СПОСОБ ЛОКАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ АУТОИММУННОГО АРТРИТА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/726 A61P19/02 

Изобретение относится к медицине и биологии и предназначено для консервативного лечения аутоиммунного артрита млекопитающих.

Известен способ лечения аутоиммунного артрита, включающий ежедневное пероральное введение «Вобензим», наряду с ним ежедневно перорально вводят препарат «Дона» и внутрисуставно - препарат «Оксибутират натрия». «Дона» вводят из расчета суточной дозы 21,4 мг/кг массы, которую перед употреблением растворяют в 300 мл воды и вводят 2 раза в сутки в течение 4-х недель. 20%-ный раствор препарата «Оксибутират натрия» вводят из расчета суточной дозы 5,7 мг/кг массы, смешивая с 2 мл изотонического раствора хлорида натрия, и вводят 1 раз в сутки в течение 4-х недель (патент РФ №2169560, кл. А61K 31/045, 31/7008, 31/70, А61P 9/02. Опубл. 27.06.2001 г. Бюл. №18).

Недостатком способа является необходимость использования трех препаратов, два из которых вводят перорально и один - внутрисуставно. Прероральное же введение препаратов приводит к негативному воздействию на желудочно-кишечный тракт, в частности на печень, играющую основную роль в поддержании метаболического гомеостаза организма. Кроме того, имеется необходимость приготовления растворов лекарственных препаратов ex temporae. Данный способ приводит к положительному терапевтическому эффекту только через 4 недели.

Известен также способ лечения адъювантного артрита у кроликов, где в качестве сывороточного ферментативного антиоксиданта используют церулоплазмин, который в количестве 10 мг растворяют в 1 мл стерильного физиологического раствора и вводят внутрисуставно один раз в неделю в течение 4-6 недель. В способе используют препарат, получаемый из ретроплацентарной крови человека и оказывающий терапевтическое воздействие при лечении кроликов со сформированным адъювантным артритом (патент РФ №2156617, кл. А61К 36/16. Опубл. 27.09.2000 г. Бюл №27).

Недостатками этого способа является коррекция только одного из многих патогенетических механизмов артрита, а именно перекисно-антиоксидантного дисбаланса путем нормализации ферментного звена антиоксидантной системы. Способ требует длительного промежутка времени для получения положительного терапевтического эффекта (4-6 недель). Для достижения более быстрого терапевтического эффекта необходимо назначение дополнительных лекарственных средств, непосредственно влияющих на метаболизм суставного хряща.

Наиболее близким к предлагаемому по своей технической сущности является способ лечения аутоиммунного артрита, включающий применение повиаргола, 5 мг которого из расчета разовой дозы 0,5 мг/кг массы тела растворяют в 1 мл 1%-ного раствора никотиновой кислоты, при этом препарат никотиновой кислоты вводят из расчета разовой дозы 1 мг/кг массы. Полученную смесь двух препаратов вводят внутрисуставно в количестве 0,02 мл 1 раз в 4 дня в течение 16 дней (патент РФ №2232560, кл. А61D 7/00, А61К 33/38. Опубл. 20.07.2004 г. Бюл. №20).

Недостатком способа является то, что оба препарата, входящие в состав смеси, улучшая состояние синовиальной среды сустава, благодаря бактерицидному, антисептическому, иммуномодулирующему и дезинтоксикационному действию, приводящему к снижению местной активности воспалительного процесса и за счет этого к торможению процесса воспалительной деструкции тканей пораженного сустава, оказывают при этом только опосредованное влияние на метаболизм суставных тканей, в частности суставного хряща. Кроме того, использование смеси из двух препаратов делает необходимым приготовление лекарственного средства ex temporae и, к тому же, в стерильных условиях, что повышает трудоемкость способа.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является повышение эффективности и снижение трудоемкости терапии аутоиммунного артрита.

Поставленная задача решается тем, что в способе лечения аутоиммунного артрита у животных, включающем введение лекарственного средства внутрисуставно, в полость сустава вводят препарат «Мукосат» в количестве 0,1 мл один раз в 3 дня. При этом общий курс лечения составляет 5 инъекций.

Препарат «Мукосат», включенный в «Государственный реестр лекарственных средств» (том 1. Официальное издание - 1 SBN 5-225-04068-3), содержит в качестве активного начала хондроитинсульфат и предназначен для лечения воспалительно-дегенеративных процессов в суставных структурах, в частности хряща, путем его внутримышечного введения (патент РФ №2200018, Кл. А61 35/32, 35/12, 9/08. Опубл. 10.03.2003 г. Бюл. 7).

