СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ Российский патент 2017 года по МПК A61K31/505 A61K36/15 A61K36/185 A61K36/28 A61K39/42 A61P31/12 

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа профилактики инфекционных болезней и может быть использовано для предупреждения массовых респираторных болезней телят.

Этиология респираторных болезней сложна и включает в себя неблагоприятное воздействие на организм телят различных стресс-факторов. При этом снижаются показатели общей неспецифической резистентности и иммунобиологической реактивности, в результате чего резко ограничиваются адаптационные возможности организма к воздействию биологических (ассоциаты возбудителей вирусной, бактериальной, хламидийно-микоплазменной природы) и абиотических факторов. Профилактика респираторных вирусных болезней новорожденных телят 20-31-дневного возраста имеет свои характерные особенности. В результате метаболического распада колостральных антител и одновременного увеличения объема крови у телят наступает постепенная утрата пассивного иммунитета. Наблюдается снижение как клеточного, так и гуморального иммунитета при недоразвитости собственного иммунитета. При иммунологическом обследовании клинически здоровых телят 19-31-дневного возраста хозяйства, неблагополучного по респираторным болезням, обнаружились признаки функциональной недостаточности иммунной системы [1]. Они проявились тенденцией к снижению функциональной активности фагоцитирующих клеток, показателей Т-клеточного звена иммунитета, уровня IgG и IgM, а также иммунологической реактивности организма. Так, бактерицидная активность сыворотки крови составила 29,1±1,4% по сравнению с 31,3±1,2% у клинически здоровых телят из хозяйства, благополучного по респираторным болезням, лизоцимная активность сыворотки крови - 11,3±0,4% и 13,01±0,5%; концентрация общего белка - 51,3±1,2 г/л и 50,1±1,2 г/л соответственно.

В настоящее время использование иммуномодуляторов рассматривают как один из перспективных способов профилактики респираторных инфекций [2]. Основными требованиями при применении иммунофармакопрепаратов являются наличие у них иммуномодулирующего свойства, клинически доказанная высокая противовирусная эффективность, безопасность, отсутствие привыкания, побочных и канцерогенных эффектов. Иммуномодуляторы не должны вызывать чрезмерную сенсибилизацию и индукцию иммунопатологических реакций, а также нежелательного аддитивного действия при совместном применении с другими фармацевтическими средствами. Необходимыми качествами приемлемости препарата также являются предсказуемость схемы метаболизма и путей выведения из организма, возможность сочетания с другими лекарственными средствами, применяемыми при инфекционных и воспалительных заболеваниях. Перечисленным требованиям в полной мере отвечают пиримидиновые производные, которые нашли свое применение в лечении инфекционных, хирургических, неврологических, онкологических и многих других заболеваний и представляют собой группу самых разнообразных химических веществ с широким спектром фармакологической активности. Аналоги пиримидинов обладают широкой противоинфекционной направленностью фармакологического действия. Отмечается высокая активность этих препаратов как в отношении вирусов, микроорганизмов, грибков, так и в отношении паразитов. В последние десятилетия большое внимание обращено на препарат ксимедон, разработанный Институтом органической и физической химии им. акад. А.Е. Арбузова Казанского научного центра РАН и Казанским государственным медицинским институтом [3].

