СРЕДСТВО ГУМИНОВОЙ ПРИРОДЫ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ФИЗИЧЕСКОЙ РАБОТОСПОСОБНОСТИ И ВЫНОСЛИВОСТИ Российский патент 2020 года по МПК A61K35/10 A61K36/00 

Изобретение относится к экспериментальной и клинической фармакологии и касается средств для повышения физической работоспособности и выносливости в эксперименте.

В современном мире здоровье - это один из главных факторов счастливого будущего человека во всех сферах общественных начинаний. В последнее десятилетие проблема адаптации человека к внешней среде приобрела существенное теоретическое и практическое значение в связи с нарастающим экологическим, социальным стрессом. Физическая нагрузка является одним из факторов, который снижает работоспособность. Однако, сама физическая работоспособность - это комплексное понятие, которое можно определить, как интегральную психофизическую характеристику организма, отражающую свойства скелетных мышц, вегетативное, субстратное и энергетическое обеспечение, нервную и гуморальную регуляции, а также нервно-психические свойства и мотивацию индивидуума, количественно выражающиеся в величине объема и (или) интенсивности (мощности, скорости) произведенной механической работы (24). Обеспечение мышечной деятельности и поддержание или восстановление гомеостаза организма являются главными задачами в процессе адаптации к физическим нагрузкам. Эти задачи решаются путем мобилизации функциональной системы, ответственной за выполнение мышечной работы, а также реализации неспецифической стресс-реакции организма. При этом указанные процессы возникают в ответ на нагрузку в любом живом организме. Однако их течение отличается в нетренированном организме (т.е. на этапе срочной адаптации к нагрузке) от такового в тренированном (т.е. на этапе долговременной адаптации) (11).

Организм человека постоянно отвечает на действия многочисленных факторов среды, и в нем происходит перестройка всех функциональных систем (26). Основной задачей такой перестройки является поиск оптимального режима работы. Приспосабливаясь к неблагоприятным условиям окружающей среды, организм человека испытывает состояние напряжения и утомления, что в дальнейшем может привести к развитию стресса. Не зря многие исследователи считают предшественником адаптации синдром стресса, который мобилизует все ресурсы организма, уничтожает информацию старого структурного «следа» и образует новый «след» (11; 33; 1).

Переход стресса из звена адаптации в звено повреждения осуществляется, главным образом, за счет чрезмерного увеличения адаптивных эффектов стресса. Известно, что большая мобилизация структурных и энергетических ресурсов организма при отсутствии доминирующей функциональной системы, в которой эти ресурсы можно использовать, приводит к их утрате и истощению, типичному для затянувшейся стресс-реакции (33; 14). Стресс могут вызывать разнообразные эмоциональные, производственные, социальные факторы или напряженные отношения (опасность, аварийные и чрезвычайные ситуации, конфликтные ситуации и др.) (22). Вместе с тем факторами стресса являются химические агенты (фармакологические вещества, промышленные токсиканты) и пищевые нарушения (дефицит микро- и макроэлементов, гипо- и гипервитаминозы, белковое голодание) (25).

Известно, что тяжелая физическая нагрузка, не соответствующая физическим возможностям организма, отрицательно влияет на иммунитет (7). Установлено, что экспериментальный плавательный стресс, снижает общее количество лейкоцитов. Эмоциональный стресс снижает количество Т-лимфоцитов (лимфоцитопения, нейтрофильный лейкоцитоз) (2). В условиях эмоционально-болевого стресса возрастает активность каталазы, отвечающей за разложение пероксида водорода, образующегося в ходе развития стресс-реакции (10). Температурное воздействие, радиоактивное излучение, бессонница, инфекции и ряд других факторов также оказывают стрессирующее воздействие на организм (4; 20).

Одним из таких повреждающих факторов, вызывающих снижение работоспособности, и является чрезмерная физическая нагрузка. Проблема адаптации к физическим нагрузкам, или тренированности, с давних пор привлекала внимание исследователей и в настоящие время остается не менее актуальной проблемой биологии, физиологии, патофизиологии, спортивной медицины, фармакологии.

Для повышения и коррекции адаптивных возможностей организма человека в сложных условиях труда, экологических ситуациях, при повышенных физических нагрузках, используют различные препараты и композиции (фармакологические, препараты, обладающие адаптогенными свойствами на основе пчелиного маточного молочка, прополиса, пантов, растительные экстракты и др.).

Известным фармакологическим препаратом, который повышает работоспособность и обладает адаптогенным эффектом, является эталонный препарат актопротекторов этилтиобензимидазол гидробромид (метапротом, бемитил) (13).

Известны несколько композиций для повышения работоспособности спортсменов. Однако недостатками указанных сборов являются то, что набор средств для изготовления является довольно материально затратным, обширен и ведет к усложнению производства. Примером таких композиций является сбор, который содержит прополис, экстракт корней и корневищ солодки, экстракт корней элеутерококка, экстракт корня женьшеня, экстракт кожуры апельсина, нативное маточное молочко, L-карнитин, витамин В5, витамин В12, инозитол, магния глюконат, цинка глюконат, таурин фруктозу, калия сорбат, натрия бензоат, ацетилсульфат калия, натрия цикломат, натрия сахарин, ароматизатор и воду в определенном соотношении компонентов в мас. % (18).

Другая известная композиция, повышающая работоспособность и обладающая адаптогенным, ранозаживляющим, противовоспалительным действием, содержащая пчелиное маточное молочко, прополис, дополнительно содержит сироп фруктозы и глюкозы, взятые в равных соотношениях, экстракт цветочной пыльцы, токоферола ацетат (витамин Е), консервант, подсластитель, воду при определенном соотношении в мас. % (17). Недостатками композиции является повышенная чувствительность к препаратам на основе цветочной пыльцы.

Известно средство для повышения работоспособности у спортсменов, включающее экстракт элеутерококка, экстракт солодкового корня сухой, экстракт шиповника сухой, эстифан, силимар, настойку прополиса и мед, а в качестве экстракта элеутерококка экстракт элеутерококка сухой при определенных соотношениях компонентов в мас. % (17) Недостатком средства являются невысокая эффективность и неудобная для использования форма.

