СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОМИКРОБНЫМ И ПРОТИВОГРИБКОВЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2008 года по МПК A61K9/06 A61K35/10 A61P31/10 

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакологии и дерматовенерологии, может быть использовано для лечения грибковых заболеваний кожи, в том числе микозов стоп.

Микозы характеризуются хроническим течением и определенной устойчивостью к самым разнообразным методам лечения. Патогенные грибы легко адаптируются к различным неблагоприятным условиям и вырабатывают толерантность к любым средствам воздействия. Дрожжевые грибы производят интервенции, заселяя места обитания естественной для человеческого организма бактериальной флоры, ослабленной или уничтоженной в результате антибактериальной терапии. По данным ВОЗ, не менее 20% населения земного шара страдает микозами, а в отдельных регионах (в том числе в России) отмечается тенденция к росту грибковых заболеваний. Особенно высок процент заболеваемости у шахтеров, металлургов, военнослужащих (60-80%), работников сельского хозяйства (20-30%) (Антоньев А.А. Экспертиза трудоспособности при заболеваниях кожи / А.А.Антоньев.- М. - 1982. - 224 с.).

Практическая микология сегодня располагает большим ассортиментом противогрибковых средств, однако многие из них обладают побочными эффектами в виде диспепсий, гепато-, нефротоксического и тератогенного действия. Во время лечения требуется мониторинг биохимического состава крови, функционального состояния печени и почек. При местной терапии возможны аллергические реакции (Русланов Д.В. Комплексное лечение больных с микозами стоп и кистей: Дис. ... к.м.н. / Д.В.Русланов. - 1983. - 156 с.).

В последние годы в нашей стране и за рубежом разработаны эффективные противогрибковые препараты («Микосептин», «Ламизил», «Тербизил», «Фунготербин», «Амиклон» и т.д), применяемые в виде мазей, кремов, гелей. Эти препараты дорогостоящие. При осложненных формах микозов стоп (экзематизацией, пиодермией) необходимо комплексное лечение заболевания, что ведет к совместному использованию противогрибковых и противовоспалительных препаратов, применяемых в настоящее время, таких как 1% мазь «Ламизил», мазь «Цинкундан».

Известна мазь «Цинкундан», содержащая ундециновой кислоты 10%, цинковой соли ундециленовой кислоты 10%, анилида салициловой кислоты 10% и мазевую основу. Мазь оказывает при местном применении фунгистатическое и фунгицидное действие. Применяют для лечения грибковых заболеваний кожи. Обычно курс лечения длительный и продолжается около 30 и более дней. Во время лечения мазью и после его окончания необходимо дополнительно наносить (припудривать) пораженные места порошком «Дустундан» (содержащий основные компоненты мази «Цинкундан» и тальк).

Прототипом является 1% мазь «Ламизил», которую применяют наружно при грибковых поражениях кожи, вызванных дерматомицетами, при дрожжевых инфекциях кожи (кандидозы), лишае (отрубевидном или разноцветном), при использовании мази наблюдается гиперемия, зуд, ощущение жжения. Препарат быстро диффундирует через кожу и накапливается в сальных железах (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 2001.- Т.2, 363 с.).

Задачей изобретения является расширение арсенала средств из природных источников биологически активных веществ (БАВ), обладающих противогрибковой и противомикробной активностью.

Технический результат - новое лекарственное средство, обладающее противомикробным и противогрибковым действием при лечении микозов.

Указанный технический результат достигается тем, что средство, содержащее действующее вещество и мазевую основу, в качестве действующего вещества содержит гумат натрия из низинного древесно-травяного торфа месторождения «Темное» Томской области, а в качестве основы полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 1500, димексид и воду очищенную при следующем соотношении компонентов, мас.%:

гумат натрия из торфа5,0полиэтиленгликоль с молекулярной массой 40063,0полиэтиленгликоль с молекулярной массой 150025,0димексид2,0вода очищенная5,0

Предлагаемая мазь для лечения микозов содержит гумат натрия из низинного древесно-травяного торфа месторождения «Темное» Томской области, полиэтиленгликоль (ПЭГ) с молекулярной массой 400, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 1500, димексид и воду очищенную при следующем соотношении компонентов, мас.%:

гумат натрия из торфа5,0полиэтиленгликоль с молекулярной массой 40063,0полиэтиленгликоль с молекулярной массой 150025,0димексид2,0вода очищенная5,0

Средство в указанных концентрациях легко наносится на поверхность кожи и не образует плотной пленки, которая могла бы препятствовать процессам дыхания и выделению продуктов клеточного метаболизма.

Характеристика входящих компонентов:

полиэтиленгликоль (ПЭГ400) - (ФС 42-1242-79);

полиэтиленгликоль (ПЭГ-1500) - (ФС 42-811-79);

вода очищенная ГОСТ 2874-82.