Ксимедон представляет собой 1-(β-оксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидро-2-оксипиримидин, обладает регенеративным (активизация процессов регенерации при линейных ранах кожных покровов и плоскостных дефектах кожи), противовоспалительным (регулирующее воздействие на инфламматорный процесс; в первой стадии воспаления препарат оказывает протективное влияние на клеточном уровне за счет мембраностабилизирующего, антиоксидантного, адаптогенного, антибактериального эффектов, во второй фазе воспаления - выраженное противоотечное действие), иммуностимулирующим (путем индукции экспрессии CD2+ молекул, FCgR и C3bR на мембране иммунокомпетентных клеток, усиления метаболических процессов в клетке за счет активации внутриклеточных ферментных систем и синтеза ДНК, что приводит к стимуляции Т- и В-систем иммунитета с увеличением абсолютного содержания CD4+ и CD19+ клеток, инициации пролиферации и дифференцировки костномозговых предшественников Т-лимфоцитов по хелперному пути, повышению функциональной активности Т-лимфоцитов, стимуляции фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов с увеличением показателя завершенности фагоцитоза), антибактериальным, антиоксидантным (мембранопротективное воздействие на лейкоциты) эффектами. Кроме того, препарат способствует увеличению числа эритроцитов за счет стимуляции гемопоэза и путем повышения их устойчивости к разрушению [4]. К настоящему времени накоплен значительный материал об усиленном применении ксимедона в следующих областях клинической медицины: для профилактики и лечения осложнений в послеоперационном периоде, особенно у пациентов с высоким риском осложнений, и в неотложной абдоминальной хирургии, в комплексном лечении длительно не заживающих ран и трофических язв. Назначение ксимедона показано при хроническом остеомиелите, в восстановительном периоде после травм периферических нервов, в комплексе лечения ожоговой болезни и перед аутодермопластикой. Препарат успешно применен в лечении пневмонии, хронического бронхита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, распространенных и деструктивных форм туберкулеза, в стоматологии [5]. В ветеринарной медицине гидрохлорид ксимедона (гидрохлорид 1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиримидин-2-она) - промежуточный продукт в процессе получения ксимедона - применяли в качестве средства повышения естественной резистентности и профилактики желудочно-кишечных болезней телят [6], а в сочетании с миксофероном (препарат для инъекций на основе рекомбинантных α-интерферонов) для профилактики ассоциированной бронхопневмонии телят: телятам 30-45-дневного возраста вводили гидрохлорид ксимедона в дозе 25 мг/кг живой массы и миксоферон в количестве 1 доза на кг живой массы, двукратно с интервалом в 7 дней [7]. В известных способах обеспечивается повышение устойчивости телят к смешанным респираторным инфекциям, однако у таких животных клинические признаки болезни не проявляются, а выделение возбудителей происходит. Вирусы в большой концентрации (4,5-5 lg ТЦД 50/мл) выделяются из носовой слизи, содержимого конъюнктивального мешка, слюны и мочи. В связи с этим наблюдается широкое распространение возбудителей и массовое перезаражение животных [8].

Цель изобретения - повышение эффективности профилактики смешанных респираторных болезней телят вирусно-бактериальной этиологии обеспечением полной защиты от развития клинически выраженного заболевания и прекращения экскреции вирусов и бактерий.

Поставленная цель достигается применением внутрь иммунотропного препарата и дополнительной инъекцией гипериммунной сыворотки животных-доноров, содержащей антигемагглютинины к вирусам ПГ-3 в титре 1:1280, ИРТ - в титре 1:256 и ВД-БС - в титре 1:1024, аденовирусу - в титре 1:256, PC-вирусу - в титре 1:128.

Иммунотропный препарат содержит 2,0 г гидрохлорида ксимедона и 100,0 мл 3,5% спиртовой настойки почек сосны обыкновенной (Gemmue Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinaceapurpurea L.), корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium L.), взятых в соотношении 2:1:1.

Обоснованием для выбора компонентов настойки послужили данные о фармакологических свойствах и химическом составе лекарственного растительного сырья. Каждый компонент содержит биологически активные вещества, воздействующие одновременно на все звенья патогенеза, симптоматику воспалительных заболеваний респираторных органов, а также обладающие выраженным антимикробным действием на патогенную и условно патогенную микрофлору.

Биологически активные вещества почек сосны (Gemmue Pini) обладают дезинфицирующим, фитонцидным, отхаркивающим, витаминным и успокаивающим свойствами, эффективно предотвращают распространение микробной и вирусной инфекции в организме.

Биологически активные вещества травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.) обладают иммуномодулирующей активностью, снижают активность гиалуронидазы, которую вырабатывают бактерии и вирусы, в результате чего сохраняется гиалуроновая кислота - субстанция, которая формируется в тканях между клетками и служит барьером против инфекций [9], увеличивают противомикробную активность лейкоцитов, макрофагов и нейтрофилов крови и повышают синтез защитных антител и эндогенного интерферона.

Биологически активные вещества корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium I.) обладают противовоспалительным, антимикробным, бактерицидным, противогрибковым, кровоостанавливающим, отхаркивающим свойствами.

Для приготовления настойки почки сосны обыкновенной (Gemmue Pini), траву и соцветия эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневища и корни девясила высокого (Inula Neleium L.) измельчают (в сухом виде) и смешивают в соотношении 2:1:1. Сырье помещают в стеклянный сосуд и смачивают, заливая извлекателем (70% спиртом) в соотношении 1:5. Слив готового продукта получают через 7 дней.

В соответствии с классификацией токсичности веществ по ГОСТу 12.1.007-88 средство может быть оценено как относительно безопасное, поскольку при определении параметров острой токсичности на мышах весом 20,0 г оно в концентрации 20% и 40% показало ЛД₅₀ более 17,8 г/кг массы тела, а при внутриутробном введении - более 3,0 г/кг массы тела.

