ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОЛИБАКТЕРИОЗА У МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2009 года по МПК A61K9/08 A61K31/7036 A61K31/498 A61P1/00 A61P31/04 

Изобретение относится к области ветеринарии.

Несмотря на значительные достижения ветеринарной науки, бактериальные инфекции сельскохозяйственных животных продолжают наносить значительный ущерб специализированным хозяйствам: даже в случае удовлетворительных зоогигиенических условий переболевают ими до 50-70% поголовья. При тяжелых формах течения болезни смертность может достигать 90% от общего числа заболевших животных.

Специфическая профилактика многих бактериальных инфекций является недостаточно эффективной, поэтому ведущая роль в борьбе с ними принадлежит химиотерапевтическим препаратам, в частности антибиотикам, сульфаниламидам, нитрофуранам.

Проблема антибиотикотерапии в интенсивном животноводстве состоит в том, что фармацевтические компании фактически не ведут разработки принципиально новых молекул, как это происходит в медицине. Наиболее успешно эта проблема решается с помощью использования комбинированной антибиотикотерапии.

Нередко комплекс антибактериальных веществ обладает синергидным эффектом, что позволяет снизить дозу препарата или разработать более удобную схему лечения, уменьшив тем самым риск возникновения побочных эффектов.

Известен аналог - препарат "Диарин" - для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка животных, который содержит, мас.%: диоксидин 0,6-0,9, 40%-ная молочная кислота 10,0-15,0, метилурацил 0,6-0,9, вода кипяченая - остальное [RU 2105548 С1, 27.02.1998.].

Известно средство для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных "Диацетин", содержащее антибактериальное средство диоксидин, противовоспалительное и жаропонижающее средство - ацетилсалициловую кислоту, иммуномодулирующее средство тималин и природные цеолиты при следующем соотношении, мас.%: диоксидин - 2,5-5,0, ацетилсалициловая кислота - 25,0-75,0, тималин - 0,5-0,75, цеолиты - до 100 [RU 2075972 C1, 27.03.1997.].

Известен аналог - препарат энроксил - 5% раствор для инъекций представляет собой прозрачный раствор желтого цвета, 1 мл которого содержит 50 мг энрофлоксацина. [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1. / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - M.: Сельхозиздат, 2004. - С.226].

Однако применение этих препаратов не всегда приводит к положительным результатам. С одной стороны, по-видимому, это связано с развитием устойчивости возбудителя заболевания к препаратам. С другой стороны, фармакодинамический спектр изменений, естественно, является более выраженным при парентеральных путях введения, а данные препараты задаются больным животным с кормом или с питьем.

Прототип - гентамицина сульфат 4% - представляет собой смесь нескольких антибиотиков, продуцируемых Micromonospora purpurea. Выпускается в виде стерильного раствора с содержанием 40 мг активного вещества в 1 мл. При лечении колибактериоза у крупного рогатого скота и свиней раствор гентамицина сульфата 4%-ного применяют внутримышечно два раза в сутки с интервалом 10-12 часов соответственно в дозах 3,0 и 4,0 мг/кг массы тела [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1. / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М.: Сельхозиздат, 2004. - С.168-169.].

Известный препарат не всегда достаточно эффективен и приводит к полному выздоровлению всех больных поросят при наличии побочного эффекта (нефро- и ототоксичность).

Сочетанное применение гентамицина и диоксидина обеспечивает повышение эффективности лечения колибактериоза, быстрое выздоровление больных животных, снижение расхода активнодействующих веществ и их побочного действия на организм.

Технический результат - повышение эффективности лечения колибактериоза у сельскохозяйственных животных.

Технический результат достигается использованием препарата, состоящего из следующих компонентов, мас.%:

Гентамицина сульфат - 3,5-4,5,

Диоксидин - 0,5-1,5,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Оптимальным является следующее соотношение компонентов, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,

Диоксидин - 1,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Обоснованность этой комбинации связана с тем, что в лекарственной форме одновременно сочетаются два бактерицидных агента. Это обеспечивает синергидный эффект за счет того, что эти препараты действуют в одну фазу клеточного роста, но на разные метаболические пути.

Диоксидин - препарат хиноксалинового ряда - 1,4-ди-N-окись-2,3-ди (оксиметил) хиноксалин [Червяков Д.К. и др. Лекарственные средства в ветеринарии. - М.: Колос, 1977, С.215]. В основе антибактериального действия диоксидина лежит избирательное подавление синтеза ДНК. Кроме этого, препарат снижает активность внеклеточной нуклеазы и плазмокоагулазы у микроорганизмов, что приводит к нарушению функции генетического аппарата микробной клетки и в результате подавляется биосинтез биологически активных макромолекул, являющихся факторами патогенности.

Гентамицина сульфат - аминогликозид ингибирует бактериальный синтез протеина. Обладает широким спектром антибактериального действия, активен в отношении грамположителькых и грамотрицательных микроорганизмов (стафилококки, клостридии, протеус и др.). Механизм действия гентамицина связывают с нарушением синтеза полипептидов микробной клетки в рибосомах [British Pharmacopoeia, 2000, V.1, p.638].

Основной целью сочетанного применения диоксидина и гентамицина является расширение спектра антибактериального действия, восполнение пробелов в спектре каждого из компонентов комбинации и предупреждение формирования устойчивости микроорганизмов.

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) представляет собой белый кристаллический порошок и кристаллы белого цвета, хорошо растворимые в воде, очень малорастворимые в спирте. Эмпирическая формула C₁₀H₁₄O₈N₂Na₂·2H₂O. Относительная молекулярная масса (по международным атомным массам 1985 г.) - 372,24 [Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия. ГОСТ 10652-73 - М.: ИПК Издательство стандартов, 1999. - 14 с.].