Природные биоминералы и геополимеры, такие как естественные продукты гумификации (торф, сапропель, мумие, леонардит), в последнее время стали привлекательными как пищевые добавки и исходные материалы для разработки лекарственных средств на их основе, в частности, наибольший интерес представляет их доминирующая группа - гуминовые вещества (8). Наибольшее содержание гуминовых веществ отмечено для таких природных образований как торф, сапропель и мумие, которые вот уже более 3000 лет используются в народной медицине и ветеринарии (28; 29; 5;8) в качестве биогенных стимуляторов, адаптогенов и стресс-протекторов, противовоспалительных и противоопухолевых средств, антиоксидантов и антигипоксантов, гепатопротекторов, иммуномодуляторов и кардиопротекторов, энтеросорбентов и детоксикантов, противомикробных, противовирусных, ранозаживляющих средств.

Гуминовые вещества - это темноокрашенные органические соединения, полифункциональные полиамфолиты, образующиеся в процессе окислительной деструкции растительных остатков под действием микробиоты и/или кислорода воздуха (21). Гуминовые вещества являются необходимой составной частью всех обменных процессов в природе и самой термодинамически устойчивой формой сохранения органических веществ в биосфере (21). Биосинтез гуминовых веществ является уникальным континуальным биосферным динамическим процессом, в котором задействуется от 0,6 до 2,5*10⁹ т углерода в год (31), при этом в данный процесс вовлечен весь растительный покров от необитаемых арктических пустынь и засушливых степей до фауны глубочайших океанических впадин и небольших искусственно созданных водоемов (31;21). Данный процесс называется гумификацией, итогом которого является образование уникального класса органических веществ - гуминовые вещества, которые обеспечивают существование современных жизненных форм и кодирование в своем составе условий периода своего образования. Гумификация регулирует баланс между минерализацией и консервацией органических остатков.

Гуминовые вещества являются космополитами, они входят в состав различных каустобиолитов (торфа, морских и озерных отложений, угля, сланцев, почвы и др.) и являются их базовыми компонентами. По строению и содержанию элементов, гуминовые вещества стохастичны и не имеют определенной химической структуры, при этом представляют собой уникальную стабилизированную форму органического вещества, не контролируемого условиями биологического кода, и согласуемого только с законами термодинамики (21). Гуминовые вещества можно рассматривать как биополимерные макромолекулы, а можно - как коллоидные мицеллы, супрамолекулы, состоящие из относительно небольших молекул. Такая неоднозначность в строении гуминовых веществ обусловлена их различным химическим поведением в зависимости от условий среды. При этом, непосредственно сами гуминовые вещества обладают эмерджентными свойствами. Гуминовые вещества характеризуются наличием большого количества различных функциональных групп и стабильных радикалов в их молекулах, что и обеспечивает способность их образовывать разнообразные внутри- и межмолекулярные связи, определяющие их редокс-свойства, хелатообразующие и протолитические свойства, участие в лигандообменных и гетерогенных процессах. Все эти свойства являются главными в проявлении биологической активности и обусловливают уникальные химические и фармакологические свойства гуминовых веществ.

В последние годы и в экспериментальной медицине наблюдается повышение интереса к использованию гуминовых веществ в качестве адаптагенов.

Гуминовые вещества - это последнее поколение самых современных адаптогенов стресс-корректоров (34), протективное действие (предотвращение гипертрофии надпочечников, антиульцерогенное) которых носит сберегающий регуляторно-энерго-пластический характер, а потенцирующая активность (в первую очередь мобилизация клеточного звена иммунитета) способствует повышению защитных сил организма. Механизм реализации иммуно-антиоксидантной гипотезы адаптогенного действия гуминовых веществ заключается в следующем (34): на месте введения гуминовые вещества вызывают активный прилив крови и выход фагоцитов из сосудов в межклеточную жидкость (где и сосредоточены полимерные молекулы гуминовых веществ), затем процесс начинает идти по типу цепной реакции, т.е. низкомолекулярные олигофенольные производные постепенно всасываются в кровь, попадают в печень и другие ткани, где действуют как естественные фенольные антиоксиданты и детоксиканты, постоянно попадающие в организм с растительной пищей. Полифенольные производные, не попадающие в организм через ЖКТ, на месте применения активно фагоцитируются. Здесь процесс снова раздваивается: часть фагоцитов, поглотивших фенольные полимеры, возвращаются в кровь и, при наличии патологического очага, накапливаются в нем, а другая часть разносится по всему организму. В фагоцитах гуминовые вещества поглощаются лизосомами и подвергаются лизису. Содержимое лизосом экструзируется в цитоплазму, затем в кровяное русло и, в конечном итоге, попадает в виде моно- и олигомеров в патологический очаг, органы и ткани. Этот процесс возобновляется и продолжается непрерывно, пока в организме остается хотя бы одна молекула гуминовых веществ. Одновременно они могут проявлять антирадикальную, антиоксидантную и прооксидантную активность. При этом низкоуровневая прооксидантная активность инициирует систему антиоксидантной защиты организма и стимулирует фагоцитарную активность. Процесс замыкается другой стороной иммуно-антиоксидантных механизмов адаптогенного стресс-корректорного действия (34). Препарат Томед (1% водный раствор гуминовых веществ из торфа) в условиях экспериментальной плацентарной недостаточности крыс стимулирует развитие адаптивных процессов в последе и плацентарном ложе, предотвращая гибель эмбрионов и задержку внутриутробного развития плода (9). Установлена активация метаболизма в последе по результатам увеличения количества ДНК, РНК и гликогена в трофобласте и амниотическом эпителии, в лабиринте и базальной части плаценты повышался удельный объем гликогеновых (9). Похожие результаты, связанные с активацией синтеза ДНК и РНК, описаны в экспериментах по регенерации печени крыс (23). Механизм такого действия ГВ (23) связан с тем, что в результате эндоцитоза клетки поглощают ГВ, подвергают их ферментативному гидролизу, и, в результате образуются аминокислоты, моносахара и нуклеотиды, которые и включаются в метаболизм. При исследовании морфологических особенностей различных органов крыс под влиянием ГВ торфа, в т.ч. и беременных самок крыс, было отмечено (23), что под влиянием гуминовых веществ в их тимусе наблюдается гипертрофия коркового вещества с увеличением корково-мозгового индекса, а также происходит увеличение удельной доли сосудистого компонента, количества дифференцированных лимфоцитов в корковом и мозговом веществе, в селезенке - увеличивается объем белой пульпы, количество дифференцированных лимфоцитов, макрофагов и плазматических клеток, отмечается усиление кровоснабжение красной пульпы (23). В тимусе плода отмечается ускорение дифференцировки лимфоцитов, в селезенке - увеличение количества клеток-предшественников эритро- и гранулоцитопоэза, бластов, усиливается митотическая активность клеток лимфоидного ряда, происходит ускорение дифференцировки сосудов (21). Структурные перестройки надпочечников самок под действием гуминовых веществ обусловлены увеличением удельной доли сосудистого компонента и функциональной активности спонгиоцитов всех зон, гиперва-скуляризация надпочечников плода сопровождается ускоренным формированием мозгового вещества (23).

