СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДЕПРЕССИИ ЭРИТРОИДНОГО РОСТКА КРОВЕТВОРЕНИЯ ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ МИЕЛОСУПРЕССИИ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/4523 A61K35/18 A61P7/06 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к гематологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений в системе крови, развивающихся при цитостатическом воздействии.

Показано, что эритроидные клетки как наиболее интенсивно делящаяся популяция нуклеаров костного мозга, особенно чувствительна к действию цитостатиков [1]. Известен, способ коррекции нарушений эритропоэза, вызванных цитостатиками, с помощью рекомбинантного эритропоэтина - рекормона [2].

Данный способ является наиболее близким к заявляемому по достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Недостатком способа являются осложнения цитостатической болезни при введении рекормона, которые заставляют отказаться от монотерапии [3]. Перспективным для лечения цитостатической анемии является комплексное влияние на кроветворную ткань - восстановление структурно-функциональной целостности костного мозга и воздействие на пул предшественников эритропоэза, что, предположительно, будет препятствовать развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения и усиливать эффект рекормона.

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение эффективности способа и уменьшение побочного действия рекормона.

Поставленная задача достигается тем, что ципрогептадин в дозе 30 мг/кг вводят за 30 мин до введения цитостатика, а на следующие сутки после цитостатического воздействия вводят рекормон в дозе 10 ЕД/мышь 1 раз в сут в течение 5 дней.

Совместное применение ципрогептадина и рекормона стало возможным благодаря выявленному авторами новому свойству ципрогептадина потенцировать действие рекормона и предотвращать развитие депрессии эритроидного ростка кроветворения, развивающейся при цитостатических миелосупрессиях.

Новым в предлагаемом изобретении является совместное использование ципрогептадина в дозе 30 мг/кг, цитостатического препарата и рекормона.

Ципрогептадин (перитол) проявляет антигистаминное, противоаллергическое, антисеротониновое действие, блокирует H₁ гистаминовые рецепторы (регистрационный номер П №012084/02). Применяют препарат при аллергических заболеваниях, мигрени, он оказывает выраженное седативное действие [4]. Известна, способность ципрогептадина, введенного внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг, блокировать постсинаптические серотониновые С₂-рецепторы [5].

Эпоэтин бета (β-(1-165)-Эритропоэтин, рекормон) относится к группе стимуляторов гемопоэза как стимулятор эритропоэза. Показанием к его применению являются анемии различного генеза [4]. Однако при назначении рекормона могут наблюдаться: гипертонический криз с проявлениями энцефалопатии, тромбоцитопения, тромбоцитоз, повышение концентрации калия и фосфатов в сыворотке, аллергические реакции (сыпь, крапивница), что ограничивает применение препарата. Следует отметить, что одним из показаний к применению ципрогептадина являются аллергические реакции (в частности крапивница) [4].

Ярким представителем группы цитостатиков является фторпиримидиновый антиметаболит 5-фторурацил, активно используемый в химиотерапии злокачественных образований [4]. Исследование механизма действия препарата показало, что развитие миелосупрессии вследствие назначения 5-фторурацила, связано, в первую очередь, с нарушением структурно-функциональной целостности кроветворной ткани (гемопоэтические островки), где происходит созревание коммитированных кроветворных предшественников до зрелых клеток крови, и лимфоидных механизмов [6]. В основе стимулирующего действия на эритропоэз рекормона лежит усиление пролиферативной активности эритроидных клеток-предшественников и ускорение темпов их созревания [7]. Поэтому нарушение, прежде всего, процессов формирования гемопоэтических островков на фоне истощения коммитированных прекурсоров приводит к развитию осложнений цитостатической болезни при введении рекормона. Вместе с тем, обнаружена способность ципрогептадина, при применении 5-фторурацила, восстанавливать структурно-функциональную организацию костного мозга [8]. Перспективным для лечения цитостатической анемии может явиться комплексное воздействие на кроветворную ткань: одновременное восстановление структурно-функциональной целостности кроветворной ткани и стимуляция пролиферативной активности и интенсивности дифференцировки предшественников эритропоэза. Это позволит существенно повысить эффективность противоопухолевого лечения, снизить дозу рекормона, а также улучшить качество жизни больных.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Способ может быть использован для повышения эффективности лекарственной химиотерапии. Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна» и «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Предлагаемый способ изучен в экспериментах на мышах-самцах линии CBA/CaLac в количестве 220 штук, массой 20-22 г. Животные первой категории, конвенциональные линейные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).