Воду для инъекций получают дистилляцией или осмосом. Является апирогенной, не содержит антимикробных веществ и других добавок, максимально допустимый уровень содержания бактериальных эндотоксинов 0,25 Едэ/мл [Фармакопейная статья ФС 42-2620-97, Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации, Фармакопейный государственный комитет, утверждена 11.03.97. - 4 с.].

Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных перед применением подогревают до 37-38°С. Препарат вводят внутримышечно ежедневно два раза в сутки в дозе 0,1 мл/кг массы тела в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней.

Телятам не рекомендуется вводить в одно место более 5 мл, поросятам - более 2,5 мл препарата. При введении больших объемов дозу разделяют и вводят в разные места. При повторных инъекциях рекомендуется менять место инъекций.

В рекомендуемых дозах препарат не вызывает побочных явлений и осложнений. После инъекций препарата у животных может отмечаться кратковременная болевая реакция и беспокойство.

Не допускается одновременное или последовательное применение препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных с другими ото- и нефротоксическими препаратами (стрептомицином, канамицином, неомицином), а также при тяжелых нарушениях функции почек.

Препарат противопоказан при повышенной чувствительности животных к гентамицину и диоксидину. Убой животных на мясо разрешается не ранее чем через 21 сутки после последнего введения препарата. Мясо животных, вынужденно убитых до истечения указанного срока, может быть использовано для кормления плотоядных животных или для производства мясокостной муки.

Изготавливается препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных следующим образом. Воду для инъекций нагревают в реакторе с контактным термометром и контурным отоплением и охлаждением до температуры (50±5°)С. Затем в реактор вносят последовательно с интервалом в 10 минут соль динатриевую этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водную, диоксидин и гентамицина сульфат. Смешивание проводят при температуре 40±5°С до полного растворения компонентов. Фасовка препарата проводится в боксе, предварительно обработанном в течение 1 часа бактерицидной лампой. Ампулы запаивают, флаконы закрываются резиновой пробкой и герметизируются алюминиевыми колпачками. В процессе фасовки проводится промежуточный контроль на наличие механических включений (визуально невооруженным глазом на черном и белом фонах) и на объем заполнения ампул и флаконов (с помощью калиброванного шприца или цилиндра). Контроль объема заполнения проводится с интервалом: при расфасовке 100-50 мл - через каждые 200 единиц фасовки, при расфасовке 20-10 мл - через каждые 300 единиц фасовки, при расфасовке в ампулы - через каждые 500 единиц фасовки. Объем заполнения флаконов должен быть не менее номинального.

Сущность технического решения поясняется примерами.

Пример 1. Определение оптимального соотношения компонентов в препарате для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, изучение его антимикробных свойств.

Изучены антимикробные свойства препарата. Выявлено оптимальное количественное содержание гентамицина и диоксидина в опытах in vitro и in vivo. В модельных опытах установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия в отношении испытанных культур микроорганизмов.

1.1. Опыты in vitro

Изучение антимикробной активности и соотношения гентамицина и диоксидина в препарате для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных проводилось in vitro методом серийных разведений. В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят и телят, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам. Соотношение гентамицина и диоксидина в препарате для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в следующих комбинациях:

Комбинация 1. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Гентамицина сульфат - 3,5,

Диоксидин - 1,5,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 2. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,

Диоксидин - 1,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 3. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,5,

Диоксидин - 0,5,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Антимикробную активность различных комбинаций состава препарата сравнивали с антимикробной активностью гентамицина и диоксидина.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат.

В качестве жидкой питательной среды применяли мясопептонный бульон. При определении чувствительности стрептококков к среде добавляли 1% глюкозы.

Основной раствор препарата - 1000 мкг/мл (готовили с учетом плотности препарата). Из основного раствора препарата готовили рабочий раствор. Далее в 16 стерильных пробирок разливали по 4,5 мл мясопептонного бульона. В 1 пробирку добавляли 4,5 мл препарата, перемешивали, после чего 4,5 мл полученного раствора переносили в следующую пробирку, продолжая таким образом разведение до 15 пробирки. В качестве контроля роста культуры использовали 16 пробирку, не содержащую препарат.

Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 500 тысяч.

Посевы инкубировали при 37°С в течение 18-20 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1.

В отношении эшерихий по абсолютной массе препарата активность композиции гентамицина с диоксидином при соотношении в процентах 4,0:1,0 практически не изменилась по сравнению с активностью гентамицина, а по сравнению с активностью диоксидина увеличилась в 2-4 раза. Антимикробная активность композиций гентамицина с диоксидином при соотношении в процентах 4,5:0,5 и 3,5:1,5 по сравнению с гентамицином в среднем снизилась соответственно в 1,4 и 2,6 раза, но по сравнению с диоксидином увеличилась в 3,7 и 2 раза. В то же время совместное применение гентамицина и диоксидина позволило снизить МПК для гентамицина до 0,12-1,10 мкг/мл, для диоксидина - до 0,02-0,38 мкг/мл.

Наиболее устойчивой к изученным препаратам оказалась синегнойная палочка. В отношении данного микроорганизма по абсолютной массе препарата активность композиции гентамицина с диоксидином при соотношениях в процентах 4,0:1,0 и 4,5:0,5 не изменилась по сравнению с активностью гентамицина, а по сравнению с активностью диоксидина увеличилась в 2 раза. Антимикробная активность композиций гентамицина с диоксидином при соотношении в процентах 3,5:1,5 по сравнению с гентамицином снизилась в 2 раза, а по сравнению с диоксидином не изменилась. В отношении синегнойной палочки совместное применение гентамицина и диоксидина позволило снизить МПК для гентамицина до 1,0-1,1 мкг/мл, для диоксидина - до 0,13-0,25 мкг/мл.

