поскольку результат замораживания находится в прямой зависимости от количества выживших фолликулов, то предлагаемый способ, в отличие от способа-прототипа, характеризуется подбором оптимальных условий сохранения ткани яичника после резекции, улучшением процесса криоконсервации ткани и адаптации ткани после размораживания.

Настоящим изобретением поставлена и решена задача создания способа подготовки ткани яичника к трансплантации у пациенток, имевших злокачественные новообразования органов репродуктивной системы и прошедших курс лечения по поводу рака тела матки и рака шейки матки.

Предлагаемый способ позволяет не только значительно улучшить выживаемость ткани, но и в дальнейшем реализовать репродуктивную функцию путем клинического применения размороженной ткани яичника в качестве трансплантата.

Технический результат изобретения состоит в том, что предлагаемый способ подготовки ткани яичника к трансплантации у пациенток, имевших новообразования органов репродуктивной системы и прошедших курс лечения, обеспечивает сохранение архитектоники ткани яичника, выживаемость фолликулов и клеточных компонентов стромы с последующим восстановлением эндокринной функции яичника после трансплантации. Кроме того, способ обеспечивает не только сохранение архитектоники ткани яичника, но и увеличивает число фолликулов, способных полноценно функционировать за счет предлагаемой техники забора ткани, выбранных для культивирования сред, подобранного времени эквилибрации в них и протокола замораживания и размораживания. Это позволяет после проведения трансплантации восстановить эндокринную функцию яичника у пациенток, имевших злокачественные новообразования органов репродуктивной системы и прошедших курс лечения.

Для достижения указанного результата в предлагаемом способе подготовки ткани яичника к трансплантации у пациенток со злокачественными новообразованиями органов репродуктивной системы, включающем этап транспортировки ткани во льду, характеризующемся тем, что осуществляют забор ткани яичника, обработку ткани средами, отделение кортикального слоя от медуллярной части, криоконсервацию путем замораживания ткани в криовиолах со стартовой температурой +4°С и пошаговым охлаждением 2°С/мин до - 9°С, инициацию кристаллизации при -9°С и выполнение пошагового охлаждения 0,3°С/мин до температуры - 40°С, 10°С/мин до температуры - 140°С, последующее погружение в криобанк с жидким азотом с температурой -196°С и хранение с последующим размораживанием ткани для трансплантации, согласно изобретению после забора ткани ее обрабатывают вначале Flushing-средой с гепарином (Medicult) при комнатной температуре, затем средой Sperm Preparation Medium (Medicult), после чего отделяют кортикальный слой от медуллярной части, и ткань, находящуюся в стерильных пробирках в среде Sperm Preparation Medium (Medicult), помещают в лед для транспортировки, после чего кортикальный слой нарезают на фрагменты размером 5×10 мм и толщиной 1 мм на холодном столе при температуре +4°С и повергают дегидратации в течение 95 минут при температуре +4°С путем помещения фрагментов ткани в криовиолы с раствором 1,5 моль/л пропандиола и с 0,1 моль/л сахарозы, затем осуществляют криоконсервацию, а после размораживания ткань помещают в среду Sperm Preparation Medium (Medicult) при комнатной температуре, в которой она находится до трансплантации, но не более 20 минут.

При этом через день после криоконсервации выполняют размораживание контрольной криовиолы по протоколу и гистологическую оценку состояния фолликулов и стромы до и после криоконсервации.

В процессе проведения исследований были выбраны среды для стабилизации ткани после резекции, растворы криопротекторов, подобраны протоколы замораживания и размораживания, была установлена важность следующих стадий способа:

непосредственно после резекции фрагмент или целый яичник обрабатывают Flushing-средой с гепарином (Medicult) при комнатной температуре;

затем ткань помещают в Sperm Preparation Medium (Medicult);

отделяют кортикальный слой от медуллярной части непосредственно перед транспортировкой в операционной;

затем ткань яичника в Sperm Preparation Medium (Medicult) помещается в лед;

после чего кортикальный слой нарезают на фрагменты размером 5×10 мм и толщиной 1 мм на холодном столе при температуре +4°С;

перед проведением программного замораживания ткань яичника повергают одноэтапной дегидратации в течение 95 минут при температуре +4°С путем помещения фрагментов ткани размером 5×10 мм в криовиолы с раствором 1,5 моль/л пропандиола и с 0,1 моль/л сахарозы;

после размораживания ткань помещают в среду Sperm Preparation Medium (Medicult) при комнатной температуре, в которой она находится до трансплантации, но не более 20 минут.

