СПОСОБ РЕТРОСПЕКТИВНОЙ (ПОСЛЕРОДОВОЙ) ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ГРУППЫ НОВОРОЖДЕННЫХ ВЫСОКОГО РИСКА РАЗВИТИЯ ПАТОЛОГИИ В НЕОНАТАЛЬНЫЙ ПЕРИОД И ПЕРИОД НОВОРОЖДЕННОСТИ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в практическом акушерстве и неонатологии, патологической анатомии.

Известно множество способов определения степени компенсации плаценты во время беременности и ретроспективно.

В клинической практике широко применяется способ ультразвуковой диагностики патологии фетоплацентарного комплекса, позволяющий во время беременности оценить количественно и качественно маточно-плацентарный кровоток, кровоток в сосудах пуповины и магистральных сосудах плода, а также определить объем плаценты и ее толщину, срок гестации по размерам плода. Однако из-за невозможности визуализации той части плаценты, которая находится на задней стенке матки, полученная информация может оказаться неполной. Поэтому для выявления группы новорожденных высокого риска развития патологии в неонатальный период и период новорожденности важное значение имеет своевременная ретроспективная (послеродовая) диагностика плацентарной недостаточности, так как ранняя диагностика плацентарной недостаточности важна для своевременного лечения новорожденного.

Известен разработанный Крансом метод ретроспективной оценки фетоплацентарного кровообращения, основанный на перфузии материнской и плодовой части плаценты раствором глюкозы. В практическом акушерстве данный способ не применим ввиду своей технической сложности.

Известен способ ретроспективной оценки фетоплацентарного кровообращения, включающий внутривенное введение роженице в момент прорезывания затылочных бугров головки плода окситоцина с раствором глюкозы, после рождения ребенка отделение плаценты наружными приемами, специальную обработку плаценты и микроскопическое исследование с морфометрией терминальных фетоплацентарных сосудов (1). Способ сложен технологически, требует специальных навыков персонала, морфометрия плаценты занимает много времени. Кроме того, внутривенное введение дополнительных лекарственных препаратов роженице во время родов и отделение плаценты наружным приемом являются неблагоприятными факторами родов. Способ не применим в случае родов путем кесарева сечения.

Известен способ ретроспективной оценки фетоплацентарного кровоснабжения плода путем вычисления плацентарно-плодного коэффициента как отношение веса плаценты (детского места без оболочки и пуповины) к весу плода. Согласно изобретению выполняется препарирование последа, затем гистологические исследования, которые выполняются вне родового зала (2). Известный способ занимает много времени, и, как показывает практика, заключение гистологического исследования последа передается в родильное отделение лишь на пятые-шестые сутки, когда значимость информации для выявления риска развития патологии новорожденного может быть снижена.

Известен также способ ретроспективной экспресс-диагностики плацентарной недостаточности в родовом зале, включающий взвешивание плаценты с внеплацентарными оболочками и остатком пуповины длиной 26-28 см без препарирования последа с последующим расчетом плацентарно-плодового коэффициента (К) по формуле К=(А-В)/С, где А - масса последа, В - масса внеплацентарных оболочек с остатком пуповины, равная 103 г, С - масса плода при рождении. При этом значения К, характеризующие плаценты как компенсированные, зависят от сроков гестации, при которых произошли роды: 0,13-0,19 в сроке гестации 38-40 недель и 0,2-0,23 в сроке гестации 32-37 недель. При всех других значениях для соответствующих сроков гестации диагностируется хроническая вторичная плацентарная недостаточность (3). Однако информативность данного способа может быть снижена ввиду того, что величина В в действительности может оказаться меньше 100 г (остаток пуповины может быть меньше 26-28 см), не учитывается зависимость массы плаценты от пола новорожденного, способ практически не применим при рождении новорожденного в асфиксии. Известный способ может быть использован лишь как предварительный экспресс-метод, а для достоверной диагностики требуется последующее морфологическое исследование.

Известен морфологический способ диагностики плацентарной недостаточности путем окраски гистологических срезов плаценты общими красителями гематоксилином-эозином (4). Этот способ позволят определить плотность расположения ворсин, строение спиральных артерий, аномалии архитектоники ворсинчатого дерева, патологию терминальных ворсин, недостаток васкуляризации и избыток стромы. Однако известный способ имеет длительную пробоподготовку, в связи с чем заключение выдается на 3-4 сутки после родов.

Известно также то, что в клеточных структурах плаценты (в клетках трофобласта, стромы ворсин, амниотической оболочки) у родильниц с хронической плацентарной недостаточностью имеет место снижение содержания биогенных аминов, в том числе уровней гистамина и катехоламинов (5).