Таким образом, изучение антимикробной активности сочетаний гентамицина и диоксидина показало наличие синергического действия в отношении изученных патогенных культур.

Таблица 1 Антимикробная активность гентамицина, диоксидина и различных композиций препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных (мкг/мл) Культура микроорганизмов Гентамицин Диоксидин Комбинация 1 Комбинация 2 Комбинация 3 МБсК МБцК МБсК МБцК МБсК МБцК МБсК МБцК МБсК МБцК Escherichia coli 57358 3,12 6,25 25,0 50,0 6,25 12,5 6,25 12,5 3,12 6,25 Escherichia coli O4 6,25 12,5 12,5 25,0 12,5 25,0 6,25 12,5 6,25 12,5 Escherichia coli O139 (п) 12,5 25,0 50,0 100,0 25,0 50,0 6,25 12,5 6,25 12,5 Escherichia coli 866 3,12 6,25 25,0 50,0 12,5 25,0 3,12 6,25 3,12 6,25 Escherichia coli O(III) (п) 6,25 12,5 50,0 100,0 25,0 50,0 12,5 25,0 25,0 50,0 Pseudomonas aeruginosa 25,0 50,0 50,0 200,0 50,0 100,0 25,0 50,0 25,0 50,0

1.2. Опыты in vivo

Определение эффективности гентамицина и диоксидина, а также этих компонентов в различных соотношениях проводили в модельных опытах при экспериментальном заражении белых мышей Salmonella cholerae suis 434/9 (2,25 млн. м.к./мышь), Escherichia coli 57358 (2,5 млрд. м.к./мышь).

Эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г (400 гол.), разведения вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии. Животные содержались в условиях вивария при 20-22°С и влажности 40-60%. Содержание животных и обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям Международной конвенции.

Группы животных формировали по принципу парных аналогов по 16 голов в каждой, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Животные контрольных групп лечению не подвергались. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 10 дней, учитывали заболеваемость, гибель, сроки выздоровления. Специфичность гибели определяли бактериологическим методом выделения исходных культур микроорганизмов.

Заражение животных проводили внутрибрюшинно смывом суточных агаровых культур возбудителей. Разведения культур делали на стерильном физиологическом растворе. Концентрацию микробных клеток определяли по стандарту мутности.

Лечение мышей начинали через 6 часов после заражения. Препараты вводили 2 раза в сутки внутримышечно.

О терапевтической эффективности подобранных комбинаций препаратов судили по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мыше-дней для каждой группы через 10 дней после инфицирования (см. таблицу 2).

С учетом полученных результатов в опытах in vitro в опытах in vivo испытывались две комбинации гентамицина с диоксидином:

Комбинация 1. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,

Диоксидин - 1,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 2. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,5,

Диоксидин - 0,5,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Таблица 2 Терапевтическая активность гентамицина и диоксидина и их комбинаций при экспериментальном заражении белых мышей Микроорганизм-возбудитель Препарат Доза, мкг/мышь Кол-во мышей в группе Пало, гол. Выжило Мыше-дни жизни Гол. % Salmonella cholerae suis 434/9 (2,25 млн. м.к./мышь) Контроль - 16 16 0 0 51 Гентамицин 80,0 16 4 12 75,0 147 Диоксидин 20,0 16 6 10 62,5 131 Комбинация 1 80,0+20,0 16 2 14 87,5 155 Комбинация 2 90,0+10,0 16 2 14 87,5 157 Escherichia coli 57358
(2,5 млрд. м.к./мышь) Контроль - 16 16 0 0 50 Гентамицин 80,0 16 7 9 56,3 138 Диоксидин 20,0 16 7 9 56,3 120 Комбинация 1 80,0+20,0 16 4 12 75,0 150 Комбинация 2 90,0+10,0 16 4 12 75,0 146

Как видно из данных, представленных в таблице 2, лечение экспериментальных инфекций гентамицином в дозе 80 мкг/мышь малоэффективно (эффективность препарата 56,3-81,3%). Лечение экспериментальных инфекций, вызванных Salmonella cholerae suis 434/9, Escherichia coli 57358 диоксидином в дозе 20 мкг/мышь также малоэффективно (эффективность препарата 56,3-62,5%).

При экспериментальном заражении мышей Salmonella cholerae suis 434/9 лечение препаратом для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в дозах 80+20 и 90+10 мкг/мышь обеспечило сохранность животных в пределах 87,5%, что было выше на 12,5-25% по сравнению с гентамицином и на 25-68,7% с диоксидином.

Эффективность комплексов гентамицина и диоксидина в дозах 80+20 и 90+10 мкг/мышь при лечении белых мышей, зараженных Escherichia coli 57358, была выше на 18,7% по сравнению с раздельным применением диоксидина и гентамицина.

Также отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни белых мышей в зависимости от микроорганизма-возбудителя на 8-70 дней в группах, подвергнутых лечению препаратом для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

Проведенные исследования показали, что препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

В результате изучения антимикробного действия гентамицина в сочетании с диоксидином в опытах in vivo и in vitro установлено, что эти препараты обладают взаимоусиливающим действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов. Использование комплексов гентамицина и диоксидина обеспечило сохранность животных от 75 до 100% в зависимости от микроорганизма-возбудителя.

Пример 2. Изучение эффективности лечения колибактериоза у телят.

Изучение проведено в четырех опытах на телятах 1-10-дневного возраста весом 30-40 кг. По принципу парных аналогов животные были разделены на две группы.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, бактериологического исследования (выделены Е.coli различных серологических вариантов), патологоанатомического вскрытия, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

За животными вели ежедневное клиническое наблюдение в течение 10-15 дней, при этом учитывали общее состояние, падеж, скорость роста, сроки выздоровления.

