ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОЛИБАКТЕРИОЗА У МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/18 A61K31/105 A61K31/63 A61K31/64 A61P1/00 A61P1/14 

Изобретение относится к области ветеринарии.

В настоящее одной из ведущих проблем являются заболевания молодняка сельскохозяйственных животных, проявляющиеся с синдромом диареи и устойчиво занимают лидирующее место среди всех бактериальных инфекций, регистрируются во всех странах и по экономическому ущербу, наносимому животноводству занимают второе место в мире.

Желудочно-кишечные болезни телят наносят огромный ущерб животноводству вследствие высокой заболеваемости и падежа (до 100%), затрат на лечебные мероприятия, снижения продуктивных качеств и племенной ценности животных.

В комплексе мероприятий по борьбе с желудочно-кишечными болезнями бактериальной этиологии у молодняка сельскохозяйственных животных широкое применение нашли такие химиотерапевтические средства: сульфаниламиды, антибиотики, нитрофураны, но лучший эффект достигается при применении комплексных препаратов.

Известно, что широкий спектр антимикробной активности препаратов, как правило, достигается путем комбинирования нескольких лекарственных препаратов. При этом сочетание химических структур в композиции позволяет достичь их синергидного эффекта, что позволяет снизить дозу препарата и тем самым уменьшить риск возникновения побочных эффектов или получить препараты с новыми полезными свойствами.

Известен аналог - антибактериальный препарат "Сульф Гранулят" для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка животных, который содержит, мас.%: Сульфадиазин 10,0, Триметоприм 2,0, остальное - вспомогательное вещество [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.I / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А, Архипов. - М: Сельхозиздат, 2004. - С.240].

Также известно средство для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных "Тримеразин", содержащие в своем составе антибактериальные средства мас.%: Сульфамеразин 10,0, Триметоприм 2,0, остальное - вспомогательное вещество [Справочник в 2 томах. Т.I / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М: Сельхозиздат, 2004. - С.241].

Применение этих препаратов не всегда дает положительный терапевтический эффект. Это может быть связано с развитием резистентности у возбудителей заболевания к данным препаратам.

Прототипом изобретения является препарат "Триметин", содержащий, мас.%: Сульфаметоксазол 10,0, Триметоприм 2,0, остальное - вспомогательное вещество [Справочник в 2 томах. Т.I / И.Ф. Кленова, К.Л. Мальцев, Н.А. Яременко, И.А, Архипов. - М: Сельхозиздат, 2004. - С.241].

Данный препарат не всегда достаточно эффективен и приводит к неполному выздоровлению телят и поросят.

Так как фармакодинамический спектр у данного препарата менее выражен, что приводит к снижению эффективности и в результате к неполному выздоровлению телят и поросят.

Технический результат - повышение эффективности лечения колибактериоза у сельскохозяйственных животных.

Технический результат достигается использованием препарата, состоящего из следующих компонентов, мас.%:

Сульфадимезин - 11,5-15

Триметоприм - 2,0-3,6

Колистин - 2,0-3,5

Глюкоза - до 100%

Оптимальным является следующее соотношение компонентов, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 2,4

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100.

Обоснование данной комбинации связано с тем, что одновременно сочетаются три антимикробных препарата с различным механизмом действия, а это в свою очередь обеспечивает синергидный эффект.

Совместное использование сульфадимезина с триметопримом вызывает бактерицидный эффект и усиливается антибактериальный эффект колистина совместно с этой композицией, что обеспечивает быстрое выздоровление, снижение расхода активнодействующих веществ и их побочного действия.

Сульфадимезин - 2-(пара-Аминобензол-сульфамидо)-4,6-диметалпиримидин. В силу структурного сходств молекулы парааминобензойной кислоты и сульфаниламидов последние способны вытеснять ПАБК из ферментных систем микроорганизма. Под его действием в микробной клетке нарушается синтез метионина, пуриновых и пиримидиновых оснований, что в свою очередь приводит к нарушению синтеза нуклеиновых кислот и нуклеопротеидов. Также препятствует синтезу дигидрофолиевой кислоты в микроорганизме из глютаминовой и параминобензойной кислот. [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 12-е издание. М.: Медгиз, 1999. - 326 с.]