Заявляемое изобретение решает задачу разработки достоверного способа ретроспективной (послеродовой) диагностики плацентарной недостаточности у родильниц, беременность которых протекала на фоне антифосфолипидного синдрома (АФС), для выявления группы новорожденных высокого риска развития патологии в неонатальный период и период новорожденности, осуществимого в первые часы после родов.

Техническим результатом является повышение информативности способа.

Это достигается способом ретроспективной (послеродовой) экспресс-диагностики плацентарной недостаточности, включающим морфологические исследования плаценты и люминесцентно-гистохимическое исследование плаценты непосредственно после родов на содержание биогенных аминов, при котором определяют содержание гистамина и катехоламина в тканях плаценты родильниц, беременность которых протекала на фоне антифосфолипидного синдрома (АФС), и при содержании гистамина более 150 у.е. и катехоламина более 12 у.е. диагностируют хроническую плацентарную недостаточность. Известно, что при возникновении патологического процесса содержание биогенных аминов в клетках плаценты уменьшается за счет того, что они диффундируют в окружающие ткани, а количество клеток уменьшается за счет их дегрануляции. Было установлено, что увеличение содержания биогенных аминов, прежде всего гистамина и катехоламина, в тканях плаценты свидетельствует о наличии патологии, хронической плацентарной недостаточности.

Для выполнения люминесцентно-гистохимических исследований ткани плаценты на содержание биогенных аминов сразу после родов кусочек ткани размером 1,5×1,5, взятый на расстоянии 3 см от края через все слои, замораживается при температуре 20°С в течение 15-20 минут, из него готовится не менее двух криостатных среза плаценты толщиной около 20 мкм, которые высушиваются на воздухе при комнатной температуре в течение 30-40 минут. Полученные материалы исследуются на содержание гистамина и катехоламина известными способами, при которых для определения гистамина материал обрабатывается парами ортофталиевого альдегида, а для определения катехоламина материал обрабатывается парами формальдегида, с последующим изучением образцов под люминесцентным микроскопом (6 - ссылки на метод Кросса-Эвена-Роста и метод Е.М.Крохиной). Для изучения приготовленных срезов использовали люминесцентный микроскоп ЛЮМАМ-ИЗ с набором светофильтров. Цитоспектрофлуориметрия проводилась при помощи фотометрической насадки ФМЭЛ-1А с интерференционным фильтром 7 (517 нм) для гистамина и с фильтром 6 (480 нм) для катехоламинов. Интенсивность свечения биоаминов измерялась по шкале цифрового вольтметра и выражалась в условных единицах (у.е.) шкалы цифрового вольтметра х100. При вышеописанном исследовании в плаценте дифференцируются следующие биоаминпозитивные структуры: децидуальная ткань, хориальная пластинка, кровеносные сосуды хориальной пластинки и терминальные ворсинки, в которых люминесцировали строма, капилляры и синцитиотрофобласт.

Пример 1. Новорожденный К., родился при сроке гестации 39 недель. Вес при рождении 3560 г, длина тела 53 см, оценка по шкале Апгар при рождении 8 баллов, через 5 мин - 9 баллов. Вес последа 480 г.Макроскопически в плаценте патологии не обнаружено. Сразу после рождения последа взят его кусочек на расстоянии 3 см от края через все слои 1,5×1,5 см. Произведено исследование на содержание гистамина, катехоламинов и серотонина. Содержание гистамина - 104,8 у.е. (<150 у.е.), катехоламинов - 7,6 у.е. (<12 у.е.). Ребенок выписан домой на шестые сутки. При гистологическом исследовании в плаценте патологических изменений не обнаружено.

Пример 2. Новорожденный П., родился путем планового кесарева сечения в сроке гестации 38 недель. Вес при рождении - 3488 г, длина тела - 53 см, оценка по Апгар при рождении 9 баллов, через 5 мин - 9 баллов. Вес плаценты 455 г. Макроскопически в плаценте патологии не обнаружено. Произведено исследование на содержание БАД: содержание гистамина - 106,7 у.е. (<150 у.е.), катехоламинов - 9,5 у.е. (<12у.е.). Ребенок выписан домой на восьмые сутки. При гистологическом исследовании плаценты патологических изменений не обнаружено.