Инструкция по применению препарата, который представляет собой 10%-ный раствор хондроитинсульфата, предусматривает его внутримышечное введение, но при этом его биодоступность недостаточна.

В силу своей функциональной структуры сустав является замкнутым, поэтому введение лекарственного препарата непосредственно в суставную полость позволяет достичь его максимальных концентраций, что ускоряет реабилитационный процесс в суставных структурах, в частности гиалинового хряща. При введении же препарата внутримышечно часть его инактивируется в печени, часть, попадая в кровоток, разносится по другим тканям сустава, не достигая нужной терапевтической концентрации в конкретном пораженном суставе.

Также локальное использование препарата позволяет избежать его негативного влияния на желудочно-кишечный тракт и обладает рядом дополнительных преимуществ: избирательное воздействие на пораженный сустав, доставка препарата непосредственно к пораженным тканям позволяет снизить дозы системно назначаемых препаратов, которые отрицательно влияют на пищеварительную, нервную, сердечно-сосудистую и другие системы, а также вызывают нарушения иммунного и гормонального статуса, угнетают гемопоэз и вызывают гнойно-септические осложнения.

Данный препарат ранее использовался в виде курса внутримышечных введений только для лечения воспалительно-дегенеративных заболеваний суставов и не использовался для лечения аутоиммунного артрита ни как внутримышечно, ни как и внутрисуставно.

Заявитель установил способность препарата «Мукосат» при внутрисуставном введении оказывать положительное воздействие на воспалительно-дегенеративные процессы в суставных тканях в условиях экспериментального аутоиммунного артрита у кроликов.

Учитывая данные факты, разработан иной способ введения потенциально эффективного препарата.

Введение, согласно предлагаемому изобретению, в полость сустава препарата «Мукосат» стимулирует обменные процессы в соединительной ткани, нормализуя биосинтез основных компонентов соединительной ткани - протеогликанов и гликозаминогликанов, что повышает эффективность способа лечения за счет уменьшения выраженности дегенеративных изменений в соединительной ткани, а именно в хрящевой, и улучшает подвижность в пораженных суставах.

Нами экспериментальным путем выявлено, что наиболее положительное действие на выраженность аутоиммунного воспаления оказывает внутрисуставное введение животным с аутоиммунным артритом, в частности, кроликам, препарата «Мукосат» в количестве 0,1 мл один раз в 3 дня.

А общий курс лечения, составляющий 5 инъекций, приводит к купированию клинических проявлений экспериментального аутоиммунного артрита, что подтверждается результатами общелабораторных, биохимических и гистоморфометрических исследований.

Технический результат заключается в стимуляции собственного синтеза основных компонентов матрикса соединительной ткани, в частности гиалинового хряща.

Способ реализуется следующим образом.

Кролика со сформированным аутоиммунным артритом фиксируют на станке для лабораторных животных. Перед введением препарата проводят подготовку коленного сустава. В области опытного, например, правого сустава сбривают волосяной покров, кожу обрабатывают 5%-ным раствором йодом или спиртовым 1%-ным раствором бриллиантовым зеленым. Внутрисуставные инъекции осуществляют шприцом один раз в 3 дня, общим курсом 5 инъекций. Разовая доза препарата «Мукосат» составляет 0,1 мл.

В левый, симметричный, сустав, обработанный таким же образом, как и опытный сустав, вводят 0,1 мл стерильного 0,9%-ного изотонического раствора хлорида натрия.

После манипуляций места инъекций заклеивают бактерицидным пластырем.

Заявляемый способ был экспериментально опробирован на 40 кроликах породы «Шиншилла русская» с индуцированным аутоиммунным артритом, которым была проведена локальная терапия путем внутрисуставного введения 10%-ного раствора хондроитинсульфата - препарата «Мукосат».

Проведено 3 серии экспериментальных исследований:

1 серия (контрольная) - обследование 10 интактных кроликов;

2 серия (сравнения) - обследование 10 кроликов с аутоиммунным артритом, которым внутрисуставно вводился только изотонический раствор хлорида натрия по 0,1 мл один раз в 3 дня, общим курсом 5 инъекций;

3 серия (опытная) - обследование 20 кроликов с аутоиммунным артритом, которым проведено внутрисуставное введение препарата «Мукосат» в дозе 0,1 мл один раз в 3 дня, общим курсом 5 инъекций.