Гипериммунную сыворотку готовят по методу Н.И. Горбань (1981) из крови животных-доноров из хозяйства, для которого она предназначается, предварительно обследованных на вирус лейкоза крупного рогатого скота в РИД с отрицательными результатами. Животных иммунизируют поливалентной противовирусной вакциной. Эффективная сыворотка должна содержать антитела к этиологическим агентам респираторных болезней телят в следующих титрах: к вирусу ПГ-3 - 1:1280, ИРТ - 1:256, ВД-БС - 1:1024, аденовирусу - 1:256, PC - вирусу - 1:128.

Способ осуществляется следующим образом.

Клинически здоровым 20-30-дневным телятам трехкратно применяют внутрь иммунотропный препарат в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы первый раз за 18-24 часа до и двукратно после иммунизации, которую проводят трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 10-12 дней.

Профилактическую эффективность способа определяли в производственных опытах в условиях хозяйства, длительно неблагополучного по респираторным болезням, обусловленным воздействием на организм ассоциаций вирусов, патогенной и условно патогенной микрофлоры на фоне нарушения условий содержания и кормления стельных коров и телят. При серологических исследованиях сывороток крови телят, больных респираторными инфекциями, выявлены антитела к вирусам ИРТ в 80%, ПГ-3 - в 72,5%, ВД-БС - в 77,5%, PC - в 67,5% и к аденовирусу - в 60% случаев. При этом одновременно в 60% проб выявлены антитела к пяти вирусам - ИРТ, ПГ-3, ВД-БС, PC, АД, в 22,5% - к четырем вирусам ИРТ, ВД-БС, PC, АД, в 17,5%) проб - к трем вирусам ИРТ, ВД-БС, PC - инфекции. При бактериологических исследованиях патологического материала от павших через 13-15 дней после первого исследования сыворотки крови телят, у которых при первичном исследовании были выявлены антитела к пяти и четырем вирусам, выделена условно патогенная микрофлора, представленная различными ассоциациями с преобладанием стафилококков - 64,3%, стрептококков - 42,9%.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Эффективность профилактики в зависимости от дозы иммунотропного препарата определяли на 5 группах клинически здоровых телят 20-30-дневного возраста: 4 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Условия кормления, ухода и содержания во всех группах одинаковые. Телятам всех опытных групп трехкратно применяли внутрь иммунотропный препарат в дозах мл/кг живой массы 1,0 (первая группа), 1,5 (вторая группа), 2,0 (третья группа) и 2,5 (четвертая группа) первый раз за 18 часов до и двукратно после иммунизации, которую проводили трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 10 дней. Телятам контрольной группы препаратов не применяли. Клинический статус определяли общепринятыми методиками; все павшие животные подвергались полному патолого-анатомическому вскрытию с отправкой патологического материала в ветеринарную лабораторию. Результаты представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, дозы в заявленном интервале 1,5-2,0 мл/кг живой массы являются необходимыми и достаточными для получения оптимальных показателей клинического статуса телят.

Пример 2. Влияние иммунотропного препарата на иммунный статус клинически здоровых телят определяли на 3 группах клинически здоровых телят 20-30-дневного возраста в сравнении с условным контролем (клинически здоровые телята 20-30-дневного возраста хозяйства, благополучного по респираторным болезням телят). Телятам первой группы трехкратно применяли внутрь иммунотропный препарат в дозе 1,5 мл/кг живой массы первый раз за 18 часов до и двукратно после иммунизации, которую проводили трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 12 дней. Телятам второй группы трехкратно применяли внутрь ксимедон в дозе 2,0 мл/кг живой массы первый раз за 24 часа до и двукратно после иммунизации, которую проводили трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 12 дней. Телят третьей группы иммунизировали трехкратной подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 12 дней. Функциональное состояние иммунной системы оценивали по показателям клеточного и гуморального иммунитета, включающим относительное и абсолютное содержание Т- и В-лимфоцитов крови (определяли по методу Н.И. Блинова, 1980), функциональную активность нейтрофилов крови в НСТ-тесте (определяли по методу М.Е. Виксмана и A.M. Маянского, 1979), уровни иммуноглобулинов отдельных изотипов (G и М) (определяли по методу Manchini, 1964), лизоцимную активность сыворотки крови (определяли по методу В.Г. Дорофейчук,1969). Взятие крови у животных для исследований проводили до применения препаратов (фон) и спустя 10 дней после завершения опыта. Результаты представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, во всех группах отмечали изменения в показателях иммунного статуса относительно исходных значений. Более высокие показатели гуморальных и клеточных факторов естественной резистентности обеспечивал иммунотропный препарат в соответствии с изобретением. Так, по сравнению с условным контролем относительное содержание Т-лимфоцитов максимально приближалось к соответствующему показателю, а В-лимфоцитов превышало соответствующий показатель, абсолютное содержание Т-лимфоцитов превышало, а абсолютное содержание В-лимфоцитов достигало соответствующего показателя. Аналогичная динамика отмечалась по другим исследованным показателям.