В опытах 1, 2, 3 телят контрольной группы лечили раствором гентамицина сульфата 4%, который вводили внутримышечно в дозе 3 мг/кг живой массы два раза в сутки в течение 3-5 дней. В четвертом опыте телят контрольной группы лечили энроксилом 5% производства фирмы «KRKA» (Словения), который вводили подкожно в дозе 1 мл/20 кг массы тела 1 раз в сутки в течение 3-5 дней.

Животным опытной группы для лечения применяли препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,

Диоксидин - 1,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Препарат вводили внутримышечно в дозе 1 мл/10 кг массы тела с интервалом 12 часов в течение 2-3 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 3-5 дней.

Первый опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза телят проведен в ОАО «Юбилейное» Хохольского района Воронежской области в марте - мае 2004.

Второй опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза телят проведен в ОАО «Юбилейное» Хохольского района Воронежской области в январе - марте 2005 года.

Третий опыт по изучению эффективности парентерального применения для лечения колибактериоза у телят проведен в ООО «Новая деревня» Липецкого района Липецкой области в апреле - мае 2004 года.

Четвертый опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза у телят проведен в СПК «Староникольский» Хохольского района Воронежской области в феврале 2007 года.

Результаты опытов представлены в таблицах 3-6.

Таблица 3 Эффективность лечения колибактериоза в ОАО «Юбилейное» Хохольского района Воронежской области (1-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 93 97 Выздоровело, голов 78 92 % 83,9 94,9 Пало, голов 2 2 % 2,2 2,0 Остались больными, голов 13 3 % 13,9 3,1 Сроки выздоровления, дней 4,0±0,5 3,4±0,4 Терапевтическая эффективность, % 83,9 94,9 Таблица 4 Эффективность лечения колибактериоза в ОАО «Юбилейное» Хохольского района Воронежской области (2-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 80 82 Выздоровело, голов 68 75 % 85,0 91,5 Пало, голов 4 2 % 5,0 2,4 Остались больными, голов 8 5 % 10,0 6,1 Сроки выздоровления, дней 4,4±0,3 3,6±0,3 Терапевтическая эффективность, % 85,0 91,5

Таблица 5 Эффективность лечения колибактериоза телят в ООО «Новая деревня» Липецкого района Липецкой области (3-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 58 63 Выздоровело, голов 48 59 % 82,8 93,6 Пало, голов 2 1 % 3,4 1,6 Остались больными, голов 8 3 % 13,8 4,8 Сроки выздоровления, дней 4,3±0,5 3,9±0,3 Терапевтическая эффективность, % 82,8 93,6 Таблица 6 Эффективность лечения колибактериоза в СПК «Староникольский» Хохольского района Воронежской области (4-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 11 19 Выздоровело, голов 10 19 % 91,0 100,0 Пало, голов 1 0 % 9,0 0 Остались больными, голов 0 0 % 0 0 Сроки выздоровления, дней 6,2±0,3 5,1±0,2 Терапевтическая эффективность, % 91,0 100,0

Проведенные исследования показали, что препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении колибактериоза у телят (в среднем она составила 93,3%), что на 9,4% выше эффективности раствора гентамицина сульфата 4%, и на 9,0% - выше энроксила 5% (четвертый опыт). По сравнению с контрольными группами при применении препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных снизился падеж животных в среднем 3,3 раза, уменьшился срок выздоровления в среднем на 14,9%.

Пример 3. Изучение эффективности лечения колибактериоза у поросят.

Изучение проведено в трех опытах на поросятах 2-10-дневного возраста весом 2,5-3,5 кг. По принципу парных аналогов животные были разделены на две группы с учетом общего состояния и тяжести заболевания и находящихся в одинаковых условиях кормления и содержания.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, результатов бактериологического исследования (выделены Escherichia coli различных серологических вариантов), патологоанатомического вскрытия, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

За животными вели ежедневное клиническое наблюдение в течение 10-15 дней, при этом учитывали общее состояние, падеж, скорость роста, сроки выздоровления.

Поросят контрольной группы лечили раствором гентамицина сульфата 4%, который вводили внутримышечно в дозе 4 мг/кг живой массы два раза в сутки в течение 3-5 дней.

Животным опытной группы для лечения применяли препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Гентамицина сульфат - 4,

Диоксидин - 1,

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01,

Вода для инъекций - до 100%.

Препарат вводили внутримышечно в дозе 1 мл/10 кг массы тела с интервалом 12 часов в течение 2-3 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 3-5 дней.

Первый опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза поросят проведены в СХА «Начало» Россошанского района Воронежской области в сентябре - октябре 2004 года. Второй опыт проведен в СХА «Начало» Россошанского района Воронежской области в январе - феврале 2005 года.

Третий опыт проведен ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» Ливенского района Орловской области в феврале - марте 2007 года.

Результаты опытов по изучению эффективности лечения колибактериоза у поросят представлены в таблице 7-9.

Таблица 7 Эффективность лечения колибактериоза у поросят в СХА «Начало» Россошанского района Воронежской области Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 93 106 Выздоровело, голов 81 99 % 87,1 93,4 Пало, голов 4 3 % 4,3 2,8 Остались больными, голов 8 4 % 8,6 3,8 Сроки выздоровления, дней 4,9±0,6 4,5±0,6 Терапевтическая эффективность, % 87,1 93,4 Таблица 8 Эффективность лечения колибактериоза у поросят в СХА «Начало» Россошанского района Воронежской области Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 76 98 Выздоровело, голов 67 95 % 88,2 96,9 Пало, голов 2 1 % 2,6 1,0 Остались больными, голов 7 2 % 9,2 2,0 Сроки выздоровления, дней 5,7±0,6 4,1±0,6 Терапевтическая эффективность, % 88,2 96,9

Таблица 9 Эффективность лечения колибактериоза у поросят в ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» Ливенского района Орловской области Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 53 56 Выздоровело, голов 53 56 % 100,0 100,0 Пало, голов 0 0 % 0 0 Остались больными, голов 0 0 % 0 0 Сроки выздоровления, дней 4,9±0,2 3,9±0,3 Терапевтическая эффективность, % 100,0 100,0 Среднесуточный прирост массы тела, г 73,5±4,2 104,0±4,03

Как показали проведенные исследования, препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении колибактериоза у поросят (в среднем 96,8%). Во всех опытах при применении препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных по сравнению с контрольными группами сократились сроки выздоровления на 0,4-1,6 дня, падеж животных уменьшился в 1,5 раза.