Животным всех серий (контрольной, сравнения и опытной) в динамике было проведено клинико-лабораторное обследование. Клиническими методами оценивали состояние и поведение животного, проводили пальпацию и измерение окружности и объема движений в обоих коленных суставах, определяли массу тела животных. Лабораторными методами проводили оценку системных воспалительных процессов по показателям гематологического исследования (СОЭ, гемоглобин, эритроциты и лейкоциты, а также их палочко- и сегментоядерные формы). Локальные воспалительно-дегенеративные процессы в суставе исследовали по уровню общего цитоза и качественному клеточному составу клеточных элементов содержимого суставной полости. Исследование обмена соединительной ткани проводили по уровню гликозаминогликанов, определяемых как по уроновым кислотам, так и по гексозам. Так же проводили морфометрическое исследование тканей коленных суставов.

В опытной группе животных после внутрисуставных инъекций «Мукосат» по предлагаемому способу на фоне улучшения клинической картины отмечались и значительные положительные сдвиги, подтверждаемые данными лабораторных показателей (таблицы 1, 2, 3).

Клинический осмотр показал, что после проведенной терапии наблюдается улучшение клинического состояния животных и результатов лабораторного обследования. Отмечено статистически достоверное (р<0,05) положительное изменение показателей гематологического исследования, а именно: повышение содержания гемоглобина и количества эритроцитов, снижение уровня СОЭ и общего количества лейкоцитов, а также их палочко- и сегментоядерных форм (таблица 1).

Данные изучения влияния внутрисуставного введения препарата «Мукосат» на местную активность воспалительного процесса при экспериментальном артрите показали, что после лечения уровень общего цитоза в содержимом суставной полости животных был значительно ниже, чем до начала лечения, хотя и не достигал нормальных значений. В качественном составе клеточных элементов в содержимом суставной полости правого коленного сустава у животных тоже наблюдались значительные положительные изменения: встречались нейтрофилы и небольшое количество лимфоцитов и макрофагов, рагоцитоподобные клетки отсутствовали (таблица 2).

Наблюдались положительные сдвиги и в уровне гликозаминогликанов сыворотки крови - основных компонентов обмена соединительной ткани, определяемых по уроновым кислотам и гексозам (таблица 3).

В опытной серии по сравнению с животными, которым не проводилась данная терапия (серия сравнения), наблюдалось значительное улучшение состояния суставных структур. При оценке результатов гистоморфометрии в опытной серии установлено, что имеет место резкое торможение процесса дезорганизации соединительной ткани и снижение степени выраженности иммуноморфологических признаков поражения.

При проведении макро- и микроскопического исследования тканей коленных суставов исследовались параартикулярные ткани, хрящ и субхондральная кость.

У животных опытной серии, которым внутрисуставно вводили «Мукосат» в дозе 0,1 мл, патологические изменения параартикулярных тканей в виде незначительного утолщения были зафиксированы только в 2-х случаях, при этом суставной хрящ у этих же животных имел небольшие шероховатые участки в краевых зонах мыщелков. Микроструктура суставного хряща и субхондральной кости была в пределах нормы. Патологические изменения костной ткани у всех животных этой серии отсутствовали.

Сравнительный анализ результатов гистоморфометрического исследования показал, что у животных опытной серии, получавших лечение в виде внутрисуставных инъекций «Мукосата», имеет место резкое торможение процесса дезорганизации соединительной ткани с одновременным снижением степени выраженности воспалительных процессов и иммуноморфологических признаков поражения по сравнению с животными, не получавшими лечения.

У животных, не получавших лечения, положительной динамики изучаемых показателей обнаружено не было, напротив, имелось дальнейшее прогрессирование проявлений аутоиммунного артрита, что подтверждается данными клинико-лабораторного исследования.

Внутрисуставное введение кроликам с аутоиммунным артритом «Мукосата» в дозе 0,1 мл один раз в 3 дня, общим курсом 5 инъекций оказывает положительное действие на выраженность экспериментального аутоиммунного воспаления. Курс из 5 инъекций препарата, проводимых один раз в 3 дня, купировал клинические проявления экспериментального аутоиммунного артрита, что также подтверждается данными общелабораторных, биохимических и морфогистохимических исследований состояния соединительнотканых суставных структур.

ПРИМЕР. У кролика №18, массой 3,2 кг был сформирован аутоиммунный артрит с помощью полного адъюванта Фрейнда, содержащего убитые нагреванием микобактерии в растительном масле, в качестве антигена использовали овальбумин. Формирование аутоиммунного артрита подтверждалось инструментальными, клинико-лабораторными исследованиями.