Использование Flushing-среды с гепарином (Medicult), имеющей в своем составе пируват и бикарбонат натрия, позволяет минимизировать апоптотические процессы в ткани вследствие резекции и, кроме того, способствует быстрому отмыванию ткани от крови.

Помещение ткани в Sperm Preparation Medium (Medicult), обогащенную глюкозой и сывороточным альбумином человека, значительно лучше стабилизирует ткань в отсутствие кровоснабжения. Неотъемлемой частью успешного сохранения ткани яичника является определение времени эквилибрации и концентрация криопротекторов в растворе, что составляет 95 минут в растворе 1,5 моль/л пропандиола и с 0,1 моль/л сахарозы.

По данным, полученным в процессе исследований, наилучшие результаты получены с использованием одноэтапной дегидротации в растворе пропандиола с сахарозой в течение 95 минут - это время, необходимое для полного пропитывания ткани криопротектором, поскольку именно введение этих стадий в совокупности с известными ранее позволяет обеспечить не только сохранение архитектоники ткани, но и увеличить число фолликулов, способных полноценно функционировать после трансплантации у пациенток, прошедших лечение по поводу злокачественных новообразований.

Возможность объективного проявления технического результата при использовании изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, содержащих сведения экспериментального характера, полученные в процессе проведения исследований по методикам, принятым в данной области.

Сущность изобретения поясняется таблицами и фигурами.

В Таблице 1 приведен краткий анализ примеров клинического применения размороженной ткани яичника у пациенток.

В Таблице 2 представлены показатели, характеризующие гистологическую оценку качества фолликулов.

В Таблице 3 представлены показатели, характеризующие гистологическую оценку состояния стромы.

На Фиг.1 показана диаграмма сравнения доли неповрежденных фолликулов в контроле и после размораживания.

На Фиг.2 показана диаграмма сравнения доли неповрежденных клеточных структур стромы в контроле и после размораживания.

На Фиг.3 иллюстративно показана методика оценку структуры фолликулов в овариальной ткани.

На Фиг.4 иллюстративно показана методика оценку структуры стромы овариальной ткани.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

- примером осуществления способа подготовки ткани яичника к трансплантации (пример 1);

- примером, демонстрирующим сохранение архитектоники ткани яичника, выживаемости фолликулов, а также увеличение числа фолликулов, способных полноценно функционировать, и клеточных компонентов стромы, после трансплантации, вследствие чего происходит восстановление гормонального фона для реализации репродуктивной функции пациенток со злокачественными заболеваниями (пример 2).

Пример 1. Способ подготовки ткани яичника к трансплантации

1. Техника забора ткани яичника

Непосредственно после овариоэктомии фрагмент или целый яичник обрабатывается Flushing-средой с гепарином (Medicult) при комнатной температуре.

Затем ткань помещают в Sperm Preparation Medium (Medicult).

Отделяют кортикальный слой от медуллярной части непосредственно перед транспортировкой в операционной.

После этого в стерильных пробирках ткань в Sperm Preparation Medium (Medicult) помещают в лед и транспортируют в лабораторию для проведения криоконсервации.

2. Криоконсервация ткани яичника

Кортикальный слой нарезают на фрагменты 10х5 мм и толщиной 1 мм на холодном столе при +4°С.

Фрагменты ткани помещают в криовиолы с раствором 1,5 моль/л пропандиола и с 0,1 моль/л сахарозы на 95 минут при +4°С.

Помещают криовиолы с тканью в программный замораживатель Planer Cryo 360-1.7 с начальной температурой +4°С.

Осуществляют замораживание путем пошагового охлаждения 2°С/мин до - 9°С.

Выполняют инициацию кристаллизации при -9°С.