В многочисленных научных исследованиях было доказано, что гуминовые вещества не опасны, не тератогенны, не мутагенны, не вызывают аллергических реакций, не обладают сенсибилизирующими и раздражающими свойствами (32; 28; 27; 30; 5) характеризуются очень низкой токсичностью, имеют высокие значения ЛД₅₀ (27;3), относятся к III (при внутрибрюшинном введении) и IV (при внутрижелудочном введении) классам опасности. При доклиническом исследовании хронической токсичности на крысах, получавших в течении месяца буроугольные гуминовые вещества, в дозе 500 мг/кг и 1 г/кг, не было выявлено токсических эффектов, в т.ч. и относительно щенков (при введении беременным самкам крыс) (27), отмечается отсутствие побочных эффектов (30) и полное выведение препарата из организма. В работе (5) говорится о безвредности и нетоксичности гуминовых веществ на основании результатов исследования острой и хронической токсичности, кумуляции, мутагенности, эмбриотропной активности, тератогенного действия, эмбриотоксичности, раздражающего и резорбтивного действия препаратов ГВ. При исследовании влияния ГВ торфа (в дозе 10 мг/кг веса) на беременных самок крыс (23) отмечено, что они не оказывают эмбриотоксического действия и не вызывают формирования внешних и внутренних пороков развития у плодов. Более того, наблюдение в динамике за крысятами первого поколения, получавшими гуминовые вещества на анте- и постнатальном этапах до периода половозрелости, выявило опережающее физическое развитие по сравнению с контрольной группой с 1-го месяца постнатального развития, а второго поколения - с 15-го дня постнатального периода (23). В работах, посвященных исследованиям препарата Tolpa Peat Preparation (гуминовые вещества торфа), не выявлены какие-либо эмбриотоксические или тератогенные эффекты (в эксперименте с хомяками и крысами, в суточной дозе от 5 до 50 мг/кг), а также мутагенные и генотоксические свойства, гуминовые вещества не вызвали и не усиливали аллергическую сенсибилизацию (в эксперименте с мышами и морскими свинками) (32).

При использовании гуминовых веществ торфа в заведомо летальных дозах (480 мг/кг) на крысах было отмечено (3), что гибель животных наступала от острой сердечной недостаточности, возникающей в результате ишемической дистрофии миокарда. Наблюдали снижение электрической стабильности сердца как результат снижения порога фибрилляции желудочков (в 1,8 раза) и укорочения (в 2,8 раза) комплекса QRS в сравнении с интактными животными.

Новой технической задачей данного изобретения является - расширение арсенала водорастворимых гуминовых кислот торфа, обладающих свойствами повышать работоспособность и физичнскую выносливость.

Для достижения нового технического результата применяют экстракт водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области, со среднечисленной молекулярной массой 4419,8 Да, среднемассовой молекулярной массой 17638,4, полидисперсностью 4,0 и медианой 8829,4 Да, в качестве средства, повышающего физическую работоспособность и выносливость.

Новое свойство водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской, было обнаружено в результате проведения экспериментальных исследований и для специалиста явным образом не вытекает из уровня техники, и описание этого свойства не обнаружено авторами в патентной и научно-медицинской литературе. Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям изобретения, а именно - «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».

Новое свойство экстракта водорастворимых гуминовых кислот - повышать физическую работоспособность и выносливость экспериментальных животных было обнаружено в процессе проведения экспериментальных исследований. Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенных фигур 1 и 2. На фиг. 1 представлен электронный спектр гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области. На фиг. 2 представлен инфракрасный (ИК) спектр гуминовых кислот из низинного древесно-травяного торфа.

Представительный средний образец торфа, максимально отражающий неоднородность химического состава всей партии анализируемого материала, отбирали буром ТБГ-1 в генетическом центре эвтрофного болота «Таган» Томской области, из середины однородного по ботаническому составу горизонта с глубины 50-100 см, в летний период (июнь-август) согласно ГОСТ 17644-83 «Торф. Методы отбора проб из залежи и обработки их для лабораторных испытаний». В скважине с указанной глубины каждую пробу (массой не менее 600 г, количество скважин - не менее 50) отбирали только один раз, средняя масса образца торфа составляла более 30 кг. Согласно общетехнологическим характеристикам, ботаническому и гравиметрическому анализу отобранный торф охарактеризован как низинный древесно-травяной торф, степень разложения растительных остатков 30-35%, содержание минеральной примеси (общей золы) - не более 6,5%, содержание биологически активных гуминовых кислот не менее 38,5 масс. %. Полученный образец торфа высушивали при комнатной температуре на воздухе в хорошо проветриваемом помещении, периодически перемешивая, до воздушно-сухого состояния (влажность 15-20%), измельчали в роторно-ножевой мельнице и просеивали через сито с диаметром отверстий 1-3 мм, обрабатывали 0,1 моль/л раствором натрий гидроксида (NaOH) в массовом соотношении 1:100 в течение 8 часов при постоянном перемешивании в реакторе Р-100 при температуре 25-27С, отделяли жидкую фазу (экстракт гуминовых кислот) от осадка (остатка торфа) фильтрованием при помощи системы вакуумной фильтрации (нутч-фильтр), далее для осаждения гуминовых кислот из экстракта жидкую фазу обрабатывали 10% раствором водород хлорида до рН 1-2, выделившиеся гуминовые кислоты разделяли центрифугированием, отмывали холодной водой очищенной на воронке Бюхнера до рН 7 и высушивали при комнатной температуре.

Полученные вышеописанным способом гуминовые кислоты из низинного древесно-травяного торфа были охарактеризованы по физико-химическим параметрам молекулярной структуры: элементному (C, H, N, О) составу, электронным и молекулярным спектральным свойствам, молекулярно-массовому распределению.

1. Элементный состав гуминовых кислот определяли методом сожжения на C, H, N - анализаторе «ЕuroА 300» (производство Италия), содержание кислорода определяли по разности. Массовые доли элементов в процентах (%mass) рассчитывали по градуировочным зависимостям, построенным с использованием Sulphanilamide Reference standard material. Атомные доли элементов (%atom), атомные отношения и отношение ароматического и алифатического углерода (Caromatic/Caliphatic) вычисляли по общепринятым методам (15).