Триметоприм - является конкурентным ингибитором дигидрофолатредуктазы и нарушает один из этапов синтеза нуклеиновых кислот - образование тетрагидрофолиевой кислоты из дигидрофолиевой [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 12-е издание. М.: Медгиз 1999. - 335 с.]

Колистин (полимиксин Е) оказывает прямое действие на цитоплазматическую мембрану микроорганизмов, адсорбируясь на ее фосфолипидных компонентах, что способствует нарушению ее проницаемости и выходу в среду водорастворимых компонентов цитоплазмы [Щетинин Е.В. Полимиксины - новый взгляд на известные антибиотики. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. №3. том 2. 2000, 68-73 с.].

Глюкоза является источником легко усвояемого организмом энергетического материала, повышающего сопротивляемость организма и улучшающего его функции. Глюкоза - химическая формула

Представляет собой белый порошок. Очень легко растворимые бесцветные кристаллы или белый мелкокристаллический порошок без запаха, сладкий на вкус. Растворим в воде (1:1,5), труднорастворим в спирте. Растворы стерилизуют при температуре +100°С в течение 60 минут или при температуре +119, +121°С в течение 5-7 минут: pH растворов 3,0-4,0 [Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух частях. Ч.II. - 12-е изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 1994. - С.219-220].

Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных перед применением растворяют в теплой воде, молозиве температурой 35-37^оС или скармливают с кормом. Препарат применяют ежедневно два раза в сутки в дозе 100 мг/кг массы тела в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней.

В рекомендуемых дозах препарат не вызывает побочных явлений и осложнений.

Не допускается одновременное или последовательное применение препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных с другими ото- и нефротоксическими препаратами (канамицин, неомицин), а также при тяжелых нарушениях функции почек.

Препарат противопоказан при повышенной чувствительности животных к колистину. Убой животных на мясо разрешается не ранее чем через 14 дней после последнего введения препарата. Мясо животных, вынужденно убитых до истечения указанного срока, может быть использовано для кормления плотоядных животных или для производства мясокостной муки.

Изготавливается препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных следующим образом. Сначала в емкость добавляют триметоприм, далее при интенсивном перемешивании добавляют сульфадимезин, доводя до полного смешивания, затем колистин. Все перемешивается до однородного порошка и только потом добавляют глюкозу. Процесс останавливают, когда все полностью перемешается.

Пример 1. Определение оптимального соотношения компонентов в препарате для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, изучение его антимикробных свойств.

Изучены антимикробные свойства препарата. Выявлено оптимальное количественное содержание сульфадимизина с триметопримом и колистином в опытах in vitro и in vivo. В модельных опытах установлено, что препарат обладает широким спектром антибактериального действия в отношении испытанных культур микроорганизмов.

Опыты in vitro

Изучение антимикробной активности и соотношения компонентов в препарате для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных проводилось in vitro методом серийных разведений. В качестве тест-культур использовали референтные (музейные) и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят и телят, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам. Соотношение сульфадимезина, триметоприма, колистина в препарате для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в следующих комбинациях:

Комбинация 1. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 15,0

Триметоприм - 3,0

Колистин - 2,5

Глюкоза - до 100

Комбинация 2 Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 2,4

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100

Комбинация 3. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 3,0

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100

Комбинация 4. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 11,5

Триметоприм - 2,0

Колистин - 2,0

Глюкоза - до 100.

Антимикробную активность различных комбинаций состава препарата сравнивали с антимикробной активностью сульфадимезина, триметоприма, колистина.

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ).

Результаты изучения антимикробной активности сульфадимезина, триметоприма, колистина и различных композиций препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных представлены в таблице 1.

Как видно из представленных данных, препарат обладает высоким антибактериальным действием в отношении основных возбудителей желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных. В зависимости от штамма минимальная ингибирующая концентрация (МИК) в отношении S.cholerae suis составила для колистина 0,78 мкг/мл, для сульфадимезина - 50,0 мкг/мл, для триметоприма - 25,0 мкг/мл.