Выполняют пошаговое охлаждение 0,3°С/ мин до - 40°С, затем 10°С/мин до - 140°С и последующее погружение в криобанк с жидким азотом (-196°С) для хранения до момента размораживания.

3. Контрольное размораживание ткани яичника

На следующий день после криоконсервации выполняют размораживание контрольной криовиолы, содержащей 1 фрагмент ткани.

Размораживание выполняется по следующему протоколу.

Криовиолу с тканью извлекают из криохранилища и выдерживают 30 секунд на воздухе, после чего быстро погружают в емкость с теплой водой (+37°С) и на водяной бане ткань размораживают в течение 3 минут.

Затем ткань проводят по средам коммерческого набора для размораживания (Medicult).

После проводки ткань фиксируют в жидкости Буэна.

Данный фрагмент ткани отправляется на гистологическое исследование.

Гистологическую оценку выполняют на основании разработанной методики, в соответствии с которой гистологическое заключение должно обязательно содержать информацию об отсутствии атипичных клеток, о качестве сохранения строения фолликулов и стромы.

4. Размораживание ткани яичника

Для трансплантации необходимо от 5 до 10 фрагментов ткани в зависимости от места трансплантации.

Из криохранилища извлекают 2-3 криовиолы с тканью и выдерживают 30 секунд на воздухе. Затем быстро погружают в емкость с теплой водой (+37°С), на водяной бане ткань размораживают в течение 3 минут. После чего ткань проводят по средам коммерческого набора для размораживания (Medicutt) при комнатной температуре. Ткань помещают в Sperm Preparation Medium при комнатной температуре, где она и находится до момента трансплантации, но не более 20 минут.

Пример 2. Восстановление эндокринной функции яичников у онкологическогих пациенток

Способ сохранения, криоконсервации и подготовки ткани яичника к трансплантации был проведен в соответствии с Примером 1 в клинике АВА-ПЕТЕР (г.Санкт-Петербург) совместно с Городским онкологическим диспансером г.Санкт-Петербурга на 5 пациентках с новообразованиями органов репродуктивной системы. Краткий анализ примеров клинического применения размороженной ткани яичника у пациенток (клинический диагноз, возраст, проводимое лечение, место трансплантации) представлен в Таблице 1.

Таблица 1№Нозоологическая форма заболеванияВозрастПроводимая терапияМесто имплантацииСроки инициации фолликулогенеза, от момента аутотрансплантации1.Рак шейки матки31Хирургическое лечение, химиотерапия, Сочетанная лучевая терапия (СЛТ)Верхняя треть предплечья11 недель2.Рак шейки матки30Хирургическое лечение, СЛТПередняя брюшная стенка10 недель3.Рак шейки матки45Хирургическое лечение, химиотерапия, Сочетанная лучевая терапия (СЛТ)Верхняя треть предплечьяБолее 11 недель, наблюдение продолжено4.Рак шейки матки31Хирургическое лечениеПередняя брюшная стенка16 недель5.Рак тела матки30Хирургическое лечение, химиотерапия, лучевая терапияВерхняя треть предплечьяБолее 16 недель, стимуляция овуляции

Через 10 недель в случаях 1, 2, 3 на УЗ-исследовании обнаруживались растущие фолликулы в местах трансплантации. Через 12 недель отмечено стойкое увеличение концентрации 17β-эстрадиола в крови пациенток в случаях 1, 2, 3. В случаях 4, 5 инициация фолликулогенеза отмечена на несколько недель позже, но также сопровождалась увеличением концентрации ингибина В и 17β-эстрадиола. Представленные данные свидетельствуют о восстановлении эндокринной функции яичников пациенток после криоконсервации и трансплантации.

Гистологическое исследование ткани яичника с целью оценки жизнеспособности фолликулов было выполнено, как описано в Таблице 2 и Таблице 3. Эндокринная функция яичников подтверждается анализом крови на гормоны (17β-эстрадиол, ингибин В), вырабатываемые тканью яичника. Перед трансплантацией концентрация 17β-эстрадиола ингибина В не определялись в крови. После трансплантации через 10 недель отмечалось стойкое увеличение концентрации ингибина В, свидетельствующее о инициации фолликулогенеза. В Таблице 1 представлен краткий анализ примеров клинического применения размороженной ткани яичника у пациенток.