Элементный состав гуминовых кислот низинного древесно-травяного торфа, представленный в таблице 1, показывает распределение основных конституционных элементов молекулярной структуры вещества и является диагностическим показателем для характеристики активной фармацевтической субстанции. Атомное отношение элементов углерода и водорода (Н/С=1,24) указывает на ароматический характер молекулы гуминовых кислот, т.к. содержание водорода всего на 24% выше углерода, следовательно, алифатическая часть молекулы выражена незначительно и/или является замещенной различными кислород- и азот- содержащими функциональными группами. Соотношение содержания кислорода в гуминовых кислотах относительно углерода порядка 46% свидетельствует о большом количестве кислородсодержащих функциональных групп их молекулярной структуры, в основном фенольных, карбонильных и карбоксильных групп. Содержание азота в структуре гуминовых кислот относительно количества углерода незначительно (около 5%).

2. Регистрацию электронных спектров поглощения 0,001% водных растворов гуминовых кислот проводили на спектрофотометре Unico 2800 (производство США) в диапазоне длин волн 190-800 нм в кварцевой кювете толщиной 1 см. В полученных спектрах определяли максимумы поглощения и коэффициенты экстинкции (Е 0,001% С), которые характеризуют оптическую плотность растворов гуминовых кислот при их концентрации 0,01 мг/мл для слоя 1 см при длинах волн 465 нм (А₄₆₅) и 650 нм (А₆₅₀) и вычисляли коэффициент цветности Q_4/6 по Е. Вельте (15) как отношение оптических плотностей при длинах волн 465 и 650 нм (А₄₆₅ / А₆₅₀).

Электронный спектр гуминовых кислот низинного древесно-травяного торфа представлен на фиг. 1, согласно которому в видимой области (400-800 нм) спектр не имеет четко выраженных максимумов поглощения, и выглядит как пологая кривая, характеризующая сплошное поглощение с постепенным уменьшением оптической плотности по мере увеличения длины волны. В ультрафиолетовой области спектра (200-400 нм) наблюдается резко возрастающее в коротковолновую сторону поглощение света, при этом, в области 255-275 нм отмечается плечо характерное для фенольных, карбонильных, карбоксильных групп и полиеновых цепей. Более высокая интенсивность поглощения в данной области (255-275 нм) вероятнее всего соответствует π→π*- и n→π*- переходам, характерным для ароматических альдегидов, кетонов, карбоновых кислот, их функциональных и гетерофункциональных производных, ката-конденсированных и периконденсированных ароматических систем типа «аценов», «фенов», пиренов, периленов и др.

Но, несмотря на монотонность профилей спектров, поглощение света гуминовыми кислотами в видимой и ультрафиолетовой областях имеет некоторую специфичность. К таким особенностям, помимо наклона кривой светопоглощения относительно оси абсцисс, относятся величины оптических плотностей при определенных длинах волн и рассчитанные на их основании коэффициенты экстинкции и цветности, зависящие от числа и расположения электронов в поглощающих молекулах и ионах. Согласно Д.С. Орлову (15), наиболее объективным показателем, характеризующим гуминовые кислоты как вещество в целом, является коэффициент экстинкции при А₄₆₅. Данный коэффициент представляет собой обобщенный показатель, как некий условный коэффициент поглощения, вычисленный по отношению к условной единице молекулярной массы. Еще одним важным показателем, характеризующим оптические свойства гуминовых кислот, является коэффициент цветности Q_4/6 по Е. Вельте (А₄₆₅ / А₆₅₀). Значение Q_4/6 - величины показывает крутизну падения оптической плотности при увеличении длины волны, обусловлено особенностями химического строения гуминовых кислот, и является количественной величиной ароматичности макромолекул гуминовых кислот, показывающей относительное содержание ароматических фрагментов их молекулярной структуры к алифатическим заместителям.

Согласно литературным данным (15), полученные гуминовые кислоты имеют значения коэффициентов экстинкции и цветности (Таблица 2), характерные для гуминовых кислот природных каустобиолитов, и свидетельствуют о сложном молекулярном строении, о наличии в их молекулярной структуре протяженной и разветвленной системы полисопряжения, включающей различные кратные связи (в основном С=С и С=O), а также невысокой степени конденсированности ароматических структур в их макромолекулах и высокой поляризуемости.

В Таблице 2 представлены оптические свойства гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области

3. Исследование молекулярных параметров структуры гуминовых кислот проводили методом инфракрасной (ИК) спектроскопии на ИК - Фурье - спектрометре ФСМ 1201 (ООО «Инфраспек») в таблетках с KBr (в соотношении 1:100 соответственно), в интервале значений частоты от 500 до 4000 см^-1. В полученных спектрах определяли максимумы поглощения. Относительную количественную оценку параметров структуры молекул гуминовых кислот по данным ИК-спектроскопии давали на основании отношений оптических плотностей полос поглощения (ОППП) кислородсодержащих функциональных групп (υОН₃₄₀₀ см^-1, υС=О₁₇₂₀ см^-1, υС-О, С-О-С₁₂₂₅ см^-1, υС-О₁₀₃₅ см^-1) к ОППП, соответствующим ароматическим (υC=C₁₆₁₀ см^-1) и алифатическим (υAliphatic₂₉₂₀ см^-1) фрагментам.

