Способ прогнозирования риска развития внутриутробных инфекций новорожденного по морфометрическим параметрам терминальных ворсин плаценты Российский патент 2020 года по МПК A61B5/00 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития внутриутробных инфекций у новорожденного. Внутриутробные инфекции возникают в результате анте - или интранатального инфицирования плода, значительно влияют на показатели неонатальной и младенческой заболеваемости и смертности, вызывают невынашивание беременности, рождение детей с малым весом, с признаками врожденной инфекции. У выживших детей, перенесших внутриутробную инфекцию, в дальнейшем развиваются серьезные нарушения здоровья. Вирусологическое и микробиологическое обследование новорожденных при подозрении на внутриутробную инфекцию проводится редко из-за высокой стоимости и больших трудозатрат. Поэтому поиск информативных, быстрых и доступных способов диагностики внутриутробных инфекций является актуальным.

Известные способы определения риска внутриутробного инфицирования новорожденного включают различные методы исследования беременной женщины и новорожденного: анамнестические, клинические, морфологические, лабораторные, эхографические, молекулярно - генетические, серологические [RU 215892 C2, 10.11.2000 Малкова Е.М., Гришаева О.Н. Диагностика внутриутробных инфекций у новорожденных детей методом полимеразной цепной реакции: методические рекомендации для врачей; Кольцово-2000; RU 2 158 927 С2, 10.11.2000; RU 2 295 51 C1, 26.09.2005; RU 2 461 006 C1, 10.09.2012; RU 2 532 382 C1, 18.06.2013; RU 2 495 429 C1, 10.10.2013; RU 2 567 037 C1, 05.11.2014; Протоколы диагностики, лечения и профилактики внутриутробных инфекций у новорожденных детей М: ГОУ ВЦНМУ, 2001; Клинические рекомендации Рос.ассоц. специалистов перинатальной медицины [www.raspm.ru/index.php/metodicheskie-rekomendatsii, дата обращения 10.01.19]. Известные способы являются инвазивными материально - затратными и трудоемкими. Неинвазивные способы сложны из-за большого объема необходимой информации, применения математического расчета, длительности тестирования (RU 2 246 247 C1, 20.02.2005; RU 2 518 541 C1 10.01.2013). Морфологическое исследование плацент, с целью определения риска внутриутробного инфицирования включает полное макроскопическое и гистологическое изучение состояния плаценты с субъективной оценкой выявленных изменений по 4-крестовой системе [Цинзерлинг В.А., Мельникова В.Ф. Перинатальные инфекции. Практическое руководство. СПб:2002.]

Задачей данного изобретения явилось создание скринингового, дешевого, информативного, неинвазивного, количественного способа прогнозирования риска развития внутриутробной инфекции у новорожденного. В основу изобретения положена оценка состояния терминальных ворсин плаценты. В случае развития внутриутробной инфекции у плода при любом пути заражения прежде всего поражается плацента, что сопровождается диссоциированным развитием ворсинчатого хориона, склеротическими, воспалительными, компенсаторно-приспособительными изменениями во всех отделах плаценты и плодных оболочек. Наиболее значимым фактором патогенеза является нарушение строения терминальных ворсин плаценты, которым принадлежит ведущая роль в обмене между кровью матери и плода.

За прототип принята работа М.Т.Луценко и И.А. Андриевской «Морфометрические исследования фетоплацентарного барьера ворсинок плаценты при герпесной и цитомегаловирусной инфекции» // Бюллетень СО РАМН. 2010. том 30. №3. С.137-140. Авторами показано, что при активизации герпес - инфекций во время беременности происходят выраженные изменения в перестройке кровеносного русла в терминальных ворсинках плаценты, отмечается недостаточность обеспечения ворсинок кровеносными сосудами, которые далеко отстают от синцитиотрофобласта, что приводит к снижению газообмена и формированию гипоксии плода. Количество сосудов на поперечном сечении ворсинок снижается до 3-5, в контроле - 6-7 сосудов. Увеличивается расстояние между кровеносным сосудом и внутренней поверхностью синцитиотрофобласта до 2,5 mkm по сравнению с контролем (1,0 (0,003 mkm).

Недостатком прототипа является ограничение сведений только по герпес - вирусным инфекциям и только случаями доношенной беременности. Но этиопатогенетическим фактором перинатальной заболеваемости и смертности могут быть и другие перинатально-значимые инфекции, составляющие биоценоз генитального тракта женщины, другие представители микрофлоры женщины. В случаях недоношенной беременности и внутриутробной инфекции изменения сосудистого русла терминальных ворсин еще более выражены.