В Таблице 2 представлена гистологическая оценка качества фолликулов во фрагментах ткани яичника.

Таблица 2ОценкаОписание1Неповрежденное ядро, неповрежденная цитоплазма, нет полости между гранулезными клетками и базальной мембраной фолликула, нет пикноза в гранулезных клетках (норма).2Неповрежденное ядро, неповрежденная цитоплазма, небольшое пространство между гранулезными клетками и базальной мембраной фолликула (до 30% поверхности ооцита), и/или до 10% вакуолизации клеток гранулезы, нет пикноза в гранулезных клетках.3Конденсированное или пикнотическое ядро, коллапсированная цитоплазма ооцита, эозинофилия ооплазмы, наличие полости или полостей между гранулезными клетками и базальной мембраной фолликула, выраженный пикноз в гранулезных клетках.

В Таблице 3 представлена гистологическая оценка клеточных компонентов стромы ткани яичника.

Таблица 3ОценкаОписание1Многоклеточная строма, отсутствие пикнотических ядер в клетках, отсутствие полостей между клетками, без вакуолизации (норма).2Наличие немногочисленных пикнотических клеток, слабая вакуолизация, наличие коллапсированных клеток.3Большое количество пикнотических клеток, выраженная вакуслизация и/или наличие полостей между клетками, наличие коллапсированных клеток.

Гистологический метод оценки позволяет оценить нарушения в ткани, возникшие вследствие криоконсервации.

На Фиг.1 показана диаграмма сравнения доли неповрежденных фолликулов в контроле до и после размораживания с полностью сохраненной структурой, со слабо выраженными повреждениями и с выраженными повреждениями строения фолликулов как в контроле, так и после размораживания. Как видно из диаграммы сравнения, представленной на Фиг.1, достоверная разница в количестве сохраненных фолликулов после размораживания составила 24% по сравнению с контролем.

На Фиг.2 показаны результаты доли клеточных компонентов стромы с полностью сохраненной структурой, со слабо выраженными повреждениями и с выраженными повреждениями строения стромы в контроле и после размораживания. При этом, как это видно из диаграммы, представленной на Фиг.2, наблюдалась достоверная разница в 15% между контролем и после размораживания ткани. Анализ клинического применения размороженной ткани яичника, проведенной на 5 пациентках, позволяет сделать выводы о том, что ткань яичника после овариоэктомии и криотрансплантации, а также ее размораживания и трансплантации, восстанавливает эндокринную функцию.

На Фиг.3 иллюстративно показана методика оценки структуры фолликулов в овариальной ткани. А - примордиальный фолликул с полностью сохраненной гистологической структурой (оценка 1). Окраска гематоксилин-эозин. ×1000; Б - примордиальный фолликул с наличием полостей (показано стрелками) (оценка 2). Окраска гематоксилин-эозин×1000; В - Примордиальный фолликул с конденсированным ядром (1), коллапсиоранной и эозинофильной цитоплазмой ооцита (2), с наличием полостей между гранулезными клетками и базальной мембраной фолликула (3) (оценка 3). Окраска гематоксилин-эозин×600. Как наглядно видно из гистологических фотографий, представленных на Фиг.3, условия криоконсервации и метод оценки являются важными критериями клинического успеха.

На Фиг.4 иллюстративно показана методика оценки структуры стромы овариальной ткани. А - многоклеточная строма с сохраненной гистологической структурой (оценка 1). Окраска гематоксилин-эозин×1000; Б - строма со слабо выраженной вакуолизацией (1), с наличием единичных пикнотических клеток (2) (оценка 2). Окраска гематоксилин-эозин×1000; В - Строма с выраженной вакуолизацией клеток (3), с наличием коллапсированных клеток (Оценка 3). Окраска гематоксилин-эозин. ×1000. Состояние клеточных компонентов стромы, как наглядно видно из гистологических фотографий, представленных на Фиг.4, неотъемлемо связано с выживаемостью фолликулов. Начальные этапы фолликулогенеза зависят от паракринной регуляции между стремой и фолликулом.