Инфракрасный спектр гуминовых кислот низинного древесно-травяного торфа (фиг. 2), выявил широкую интенсивную полосу поглощения с максимумом при 3500-3300 см^-1, обусловленную переменными валентными колебаниями гидроксильных групп (υ_ОН) алифатического и ароматического характера, связанных преимущественно водородными связями, наличие которых проявляется максимумом поглощения в интервале 1270-1220 и 1170-1040 см^-1. На длинноволновом крыле главной полосы при 3250-3200 см^-1 обнаруживается поглощение средней интенсивности, имеющее вид уступа (перегиба) и отвечающее колебаниям N-H (υ_NH) в структуре амида, аминов, связанных водородными связями. Полосы средней интенсивности хорошо видны при 2928-2921 см^-1 и 2855-2842 см^-1 за счет переменных валентных колебаний -СН₃ и -СН₂ групп боковых цепей в молекулах гуминовых кислот, в том числе связанных с ароматическими фрагментами, судя по наличию полосы поглощения в области 1385 см¹. Отмечается слабое поглощение при 2700-2400 см^-1, присущее димерам карбоновых кислот. Отчетливый максимум сильной интенсивности обнаруживается в интервале 1725 см^-1-1710 см^-1, свойственном для валентных колебаний карбонильных групп (υ_C=O), которые могут быть представлены кетонами, альдегидами, карбоновыми кислотами и их функциональными производными. В ИК-спектре гуминовых кислот обнаруживается сильная полоса в области 1650-1600 см^-1 обусловленная плоскостными валентными колебаниями сопряженных углерод-углеродных (ароматические, υ_С=С) и углерод-кислородных связей (карбонилы, связанные водородными связями, карбоксилат-ионы, υ_С=О) в ароматическом скелете и хинонах. Полоса поглощения около 1513 см^-1 (υ_С-C) указывает на наличие неконденсированных моноароматических структур. В данной области наблюдаются также колебания связей полипептидов в составе гуминовых кислот, связанных с атомами азота и кислорода (N-H, N-C=O): первичной (1580-1632 см^-1) и вторичной (1512-1560 см^-1) аминогрупп. Колебания в области 1264-1225 см^-1 определяются в основном валентными (υ_С-О) и деформационными колебаниями (δ_О-Н) связей недиссоциированных карбоновых кислот и их функциональных производных (в основном сложных эфиров как арильного, так и алкильного типов). За поглощение излучения в коротковолновой части спектра в области 1175-1000 см^-1 ответственны валентные колебания гидроксильных групп (υ_ОН) спиртов и углеводов. В интервале около 1075-1013 см^-1 (υ_С-О) поглощают излучение первичные спирты, при 1125-1100 см^-1 (υ_С-О) - вторичные спирты и при 1175-1150 см^-1 (υ_С-О) - третичные спирты. Поглощение в данной области (1175-1000 см^-1) может быть также обусловлено валентными колебаниями (υ_С-О-C) гликозидных связей углеводов, лактонов, С-О-С-связями циклических и алифатических простых эфиров, при этом присутствие С-O связей полисахаридов также подтверждается колебаниями в области 830-1100 см^-1. В области волновых чисел от 800 до 600 см^-1 наблюдаются слабые полосы поглощения, возможно обусловленные внеплоскостными деформационными колебаниями (δ_C-H) в ароматических кольцах, имеющих два и более незамещенных атомов водорода, и в том числе присутствием конденсированных многоядерных аренов (755-760 см^-1).

При исследовании ИК-спектров гуминовых кислот в качестве диагностических параметров обычно используют спектральные коэффициенты, характеризующие интенсивность полос поглощения. Спектральные коэффициенты являются характерным диагностическим показателем структуры гуминовых кислот. Высокая интенсивность полос поглощения говорит о большем содержании функциональных групп, т.е. чем выше интенсивность поглощения, тем больше содержание группы или фрагмента. В описании полиморфных и высокомолекулярных соединений нестехиометрического состава для количественной оценки интенсивности полос поглощения и содержания функциональных групп, помимо метода базовых линий, чаще всего используют метод отношений оптических плотностей полос поглощения (ОППП). Метод отношений ОППП позволяет получить информацию об относительных пропорциях ароматических и алифатических фрагментов молекулы, структурной организации кислородсодержащих функциональных групп, наличии белковых и углеводных компонентов.

Относительная количественная оценка содержания функциональных групп в молекулах гуминовых кислот по данным ИК-спектроскопии дана на основании отношений оптических плотностей полос поглощения (ОППП) кислородсодержащих функциональных групп к оптическим плотностям полос поглощения, соответствующим ароматическим и алифатическим фрагментам структуры, в Таблице 3 Представлены отношения оптических плотностей полос поглощения при определенных волновых числах по данным ИК-спектроскопии в гуминовых кислотах, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области.

Одними из основных кислородсодержащих функциональных групп в молекуле гуминовых кислот низинного древесно-травяного торфа являются: гидроксильные (υ_ОН 3400-3300 см^-1, υ_С-О 1150-1000 см^-1) группы, карбоксильные группы и их функциональные производные (υ_C=O 1725-1700 см^-1, υ_C-O 1260-1225 см^-1), а также простые эфирные группы (υ_С-О-С 1050-1035 см^-1). Рассматривая отношения ОППП ароматических фрагментов структуры к алифатических (А_{с=с 1610}/A_Alif2920), можно отметить, что наблюдается преобладание ароматических структур над алкильными заместителями и над кислородсодержащими функциональными группами. Также наблюдается обратная зависимость в отношениях ОППП кислородсодержащих функциональных групп к алифатическим фрагментам структуры, где в основном преобладают группы карбоновых кислот и сложных эфиров.

4. Молекулярную массу определяли методом эксклюзионной ВЭЖХ на приборе Ultimate 3000 (Thermo Scientific, США) с использованием колонки Ultrahydrogel 250, 300×7,8 мм, подвижная фаза - 0,1 М NaNO₃, 0,01% NaN₃ в воде, скорость потока 1 мл/мин. Детектирование спектрофотометрическое при длине волны 200 нм. Расчет молекулярной массы проводили по калибровочному графику log M_w=f(t_R) построенному по стандартам PSS (polystyrene sulfonate) 891-976000 Da (Polymer Standarts Service Service GmbH, Германия). Среднечисленная молекулярная масса гуминовых кислот низинного древесно- травяного торфа составила 4419,8 Да; среднемассовая молекулярная масса составила 17638,4; полидисперсность - 4,0; медиана - 8829,4 Да.

Влияние водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области, на работоспособность и выносливость крыс изучали с помощью модифицированного теста «принудительного плавания».

Существуют несколько подходов к экспериментальному моделированию физического переутомления, где объектом являются мелкие млекопитающие (мыши, крысы). Одним из таких методов является «принудительное плаванье». Для оценки влияния заявленных водорастворимых гуминовых кислот торфа на физическую работоспособность и выносливость лабораторных крыс использовали тест принудительного плавания с дополнительной нагрузкой до полного утомления в модификации (19).

Плавание проводили в специальной боксированной установке представляющею собой стеклянный аквариум прямоугольной формы размерами 100 см×100 см×20 см, разделенный на пять отсеков, соединяющихся у дна и снабженный двумя вентилями - по одному сверху и снизу одной из боковых стенок, с утяжеляющим грузом равным по весу 10% от массы тела конкретной особи при температуре воды 26°-28°С.