При осмотре животное вялое, гиподинамичное по сравнению с интактными животными, шерсть тусклая с имеющимися местами проплешин. У животного снижен аппетит, вес составил 3,0 кг. Визуально увеличен объем опытного сустава почти в 2 раза по сравнению со здоровым суставом. Кролик явно щадил правую конечность из-за отека и выраженной болевой реакции, у него наблюдался выраженный артрит правого коленного сустава. Данные тепловизионного обследования отмечали выраженную температурную реакцию в области правого коленного сустава. Разница температур между опытным и контрольным суставом составила 1,1°С. Наряду с выраженными клиническими проявлениями и характерной тепловизионной картиной коленных суставов были обнаружены значительные метаболические нарушения, заключавшиеся в наличии общей активности воспалительного процесса (снижение уровня гемоглобина и количества эритроцитов, повышение СОЭ и общего количества лейкоцитов, а также их палочко- и сегментоядерных форм), в значительной выраженности воспалительно-деструктивных процессов в пораженных суставах, сопровождавшихся повышением содержания гликозаминогликанов в сыворотке крови, уровня общего цитоза и нарушением клеточного состава содержимого сустава.

Кролику проведена внутрисуставная терапия с помощью препарата «Мукосат» в дозе 0,1 мл один раз в 3 дня, общим курсом 5 инъекций.

После проведенного лечения отмечалось улучшение общего состояния животного, на фоне улучшения клинической картины, выражавшееся в уменьшении отека и температуры пораженного сустава, отмечались положительные сдвиги в результатах лабораторных показателей.

Отмечено улучшение морфометрических данных. Параартикулярные ткани макроскопически без видимой патологии. Микроскопически из признаков поражения выявляется слабо выраженная пролиферация пиронинофильных фибробластов, а также не более 3-4 лимфоцитов в поле зрения. Сумма баллов признаков поражения - 2.

Синовиальная оболочка макроскопически слегка разрыхлена. Микроскопически имеется слабо выраженная гиперплазия ворсин и пролиферация кроющих клеток. Последние на небольших участках имеют кубическую форму и располагаются в 2-3 слоя. Отложения фибрина имеют очаговый характер и располагаются как на поверхности, так и между синовиоцитами. Выявляются умеренные изменения пролиферативного характера стенок половины сосудов. Дезорганизация соединительной ткани представлена слабой периваскулярной метахромазией при окраске толуидиновым голубым, а также незначительно выраженными фибриноидными изменениями небольших участков коллагеново-эластического слоя. Тучные клетки выявляются по 1-2 в поле зрения, а дегрануляция их практически отсутствует. Признаков склероза практически нет: выявляется лишь умеренный периваскулярный фиброз. Сумма баллов признаков поражения - 9.

Мениски макро- и микроскопически без патологии. Суставной хрящ макроскопически без патологии. Микроскопически поверхностный слой сохранен на всем протяжении: имеются лишь незначительные участки разрыхления (разволокнения). Ориентация зон не нарушена, хондроциты без признаков дистрофии. Матрикс хряща гомогенен и метахроматичен: ослабление метахромазии выявляется лишь на некоторых участках верхних слоев средней зоны. Сумма баллов признаков поражения - 1.

Субхондральная кость макро- и микроскопически без патологии.

Заключение: на фоне ярко выраженного улучшения клинической картины и данных лабораторных исследований имелись слабо выраженные проявления неспецифического хронического продуктивного воспаления.

Экспериментальное исследование на 40 кроликах показало, что внутрисуставное применение препарата «Мукосат», представляющего собой 10%-ный раствор хондроитинсульфата, обеспечивает терапевтический эффект за счет предупреждения развития воспалительно-деструктивных процессов в суставах. Экспериментально обоснована эффективность данного способа на животных, частным представителем которых явились кролики. Учитывая то, что патогенетические механизмы возникновения и развития ревматоидного воспаления, а также механизмы коррекции воспалительно-деструктивных изменений соединительной ткани одинаковы для всех млекопитающих, можно предположить, что полученные закономерности восстановления и стимуляции биосинтеза гликозаминогликанов (основных компонентов соединительной ткани) в суставных поверхностях однотипны у кроликов с аутоиммунным артритом и больных ревматоидным артритом.

Поскольку аутоиммунный артрит животных является аналогом ревматоидного артрита человека и они имеют единые закономерности развития ревматоидного воспаления и коррекции, поэтому возможно проведение экстраполяции полученных экспериментальных данных в клинику.