Пример 4. Токсикологическая безопасность препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

Согласно существующему положению о лекарственных средствах, предназначенных для лечения животных, проведено экспериментальное доклиническое изучение общей фармакологической активности и токсикологических свойств препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

При проведении исследований использовали фармакологические, токсикологические, биохимические, патоморфологические методы исследования, применяемые для изучения лекарственных средств, получившие апробацию в научно-исследовательской практике.

Эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г (191 гол.) и белых крысах с массой тела 200-225 г (132 гол.), разведения вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии. Животные содержались в условиях вивария при 20-22°С и влажности 40-60%. Содержание животных и обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям Международной конвенции.

Определение параметров токсичности препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в остром опыте проведены при однократном пероральном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении на двух видах лабораторных животных - белые мыши и белые крысы.

Группы животных формировали по принципу парных аналогов, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 12 часов.

Наблюдение за животными проводили непрерывно на протяжении первого дня после введения препарата. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение животных, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, шерстного покрова, поедание корма, потребление воды. Особое внимание уделяли развитию признаков токсикоза, оценивали их тяжесть, продолжительность, время выздоровления или гибели животных.

В первой серии опытов острая токсичность препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных испытана при пероральном способе введения. Препарат вводили однократно внутрь в дозах от 5000,0 до 50000,0 мг/кг массы тела в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл на крысу (дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения). Высшие дозы для белых мышей и белых крыс свыше 25000 мг/кг вводили в два приема, по половине дозы с интервалом 2 часа. Объем раствора препарата, вводимого животным, доводили до необходимого объема, добавлением к препарату воды для инъекций. Гибели животных при введении препарата в изученных дозах за весь период наблюдения за животными (14 дней) не отмечено. Препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества [ГОСТ 12.1.007-76].

Во второй и третьей серии опытов по изучению острой токсичности препарата испытывали дозы от 4000,0 до 10000,0 мг/кг (мыши) и от 4500,0 до 12000,0 мг/кг (крысы) при внутрибрюшинном введении и при внутримышечном введении - от 4500,0 до 10500,0 мг/кг (мыши) и от 4500,0 до 12000,0 мг/кг (крысы).

На основании результатов токсикометрических исследований были получены следующие параметры острой токсичности препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, которые представлены в таблице 10.

Таблица 10 Параметры острой токсичности препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных при однократном парентеральном введении для лабораторных животных (мг/кг) Вид животных Параметры токсичности SLD₅₀ МПД LD₁₆ LD₅₀ LD₈₄ LD₁₀₀ Внутрибрюшинное введение Белые мыши 4000,0 5650,0 7177,8 (6090-8260) 7610,0 10000,0 ±529,6 Белые крысы 4500,0 5770,0 8810,0 7250-10400 8610,0 12000,0 ±750,2 Внутримышечное введение Белые мыши 4500,0 5643,3 7078,3 (6310-7850) 8409,6 10500,0 ±375,5 Белые крысы 4500,0 6021,2 8249,6 (6950-9550) 10479,2 12000,0 ±629,6

Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс как при внутрибрюшинном, так и при внутримышечном введении сопровождались непродолжительным периодом возбуждения с усилением двигательной активности у большинства особей. У крыс отмечалась агрессивность. За непродолжительным периодом возбуждения развивалось резко выраженное угнетение, состояние глубокого сна, переходящее затем в кому. Животные не реагировали на световой и тактильный раздражители. К моменту гибели животных отмечалось учащенное дыхание и сердцебиение. Дыхание часто становилось поверхностным, прерывистым, развивалась синюшность кожи и слизистых оболочек. Смерть, как правило, наступала в состоянии глубокого угнетения.

В подостром опыте, который проводили на белых крысах-самцах с массой тела 160-180 г при внутримышечном введении препарата в течение 21 дня, установлено, что многократное внутримышечное введение препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в дозах 0,16 мл/кг; 0,40 мл/кг и 0,80 мл/кг массы тела (1/50; 1/20; 1/10 дозы от LD₅₀, установленной в опыте по изучению острой токсичности), не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп как в период применения препарата, так и в течение одной недели после окончания применения препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных оставались в пределах физиологической нормы. Также не было отмечено случаев гибели животных.

За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, у них не отмечалось нарушение аппетита, были сохранены рефлексы.

Установлено, что препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных оказывает влияние на интенсивность роста животных. В то же время прослеживается зависимость этого эффекта от вводимой дозы препарата. Так, в дозе 0,16 мл/кг препарат стимулирует рост животных в среднем на 6,7%. В течение курса введения препарата подопытные животные, которым вводили препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в дозе 0,4 мл/кг, не отличались от контрольных по приросту массы тела и в конце эксперимента статистически достоверных различий по этому показателю не было обнаружено.

У крыс, которым препарат вводили внутримышечно в дозе 0,80 мл/кг массы тела, на протяжении всего опыта отмечали снижение прироста массы тела по отношению к контролю, что свидетельствует о токсическом действии препарата. Однако через 10 суток после последнего введения препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных среднесуточный прирост массы тела крыс приближается к среднесуточному приросту массы тела контрольных животных (см. таблицу 11).