Приведенные данные демонстрируют сохранение архитектоники ткани яичника, выживаемость фолликулов, а также увеличение числа фолликулов, способных полноценно функционировать, и клеточных компонентов стромы, после трансплантации, вследствие чего и происходит восстановление гормонального фона для реализации репродуктивной функции пациенток со злокачественными заболеваниями.

Таким образом, предложенный способ сохраняет ткань яичника на многие годы, что является важным для реабилитации пациенток со злокачественными новообразованиями, что подтверждается анализами крови на 17β-эстрадиол и ингибин, а также УЗ-исследованием.

Изобретение относится к криобиологии и медицине. Предлагается способ подготовки ткани яичника к трансплантации у пациенток со злокачественными новообразованиями органов репродуктивной системы. Способ предполагает забор ткани яичника, обработку ткани средами, отделение кортикального слоя от медуллярной части, криоконсервацию замораживанием ткани в криовиолах от +4°С с пошаговым охлаждением до -9°С, инициацию кристаллизации при -9°С и выполнение пошагового охлаждения 0,3°С/мин до температуры -40°С и 10°С/мин до температуры -140°С, погружение в криобанк с жидким азотом с температурой -196°С и хранение с последующим размораживанием ткани для трансплантации. Сущность способа заключается в том, что для обработки ткани используют Ftushing-среду с гепарином (Medicult) и затем среду Sperm Preparation Medium (Medicult). Транспортировку во льду осуществляют в среде Sperm Preparation Medium (Medicult). Далее кортикальный слой нарезают на фрагменты на холодном столе и подвергают дегидратации в течение 95 мин при температуре +4°С путем помещения фрагментов ткани в криовиолы с раствором 1,5 моль/л пропандиола и с 0,1 моль/л сахарозы, после чего осуществляют криоконсервацию. После размораживания ткань помещают в среду Sperm Preparation Medium (Medicutt) при комнатной температуре, в которой она находится до трансплантации, но не более 20 минут. Предлагаемый способ обеспечивает сохранение архитектоники ткани яичника, выживаемость фолликулов и клеточных компонентов стромы с последующим восстановлением эндокринной функции яичника после трансплантации. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 ил.

1. Способ подготовки ткани яичника к трансплантации у пациенток со злокачественными новообразованиями органов репродуктивной системы, включающий этап транспортировки ткани во льду, характеризующийся тем, что осуществляют забор ткани яичника, обработку ткани средами, отделение кортикального слоя от медуллярной части, криоконсервацию путем замораживания ткани в криовиолах со стартовой температурой +4°С и пошаговым охлаждением 2°С/мин до -9°С, инициацию кристаллизации при -9°С и выполнение пошагового охлаждения 0,3°С/мин до температуры -40°С, 10°С/мин до температуры -140°С, последующее погружение в криобанк с жидким азотом с температурой -196°С и хранение с последующим размораживанием ткани для трансплантации, отличающийся тем, что после забора ткани, ее обрабатывают вначале Flushing-средой с гепарином (Medicult) при комнатной температуре, затем средой Sperm Preparation Medium (Medicult), после чего отделяют кортикальный слой от медуллярной части, и ткань, находящуюся в стерильных пробирках в среде Sperm Preparation Medium (Medicult) помещают в лед для транспортировки, после чего кортикальный слой нарезают на фрагменты размером 5×10 мм и толщиной 1 мм на холодном столе при температуре +4°С и подвергают дегидратации в течение 95 мин при температуре +4°С путем помещения фрагментов ткани в криовиолы с раствором 1,5 моль/л пропандиола и с 0,1 моль/л сахарозы, затем осуществляют криоконсервацию, а после размораживания ткань помещают в среду Sperm Preparation Medium (Medicult) при комнатной температуре, в которой она находится до трансплантации, но не более 20 мин.2. Способ подготовки по п.1, отличающийся тем, что через день после криоконсервации, выполняют размораживание контрольной криовиолы по протоколу и гистологическую оценку состояния фолликулов и стромы до и после криоконсервации.