Антимикробная активность композиции 1 по абсолютной массе в отношении S.cholerae suis снизилась по сравнению с колистином в 32 раза, по сравнению с сульфадимезином увеличилась в 2 раза, а по сравнению с триметопримом не изменилась. Но в то же время совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма позволило снизить МИК в отношении данной культуры для сульфадимезина до 18,3 мкг/мл, для триметаприма - до 3,66 мкг/мл. В отношении эшерихий по абсолютной массе препарата активность композиции 1 снизилась по сравнению с колистином в 8 раз, а по сравнению с сульфадимезином и триметопримом увеличилась в 2 раза. Но в то же время совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма позволило снизить МИК для сульфадимезина до 9,15 мкг/мл, для триметаприма - до 1,83 мкг/мл, для колистина - до активности субстанции (1,52 мкг/мл).

Антимикробная активность композиции 2 по абсолютной массе в отношении S.cholerae suis снизилась по сравнению с колистином в 16 раз, по сравнению с сульфадимезином увеличилась в 4 раза, а по сравнению с триметопримом - в 2 раза. Но в то же время совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма позволило снизить МИК для сульфадимезина до 8,62 мкг/мл, для триметоприма - до 1,72 мкг/мл, для колистина - до 2,16 мкг/мл. В отношении эшерихий по абсолютной массе препарата активность композиции 2 снизилась по сравнению с колистином лишь в 2 раза, а по сравнению с сульфадимезином и триметопримом увеличилась в 8 раз. И в то же время совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма позволило снизить МИК для сульфадимезина до 2,15 мкг/мл (выше активности субстанции в 12 раз), для триметоприма - до 0,43 мкг/мл (выше активности субстанции в 58 раз), для колистина - до 0,54 мкг/мл, что выше активности субстанции в 2,9 раза.

Антимикробная активность композиции 3 по абсолютной массе была аналогична композиции 1 как в отношении сальмонелл, так и эшерихий. Но в то же время совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма позволило снизить МИК в отношении сальмонелл для сульфадимезина до 16,7 мкг/мл (выше активности субстанции в 3 раза), для триметоприма - до 4,16 мкг/мл (выше активности субстанции в 6 раз). Совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма позволило снизить МИК в отношении эшерихий для сульфадимезину до 8,33 мкг/мл (выше активности субстанции в 3 раза), для триметоприма - до 2,08 мкг/мл (выше активности субстанции в 12 раз).

Антимикробная активность композиции 4 оказалась наиболее низкой. По абсолютной массе в отношении S.cholerae suis снизилась по сравнению с колистином в 64 раза, по сравнению с сульфадимезином не изменилась, а по сравнению с триметопримом снизилась в 2 раза. Совместное применение колистина, сульфадимезина и триметоприма в композиции 4 позволило снизить МИК только для триметоприма - до 7,63 мкг/мл как в отношении эшерихий, так и в отношении сальмонелл (выше активности субстанции соответственно в 1,6 и 3,3 раза).

Таким образом, изучение антимикробной активности препарата и отдельных компонентов показало наличие синергического действия в отношении изученных патогенных культур. Установлено, что наиболее активной композицией можно считать композицию 2.

В связи с этим более детально была изучена антимикробная активность композиции 2. Результаты опыта представлены в таблице 2

Таблица 2 Антимикробная активность композиции 2 (оптимальный состав)   МБсК, мкг/мл МБцК (мкг/мл) Культура микроорганизмов 3,12 6,25 Escherichia coli 57/853 6,25 12,5 Escherichia coli 04 25,0 50,0 Escherichia coli 0(III) п 3,12 6,25 Escherichia coli 866    

Результаты проведенных исследований показали, что препарат обладает выраженным антимикробным действием.

1.2 Опыты in vivo

Изучение оптимального соотношения колистина, сульфадимезина и триметоприма в препарате проведено в опытах по лечению колибактериоза у поросят в сравнении с препаратом Триметин.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали на основании данных клинического обследования животных, патологоанатомического вскрытия, лабораторных исследований с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

Для лечения поросят контрольной группы (10 гол.) использовали триметин в дозе 0,25 г/кг массы тела орально в смеси с кормом два раза в день в течение 4 дней.

Для лечения поросят опытных группы (по 10 гол. в каждой) применяли препараты с различным соотношением колистина, сульфадимезина и триметоприма.

