СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ БЕЛКА БТШ70 НА ТКАНЬ МОЗГА Российский патент 2009 года по МПК G01N33/68 G01N33/483 

Изобретение относится к физиологии, в частности к способу определения воздействия белка на ткани мозга в эксперименте in vitro.

Известен способ определения воздействия белка теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (БТШ70) на ткань мозга [1], принятый за прототип, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации в срезе с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия.

Цель - определение воздействия БТШ70 на ткань мозга при моделировании эпилептического приступа.

Сущность предложенного способа определения воздействия белка на ткань мозга, включающего подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в среде с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных с последующими, состоит в том, что срезы после их приготовления помещают в БТШ70 в концентрации 1 мг/мл, растворенный в инкубационной среде объемом 1 мл, и выдерживают в течение 20 мин. Затем действие белка прекращают и на срезы воздействуют хемоконвульсантом коразолом [2] в эпилептогенной концентрации 1-10 мкг/мл в течение 40 мин. Затем срезы отмывают физиологическим раствором от крови и регистрируют биоэлектрическую активность клеток. По наличию или отсутствию эпилептических разрядов определяют воздействие БТШ70 на защиту нервных клеток при смоделированном эпилептическом приступе.

Способ поясняется примером определения воздействия БТШ70 на ткань мозга при моделировании эпилептического приступа.

Пример.

Определение воздействия белка БТШ70 на ткань мозга по параметрам биоэлектрической активности - частоте и латетному периоду эпилептических разрядов (ЭР). Срезы перфузировали средой с БТШ70 в концентрации 1 мкг/мл в течение 20 мин (время установлено эмпирически). Затем действие белка прекращали и помещали в коразол в эпилептогенной концентрации 1 мкг/мл на 40 мин.

Предложенный способ определения воздействия БТШ70 поясняется таблицами.

Таблица 1 Антиэпилептический эффект БТШ70 при действии низкой дозы коразола - 1 мкг/мл Воздействие на срезы мозга Латентный период возникновения ЭР (мин) Число ЭР в мин Коразол (1 мкг/мл, 40 мин) 7,0±0,6 17,0±7,0 БТШ70 (1 мкг/мл), затем коразол 0,0 0,0 Отмывание (20 мин) 0,0 0,0

Как видно из данных, приведенных в таблице 1, предварительное воздействие БТШ70 на нервные клетки до индукции эпилепсии блокирует развитие ЭР в них.

Таблица 2 Антиэпилептический эффект БТШ70 при действии более высокой дозы коразола - 10 мкг/мл Воздействие на срезы мозга Латентный период возникновения ЭР (мин) Число ЭР в мин Коразол (10 мкг/мл, 40 мин) 5,0±0,3 25,0±4,0 БТШ70 (10 мкг/мл), затем коразол 0,0 0,0 Отмывание (20 мин) 0,0 0,0

Как видно из представленных данных в таблице 2, воздействие БТШ70 до действия более высоких доз коразола также предупреждает и предотвращает функционирование механизмов электрогенеза нервных клеток срезов от развития в них эпилепсии.

Необходимо отметить, что БТШ70 имеет эндогенное происхождение и, следовательно, не будет вызывать негативных побочных эффектов при его использовании в качестве антиэпилептического средства.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о том, что БТШ70, являющийся эндогенным веществом, защищает нервные клетки от эпилептического приступа в эксперименте.

Изобретение позволяет рекомендовать БТШ70 для использования в качестве антиэпилептического профилактического препарата для купирования эпилепсии при проведении преклинических испытаний.

Литература

1. Мокрушин А.А., Павлинова Л.И., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Белок теплового шока (Hsp70) протектирует активность глутаматергической синаптической передачи в обонятельной коре мозга крыс in vitro от тяжелой аноксии // ДАН, 2004, т.394, №3, с.419-422. Прототип.

2. Галкина О.В., Ещенко Н.Д., Путилина Ф.Е., Флеров М.А. Перекисное окисление липидов в нейронах и нейроглии при моделировании эпилептических судорог // Сб: Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты. М., 2005. С.158.

Изобретение относится к физиологии и фармацевтике. Для осуществления способа подготавливают переживающие срезы мозга, регистрируют исходные и последующие параметры после инкубации срезов в среде с исследуемым белком и определяют воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия белком. Способ включает регистрацию исходной биоэлектрической активности клеток срезов и инкубацию срезов в среде с белком в концентрации 1 мг/мл в течение 20 мин. Затем действие белка прекращают и на срезы воздействуют коразолом (хемоконвульсант) в эпилептогенной концентрации 1-10 мкг/мл в течение 40 мин. После чего срезы отмывают физиологическим раствором и регистрируют биоэлектрическую активность клеток. По отсутствию или наличию эпилептических разрядов определяют воздействие БТШ70 на защиту нервных клеток при смоделированном эпилептическом приступе в эксперименте. Использование способа позволяет определять активность конкретной партии белка БТШ70. 2 табл.

Способ определения воздействия белка БТШ70 на ткань мозга, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в инкубационной среде с белком БТШ70 и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после его воздействия, отличающийся тем, что
помещают срезы в инкубационный раствор с БТШ70 в концентрации 1 мг/мл на 20 мин,
помещают срезы в коразол в дозе 1-10 мг/мл на 40 мин,
отмывают срезы физиологическим раствором,
регистрируют эпилептические разряды,
определяют способность белка защищать клетки мозга от развития в них эпилептических разрядов при смоделированной эпилептической атаке по отсутствию в них разрядов.