Предлагаемый способ реализуется следующим образом. Обследованию подлежат плаценты от доношенных и недоношенных (срок гестации 30-36 недель) беременностей. После макроскопического изучения последов из плодовой зоны плаценты вырезают фрагменты ткани, которые фиксируют в 10% нейтральном формалине. По общепринятой методике готовят парафиновые срезы, окрашивают их гематоксилином и эозином. Далее проводится гистологическое исследование микропрепаратов последа с морфометрической диагностикой, используя систему анализа изображения с помощью микроскопа «Carl Zeiss» и программы «Axio Imager». При гистологическом исследовании анализируются терминальные ворсины в 5 полях зрения каждой из плацент. С помощью программного обеспечения производят подсчет капилляров в каждом поле зрения, измеряют расстояние от капилляров до синцитиотрофобласта, определяют среднее значение этих показателей. Сопоставляют полученные средние показатели терминальных ворсин изучаемой плаценты со средними показателями инфицированных и неинфицированных плацент от доношенных и недоношенных беременностей по табл. 1. Таблица разработана на основании результатов изучения микроморфометрических параметров терминальных ворсин плацент от 46 доношенных и 34 недоношенных беременностей, взятых на исследование методом ПЦР в первые часы после рождения (для исключения постнатального инфицирования). Исследование показало, что плаценты были инфицированы микоплазмами, герпес-вирусами, стрептококками, при этом изменения васкуляризации ворсин носили неспецифический характер, что позволило подсчитать средние параметры инфицированных плацент.Сравнение параметров терминальных ворсин исследуемой плаценты с данными таблицы дает возможность установить инфицированность плаценты и прогнозировать риск инфекционного процесса у новорожденного. В случае доказанного с помощью предлагаемого способа риска развития внутриутробной инфекции у новорожденного далее выбирают тактику последующей инвазивной диагностики методом ПЦР и ИФА и тактику лечения.

Таблица 1

Морфометрические параметры терминальных ворсин в плацентах (M (m)

Морфометрические параметры Плаценты от доношенных беременностей, неинфицированные
1 группа
N=35 Плаценты от доношенных беременностей, инфицированные
2 группа
N=11 Плаценты от недоношенных беременностей, завершившихся в 30-36 недель гестации, неинфицированные
3 группа
N=13 Плаценты от недоношенных беременностей, завершившихся в 30-36 недель гестации, инфицированные
4 группа
N=21 Кол-во сосудов, абс 5,74±0,05* 5,35±0,07 4,63±0,28** 3,97±0,19 Расстояние от сосудов до синцитиотрофобласта, mkm 1,02±0,03* 1,62±0,15 1,72±0,14** 2,20±0,20