Комбинация 1. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 15,0

Триметоприм - 3,0

Колистин - 2,5

Глюкоза - до 100

Комбинация 2 Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 2,4

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100

Комбинация 3. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 3,0

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100

Комбинация 4. Состав препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:

Сульфадимезин - 11,5

Триметоприм - 2,0

Колистин - 2,0

Глюкоза - до 100.

Поросятам назначали препараты орально в смеси с кормом в дозе 0,1 г/кг массы тела два раза в день в течение 4 дней.

Результаты опыта по изучению эффективности применения препаратов для лечения колибактериоза у поросят представлены в таблице 3.

Таблица 3 Эффективность применения препарата с различным соотношением колистина, сульфадимезина и триметоприма при лечении колибактериоза у поросят Показатели Комбинации препарата Триметин 1 2 3 4   Количество животных, гол. 10 10 10 10 10 Продолжительность лечения, дни 3,6±0,4 3,2±0,2 3,8±0,2 4,0±0,2 4,4±0,3 Выздоровело, гол.
% 9
90,0 10
100,0 9
90,0 8
80,0 8
80,0 Осталось больными, гол.
% 1
10,0 - 1
10,0 2
20,0 2
20,0 Пало, гол.
% - - - - - Лечебная эффективность, % 90,0 100,0 90,0 80,0 80,0

В опыте на поросятах при лечении колибактериоза подтверждена более высокая эффективность комбинации сульфадимезина, триметоприма и колистина в препарате в соотношении 12:2,4:3 (комбинация 2).

Пример 2. Изучение эффективности лечения колибактериоза у телят.

Изучение проведено в четырех опытах на телятах 1-10-дневного возраста весом 30-40 кг. По принципу парных аналогов животные были разделены на две группы.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, бактериологического исследования (выделены E.coli различных серологических вариантов), патологоанатомического вскрытия с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

За животными вели ежедневное клиническое наблюдение в течение 10-15 дней, при этом учитывали общее состояние, падеж, скорость роста, сроки выздоровления.

В 1-м опыте телят контрольной группы лечили "Триметином", который применяли внутрь в дозе 250 мг/кг массы тела два раза в сутки в течение 4-6 дней. В опытах 2 и 3 телят контрольной группы лечили препаратом "Сульф гранулят", который применяли внутрь в дозе 5 г/20 кг живой массы два раза в сутки в течение 3-5 дней.

Животным опытной группы для лечения применяли препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 2,4

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100%

Препарат вводили внутрь в дозе 0,1 г/кг массы тела с интервалом 12 часов в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней.

Первый опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза телят проведен в СПК «Староникольское» Хохольского района Воронежской области в феврале-марте 2007.

Второй опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза телят проведен в СПК «Староникольское» Хохольского района Воронежской области в марте 2007 года.

Третий опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза у телят проведен в ООО «Содружество» Новоусманского района Воронежской области в феврале 2007 года.

Результаты опытов представлены в таблицах 4-6.

Таблица 4 Эффективность лечения колибактериоза телят в СПК «Староникольское» Хохольского района Воронежской области (1-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 17 21 Выздоровело, голов 14 19 % 82,4 90,5 Пало, голов - - % - - Остались больными, голов 3 2 % 17,6 9,5 Сроки выздоровления, дней 4,8±0,4 3,6±0,3 Терапевтическая эффективность, % 82,4 90,5

Таблица 5 Эффективность лечения колибактериоза телят в СПК «Староникольское» Хохольского района Воронежской области (2-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 25 34 Выздоровело, голов 19 32 % 76,0 94,1 Пало, голов - - % - - Остались больными, голов 6 2 % 24,0 5,9 Сроки выздоровления, дней 5,1±0,5 3,3±0,3 Терапевтическая эффективность, % 76,0 94,1

Таблица 6 Эффективность лечения колибактериоза телят в ООО «Содружество» Новоусманского района Воронежской области (3-й опыт) Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 78 96 Выздоровело, голов 62 85 % 79,5 88,5 Пало, голов - - % - - Остались больными, голов 16 11 % 20,5 11,5 Сроки выздоровления, дней 4,9±0,3 3,9±0,5 Терапевтическая эффективность, % 79,5 88,5

Проведенные исследования показали, что препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении колибактериоза у телят (в среднем она составила 91,0%), что на 8,0% выше эффективности препарата "Триметин", и на 11,7% - препарата "Сульф гранулят" (2 и 3 опыт). По сравнению с контрольными группами при применении препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных уменьшился срок выздоровления в среднем на 1,3 дня.