Пример 3. Новорожденный Р., родился при сроке гестации 38 недель. Вес при рождении - 3830 г, длина тела - 56 см, оценка по Апгар при рождении 7 баллов, через 5 мин - 8 баллов. Послед макроскопически тонкий, в кальцинатах. Масса последа - 380 г. Исследование: выявлено повышенное содержание гистамина - 375,4 у.е. (>150 у.е.), катехоламинов - 15,9 у.е. (>12у.е.), то есть имеет место хроническая плацентарная недостаточность. У новорожденного клинически диагностировано: перинатальное поражение ЦНС гипоксически-ишемического генеза с миотоническим синдромом. Открытое овальное окно. Конъюгационная желтуха. Лактазная недостаточность. Новорожденный находился в отделении патологии новорожденных на лечении, выписан на 14 сутки. При гистологическом исследовании последа выявлена хроническая плацентарная недостаточность.

Пример 4. Новорожденный Б., родился от доношенной беременности в 39 недель. Вес при рождении 3710 г, длина тела 55 см, оценка по Апгар при рождении 8 баллов, через 5 мин - 9 баллов. Плацента выглядела с наличием белых инфарктов. Масса последа - 420 г. Произведено исследование на содержание БАД: содержание гистамина - 185,2 у.е. (>150 у.е.), катехоламинов-12,3 у.е.(>12у.е.), то есть имеет место хроническая плацентарная недостаточность. У новорожденного диагностировано: гипоксически-ишемическое поражение ЦНС, синдром угнетения ЦНС. СДР. Пирамидная недостаточность. Открытое овальное окно. Внутрижелудочковые кровоизлияния. Псевдокисты головного мозга. Конъюгационная желтуха. Новорожденный выписан на 20 сутки из отделения патологии новорожденных. При гистологическом исследовании последа выявлена хроническая плацентарная недостаточность, признаки преждевременного созревания плаценты.

Исследованы плаценты 20 родильниц: из них - 10 последов родильниц с нормально протекающей беременностью (в возрасте от 21-34 лет), родивших в срок (1 группа), и 10 последов родильниц, беременность которых протекала с осложнениями на фоне антифосфолипидного синдрома (АФС) (в возрасте 25-39 лет), получавших лечение и доносившие беременность до 38-40 недель, с рождением живого новорожденного (2-я группа). Для выявления патологических изменений все плаценты подвергались гистологическим исследованиям и люминесцентно-гистохимическим исследованиям на содержание биогенных аминов (гистамина и катехоламина).

При изучении срезов плацент на содержание гистамина в плацентах 1-й группы наиболее интенсивную изумрудно-зеленую люминесценцию имели стенки кровеносных сосудов хориальной пластинки, синцитиотрофобласта и амниона. В децидуальной ткани наблюдали умеренное свечение желтоватого цвета, на фоне которого выявлялись более ярко светящиеся децидуальные клетки. В терминальных ворсинках выявлялись капилляры, по 4-6 сосудов в ворсинке, расположенные на периферии ворсин. У кровеносных сосудов люминесцировала адвентициальная оболочка, интенсивность свечения которой зависела от величины сосуда, свечение синцитиотрофобласта было равномерным, он выявлялся в виде гомогенного слоя, окаймляющего терминальные ворсинки. Соединительнотканные структуры хориальной пластинки и ворсинок имели неровное свечение, в основном наблюдалась люминесценция волокон соединительной ткани. При изучении срезов плацент на содержание гистамина 2-й группы выявлялись те же структуры. Однако не все терминальные ворсинки были покрыты сплошным слоем синцитиотрофобласта, в этом случае он выявлялся в виде люминесцирующих глыбок. Возможно, это связано с незрелостью плаценты при данной патологии. Еще одной особенностью строения и люминесценции этих плацент было уменьшение количества капилляров до 1-2-х или полное их отсутствие в некоторых терминальных ворсинках.

При изучении срезов плацент на содержание катехоламинсодержащих структур установлено, что для срезов плацент 2-й группы имеет место наиболее выраженное увеличение интенсивности люминесценции катехоламинов в структурах стромы хориальной пластинки, ворсин и синцитиотрофобласте.

Усредненные данные интенсивности люминесценции структур плацент приведены в таблице в условных единицах.

Таблица

Интенсивности люминесценции структур плацент в у.е.