Гумат натрия из торфа представляет собой сухой порошок темно-коричневого цвета, с характерным запахом, выделенный из низинного древесно-травяного торфа месторождения «Темное», расположенного в Томском районе Томской области и относящегося к Обь-Чулымской провинции (И.В.Федько и др. «Фармацевтическая оценка свойств гуминовых веществ торфов, полученных различными способами». - Минск. - 2006, с.249-251). Описаны результаты исследования группового состава торфа со степенью разложения 35% и зольностью 8,1%. Ранее в качестве противомикробного и противогрибкового средства не использовался.

Гидрофильная полиэтиленгликолиевая (ПЭГ) основа, представляющая собой композицию жидкого и твердого ПЭГ, имеющая вязкопластичную консистенцию: ПЭГ-400 представляет собой вязкую прозрачную бесцветную жидкость и ПЭГ-1500 - воски. ПЭГ является основой для лечения инфицированных ран. В эту основу можно вводить любые антимикробные и другие вещества, обеспечивающие комплексное воздействие на гнойную рану. По сравнению с углеводородными основами, обычно применяемыми в медицинской практике, мази на ПЭГ основах значительно лучше отдают действующие вещества (ГФ СССР. - 11-е изд. - М.: Медицина, 1987. - Вып.1, 2 - С.334; С.400).

Димексид представляет собой жидкое вещество, обладающее неспецифическим противовоспалительным действием при местном применении. Препарат обладает способностью проникать через биологические мембраны, в том числе через кожные барьеры и слизистые оболочки без их повреждения. Применяют для лечения ушибов, растяжения связок, воспалительных отеков, ожогов, флегмон, гнойных ран, которые не очищаются или плохо очищаются обычными методами лечения (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 2000. - T.1, 175 с.)

Предлагаемую мазь для лечения микозов получают следующим образом: Подготовка основы (сплавление и смешение ПЭГ-1500 и ПЭГ-400). Для этого в емкости 1 на водяной бане расплавляют при температуре 70-80°С полиэтиленгликоль (ПЭГ-1500) и при его полном переходе в жидкое состояние смешивают с полиэтиленгликолем (ПЭГ-400). Подготовка лекарственных веществ (растворение гумата натрия в воде очищенной). В емкость 2 (фарфоровую ступку) помещают гумат натрия и порциями добавляют предварительно нагретую до 20°С воду очищенную, при тщательном перемешивании до полного растворения гумата натрия. Введение лекарственных веществ в основу и гомогенизация полученного продукта. Концентрированный водный раствор гумата натрия вводят в расплавленную основу и гомогенизируют в течение трех минут.

I. Противомикробное действие гумата натрия (ГН) из торфа месторождения «Темное»Томской области.

1. Для исследования антимикробной активности in vitro готовили тиогликолиевую среду, содержащую гумат натрия в разведениях 1:1, 1:10, 1:20, 1:40, куда сеяли исследуемые культуры (Proteus mirabilis N132, Citrobacter diversus N244, Klebsiella pneumoniae N251), депонированные в ГНИИСК им. Л.Ю.Тарасевича, а также плазмокоагулазный штамм Staphylococcus aureus и вирулентный штамм Pseudomonas aeruginosa. Чашки Петри ставили в термостат при t=37°С и через каждые 24 часа, в течение 7 дней, учитывали результат по наличию роста этих культур на средах (табл.1)

Из таблицы 1 видно, что ГН в разведении 1:1 обладает антимикробной активностью ко всем перечисленным выше микроорганизмам; а в разведении 1:10 - к Proteus mirabilis, Citrobacter diversus, Klebsiella pneumoniae, Staphyloccocus aureus. В разведении 1:20 противомикробное действие проявилось к Citrobacter diversus, Klebsiella pneumoniae. В разведении 1:40 - антимикробная активность не обнаружена.

Таким образом, ГН обладает определенной антимикробной активностью, что также подтверждено в опытах, проведенных на крысах с экспериментальными инфицированными ранами.

2. Во второй серии опытов изучали скорость заживления экспериментальных инфицированных ран. В опыте использовали 50 белых крыс (5 групп по 10 крыс). На предварительно выстриженных участках кожи спины наносили свежие резаные раны размером 1,0×1,0 см. Далее на раны наносили 1 мл 18-часовые бульонные культуры, выращенные на среде Хоттингера (рН 7,2-7,4) с оптической плотностью 100 млн. - 1 млрд. КОЕ. Через 4 дня нагноившиеся раны опытных групп животных обрабатывали 5% мазью ГН (I группа) и синтомициновой эмульсией (II группа). Через 1; 3 и 7 суток на фоне лечения стерильными тампонами брали содержимое раны и сеяли на универсальные и дифференциально-диагностические среды, выделяли чистую культуру и проводили их идентификацию (табл.2).

Установлено, что предлагаемая 5% мазь ГН подобно синтомициновой эмульсии оказывает антимикробное действие по отношению к Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter diversus, Staphylococcus aureus. Раневые поверхности очищались быстрее от гноя по сравнению с контрольными животными и заживление ран ускорялось в опытных группах по сравнению с интактными контрольными крысами (Р<0,01-0,05).

II. Противогрибковые свойства исследовали in vitro методом двукратных серийных разведений их в жидкой питательной среде Сабуро.