Пример 3. Изучение эффективности лечения колибактериоза у поросят.

Изучение проведено в трех опытах на поросятах 2-10-дневного возраста весом 2,5-3,5 кг. По принципу парных аналогов животные были разделены на две группы с учетом общего состояния и тяжести заболевания и находящихся в одинаковых условиях кормления и содержания.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, результатов бактериологического исследования (выделены Escherichia coli различных серологических вариантов), патологоанатомического вскрытия с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

За животными вели ежедневное клиническое наблюдение в течение 10-15 дней, при этом учитывали общее состояние, падеж, скорость роста, сроки выздоровления.

Поросят контрольной группы лечили препаратом "Сульф гранулят", который является базовым препаратом в опытных хозяйствах. Препарат применяли внутрь в дозе 5 г/20 кг живой массы два раза в сутки в течение 3-5 дней.

Животным опытной группы для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных применяли препарат при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Сульфадимезин - 12,0

Триметоприм - 2,4

Колистин - 3,0

Глюкоза - до 100

Препарат вводили внутрь в дозе 0,1 г/кг массы тела с интервалом 12 часов в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней.

Первый опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза поросят проведен в СХА «Родина» Россошанского района Воронежской области с февраля по март 2006 г, второй - в СХА «Александровская» Россошанского района Воронежской области с февраля по март 2007 г. и третий опыт - в СХА имени Докучаева Таловского района Воронежской области с сентября по ноябрь 2007 г.

Результаты опытов представлены в таблицах 7-9.

Таблица 7 Эффективность лечения колибактериоза у поросят в СХА «Родина» Россошанского района Воронежской области Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 74 81 Выздоровело, голов 62 73 % 83,8 90,1 Пало, голов 1 - % 1,3 - Остались больными, голов 11 8 % 14,9 9,9 Сроки выздоровления, дней 4,7±0,3 3,7±0,2 Терапевтическая эффективность, % 83,8 90,1

Таблица 8 Эффективность лечения колибактериоза у поросят в СХА «Александровская» Россошанского района Воронежской области Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 78 86 Выздоровело, голов 69 79 % 88,5 91,9 Пало, голов - - % - - Остались больными, голов 9 7 % 11,5 8,1 Сроки выздоровления, дней 4,4±0,2 3,6±0,3 Терапевтическая эффективность, % 88,5 91,9

Таблица 9 Эффективность лечения колибактериоза у поросят в СХА имени Докучаева Таловского района Воронежской области Показатели Группа животных Контроль Опыт Количество животных, голов 93 89 Выздоровело, голов 80 82 % 86,0 92,1 Пало, голов - - % - - Остались больными, голов 13 7 % 14,0 7,9 Сроки выздоровления, дней 4,2±0,5 3,4±0,4 Терапевтическая эффективность, % 86,0 92,1

Проведенные исследования показали, что препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении колибактериоза у поросят (в среднем она составила 91,4%), что на 5,3% выше эффективности препарата препарата "Сульф гранулят". По сравнению с контрольными группами при применении препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных уменьшился срок выздоровления в среднем на 22,2%.

Пример 4. Токсикологическая безопасность препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

Согласно существующему положению о лекарственных средствах, предназначенных для лечения животных, проведено экспериментальное доклиническое изучение общей фармакологической активности и токсикологических свойств препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

При проведении исследований использовали фармакологические, токсикологические, биохимические, патоморфологические методы исследования, применяемые для изучения лекарственных средств, получившие апробацию в научно-исследовательской практике.

Эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г (191 гол.) и белых крысах с массой тела 200-225 г (132 гол.), разведения вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии. Животные содержались в условиях вивария при 20-22°С и влажности 40-60%. Содержание животных и обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям Международной конвенции.

Определение параметров токсичности препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных в остром опыте проведены при однократном пероральном введении на двух видах лабораторных животных - белые мыши и белые крысы.

Группы животных формировали по принципу парных аналогов, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 12 часов.

