СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ЛОЗАРТАНОМ В КОМПЛЕКСЕ С СМЕСЬЮ РАСТВОРОВ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ РАЗВЕДЕНИЙ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ КРОЛИЧЬИХ АНТИТЕЛ К ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ СИНТАЗЕ ОКСИДА АЗОТА ЧЕЛОВЕКА - С12, С30, С200 Российский патент 2009 года по МПК A61K35/12 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью лозартана, относящегося к антагонистам рецепторов ангиотензина II (AT 1-подтип), описанный De Gennaro Colonna V. et al. «Angiotensin II type 1 receptor antagonism improves endothelial vasodilator function in L-NAME-induced hypertensive rats by a kinin-dependent mechanism», J. Hypertens. 2006 Jan; 24 (1): 95-102, который заключается в том, что крысам самцах Sprague-Dawley моделировали эндотелиальную дисфункцию введением блокатора NO-синтазы N(ω)-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в питьевую воду в течение 8 недель и изучали эндотелиопротективные эффекты лозартана (10 мг/кг/сутки), вводимого в последние 2 недели приема L-NAME, реализующиеся через активацию В2-рецепторов брадикинина.

Основным недостатком способа является косвенный механизм действия лозартана при эндотелиальной дисфункции, связанный со стимуляцией AT 2 подтипа рецепторов ангиотензина II и реализующийся вследствие брадикининзависимого пути эндотелиопротекции, в то время как одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргинин NO, приводящее к нарушению продукции оксида азота (NO), активность которой при применении только лозартана остается недостаточно компенсированной. В то время как основным механизмом действия смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 является увеличение количества eNOS, приводящее к повышению содержания оксида азота в магистральном сосудистом русле и коррекции эндотелиальной дисфункции.

Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при недостаточности NO-синтаз с помощью лозартана неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование лозартана, относящегося к антагонистам рецепторов ангиотензина II (AT 1-подтип) и смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением лозартана в дозе 6 мг/кг однократно в сутки и введением смеси гомеопатических разведений афинно очищенных антител к эндотелиальной NOS - С12, С30, С200 из расчета 1 таблетка на 100 мл воды со свободным доступом к питью, замена воды в поилках производилась 1 раз в сутки с количественным учетом выпитой жидкости (20±3 мл в среднем на одно животное), что приводит к повышению содержания оксида азота в магистральном сосудистом русле и коррекции эндотелиальной дисфункции.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминалнатрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7 суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и лозартана (6 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 192,2±10,5, ДАД - 138,2±2,4 мм рт.ст.). В экспериментах, где еще дополнительно вводилась смесь растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 добавлением в поилки со свободным доступом к питью, это не приводило к достоверному снижению показателей исходных значений АД (САД - 185,4±13,5, ДАД - 138,1±7±9 мм рт.ст.) (таблица 1).

Таблица 1
Динамика показателей артериального давления и частоты сердечных сокращений при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции лозартаном при сочетанном его применении с смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 (n=10, М±m).Группы животныхФункцио-нальные пробыСАД, мм рт.ст.ДАД, мм рт.ст.ЧСС, уд. в минИнтактныеИсходные137,7±3,7101,9±4,3420,0±9,0ЭЗВ с АХ84,3±4,538,7±2,8416,0±14,0ЭНЗВ с НП83,0±3,742,1±4,4415,0±10,0Получавшие L-NAME (25 мг/кг)Исходные190,3±6,7*145,0±3,9*428,0±11ЭЗВ с АХ110,6±5,2*82,8±6,6*426,0±14,0ЭНЗВ с НП88,7±4,750,8±4,2426,0±13,0L-NAME (25 мг/кг)+ло-зартан (6 мг/кг)Исходные192,2±10,5*138,2±2,4*381,0±9,0ЭЗВ с АХ90,0±7,8*51,7±5,0*365,0±8,0ЭНЗВ с НП95,5±8,955,5±5,5378,0±12,0L-NAME (25 мг/кг)+ло-зартан+
смесь растворов гомеопати-ческих разведений поликло
нальных кроличьих антител к эндотелии-альной NOS человека - С12, С30, С200Исходные185,4±13,5138,1±7,9390,8±5,1ЭЗВ с АХ65,3±10,2**37,6±5,9**371,1±5,2ЭНЗВ с НП97,3±6,355,7±6,1402,1±4,1*р<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+лозартан
Примечание: САД - систолическое артериальное давление, ДАД - диастолическое артериальное давление, ЧСС - частота сердечных сокращений, ЭЗВ - эндотелийзависимая вазодилатация, ЭНЗВ - эндотелийнезависимая вазодилатация, АХ - ацетилхолин, НП - нитропруссид

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции.

Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только лозартан, это отношение соответствовало значению 2,3±0,3, а в группе с дополнительным введением к лозартану смесью растворов гомеопатичесих разведении поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200 - 1,5±0,2 (таблица 2)

Таблица 2
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME лозартаном при сочетанном его применении с смесью растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 (n=10, M±m).Группы животныхФункцио-нальные пробыПрирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)Время сосудистой реакции (с)Площадь сосудистой реакции (усл.ед.)Отношение площадей сосудистой реакции АХкНПL-NAME+ло-зартанАХ91,7±4,729,7±1,91048,9±79,82,3±0,3НП93,0±7,074,8±8,63523,4±535,9L-NAME+ло-зартан+
смесь растворов гомеопати-ческих разведений поликло-нальных антител к эндотелии-альной NOS человека - С12, С30, С200АХ107,1±9,8*34,9±1,2*1891,2±202,4*1,5±0,2*НП86,0±7,1*59,2±2,0*2587,8±255,8**- р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+лозартан
Примечание: АХ - ацетилхолин, НП - нитропруссид.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной на фоне введения L-NAME лозартаном при сочетанном его применении с смесью растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы "М-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг в течение 7 суток вводят внутрижелудочно лозартан в дозе 6 мг/кг ежедневно и смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200 добавлением в поилки к питью. Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции, обусловленной ингибированием NO синтазы, за счет сочетанного введения и растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование лозартана, относящегося к антагонистам рецепторов ангиотензина II (AT 1-подтип), отличающийся тем, что в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы "М-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг в течение 7 суток вводят внутрижелудочно лозартан в дозе 6 мг/кг ежедневно и смесь растворов гомеопатичесих разведении поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С 12, С30, С200 добавлением в поилки к питью.