В качестве тест-культур использовали основных возбудителей наиболее часто встречающихся грибковых заболеваний: Aspergillus niger 163/3685, Candida albicans - 4337, Trychophyton rubrum - ВКПГ-248/700, Trichophyton mentagrophytes var interdigitale - ВКПГ-268, Microsporum canis -ВКПГ-326/316.

Контролем проводимых исследований служили - пробирки с питательной средой, а также пробирки с питательной средой и 0,01 мл растворителя, засеянные по 0,2 мл культуры патогенных грибов.

Посевы, как опытные, так и контрольные, инкубировали в термостате при t=37°С. Визуальный учет культур проводили для A.niger. и С.albicans через 48 часов, для Tr. rubrum., Tr. mentagrophites и M.canis через 6-7 суток.

За критерий антигрибковой активности данного вещества принимали фунгистатический титр, который оценивали в весовых единицах (микрограммах в одном мл питательной среды). Полученные данные представлены в таблице 3.

Анализ представленных данных показывает, что исследуемый гумат натрия задерживал рост Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes и Microsporum cams на уровне таких известных препаратов, как нистатин и нитрофунгин.

Таким образом, предлагаемая 5% мазь с гуматом натрия оказывает лечебное действие при микозах, что, видимо, объясняется ее противовоспалительными, противомикробным эффектами.

Средство, обладающее противомикробным и противогрибковым действием

Таблица 1Антимикробная активность in vitro гумата натрия (КОЕ/мл)Разведение ГН МикроорганизмProteus mirabilisCitrobacter diversusKlebsiella pneumoniaeStaphylococ cus aureusPseudomonas aeruginosa1:1000001:100000151:20530031более 1001:40более 1005446более 100более 100

Таблица 2Антимикробная активность in vivo (КОЕ/мл) n=10 (раны, инфицированные микрофлорой внутрибольничной гнойной инфекцией)ГруппаProteus mirabilisPseudomonas aeruginosaKIebsiella pneumoniaCitrobacter diversusStaphylococcus aureusДни полного заживления1-е сутки3-й сутки7-е сутки1-е сутки3-й сутки7-е сутки1-е сутки3-й сутки7-е сутки1-е сутки3-й сутки7-е сутки1-е сутки3-й сутки7-е суткиМазь ГН 5%77±0,4^+*37±0,7^+*16±0,6^+*80±0,6^+*59±0,3^+*29±1,2^+*58±2,0^+*40±1,2^+*10±0,2^+*56±2,0^+*38±1,6^+*3±2,0^+*81±1,1^+*56±0,6^+*45±2,0^+*15,5±1,0^+*Синтомициновая эмульсия92±1,0^+*56±0,4^+*12±0,9^+*92±2,051±1,2^+*20±1,5^+*87±0,7^+*51±1,4^+*7±1,1^+*59±1,2"44±0,4^+*4,1±0,3 ^+*91,4±2,0^+*58,1±1,2^+*30,1±1,7^+*16,6±1,5^+*Контроль (ПЭГ)97±0,686±1,655±0,397±2,085±0,966±1,995±0,686±3,159±1,089±0,787±1,066±0,597±2,091±1,485±1,819,1±1,7Контроль (интактные)98±0,792±1,280±0,396±2,092±3,167±2,798±0,686±1,155±1,288±1,372±0,460±0,297±0,288±0,288±2,022±1,5Примечание: знаком "+" обозначены статистически достоверные результаты по сравнению с контрольной группой животных."*" - по сравнению с интактной группой

Таблица 3Антигрибковые свойства суммарных комплексов, выделенных из низинного древесно-травяного торфаИсследуемые комплексыТест-грибыTriohophyton rubrumTriohophyton mentagrophytesMicrosporum canisAspergillus nigerCandida albicaГумат натрия1/15,615,6-31,21/15,6-31,21/10001/1000Нистатин1/15,6-31,21/15,6-31,21/7,8-15,61/2501/250Нитрофунгин1/15,6-31,21/15,61/15,6н/ан/аПримечание: н/а - при концентрации вещества 2000 мкг/мл ингибирующего действия не наблюдалось.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к дерматовенерологическим средствам. Средство содержит гумат натрия из древесно-травяного торфа месторождения «Темное» Томской области, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 1500, димексид и воду очищенную при определенном соотношении компонентов. Применение средства расширяет область использования препаратов из торфа и арсенал противомикробных и противогрибковых средств на уровне известных препаратов, таких как нистатин и нитрофунгин. 3 табл.

Средство, обладающее противомикробным и противогрибковым действием, содержащее действующее вещество и мазевую основу, отличающееся тем, что в качестве действующего вещества оно содержит гумат натрия из низинного древесно-травяного торфа месторождения «Темное» Томской области, а в качестве основы полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 1500, димексид и воду, очищенную при следующем соотношении компонентов, мас.%:

гумат натрия из низинного древесно-травяного торфа месторождения «Темное» Томской области5,0полиэтиленгликоль с молекулярной массой 40063,0полиэтиленгликоль с молекулярной массой 150025,0димексид2,0вода очищенная5,0.