Пример 3. Сравнительную эффективность заявляемого способа определяли на 4 группах клинически здоровых телят 20-30-дневного возраста: 3 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Телятам первой опытной группы трехкратно применяли внутрь иммунотропный препарат в соответствии с изобретением в дозе 2,0 мл/кг живой массы первый раз за 24 часа до и двукратно после иммунизации, которую проводили трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 12 часов (заявляемый способ). Телятам второй опытной группы вводили гидрохлорид ксимедона в дозе 25 мг/кг живой массы и миксоферон в количестве 1 доза на кг живой массы, двукратно с интервалом в 7 дней (способ-прототип). Телятам третьей опытной группы подкожно вводили гипериммунную сыворотку животных-доноров в дозе 1 мл/кг живой массы трехкратно с интервалом 12 дней (базовый способ). Телятам четвертой группы препаратов не применяли (контроль). Всех телят подвергали общеклиническому обследованию. Через 10 дней после окончания опытов брали кровь для определения основных иммунологических показателей. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Как видно из таблицы 3, профилактическое введение препаратов во всех группах проводили на фоне нарушений системы иммунитета в виде уменьшения функциональной активности фагоцитирующих клеток, снижения показателей Т-клеточного звена, дефицита IgG и IgM. Во всех опытных группах проявилась тенденция к нормализации иммунобиологических показателей. Более выраженные изменения нормализующего характера установлены в первой группе, особенно в отношении уровней IgG и IgM. Так, уровень IgG у телят первой группы увеличился на 42,06% по сравнению с 32,03% (вторая группа), 17,18% (третья группа) и 6,67% (контроль). IgG белки представляет класс антител G. Они составляют около 80% всех иммуноглобулинов. Антитела класса IgG обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях, т.е. представляют антитела вторичного иммунного ответа на чужеродные вещества. Уровень IgM у телят первой группы повысился на 41,18% по сравнению с 17,69% (вторая группа), 6,25% (третья группа) и 5,89% (контроль). IgM - белки, представляющие класс антител М, первыми вырабатывают антитела в ответ на острую инфекцию, обеспечивая первичный иммунитет. Они первыми появляются в кровяном русле при бактериемии, осуществляя антибактериальный иммунитет. Показатели функциональной активности нейтрофилов крови в спонтанном и индуцированном тестах у телят первой группы были выше на 31, 81% и 64, 08% соответственно против 17,39% и 50,26% во второй группе, 13,04% и 37,57% в третьей группе и 5,88% и 9,04% в контроле. Повышение резистентности организма животных опытных групп отразилось и на количестве заболевших (3,1% - первая группа, 9,1% - вторая группа и 7,9% - третья группа по сравнению с 13,3% в контроле) (таблица 4). Симптомы респираторной патологии у телят, которым применяли иммунотропные препараты, проявлялись преимущественно в легкой форме и характеризовались серозным ринитом, редким сухим кашлем, повышением температуры тела на 0,5-1,2°С. Симптомы ринита сохранялись 6-8 дней. В контрольной группе процент больных был высоким (20,0%), причем болезнь протекала тяжело, с осложнениями, сопровождаясь поражением желудочно-кишечного тракта и рецидивами. Клинические признаки у больных животных характеризовались кратковременным повышением температуры тела до 40,5-41°С, снижением или отсутствием аппетита, общим угнетением, появлением серозно-слизистых истечений из носовой полости, учащенным дыханием, кашлем, конъюнктивитом. Заболевших телят лечили традиционными способами с применением симптоматических средств. Клиническое выздоровление наступало через 16 дней.