Структуры Децидуальная ткань Хориальная пластинка Кровенос ные сосуды Капилляры терминальной ворсинки Строма терминальной ворсинки Синцитиотрофобласт Гистамин 1 группа 86,98±6,17 83,22±4,88 129,49±10,71 133,53±11,01 80,08±5,31 145,54±7,99 2 группа 203,68±11,36 289,74±24,94 390,84±29,69 330,33±42,45 190,76±17,05 324,82±33,93 Катехоламин 1 группа 10,68±0,74 9,98±0,44 12,5±0,61 10,63±0,76 9,52±0,55 10,32±0,78 2 группа 14,08±0,20 15,46±0,65 15,53±0,83 13,79±0,27 13,81±0,25 17,07±1,52

В таблице приведены показатели для всех люминесцирующих структур плаценты: децидуальной ткани, хориальной пластинки, кровеносных сосудов хориальной пластинки и терминальных ворсинок, в которых люминесцировали строма, капилляры и синцитиотрофобласт. Как видно из таблицы, во всех люминесцирующих структурах: децидуальной ткани, хориальной пластинке, сосудах и капиллярах, синцитиотрофобласте, соединительной ткани терминальных ворсин для плацент 2 группы имеет место повышение интенсивности люминесценции гистамина в 2-3 раза в сравнении с показателями плацент 1 группы. Интенсивности люминесценции катехоламинов в соединительной ткани ворсин превышают в 1,5 раза, в синцитиотрофобласте в 1,7 раз, строме хориальной пластинки в 1,5 раза в сравнении с показателями плацент 1 группы. Также из таблицы видно, что при исследовании плацент родильниц с нормально протекающей беременностью максимальная интенсивность люминесценции гистамина имеет место в сосудах и капиллярах, а также в синцитиотрофобласте, и составляет не более 150 у.е., а максимальная интенсивность люминесценции катехоламина имеет место в кровеносных сосудах и составляет не более 12.у.е.

Таким образом, из показаний таблицы следует, что показатели содержания гистамина более 150 у.е. и катехоламина более 12 у.е. свидетельствуют о патологических изменениях плаценты, при которых диагностируют хроническую плацентарную недостаточность.

Заявленный способ диагностики несложен, не требует дорогостоящего оборудования или специфических навыков персонала. Пробоподготовка для исследования плаценты по заявленному способу не представляет трудностей для любого родильного медицинского учреждения и его медицинского персонала, может быть выполнена непосредственно в родильном отделении и благодаря высокой информативности позволяет в течение 2-х часов после родов поставить достоверный диагноз плацентарной недостаточности и своевременно начать соответствующее лечение новорожденному с высоким риском развития патологии в неонатальном периоде и периоде новорожденности.

Источники информации

1. Савельева Г.М. и др. Плацентарная недостаточность. - М.: Медицина, 1991, с.169-170.

2. Жемкова З.П., Топчиева О.И. Клинико-морфологическая диагностика недостаточности плаценты. Л.: Медицина, 1973, с.74-75.

3. Птент RU №2227914, МПК G01N 33/48.

4. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. - М.: Медицина, 1982, с.228, 304.

5. Зарайская М.М, Охотина Т.Н., Жамлиханова С.С. Особенности биоаминового обеспечения клеточных структур плаценты при хронической плацентарной недостаточности. - М., научно-практический журнал "Проблемы беременности", 2001 г., №4, с.61-62.

6. Крохина Е.М, Александров П.Н. Симпатический (адренергический) компонент иннервации сердечной мышцы. М., 1969, Кардиология, №3, с.97-102.

Способ относится к медицине и может быть использован в практическом акушерстве и неонатологии для выявления в первые часы после родов новорожденных высокого риска развития патологии в неонатальный период и период новорожденности. Сущность способа ретроспективной (послеродовой) экспресс-диагностики плацентарной недостаточности заключается в том, что определяют содержание гистамина и катехоламина в тканях плаценты родильниц, беременность которых протекала на фоне антифосфолипидного синдрома (АФС), и при содержании гистамина более 150 у.е. и катехоламина более 12 у.е. диагностируют хроническую плацентарную недостаточность. Использование данного способа позволяет в течение 2-х часов после родов поставить достоверный диагноз плацентарной недостаточности и своевременно начать соответствующее лечение новорожденного с высоким риском развития патологии. 1 табл.

Способ ретроспективной (послеродовой) экспресс-диагностики плацентарной недостаточности для выявления группы новорожденных высокого риска развития патологии в неонатальный период и период новорожденности, включающий морфологические исследования плаценты и люминесцентно-гистохимическое исследование плаценты непосредственно после родов на содержание биогенных аминов, отличающийся тем, что определяют содержание гистамина и катехоламина в тканях плаценты родильниц, беременность которых протекала на фоне антифосфолипидного синдрома (АФС), и при содержании гистамина более 150 у.е. и катехоламина более 12 у.е. диагностируют хроническую плацентарную недостаточность.