Таблица 11 Морфологические показатели крови белых крыс при многократном внутримышечном применении препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных Показатели Контроль Дозы препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, мл/кг 0,16 0,40 0,80 Через 14 дней Эритроциты, 10¹²/л 5,4+0,38 5,7±0,42 5,5±0,44 5,4±0,51 Лейкоциты, 10⁹/л 7,0+0,41 7,5±0,83 6,8±0,67 5,9±0,23* Гемоглобин, г/л 127,7±1,26 131,9±9,11 129,9±2,65 114,9±8,84 СОЭ, мм/час 3,00±0,16 3,00±0,58 2,67±0,33 1,97±0,33* Нейтрофилы, % Палочкоядерные 3,3±0,88 3,0±0,50 3,2±0,33 3,7±0,58 Сегментоядерные 24,6±0,88 24,6±1,20 27,3±6,17 27,1±1,04 Эозинофилы, % 1,7±0,12 2,0±0,33 3,0±1,04 2,7±0,67 Базофилы, % - - - - Лимфоциты, % 68,8±1,18 68,9+1,45 65,4±9,54 65,7±1,67 Моноциты, % 1,57±0,33 1,48±0,41 1,43±0,63 0,67±0,13* Через 21 день Эритроциты, 10¹²/л 5,1±0,19 5,3±0,27 5,0±0,36 5,0±0,43 Лейкоциты,10 /л 7,8±1,02 8,3±0,64 9,9±0,23 6,9±0,67 Гемоглобин, г/л 135,1±7,97 135,3±5,52 131,4±5,17 126,4±8,39 СОЭ, мм/час 3,05±0,24 3,00±0,19 2,87±0,35 1,81±0,11* Нейтрофилы, % Палочкоядерные 2,7±0,67 2,4±0,35 2,3±0,43 5,3±0,38* Сегментоядерные 22,6±3,33 22,7±1,74 24,6±4,67 30,1±4,03* Эозинофилы, % 1,6±0,17 2,0±0,09 2,0±0,24 4,0±1,03* Базофилы, % - - - - Лимфоциты, % 71,7±1,76 72,0±2,71 69,9±4,81 60,1±3,06* Моноциты, % 1,33±0,27 1,33±0,33 1,27±0,21 0,56±0,12* * - Р<0,05-0,001 по сравнению с контролем

При исследовании крови животных, которым вводили препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в дозах 0,16 и 0,40 мл/кг массы тела, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови, и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы (таблицы 12, 13 и 14).

Таблица 12 Биохимические показатели крови белых крыс при многократном внутримышечном введении препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных Показатели Контроль Дозы препарата, мл/кг 0,16 0,40 0,80 Через 14 дней Общий белок, г/л 66,7±2,29 62,3±3,08 62,5±4,83 58,8±0,73* Альбумины, г/л 37,0±1,39 40,4±3,58 37,9±1,53 36,1±4,11 Мочевина, мМ/л 3,77±0,34 3,12±1,09 3,36±0,40 4,99±0,39* Глюкоза, мМ/л 7,01±0,79 6,54±0,43 6,71±0,91 7,23±0,15 Холестерин, мМ/л 1,45±0,21 1,27±0,12 1,16±0,06 1,50±0,37 АсАТ, Ед/л 82,6±0,62 83,8±8,97 79,4±3,27 104,6±9,11* АлАТ, Ед/л 56,5±4,26 61,1±6,71 67,2±2,68 93,9±8,17* Креатинин, мкмоль/л 63,0±2,92 68,4±4,65 72,5±5,79 86,5±4,65* ЩФ, Ед/л 133,0±9,9 146,4±10,2 111,1±8,03 124,2±9,24 Билирубин, мкмоль/л 4,23±0,29 3,45±0,86 4,32±0,51 5,09±0,34 β-липопротеиды, г/л 5,12±0,14 4,99±0,12 4,87±0,16 5,15±0,58 Через 21 день Общий белок, г/л 66,5±2,87 63,7±0,67 67,8±4,94 56,0±1,07* Альбумины, г/л 35,9±1,16 38,1±1,64 39,0±0,53 39,9±1,79 Мочевина, мМ/л 4,09±0,23 4,92±0,73 4,74±0,68 5,87±0,21* Глюкоза, мМ/л 5,79±0,30 4,79±0,48 4,37±0,23 5,39±0,62 Холестерин, мМ/л 0,84±0,18 0,78±0,03 0,90±0,14 1,00±0,17 АсАТ, Ед/л 116,8±11,8 106,2±6,85 100,9±5,18 150,2±3,43* АлАТ, Ед/л 63,7±11,3 72,4±11,4 70,8±9,11 105,0±12,7* Креатинин, мкмоль/л 61,8±4,19 64,2±2,42 б7,8±5,62 81,0±0,79* ЩФ, Ед/л 85,1±15,6 75,4±14,6 81,3±7,40 80,7±7,91 Билирубин, мкмоль/л 4,66±0,15 3,11±0,52 3,63±0,47 5,18±0,24 β-липопротеиды, г/л 5,07±0,18 5,31±0,27 5,24±0,21 6,48±0,54* * - Р<0,05-0,001 по сравнению с контролем

Наиболее характерным изменением в составе крови крыс, которым вводили препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в дозе 0,80 мл/кг, была отчетливая моноцитопения, выявленная на 14 и 21 дни опыта. У опытных крыс после 21-дневного введения препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в наивысшей дозе (0,80 мл/кг) выявлено незначительное, но достоверно значимое уменьшение количества лейкоцитов, СОЭ, лимфоцитов, а также увеличение количества палочкоядерных и сегментоядерных лейкоцитов, эозинофилов. Следует отметить, что через 10 дней после последнего введения препарата данные показатели у опытных животных восстанавливались до физиологических значений.