Проведенные исследования подтвердили высокую эффективность заявляемого способа профилактики с применением иммунотропного средства на основе ксимедона гидрохлорида и гипериммунной сыворотки. Компоненты иммунотропного средства обладают высокой биологической доступностью и поливалентным положительным воздействием на организм животного. Гидрохлорид 1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиримидин-2-она (гидрохлорид ксимедона) - иммуномодулятор с выраженным регенераторным и антимикробным действием. Настойка почек сосны обыкновенной (Gemmue Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium L) содержит биологически активные вещества, повышающие функциональную активность антиоксидантной и иммунной систем, в частности, макрофагальных клеток. Пассивная иммунизация на фоне коррекции иммунных дисфункций обеспечивает надежную защиту телят не только от инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи - болезни слизистых, аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекций, но и от возможной ассоциации других патогенных вирусов, циркулирующих в животноводческих хозяйствах, включая герпесвирусы, энтеро-вирусы и многочисленные неклассифицированные вирусы, а бактериостатическая активность иммунотропного препарата - от возбудителей бактериального происхождения.

Источники информации

1. Левковская М.Н. Противовирусное действие витулина и тулимкара в опытах in vitro и in vivo: автореф. дис… канд. вет. наук: 06.02.02 - Санкт-Петербург, 2011 - 18 с.

2. В.А. Булгакова, И.И. Балаболкина, Л.К. Котосова и др. Оценка эффективности применения иммуномодулятора комбинированного действия инозин пранобекса для профилактики респираторных болезней у детей с аллергией // Педиатрическая фармакология. - 2010. - Т. 7, №5. - С. 30-38.

3. А.Х. Измайлова, Д.Х. Шакирова, А.Г. Измайлов - Препараты пиримидинового ряда в экспериментальных и клинических исследованиях // Вестник современной клинической медицины. - 2013. - Том 6. - С. 31-34.

4. Г.В. Черепнев. Механизмы реализации биологической активности пиримидиновых производных в иммунокомпетентных клетках: автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.00.25. - Казань, 1994. - 20 с.

5. П.С. Зубеев, А.А. Лаганин // www.medicum.nnov.ru/mnj/content.php?year=2002&num=3.

6. Патент РФ №2086240 С1, 1997.

7. Яшин Д.А. Патоморфология ассоциированной бронхопневмонии телят в условиях Нижегородской области и иммунокоррекция гидрохлоридом ксимедона: автореф. дис… канд. вет.наук: 16.00.02 - Нижний Новгород, 2009. - 18 с.

8. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев В.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. М.: ВНИТИБП, 1998, С.246.

9. Самородов В.Н., Поспелов С.В., Моисеева Г.Ф. и др. Фотохимический состав представителей рода эхинацея (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Хим. – фармацевт. журнал. - М., 1996. - 4. - С. 32-37.

Изобретение относится к области ветеринарии. Клинически здоровым телятам 20-30-дневного возраста применяют внутрь ксимедон гидрохлорид в смеси с 3,5% спиртовой настойкой почек сосны обыкновенной (Gemmue Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium L.), взятых в соотношении 2:1:1, из расчета 2,0 г ксимедона гидрохлорида на 100,0 мл 3,5% спиртовой настойки почек сосны обыкновенной (Gemmue Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium L.) в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы первый раз за 18-24 часа до и двукратно после иммунизации. Иммунизацию проводят трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки, содержащей антигемагглютинины к вирусам ПГ-3 в титре 1:1280, ИРТ - в титре 1:256 и ВД-БС - в титре 1:1024, аденовирусу - в титре 1:256, PC-вирусу - в титре 1:128, в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 10-12 дней. Использование заявленного изобретения обеспечивает высокий профилактический эффект. 4 табл., 3 пр.

Способ профилактики респираторных болезней телят, включающий применение клинически здоровым телятам 20-30-дневного возраста ксимедона гидрохлорида, отличающийся тем, что ксимедон гидрохлорид применяют в смеси с 3,5% спиртовой настойкой почек сосны обыкновенной (Gemmue Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium L.), взятых в соотношении 2:1:1, из расчета 2,0 г ксимедона гидрохлорида на 100,0 мл 3,5% спиртовой настойки почек сосны обыкновенной (Gemmue Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневищ и корней девясила высокого (Inula Neleium L.) в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы первый раз за 18-24 часа до и двукратно после иммунизации, которую проводят трехкратно подкожной инъекцией гипериммунной сыворотки, содержащей антигемагглютинины к вирусам ПГ-3 в титре 1:1280, ИРТ - в титре 1:256 и ВД-БС - в титре 1:1024, аденовирусу - в титре 1:256, PC-вирусу - в титре 1:128, в дозе 1,0 мл/кг живой массы с интервалом в 10-12 дней.