СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ГИПОЭСТРОГЕН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ СМЕСЬЮ РАСТВОРОВ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ РАЗВЕДЕНИЙ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ КРОЛИЧЬИХ АНТИТЕЛ К ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ СИНТАЗЕ ОКСИДА АЗОТА ЧЕЛОВЕКА - С12, С30, С200 Российский патент 2011 года по МПК G09B23/28 A61K39/395 A61P9/02 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции фуростаноловыми гликозидами из культуры клеток растения dioscorea deltoidea, описанный 27.07.2008 г. в патенте РФ №2329807.

Основным недостатком способа является то, что коррекция гипоэстрогениндуцированной эндотелиальной дисфунции связана с эстрогеноподобной активностью фуростаноловых гликозидов. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-NO, которая связана в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью фуростаноловых гликозидов из культуры клеток растения dioscorea deltoidea, обладающие эстрогеноподобной активностью, неудовлетворительны.

В то время как основным механизмом действия смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 является увеличение количества eNOS, тем самым влияя на основное звено патогенеза развития эндотелиальной дисфункции, приводящее к повышению содержания оксида азота в магистральном сосудистом русле и коррекции эндотелиальной дисфункции.

Задачей изобретения является способ коррекции гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции, включающий использование смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200, приводящий к повышению количества eNOS.

Поставленная задача достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте с помощью билатеральной овариэктомии у лабораторных животных проводится ее коррекция в течение 6 недель ежедневным введением смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200 добавлением в поилки в количествах, принятых в гомеопатии, со свободным доступом к питью, замена воды в поилках производилась 1 раз в сутки с количественным учетом выпитой жидкости (20±3 мл в среднем на одно животное).

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводились на белых крысах-самках линии Wistar массой 200-300 г. Для моделирования гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции крыс наркотизировали этаминалом натрия (50 мг/кг) и проводили билатеральную овариэктомию. На 42 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика TSD104A и аппаратно-программного комплекса MP100, производства Biopac System, Inc., США. Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетил-холина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 83,9±4,8 мм рт.ст., для диастолического давления (ДАД) - 41,9±2,2 мм рт.ст. и для среднего артериального давления (Ср.АД) 55,8±2,2 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту (табл.1).

Восстановление АД происходило в среднем за 43,6±2,2 сек после нормализации сердечного ритма. Именно этот интеграл нами принимался как сосудистый компонент реакции на АХ и использовался для дальнейших расчетов (табл.2). ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 91,0±4,6, ДАД до 48,5±2,9 и Ср.АД до 62,7±3,2 мм рт.ст. (табл.1) с последующим полным восстановлением в среднем в течение 40,2±2,4 сек (табл.2).

Гипоэстрогенное состояние, через 6 недель после проведения овариэктомии, вызывало артериальную гипертензию (САД - 160,0±6,2, ДАД - 124,9±5,5, СрАД - 136,6±5,6 мм рт.ст.) и приводило к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 91,8±8,0, ДАД до 57,3±7,1, СрАД до 68,8±7,3 мм рт.ст.) и НП (САД до 87,4±7,5, ДАД до 57,8±6,6 и СрАД до 67,7±6,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными (табл.1).

Через 6 недель, после проведения самкам крыс линии Wistar билатеральной овариэктомии имело место достоверное снижение интеграла (реакция восстановления АД после введения АХ) до 1022,5±131 усл.ед. по сравнению с интактной группой животных, у которых этот показатель составлял 1673,6±132,4 усл.ед. (табл.1). Напротив, ЭНЗР, являющаяся отражением реакции на введение НП, увеличилась у животных с экспериментальной эндотелиальной дисфункции и ее интеграл составил соответственно 2157,3±167 усл.ед. и 1338,1±121,1 усл.ед. в группе контроля.

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с гипоэстрогенным состоянием закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя - коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД), характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендомреакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Таблица 1 Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота и ее коррекции смесью растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200. Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин Интактные Исходные 128,1±6,0 95,7±4 401,0±8,0 АХ 83,9±4,8 41,9±2,2 398,0±11,0 НП 91,0±4,6 48,5±2,9 402,0±10,0 Гипоэстрогенное состояние Исходные 160,0±6,2* 124,9±5,5* 385,0±13,0 АХ 91,8±8,0 57,3±7,1* 385,0±9,0 НП 87,4±7,5* 57,8±6,6 397,0±8,0 Гипоэстрогенное состояние + смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NOS человека - С12, С30, С200 Исходные 158,5±15,0 120,7±9,9 377,9±18,0 ЭЗВ с АХ 103,4±10,9 60,3±5,1 381,0±16,4 ЭНЗВ с НП 119,6±12,3 78,4±8,2 379,9±15,0 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - р<0,05 в сравнении с группой с гипоэстрогенным состоянием

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота и получили разницу данного показателя в 2 раза - соответственно 0,8 у интактных и 2,1 у животных, с гипоэстрогенным состоянием.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции.

Добавление в поилки со свободным доступом к питью смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 («BD Transduction Labs, USA) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 158,5±15,0, ДАД - 120,7±9,9 мм рт.ст.) (табл.1.).

Однако этой в группе, где на фоне билатеральной овариэктомии в течение 6 недель вводилась смесь растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200 КЭД составил 1,1, что достоверно ниже, чем в группе с гипоэстрогенным состоянием.

Таблица 2 Показатели, отражающие коррекцию гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции на фоне билатеральной овариэктомии смесью растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200. Группы животных Функциональные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (сек) Площадь сосудистой реакции (усл.ед.) КЭД, усл.
ед. Интактные АХ 56,7±4,1 40,5±2,6 1673,6±132,4 0,8±
0,1 НП 60,0±4,8 58,3±2,9 1338,1±121,1 Гипоэстрогенное состояние АХ 67,8±7,3* 30,0±5,4* 1022,5±131* 2,1±
0,2* НП 79,2±8,8* 46,0±4,5* 2157,3±167* Гипоэстрогенное состояние + смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных антител к эндотелиальной NOS человека - С12, С30, С200 АХ 65,1±5,8* 61,9±4,3** 2015,0±240,7** 1,1±
0,1** НП 50,5±2,9** 82,0±2,4** 2065,6±116,9* * - р<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - р<0,05 в сравнении с группой с гипоэстрогенным состоянием

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной на фоне билатеральной овариэктомии смесью растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200, снижая КЭД до уровня такового у интактных животных.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого на белых крысах-самках линии Wistar моделируют гипоэстроген-индуцированную эндотелиальную дисфункцию путем билатеральной овариэктомии. Коррекцию дисфункции осуществляют введением в течение 6 недель после овариэктомии смеси растворов гомеопатичесих разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200. Указанную смесь ежедневно 1 раз в сутки добавляют в поилки к питью животных. Способ обеспечивает эффективную коррекцию, снижая коэффициент эндотелиальной дисфункции у самок до уровня такового у интактных животных за счет воздействия на различные механизмы развития этой дисфункции в условиях гипоэстрогении. 2 табл.

Способ коррекции гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте самкам крыс линии Wistar в течение 6 недель после овариэктомии ежедневно 1 раз в сутки вводят добавлением в поилки к питью смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, С30, С200.