СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕТОКСИКАЦИОННОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ОЖОГАХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/50 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.

В качестве прототипа выбран способ оценки функционального состояния печени, заключающийся в определении в крови количества альфа-глобулинов (А), альбуминов (В), бета-глобулинов (С) и определении по формуле диагностического критерия - коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота по формуле: Кфсп=А / (А+В+С) (см. патент РФ №2305844, G01N 33/68, 2007 г.).

Однако известный способ является длительным, субъективным и не дает возможности ранней диагностики снижения детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.

Задача предлагаемого изобретения - раннее выявление нарушения детоксикационной функции печени при ожогах.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови, в гемолизате эритроцитов измеряют оптическую плотность в течение 1 минуты при длине волны 340 нм и вычисляют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K_a (мкмоль/мин²) и, если показатель K_a у крыс с ожогом ниже величины K_a здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.

Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте осуществляют следующим образом. Исследования выполнены на 15 половозрелых крысах линии Вистар - самцах массой 180 - 200 г. Контрольная группа представлена животными, не подвергшимися ожогу. Животным опытной группы под тиопенталовым наркозом (30 мг/кг массы) наносят ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час после ожога после декапитации собирают вытекающую из шейных сосудов кровь, стабилизируют ее цитратом натрия (3,8%) в соотношении 9:1, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, отделяют плазму от эритроцитов. Эритроцитарную массу промывают в 5 мл физиологического раствора. После осаждения (10 мин при 3000 об/мин) удаляют физиологический раствор с 10-15% поверхностно расположенных эритроцитов. Отмытые эритроциты гемолизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:40. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 сек в течение 1 минуты и определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K_a (мкмоль/мин²) по формуле:

, где

3 - объем пробы в кювете в мл;

10⁶ - коэффициент пересчета моль в мкмоль;

60 - 60 секунд;

6,22×10⁶ - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного НАД;

t - время измерения, мин;

ΔE₁ - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек.;

ΔE₂ - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин;

K_a эритроцитов крови интактных животных принимают за норму, которая составляет 1,70±0,01 мкмоль/мин². Если показатель K_a у животных с ожогом ниже величины K_a здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени при ожогах.

Результаты исследования коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции в гемолизате эритроцитов и печени представлены в таблице.

Таблица Коэффициент каталитической эффективности (K_a; мкмоль/мин²) альдегиддегидрогеназной реакции в эритроцитах и печени в норме и при ожоге № животного Интактные животные Опытная группа животных, подвергшихся ожогу Эритроциты Печень Эритроциты Печень 1 1,65 1,98 1,38 1,23 2 1,77 1,87 1,37 1,25 3 1,69 1,81 1,38 1,19 4 1,71 1,86 1,35 1,15 5 1,67 1,75 1,32 1,27 6 1,64 1,76 1,35 1,25 7 1,76 1,78 1,34 1,30 8 1,68 1,83 1,31 1,24 9 1,68 1,79 1,33 1,25 10 1,60 1,71 1,34 1,19 11 1,79 1,75 1,33 1,19 12 1,68 1,69 1,36 1,26 13 1,67 1,78 1,37 1,19 14 1,76 1,65 1,30 1,19 15 1,69 1,77 1,32 1,22 M±m 1,70±0,01 1,79±0,02 1,34±0,01* 1,23±0,01* Примечание: * - различия достоверны по сравнению с интактными животными (р<0,01)

Из таблицы видно, что коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K_a в эритроцитах здоровых крыс составил 1,70±0,01 мкмоль/мин² и идентичен K_a печени интактных крыс. K_a в печени интактных крыс равен 1,79:1:0,02 мкмоль/мин². При термической травме коэффициент каталитической эффективности эритроцитов снижен и составил 1,34±0,01 мкмоль/мин², в печени K_a соответственно тоже понижен и равен 1,23±0,01 мкмоль/мин². Поэтому на основании изучения коэффициента каталитической эффективности эритроцитов можно судить о коэффициенте каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции и соответственно о детоксикационной функции печени животных.

Пример конкретного выполнения исследования.

Беспородной белой крысе (самец массой 200 г., в таблице №5) наносят под тиопенталовым наркозом ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час собирают кровь из шейных сосудов и готовят гемолизат эритроцитов, 0,05 мл которого помещают в спектрофотометрическую кювету и измеряют величину оптической плотности при длине волны 340 нм (E₃₄₀) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:

Время 0 15 сек 30 сек 45 сек 1 мин E₃₄₀ 0,100 0,114 0,125 0,142 0,155

Рассчитывают величину оптической плотности при 340 нм: ΔE₁ - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек, ΔЕ₂ - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин.

После этого рассчитывают коэффициент каталитической эффективности альдегид дегидрогеназной реакции по формуле:

Таким образом,

что свидетельствует о снижении детоксикационной функции печени.

Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.

Изобретение относится к медицине. Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте заключается в нанесении ожога на 10% поверхности кожи животного, заборе крови и определении в гемолизате эритроцитов коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции К_а. В случае, если значение К_а при ожоге ниже показателя К_а здоровых животных, судят о снижении детоксикационной функции печени. Изобретение позволяет сделать вывод о детоксикационной функции печени. 1 табл.

Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте путем исследования крови, отличающийся тем, что в гемолизате эритроцитов определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K_a, и если значение K_a при ожоге ниже показателя K_a здоровых животных, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.