Животным на хвост с помощью нитки одинарным узлом фиксировали калиброванный груз соответственно индивидуальной массе тела, после чего оно помещалось в отсек по одной особи в каждый. Температура воды контролировалась каждые 10 минут и поддерживалась на уровне 26°-28°С. Животные плавали до полного утомления, в течение 5 дней подряд. Критерием полного утомления служили три безуспешные попытки всплыть на поверхность, либо отказ от таких попыток с опусканием на дно. При этом животное сачком подхватывалось и извлекалось из аквариума.

Экспериментальное исследование выполнено в осенние время года (сентябрь) на 40 половозрелых крысах-самцах породы «Wistar» массой 220-250 г, содержащихся в стандартных условиях вивария на обычном рационе со свободным доступом к воде и пище. Помещение вивария полностью изолировано от других подразделений Филиала ТНИИКиФ ФГБУ СибФНКЦ ФМБА России. Полы выполнены из водонепроницаемого материала, стены покрыты глазурованной плиткой. Все комнаты вивария отапливаются с помощью системы центрального отопления, имеют естественное и искусственное освещение, подключены к горячему и холодному водоснабжения и к канализации, оборудованы принудительной приточно-вытяжной вентиляцией, обеспечивающей необходимые кратность воздухообмена и микроклиматические условия. Круглогодично в помещении вивария поддерживается 50-65% относительная влажность и температура воздуха 20-25°С. Для снижения микробной контаминации используются облучатели-рециркуляторы бактерицидные закрытого типа. Все процедуры с животными выполнялись в соответствии с международными правилами и нормами European Communities Council Directives of 24 November 1986, 86/609/EEC.

Животные были разделены на 4 группы по 10 особей: 1 группа - крысы не подвергались никаким воздействиям (интактная группа); 2 - крысы подвергались физической нагрузке (контрольная группа №1); 3 - крысы подвергались физической нагрузке и получали 0,9% раствор натрий хлорид внутрижелудочно по 0,5 мл на 100 г массы животного за 30 мин до нагрузки (контрольная группа №2); 4 - крысы подвергались физической нагрузке и получали водорастворимые гуминовые кислоты, выделенные раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области) внутрижелудочно по 0,5 мл 5% раствора на 100 г массы животного за 30 мин до нагрузки (опытная группа). Плавательный тест проводился ежедневно в течение пяти дней подряд на всех исследуемых группах животных (кроме интактной) параллельно в одно и то же время суток (с 10:00 до 11:00 часов утра).

Выносливость животных оценивали согласно (Буза) по формуле: CИBn\₁=Tn/T₁ × 100%, где СИВn/₁ - степень изменения выносливости при каждой последующей нагрузке по отношению к исходной первой нагрузке в опытной или контрольной группе, Тn - длительность плавания при каждой последующей нагрузке (в опытной или контрольной группе), с, T₁ - длительность плавания при первой нагрузке в опытной или контрольной группе), с.

В конце эксперимента крыс выводили одномоментным декапитированием под СО₂ наркозом, согласно Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации о гуманном отношении к животным и приказу Минздрава СССР №577 от 12.08.1977 «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных». У декапитированных животных кровь собирали для получения сыворотки. В сыворотке периферической крови определяли уровни лактата общепринятыми методами (6).

Статистическая обработка полученных результатов проводилась на основе пакета программ StatSoft Statistica v8.0. Результаты представлены в виде медианы (Me) и квартилей (Q₁ - 25%; Q₃ - 75%). Проводился анализ множественных сравнений непараметрическими тестами Фридмана и Краскала-Уолиса. Достоверность различий между группами определяли с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни, используемого для двух независимых выборок и критерий Вилкоксона, используемого для проверки различий между зависимыми выборками (р<0,05). Для оценки характера распределений между группами применяли критерий «Хи-квадрат».

Как показали эксперименты ежедневное предъявление плавательного теста крысам до полного утомления в течение пяти дней повышало устойчивость к последующей нагрузке, поэтому работоспособность животных от первого дня к последующим нарастала (табл. 4). Действительно, определение степени изменения выносливости у крыс (см. методы) продемонстрировало ее повышение на 24-39% к концу тестирования. Следовательно, тренировочный процесс (11) характерен для динамики работоспособности крыс и в этот сезон. У животных контрольной группы №2, получавших 0,9% раствор натрий хлорид внутрь, работоспособность уже в первый день предъявления плавательного теста была выше в 1,5 раза, чем в этот же день у крыс контрольной группы №1 (табл. 4), в которой представлены данные о влияние гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области на динамику работоспособности крыс в плавательном тесте и уровень лактата в сыворотке крови после физической нагрузки в осенний период.

Таким образом, в первый день тестирования выносливость к физической нагрузке животных контрольной группы №2 повышалась на 68% в сравнении с аналогичным показателем крыс контрольной группы №1. В последующие дни предъявления плавательного теста эти два показателя оставались стабильными на протяжении 4 дней эксперимента. Поскольку внутрижелудочное введение физиологического раствора (0,9% раствор натрий хлорид) является для животных также стрессом, как и плавательный тест, следует предположить, что именно сама процедура оптимизировала работоспособность и повысила выносливость животных в первый день тестирования, что подтверждает концепцию Ф.З. Меерсона о перекрестной адаптации (11). В последующие дни каждое предыдущее предъявление плавательного теста с предварительным введением 0,9% раствора натрия хлорида уже не повышало устойчивость к каждой последующей комбинации указанных стрессорных факторов, но стабилизировало работоспособность и выносливость животных на определенном уровне. Следовательно, процедура внутрижелудочного введения физиологического раствора ускорила формирование тренировочного процесса и резистентности животных к физической нагрузке. Внутрижелудочное введение водорастворимых гуминовых кислот вместо физиологического раствора в еще большей степени стимулировало работоспособность животных и повышало их выносливость, которые нарастали от первого к третьему дню и стабилизировались в последующем (табл. 4). Обращает на себя внимание тот факт, что в первые два дня предъявления плавательного теста работоспособность и выносливость животных не отличались от таковых в группе крыс, получавших физиологический раствор, но были статистически значимо выше, чем у животных, получавших только физическую нагрузку. И только по мере накопления фармакологического эффекта средства гуминовой природы, т.е. начиная с третьей дозы, работоспособность животных в плавательном тесте и их выносливость к физической нагрузке резко и статистически значимо возрастали в сравнении с аналогичными показателями крыс контрольной группы №2 (табл. 4). Таким образом, под влиянием водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области, работоспособность и физическая выносливость крыс в плавательном тесте повышались на 40-50% в сравнении с аналогичными показателями крыс контрольной группы №2 в указанные выше сроки и на 65-106% в сравнении с таковыми контрольной группы №1.