Наблюдение за животными проводили непрерывно на протяжении первого дня после введения препарата. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение животных, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, шерстного покрова, поедание корма, потребление воды. Особое внимание уделяли развитию признаков токсикоза, оценивали их тяжесть, продолжительность, время выздоровления или гибели животных.

При изучении параметров токсичности препарата в остром опыте при пероральном способе введения препарат вводили однократно внутрижелудочно в дозах от 8000,0 до 14000,0 мг/кг массы тела в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл на крысу (дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения). Высшие дозы для белых мышей и белых крыс свыше 10000 мг/кг вводили в два приема по половине дозы с интервалом 2 часа.

На основании результатов токсикометрических исследований были получены следующие параметры острой токсичности препарата для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, которые представлены в таблице 10.

Таблица 10 Параметры острой токсичности препарата при однократном внутрижелудочном введении для лабораторных животных (мг/кг) Вид животных Параметры токсичности SLD₅₀ МПД LD₁₆ LD₅₀ LD₈₄ LD₁₀₀ Белые мыши 8000,0 9206,2 10776,8 (9610-11900) 12284,4 14000,0 ±551,1 Белые крысы 8500,0 8948,2 11134,7 (9910-12600) 13321,3 14500,0 ±627,1

Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс сопровождались непродолжительным периодом возбуждения с усилением двигательной активности у большинства особей. У крыс отмечалась агрессивность. За непродолжительным периодом возбуждения развивалось резко выраженное угнетение, состояние глубокого сна, переходящее затем в кому. Животные не реагировали на световой и тактильный раздражители. К моменту гибели животных отмечалось учащенное дыхание и сердцебиение. Дыхание часто становилось поверхностным, прерывистым, развивалась синюшность кожи и слизистых оболочек. Смерть, как правило, наступала в состоянии глубокого угнетения.

Препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества [ГОСТ 12.1.007-76].

В хроническом опыте при многократном (21 день) введении препарата в смеси с кормом в дозах - 225,0 (1 группа); 560,0 (2 группа) и 1115,0 мг/кг (3 группа) массы тела (1/50, 1/20 и 1/10 LD₅₀, найденной в остром опыте) установлено, что препарат не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп как в период применения препарата, так и в течение одной недели после окончания применения оставались в пределах физиологической нормы. Также не было отмечено случаев гибели животных.

За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, были сохранены рефлексы.

Установлено, что препарат оказывает влияние на интенсивность роста животных. Так в дозе 225,0 мг/кг препарат стимулирует рост животных в среднем на 4,0%. В течение курса введения препарата подопытные животные, которым вводили препарат в дозе 560,0 мг/кг, не отличались от контрольных по приросту массы тела и в конце эксперимента статистически достоверных различий по этому показателю не было обнаружено.

У крыс, которым препарат вводили в смеси с кормом в дозе 1115,0 мг/кг массы тела, начиная с 7 дня от начала опыта отмечали снижение прироста массы тела по отношению к контролю, что свидетельствует о токсическом действии препарата. Однако через 10 суток после последнего его введения среднесуточный прирост массы тела крыс приближается к среднесуточному приросту массы тела контрольных животных.

Коэффициенты массы внутренних органов крыс, которым применяли препарат во всех изученных дозах, существенно не отличались от контроля (табл.11).

Таблица 11 Коэффициент массы внутренних органов крыс при многократном применении препарата (21 день) Внутренний орган Контроль Доза препарата, мг/кг 225,0 560,0 1115,0 Легкие 6,8±0,47 6,7±0,45 7,1±0,34 7,0±0,33 Сердце 3,7±0,15 3,8±0,34 3,6±0,32 3,7±0,29 Печень 32,4±1,58 34,2±0,84 35,6±1,34 35,1±1,66 Селезенка 3,9±0,46 4,1±0,43 3,8±0,44 3,7±0,29 Почки 7,4±0,58 7,2±0,46 7,6±0,84 7,5±0,53 Надпочечники 0,17±0,02 0,16±0,02 0,19±0,01 0,20±0,01