* p<0,0001 по сравнению со 2-й группой, ** p<0,05 по сравнению с 4-й группой

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

Пример №1. Настоящая 1-я беременность, протекала с угрозой невынашивания. Роды преждевременные на сроке 30 недель гестации, раннее излитие околоплодных вод, приращение плаценты, хроническая плацентарная недостаточность с развитием острого нарушения маточно-плацентарного кровообращения и острой плацентарной недостаточности. Масса плаценты 237 г, масса тела новорожденного 825 г. Микроморфометрические показатели: среднее кол-во капилляров в терминальных ворсинах изучаемой плаценты=3,3 - это меньше, чем среднее число капилляров в 4-й группе (3,97), а расстояние сосудов от синцитиотрофобласта (2,1 mkm) близко к среднему показателю в инфицированных плацентах от недоношенных беременностей (4-й группе - 2,2). Полученные данные указывают на снижение васкуляризации, выраженную гипоксию, на вероятность воспалительных изменений в плаценте с поражением терминальных ворсин. Можно сделать заключение о риске развития внутриутробной инфекции у ребенка, необходимости тщательного мониторинга в условиях стационара (для своевременной диагностики инфекционно - воспалительных процессов). Предположение подтвердилось, состояние ребенка было тяжелым с оценкой по шкале Апгар - 5 баллов, в позднем неонатальном периоде диагностирована пневмония.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Пример №2. Беременность 3-я, предшествовали 2 медицинских аборта, во время беременности женщина не наблюдалась в женской консультации. Роды начались на 35-й неделе гестации с ранним излитием околоплодных вод с явлениями острой плацентарной недостаточности. Масса плаценты 440 г., гистологически выявлены признаки нарушения созревания ворсин, нарушения ветвления. Масса тела ребенка 1310 г. Показатели микроморфометрии: среднее число капилляров=4,9, расстояние сосудов до синцитиотрофобласта=1,69 mkm. Полученные показатели близки к параметрам неинфицированных плацент от недоношенных беременностей (4-я группа). Согласно данным микроморфометрии сделан вывод о низкой вероятности инфицирования плаценты и низком риске развития внутриутробной инфекции у новорожденного. В дальнейшем признаки инфекции у новорожденного не были выявлены.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Пример №3. Беременность 1-я, развивалась с угрозой невынашивания. Роды преждевременные на 30-й неделе гестации, с ранним излитием околоплодных вод, острым нарушением маточно-плацентарного кровообращения. Масса плаценты 254 г. В плаценте выявлены нарушения созревания ворсин, псевдоинфаркты, признаки хронической и острой плацентарной недостаточности. Определены воспалительные изменения в оболочках - хориоамнионит, децидуит.Масса тела ребенка 1200 г., состояние средней тяжести с оценкой по шкале Апгар 7 баллов, недоношенность, задержка внутриутробного развития плода. Показатели микроморфометрии: среднее число сосудов в терминальных ворсинах=3,4. Расстояние от капилляров до синцитиотрофобласта=2,1 mkm (показатели близки к средним величинам 4-й группы). Сделано заключение об инфицированности плаценты. Новорожденный относится к группе риска по внутриутробной пневмонии, сепсису. Исследование образцов плаценты методом ПЦР подтвердило заключение об инфицированности плаценты, в плаценте была обнаружена смешанная инфекция Mycoplasma hominis+Herpes human virus 4 type. У новорожденного в неонатальном периоде установлена пневмония.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Преимущества предлагаемого способа:

1. Возможность по морфометрическим показателям терминальных ворсин определять инфицированность плаценты разными возбудителями.

2. Возможность по морфометрическим показателям терминальных ворсин определять риск развития внутриутробной инфекции не только у доношенных, но и у недоношенных новорожденных.

3.Объективизация полученных данных за счет количественной оценки.

Технический результат от реализации предложенного способа:

- расширение методов диагностики риска внутриутробного инфицирования новорожденного;

- информативность;

- неинвазивность;

- простота исполнения;

- экономичность;

- объективизация полученных данных за счет количественной оценки;

- способ пригоден для скрининга плацент на внутриутробные инфекции новорожденных.

Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии. Для прогнозирования риска развития внутриутробной инфекции у новорожденного определяют среднее число капилляров и среднее расстояние от капилляров до синцитиотрофобласта в терминальных ворсинах плаценты, полученной от доношенных и недоношенных беременностей в первые часы после рождения. Новорожденного относят к группе риска развития внутриутробной инфекции при среднем числе капилляров в 5 полях зрения в терминальных ворсинах каждой из плацент 5,28 – 5,42 и расстоянии от капилляров до синцитиотрофобласта 1,47 – 1,77 мкм в плаценте от доношенной беременности и при среднем числе капилляров в терминальных ворсинах 3,78 – 4,16 и расстоянии от капилляров до синцитиотрофобласта 2,0 – 2,40 мкм в плаценте от недоношенной беременности, завершенной в 30-36 недель гестации. Способ позволяет в короткий срок с малыми экономическими затратами прогнозировать риск развития внутриутробной инфекции у новорожденных. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования риска развития внутриутробной инфекции у новорожденного, включающий определение среднего числа капилляров и среднего расстояния от капилляров до синцитиотрофобласта в терминальных ворсинах плаценты, полученной от доношенных и недоношенных беременностей в первые часы после рождения, при этом новорожденного относят к группе риска развития внутриутробной инфекции при среднем числе капилляров в 5 полях зрения в терминальных ворсинах каждой из плацент 5,28 – 5,42 и расстоянии от капилляров до синцитиотрофобласта 1,47 – 1,77 мкм в плаценте от доношенной беременности и при среднем числе капилляров в терминальных ворсинах 3,78 – 4,16 и расстоянии от капилляров до синцитиотрофобласта 2,0 – 2,40 мкм в плаценте от недоношенной беременности, завершенной в 30-36 недель гестации.