Таблица 1Результаты гематологического исследования крови кроликов с аутоиммунным артритомПоказателиИнтактные кролики (n=10)Кролики с артритом (n=30)Опытная серия после лечения «Мукосатом» (n=20)Серия сравнения без лечения (n=10)СОЭ, мм/ч2,80±0,206,40±0,31*3,25±0,22**5,90±0,64***гемоглобин, г/л124,30±0,80120,70±0,20*123,50±0,44**119,96±0,48***эритроциты, ·10¹²/л4,04±0,103,26±0,05*3,95±0,16**3,16±0,10***лейкоциты, ·10⁹/л7,60±0,1111,18±0,11*7,89±0,12**13,32±0,19***палочкоядер. нейтрофилы, %3,96±0,186,31±0,49*4,52±0,08**7,20±0,10***сегментоядер. нейтрофилы, %42,60±0,8153,93±0,46*44,24±0,54**56,00±0,73***лимфоциты, %47,80±0,8432,13±0,37*44,65±0,63**29,30±0,84***эозинофилы, %1,49±0,102,46±0,06*1,71±0,07**3,17±0,11***моноциты, %3,44±0,124,49±0,07*3,67±0,08**4,54±0,12***Примечание: * - достоверная разница показателей (р<0,05) между нормой (интактными кроликами) и кроликами с аутоиммунным артритом, ** - достоверная разница показателей (р<0,05) между кроликами с аутоиммунным артритом до лечения и после, *** - достоверная разница показателей (р<0,05) между животными, которым проводилась терапия, и животными без лечения.

Таблица 2Общий цитоз и клеточный состав содержимого суставной полости опытных коленных суставов кроликовПоказателиИнтактные кролики (n=10)Кролики с артритом (n=30)Опытная серия после лечения «Мукосатом» (n=20)Серия сравнения без лечения (n=10)цитоз, ·10⁹/л0,15±0,012,26±0,06*0,45±0,05**1,00±0,06***нейтрофилы, частота встречаемости, %9,51±0,1157,02±0,65*11,71±0,60**18,05±0,58***лимфоциты, частота встречаемости, %8,43±0,0944,95±0,42*3,31±0,12**5,37±0,08***макрофаги, частота встречаемости, %046,34±0,47*0,95±0,25**55,89±0,68***рагоцитоподобные клетки, частота встречаемости, %033,15±0,46*0,85±0,28**36,15±1,10***Примечание: * - достоверная разница показателей (р<0,05) между нормой (интактными кроликами) и кроликами с аутоиммунным артритом, ** - достоверная разница показателей (р<0,05) между кроликами с аутоиммунным артритом до лечения и после, *** - достоверная разница показателей (р<0,05) между животными, которым проводилась терапия, и животными без лечения.

Таблица 3Биохимические показатели обмена соединительной ткани в крови экспериментальных животныхПоказателиИнтактные кролики, (n=10)Кролики с артритом (n=30)Опытная серия после лечения «Мукосатом» (n=20)Серия сравнения без лечения (n=10)Гликозаминогликаны (уроновые кислоты, г·10^-2/л)1,21±0,092,09±0,05*1,46±0,08**2,22±0,11***Гликозаминогликаны (гексозы, г·10^-2/л)1,38±0,092,68±0,07*1,67±0,06**2,86±0,14***Примечание: * - достоверная разница показателей (р<0,05) между нормой (интактными кроликами) и кроликами с аутоиммунным артритом, ** - достоверная разница показателей (р<0,05) между кроликами с аутоиммунным артритом до лечения и после, *** - достоверная разница показателей (р<0,05) между животными, которым проводилась терапия, и животными без лечения.

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии и предназначено для консервативного лечения аутоиммунного артрита. Способ осуществляют следующим образом. В полость сустава вводят препарат «Мукосат» в количестве 0,1 мл один раз в 3 дня, при этом общий курс лечения составляет 5 инъекций. Использование изобретения позволяет повысить эффективность лечения за счет повышения биодоступности «Мукосата» при внутрисуставном введении, а также удешевить способ, так как предполагает использование отечественного препарата, содержащего одно действующее начало. 3 табл.

Способ локальной терапии аутоиммунного артрита, включающий введение лекарственного раствора внутрисуставно, отличающийся тем, что в полость сустава вводят препарат «Мукосат» в количестве 0,1 мл один раз в 3 дня, при этом общий курс лечения составляет 5 инъекций.