При увеличении дозы препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных (0,80 мл/кг) отмечалась устойчивая тенденция к более напряженному функционированию выделительной системы и печени. При 21 - дневном внутримышечном введении препарата в дозе 0,80 мл/кг массы тела у крыс опытной группы достоверно возрастало содержание в сыворотке крови креатинина - на 31,1%, мочевины - на 43,5%, активность АлАТ, АсАТ - на 64,8 и 28,6% соответственно и уровень билирубина на 27,8%. Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида животных. Через 10 дней после последнего введения препарата данные показатели у опытных животных восстанавливались до физиологических значений.

Изучение кумулятивной способности препарата по методу Лима показало, что дробное введение препарата белым крысам в возрастающих дозах в первые четыре периода не влияло на прирост массы тела животных по сравнению с контрольной группой. К началу 6 периода (0,75 ЛД₅₀) отмечено снижение интенсивности роста животных, которая продолжалась до конца опыта. Суммарная доза, при которой было отмечено начало падежа животных, составила 55,63 мл/кг массы тела. При дальнейшем введении препарата гибель белых крыс продолжалась до 26 дня от начала опыта. На 28 день отмечена 40% гибель опытных животных. За время проведения опыта погибло 40% животных (к концу опыта в живых осталось 6 из 10 голов). В связи с отсутствием гибели 50% подопытных крыс коэффициент кумуляции рассчитать было невозможно. Но учитывая, что введенные дозы составляют 12,7 ЛД₅₀, то возможный коэффициент кумуляции превышает 12. Это свидетельствует об отсутствии кумулятивного эффекта у препарата.

При изучении субхронической токсичности препарата в дозах 0,1 и 0,5 мл/кг массы тела в течение 14 дней с интервалом между введениями 12 часов, проведенного на поросятах и телятах, установлено, что его внутримышечное введение в изученных дозах не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В период всего опыта как поросята, так и телята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Препарат в различных дозах не снижал скорости роста животных.

При многократном применении препарата морфологические и биохимические показатели крови существенно не отличались от показателей у животных контрольной группы.

Таблица 13 Показатели крови клинически здоровых поросят при внутримышечном применении препарата Показатели Фон Дозы, мл/кг Контроль 0,1 0,5 Эритроциты, 10¹²/л 5,9±0,21 6,0±0,30 5,9±0,55 6,2±0,32 Лейкоциты, 10⁹/л 8,9±1,04 9,2±0,19 9,0±0,87 9,6±1,31 Гемоглобин, г/л 107,9±9,1 112,1±4,2 112,9±8,3 106,7±4,5 Общий белок, г/л 63,6+3,19 65,1±2,73 65,9±6,27 61,2±4,26 Мочевина, мМ/л 3,88±0,б8 4,03±0,70 4,00±0,56 4,57±0,64* Глюкоза, мМ/л 4,67±0,23 4,95±0,39 4,87±0,17 4,91±0,45 Общие липиды, г/л 4,14±0,59 4,07±0,64 4,22±0,43 4,11±0,23 АсАТ, Ед/л 49,1±6,17 46,9±4,38 47,6±7,02 51,4±3,49 АлАТ, Ед/л 34,8±4,18 39,3±2,29 33,5±3,76 38,7±4,19 Креатинин, мкмоль/л 81,9±9,13 77,8±10,1 80,1±6,26 91,9±3,88* Билирубин, мкмоль/л 1,42±0,04 1,57±0,11 1,49±0,10 1,78±0,26 Нейтрофилы, % Палочкоядерные 3,0±0,24 2,9±0,36 3,0±0,35 3,1±0,30 Сегментоядерные 37,6±4,51 36,5±3,67 36,1±5,62 37,0±4,22 Эозинофилы, % 1,3±0,11 1,2±0,31 1,3±0,28 1,5±0,40 Базофилы, % 0,2±0,06 0,2±0,05 0,1±0,05 - Моноциты, % 3,6±1,00 3,7±0,13 3,6±0,44 3,8±1,00 Лимфоциты, % 54,3±7,19 55,5±6,29 55,9±4,17 54,6±4,77 * - Р<0,05-0,001

Таблица 14 Показатели крови клинически здоровых телят при внутримышечном применении препарата Показатели Фон Контроль Дозы, мл/кг 0,1 0,5 Эритроциты, 10¹²/л 6,5±0,44 6,4±0,31 6,6±0,16 6,1±0,52 Лейкоциты, 10⁹/л 10,6±3,97 11,1±5,01 10,8±4,13 11,0±4,56 Гемоглобин, г/л 104,8±9,16 103,1±7,12 110,0±6,04 101,1±9,17 Гематокрит, % 36,0±3,15 36,2±0,99 37,1±2,27 36,0±5,07 Общий белок, г/л 64,6±2,17 65,0±0,08 66,7±1,54 63,1±3,32 Альбумины, г/л 33,8±4,32 34,1±5,17 33,9±6,27 33,1±2,98 Глобулины, % α 10,1±2,19 9,8±1,08 10,0±2,31 9,7±1,83 β 11,1±3,07 11,0±2,15 10,8±1,06 10,5±2,11 γ 9,2±1,45 9,1±3,31 9,1±2,64 9,3±1,03 Фосфор неорг., мМ/л 1,56±0,13 1,47±0,43 2,06±0,19 1,68±0,26 Мочевина, мМ/л 4,15±0,24 4,27±0,11 4,99±0,57 5,44±0,36* Глюкоза, мМ/л 4,11±0,12 4,03±0,09 3,67±0,21 4,22±0,11 Общие липиды, г/л 2,31±0,48 2,16±0,17 1,87±0,08 1,93±0,16 Холестерин, мМ/л 1,21±0,19 1,18±0,21 0,99±0,16 1,14±0,12 АсАТ, ЕД/л 39,4±3,76 36,1±5,04 40,2±4,09 52,8±4,84 АлАТ, ЕД /л 74,5±3,52 76,1±5,99 79,6±7,81 85,0±6,68 Креатинин, мкМ/л 101,2±4,87 109,4±5,54 106,6±4,48 130,3±5,86 Билирубин, мкМ/л 2,38±0,07 2,42±0,24 2,23±0,09 3,26±0,24 Нейтрофилы, %
Палочкоядерные 7,1±1,02 6,8±0,77 7,2±0,92 7,1±1,12 Сегментоядерные 28,1±3,01 22,3±2,56 22,6±5,16 23,4±2,87 Эозинофилы, % 2,1±0,11 1,9±0,15 2,2±0,21 2,1±0,24 Базофилы, % 0,4±0,05 0,4±0,06 0,5±0,10 0,4±0,10 Моноциты, % 1,1±0,20 1,2±0,46 1,3±0,36 1,1±0,16 Лимфоциты, % 61,1±5,86 67,4±9,01 66,2±6,13 65,9±7,81 * - Р<0,05 по отношению к контролю