Таблица 12 Морфологические и биохимические показатели крови белых крыс при многократном применении препарата (21 день) Показатели Контроль Дозы препарата, мг/кг 225,0 560,0 1115,0 Эритроциты, 10¹²/л 5,9±0,48 6,1±0,72 5,6±0,54 5,8±0,50 Лейкоциты, 10⁹/л 10,4±1,17 11,3±0,93 10,2±0,83 9,7±0,77 Гемоглобин, г/л 142,6±6,97 138,4±2,04 131,5±10,6 144,5±1,33 Общий белок, г/л 69,1±1,09 68,9±1,83 71,6±1,24 68,8±2,97 Альбумины, г/л 34,9±1,25 36,7±2,17 40,8±0,68 39,0±1,69 Глобулины, % α 5,42±0,86 4,78±0,81 4,56±0,53 3,17±0,22* β 15,32±1,04 15,25±0,70 12,97±1,01 13,91±1,59 γ 13,40±1,13 12,60±1,81 13,26±0,46 10,82±0,52 Мочевина, мМ/л 8,98±0,45 8,40±1,74 8,70±1,06 8,12±1,39 Глюкоза, мМ/л 6,88±0,34 6,76±0,70 5,22±1,08 6,87±0,69 Общ. липиды, г/л 2,10±0,60 1,85±0,13 2,10±0,13 2,13±0,67 Холестерин, мМ/л 2,36±0,11 2,7±0,27 2,02±0,15 1,94±0,60 АсАТ, ЕД/л 97,15±8,57 111,5±10,6 102,2±5,1 115,3±4,5 АлАТ, ЕД/л 34,5±9,13 39,2±9,20 39,3±11,4 44,4±9,18 Креатинин, мкМ/л 52,2±4,52 48,4±6,17 61,3±1,90 47,4±1,01 ЩФ, ЕД/л 222,5±22,6 191,8±18,7 262,8±37,3 268,0±26,2 Билирубин, мкМ/л 4,99±0,43 3,53±0,55 4,38±0,84 6,39±0,76 * - Р<0,05 - 0,001 по сравнению с контролем

При исследовании крови животных также не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы (табл.12).

Исключение составляли показатели, характеризующие функциональное состояние печени. Повышение до верхних границ нормы в сыворотке крови количества билирубина (на 28,1%) и активности АлАТ (28,7%) свидетельствуют о возросшей нагрузке на этот орган. Однако через 10 дней после последнего введения препарата данные показатели у опытных животных восстанавливались до физиологических значений.

Исследование кожно-резорбтивного действия проведено на 10 белых крысах и 2 кроликах методом накожных аппликаций при однократном и многократном нанесении и втирании препарата в концентрациях 0,5 и 1,0%. Для выявления резорбции препарата с поверхности кожи кроликов использовали метод с трипановым синим, а на крысах - метод погружения хвоста в водные растворы препарата 0,5 и 1,0% концентрации.

В результате проведенных экспериментов не выявлено раздражающего действия препарата. У животных не развивались признаки токсикоза при нанесении препарата на кожу. Таким образом, препарат не обладает раздражающим и кожно-резорбтивным действием.

В связи с отсутствием раздражающего действия у препарата испытание аллергенных свойств препарата выполняли путем выявления зуда и отека у сенсибилизированных этим препаратом животных и провоцированных белоксодержащими продуктами в течение 15 дней. В опытах использовано 4 крысы и 2 кролика. В результате проведенных исследований не выявлено аллергенных свойств у препарата.

Таким образом, проведенные испытания препарата для лечения колибактериоза у поросят и телят показали, что он обладает широким спектром антимикробного действия, выраженным лечебным действием при колибактериозе у поросят и телят, является малотоксичным. Применение препарата технологично и экономически выгодно.

Изобретение относится к области ветеринарии. Препарат состоит из следующих компонентов мас.%:

Сульфадимезин 11,5-15 Триметоприм 2,0-3,6 Колистин 2,0-3,5 Глюкоза до 100

Перед применением препарат растворяют в теплой воде, молозиве температурой 35-37°С или скармливают с кормом. Препарат применяют ежедневно два раза в сутки в дозе 100 мг/кг массы тела в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней. Использование препарата позволяет повысить эффективность лечения колибактериоза у сельскохозяйственных животных. 12 табл.

Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, содержащий триметоприм, отличающийся тем, что он дополнительно содержит сульфадимезин, колистин и глюкозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Сульфадимезин 11,5-15 Триметоприм 2,0-3,6 Колистин 2,0-3,5 Глюкоза до 100