Изучение содержания молочной кислоты (лактата) в сыворотке крови исследуемых групп животных позволило нам оценить интенсивность анаэробных процессов в наиболее «работающих» органах и подтвердить выявленные нами выше закономерности. Как известно, в спортивной медицине уровень лактата в крови при физической нагрузке помогает определить тренированность спортсменов, т.е. гликолитическую способность их скелетных мышц и эффективность выполненных тренировочных программ. Чем выше тренированность спортсмена, тем ниже уровень лактата при стандартной нагрузке и выше - при максимальной физической нагрузке.

В нашем эксперименте, как и следовало ожидать, физическая нагрузка сопровождалась повышением уровня лактата в 1, 2 (табл. 4), что подтвердило наше предположение о достижении животными контрольной группы №1 после пяти дней предъявления плавательного теста состояния тренированности и резистентности к физической нагрузке. В этих условиях процедура внутрижелудочного введения 0,9% раствора натрия хлорида или средства гуминовой природы восстанавливали содержание лактата в сыворотке крови до такового интактных животных (табл. 4). Следовательно, физическая нагрузка в условиях предварительного введения физиологического раствора или гуминовых кислот не изменяла содержание молочной кислоты в сыворотке крови в сравнении с аналогичным показателем интактных крыс, не получавших никаких нагрузок, т.е. уровень тренированности у них был выше аналогичного показателя у животных контрольной группы №1, получавших только физическую нагрузку.

Учитывая весь материал исследований в совокупности, можно утверждать, что в нашем эксперименте под влиянием средства гуминовой природы мы наблюдали у крыс повышение как работоспособности, так адаптированности к физической нагрузке. Следовательно, гуминовые кислоты продемонстрировали себя как агенты, способные ускорить тренировочный процесс и повысить адаптивные возможности организма на уровне анаэробных процессов и, в связи с этим, повысить работоспособность.

Обнаруженные ранее в эксперименте актопротекторные, адаптогенные свойства водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области являются отражением общих клеточных механизмов воздействия этой группы природных соединений на организм животных, которые ранее описаны как энергосберегающие, энергооптимизирующие, антиоксидантные, антигипоксические, цитопротекторные (5).

Таким образом, в эксперименте на крысах продемонстрировано, что хроническое пятидневное введение водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области, и предъявление животным плавательного теста до состояния полного утомления сопровождалось повышением их работоспособности и резистентности к физической нагрузке и не изменяло содержание лактата в сыворотке крови животных. Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о том, что на основе вышеописанных водорастворимых гуминовых кислот впоследствии могут быть разработаны средства для повышения работоспособности у лиц, специализирующихся в различных видах спорта или занятых тяжелым физическим трудом, в том числе в экстремальных условиях.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ, ПРИНЯТЫЕ ВО ВНИМАНИЕ ПРИ СОСТАВЛЕНИИ ОПИСАНИЯ:

1. Агаджанян, Н.А. Этнос, здоровье и проблемы адаптации / Н.А. Агаджанян, Г.М. Коновалова, Р.Ш. Ожева // Новые технологии - 2010. - №3. - С. 88-92.

2. Бахмет, А.А. Реакция органов иммунной системы в ответ на воздействие острого эмоционального стресса при введении пептида, вызывающего дельта-сон (ПВДС) // «Эколого-физиологические проблемы адаптации». Москва, 27-28 января 2003 г. - Москва: Изд-во РУДН, 20036. - С. 53.

3. Белоусов, М.В. Влияние нативных гуминовых кислот низинного торфа Томской области на окислительное фосфорилирование в митохондриях в условиях гипоксии / М.В. Белоусов., P.P. Ахмеджанов, М.В. Зыкова и др. // Химико-фармацевтический журнал. - 2015. - Т. 49, №4. - С. 39-43.

4. Брагина, Е.Е. Закономерности нарушений сперматогенеза человека при некоторых генетических и инфекционных заболеваниях: автореф. дис.… д-ра биол. наук / Е.Е. Брагина. - Москва, 2001. - 53 с.

5. Бузлама, А.В. Анализ фармакологических свойств, механизмов действия и перспектив применения гуминовых веществ в медицине / А.В. Бузлама Ю.Н. Чернов // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2010. - Т. 73, №9. - С. 43-48.

6. Долгова, В.В. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство / В.В. Долгова, В.В. Меньшикова. - Москва: ГЭОТАР-Медиа; 2012. - 928 с.

7. Донников, А.Е. Взаимосвязь переносимости физической нагрузки с показателями срочной адаптации иммунной системы: автореф. дис.… канд. мед. наук / А.Е. Донников. - Москва, 2009. - 27 с.

8. Зыкова, М.В. Высокомолекулярные соединения гуминовой природы - перспективные биологически активные соединения / М.В. Зыкова, Л.А. Логвинова, М.В. Белоусов // Традиционная медицина. - 2018. - №2(53). - С. 27-38.

9. Кузнецов, Р.А. Основные механизмы профилактики и коррекции плацентарной недостаточности гуминовыми соединениями в эксперименте / Р.А. Кузнецов, Л.П. Перетятко // Вестник новых медицинских технологий. - 2007. - №3. - С. 19-23.

10. Курьянова, Е.В. Возрастные, половые и типологические особенности механизмов регуляции сердечного ритма и свободнорадикальных процессов у нелинейных крыс: дис.… д-ра биол. наук / Е.В. Курьянова. - Астрахань, 2012. - 320 с.

11. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам / Ф.З. Меерсон, М.Г. Пшенникова. - Москва: Медицина, 1988. - 256 с.

12. Механизм действия препаратов гуминовых веществ / B.C. Бузлама, В.Н. Долгополов, A.В. Сафонов, С.В. Бузлама // Итоги и перспективы применения гуминовых препаратов в продуктивном животноводстве, коневодстве и птицеводстве:сборник докладов конференции. - Москва, 2006. - С. 24-35.

13. Мещеряков, Н.П. Сравнительная экспериментальная фармакология и клиническое применение адаптогенов в ветеринарии: автореф.… дис. док. вет. наук / Н.П. Мещеряков. - Воронеж, 2004. - 58 с.

14. Мохан, Р. Биохимия мышечной деятельности и физической тренировки / Р. Мохан, М. Глессон, П. Гринхафф. - Киев: Олимп, лит., 2001. - 295 с.

15. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации / Д.С.Орлов. - Москва: МГУ, 1990. - 325 с.

16. Пат. 2104013 Российская Федерация, МПК А61K 35/64, А61K 35/64, А61K 35/78. Способ и средство повышения работоспособности у спортсменов / Е.И. Трифонов. -№95122037/14; заявл. 26.12.1995; опубл. 10.02.1998.

17. Пат. 2473357 Российская Федерация, МПК А61K 36/00, А61K 35/64, А61K 31/355, А61Р 43/00. Жидкая композиция, повышающая работоспособность и обладающая адаптогенным, ранозаживляющим, противовоспалительным действием / B.Е. Годлевский, А.Н. Клименко. - №2011106811/15; заявл. 24.02.2011; опубл. 27.01.2013, Бюл. №3.

18. Пат. 2473359 Российская Федерация, МПК А61K 36/752, А61K 36/254, А61K 36/484, А61K 36/258, А61K 35/64, А61K 31/714, А61K 31/195, А61Р 43/00. Композиция для повышения работоспособности спортсменов (варианты) / В.Е. Годлевский, А.Н. Клименко. - №2011106815/15; заявл. 24.02.2011; опубл. 27.01.2013, Бюл. №3.

19. Пат. 2617206 Российская Федерация, МПК G09В 23/28 Способ моделирования физического переутомления у крыс в условиях десинхроноза / А.А. Гостюхина, К.В. Зайцев, Т.А. Замощина и др. №2015133700; заявл. 11.08.2015; опубл. 21.04.2017. Бюл. №12. - 8 с.

20. Писаренко, С.С. Состояние мужской репродуктивной функции человека и млекопитающих в зоне радиоактивного загрязнения: дис.… докт. биол. наук / C.С. Писаренко. - Москва, 2003. - 250 с.

21. Попов, А.И. Биологическая активность и биохимия гуминовых веществ. Часть 1. Биохимический аспект (обзор литературы) / А.И. Попов, В.Н. Зеленков, Т.В. Теплякова // Вестник Российской академии естественных наук. - 2016. - Т. 16, №1. - С. 11-18.

22. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии / М.Г. Пшенникова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2000. - №2. - С. 24-31.

23. Сарыева, О.В. Морфология тимуса, селезенки, надпочечников и особенности физического развития крыс под влиянием гуминовых соединений: автореф. дисс.…канд. мед. наук / О.В. Сарыева. - Москва, 2006. - 23 с.

24. Сонькин, В.Д. Проблема оценки физической работоспособности / В.Д. Сонькин // Вестник спортивной науки. - 2010. - №3. - С. 37-42.

25. Тодоров, И.Н. Стресс, старение и их биохимическая коррекция / И.Н. Тодоров, Г.И. Тодоров. - Москва: Наука, 2003. - 479 с.

26. Федотчев, А.И. Адаптивное биоуправление с обратной связью и контроль функционального состояния человека / А.И. Федотчев, А.Т. Бондарь, Е.В. Ким // Успехи физиологических наук. - 2002. - Т. 33, №3. - С. 79-96.

27. Brown coal derived humate inhibits contact hypersensitivity; an efficacy, toxicity and teragenicity study in rats / C.E.J, van Rensburg, J.R. Snyman, T. Mokoele et al. // Inflammation. - 2007. - Vol. 30, N 5. - P. 148-152.

28. Davies, G. Humic substances, structeres, properties and uses / G. Davies, E.A. Ghabbour. -The Royal society of chemistry: Cambridge, 1998. - 260 p.

29. Schepetkin, LA. Medical drugs from humus matter: focus on mumie / I. Schepetkin, A.I. Khlebnikov, B.S. Kwon // Drug development research. - 2002. - Vol. 57. - P. 140-159.

30. Effect of humic acids on lead accumulation in chicken organs and muscles / Z. Zraly, B. Pisarikova, M. Trckova, M. Navratilova // Acta veterinary Brno. - 2008. Vol. 77. - P. 439-445.

31. Engel, M.H. Organic geochemistry: principles and applications / M.H. Engel, S.A. Macko. - Plenum Publication: New York, 1993. - 861 p.

32. Influence of Tolpa Peat Preparation on the IgE-induced anaphylactic reactions in mice / J. Wyczolkowska, T. Michon, A. Seysarczyc et al. // Acta Pol. Pharm. - 1995. - Vol. 50.

33. Johnson, E.O. Mechanisms of stress: a dynamic overview of hormonal and behavioral homeostasis / E.O. Johnson, T.C. Kamilaris; G.P. Chrousos; P.W. Gold // Neurosci. Biobehav. Rev. - 1992. - Vol. 16. - P. 115-130.

34. The research on antioxidative properties of Tolpa Peat Preparation and its fractions / D. Piotrowska, A. Dlugosz, K. Witkiewicz, J. Pajak // Acta Pol Pharm. - 2000. - Vol. 57. - P. 127-129.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Таблица 1 - Элементный состав гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области

Таблица 2 - Оптические свойства гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области

Таблица 3 - Отношение оптических плотностей полос поглощения при определенных волновых числах по данным ИК-спектроскопии в гуминовых кислотах, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области Таблица 4 - Влияние гуминовых кислот на динамику работоспособности крыс в плавательном тесте и уровень лактата в сыворотке крови после физической нагрузки в осенний период

Фиг. 1 - Электронный спектр гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области

Фиг. 2 - Инфракрасный спектр гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области

Изобретение относится к экспериментальной и клинической фармакологии и касается средств для повышения физической работоспособности и выносливости в эксперименте. Применяют экстракт водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области, со среднечисленной молекулярной массой 4419,8 Да, среднемассовой молекулярной массой 17638,4, полидисперсностью 4,0 и медианой 8829,4 Да, в качестве средства, повышающего физическую работоспособность и выносливость у экспериментальных животных. Изобретение позволяет расширить арсенал водорастворимых гуминовых кислот торфа, предназначенных повышать работоспособность и физическую выносливость. 2 ил., 4 табл., 1 пр.

Применение экстракта водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий гидроксида из низинного древесно-травяного торфа, отобранного с глубины 50-100 см с эвтрофного болота «Таган» Томской области, со среднечисленной молекулярной массой 4419,8 Да, среднемассовой молекулярной массой 17638,4, полидисперсностью 4,0 и медианой 8829,4 Да, в качестве средства, повышающего физическую работоспособность и выносливость.