Исключение составляли показатели, характеризующие функциональное состояние печени и почек. Повышение до верхних границ нормы в сыворотке крови мочевины, креатинина, а также незначительное увеличение количества билирубина и активности АсАТ свидетельствуют о возросшей нагрузке на эти органы.

Полученные в опытах in vitro результаты (таблица 1) свидетельствуют о низкой чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к диоксидину. Минимальная подавляющая концентрация которого составила 25,0-100,0 мкг/мл. Для Pseudomonas aeruginosa - 200,0 мкг/мл. Низкую активность диоксидина в отношении грамотрицательных микроорганизмов компенсирует второй компонент препарата - гентамицин. В наших исследованиях МПК гентамицина находилась в диапазоне 6,25-25,0 мкг/мл, причем наибольшей активностью антибиотик обладал в отношении музейных штаммов (6,25-12,5 мкг/мл).

При изучении антибактериального эффекта сочетания гентамицина и диоксидина in vitro нами было установлено, что минимальная подавляющая концентрация каждого из антибиотиков в присутствии другого снижается в значительной степени. Например, в присутствии гентамицина в концентрациях 0,56-0,88 мкг/мл МПК диоксидина в отношении Escherichia coli 04 снижается до 0,13 мкг/мл (в 190 раз). И наоборот, наличие в комбинации диоксидина в концентрациях 0,06-0,38 мкг/мл снижает МПК гентамицина до 0,5 мкг/мл (в 25 раз).

При добавлении к диоксидину гентамицина в концентрации 2,0 мкг/мл МПК первого в отношении Pseudomonas aeruginosa снижается до 10,0 мкг/мл (в 20 раз). В то же время присутствие диоксидина в концентрации 0,5 мкг/мл в отношении данного микроорганизма снижает МПК гентамицина до 40,0 мкг/мл (в 1,3 раза).

Обоснованность этой комбинации связана с тем, что в лекарственной форме одновременно сочетаются два бактерицидных агента. Это обеспечивает синергидный эффект за счет того, что оба компонента действуют в одну фазу клеточного роста, но на разные метаболические пути.

Диоксидин активен в отношении грамотрицательных и грамположительных патогенных и условнопатогенных аэробных и анаэробных микроорганизмов. В основе антибактериального действия диоксидина лежит избирательное подавление синтеза ДНК. Кроме этого препарат снижает активность внеклеточной нуклеазы и плазмокоагулазы у микроорганизмов, что приводит к нарушению функции генетического аппарата микробной клетки и в результате подавляется биосинтез биологически активных макромолекул, являющихся факторами патогенности.

Гентамицин действует на многие аэробные грамотрицательные микроорганизмы и на часть грамположительных, т.ч. стафилококков, эшерихий, синегнойной палочки, клостридии, протеуса. Механизм действия гентамицина связывают с нарушением синтеза полипептидов микробной клетки в рибосомах, нарушая тем самым синтез микробных оболочек, что приводит к гибели бактериальных клеток.

Таким образом, установленное взаимоусиливающее действие комбинации гентамицина и диоксидина в отношении изученных этиологически значимых в развитии колибактериоза микроорганизмов, а также расширение спектра антибактериальной активности при их совместном применении позволили включить эти активнодействующие вещества в состав комплексного препарата.

Таким образом, проведенные испытания препарата для лечения колибактериоза у поросят и телят показали, что он обладает широким спектром антимикробного действия, выраженным лечебным действием при колибактериозе у поросят и телят, является малотоксичным. Применение препарата технологично и экономически выгодно.

Изобретение относится к области ветеринарии. Препарат состоит из следующих компонентов, мас.%: гентамицина сульфат - 3,5-4,5, диоксидин - 0,5-1,5, соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная - 0,01, вода для инъекций - до 100. Препарат перед применением подогревают до 37-38°С и вводят внутримышечно ежедневно два раза в сутки в дозе 0,1 мл/кг массы тела в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения колибактериоза, быстрое выздоровление больных животных, снижение расхода активнодействующих веществ и их побочного действия на организм. 14 табл.

Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, содержащий диоксидин, отличающийся тем, что дополнительно содержит гентамицина сульфат, соль динатриевую этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водную, воду для инъекций при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Гентамицина сульфат 3,5-4,5 Диоксидин 0,5-1,5 Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'   -тетрауксусной кислоты 2-водная 0,01 Вода для инъекций до 100%