Способ осуществляют следующим образом.

У лабораторного животного (мыши) цитостатическую миелосупрессию моделировали однократным внутрибрюшинным введением в 1/3 МПД (76 мг/кг) фторпиримидинового антиметаболита 5-фторурацила (Украина, химфармобъединение ”Дарница”). За 30 мин до цитостатического воздействия животным опытных групп однократно внутрибрюшинно вводили антисеротониновый препарат ципрогептадин (”Serwa”, Германия) в дозе 30 мг/кг. Непосредственно перед использованием препарат растворяли в стерильном физиологическом растворе. Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем физиологического раствора (0,2 мл). На следующий день после введения цитостатика в течение пяти дней мыши опытных групп получали подкожные инъекции препарата рекомбинантного человеческого эритропоэтина (эпоэтин-β) - рекормона (”Hoffman-La Roche Ltd”, Швейцария), в дозе 10 ЕД на мышь. В качестве фона использовали интактных животных.

На 2-7, 12-е сут после цитостатического воздействия у животных определяли показатели периферической крови и костномозгового кроветворения стандартными гематологическими методами, структурно-функциональную организацию костного мозга изучали путем ферментативного выделения гемопоэтических островков и последующей оценки их количественного и качественного состава [9].

Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием непараметрического U-критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Пример

В ходе исследований установлено, что 5-фторурацил значительно снижает содержание эритрокариоцитов в костном мозге на протяжении всего периода исследования, вызывает развитие ретикулоцитопении в периферической крови на 2-6-е сут опыта (табл.1, 2). Указанные изменения эритроидного ростка кроветворения связаны с выраженными нарушениями со стороны структурно-функциональной организации костного мозга. Так на 2-7-е сут опыта отмечается подавление выхода клеточных комплексов ассоциированных с макрофагальными элементами (до 9-46%, Р<0,001). Изучение цитологических препаратов позволило выявить в этот период статистически достоверное снижение числа эритроидных и эритрогранулоцитарных (смешанных) гемопоэтических островков (табл.3).

Введение рекормона приводит к ускорению процессов восстановления эритропоэза, подавленного цитостатиком. Так, препарат увеличивает число эритроидных клеток в костном мозге на 4, 6, 7, 12-е сут эксперимента (табл.1). Прирост ретикулоцитов в периферической крови отмечался на 4-6-е и 12-е сут исследования (табл.2). Применение рекормона не влияет на процессы формирования макрофагпозитивных клеточных комплексов и эритроидных и эритрогранулоцитарных гемопоэтических островков в кроветворной ткани (табл.3, 4).

Последовательное использование ципрогептадина и рекормона увеличивает содержание эритрокариоцитов в костном мозге животных после цитостатической миелосупрессии, начиная с 3-х сут опыта (3-7, 12 сут) (табл.1). Увеличение содержания ретикулоцитов при действии препаратов наблюдается на 2, 5-7, 12-е сут эксперимента (табл.2). Следует отметить, что активация эритроидного ростка кроветворения при применении рекормона уступает таковой при последовательном использовании ципрогептадина и рекормона (табл.1, 2).

Показана способность ципрогептадина совместно с рекормоном восстанавливать структурно-функциональную целостность костного мозга у мышей, получавших

5-фторурацил (табл.3, 4, 5). Так, препараты способствуют накоплению числа макрофагпозитивных (2, 4-7-е сут), эритроидных (2-7-е сут) и эритро-гранулоцитарных (2, 4, 6, 7, 12-е сут) гемопоэтических островков (табл.3, 4, 5). При анализе данных обнаружено, что формирование дополнительных очагов эритроидного и смешанного кроветворения предшествует возрастанию числа эритрокариоцитов в костном мозге и ретикулоцитов в периферической крови под влиянием ципрогептадина и рекормона у животных, получавших 5-фторурацил.

Итак, введение ципрогептадина до моделирования цитостатической миелосупрессии с последующим введением рекормона препятствует разрушению структурно-функциональной целостности кроветворного ткани и развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения, а также способствует интенсивному восстановлению содержания ретикулоцитов в периферической крови, вплоть до ретикулоцитоза. По всем показателям «положительный» эффект последовательного применения ципрогептадина и рекормона превосходит эффект коррекции нарушений эритропоэза рекормоном. Таким образом, повышается эффективность лечения цитостатической миелосупрессии рекормоном.

Литература

1. Эритроциты и злокачественные новообразования. / Новицкий В.В., Степовая Е.А., Гольдберг В.Е. и др. - Томск: ”STT”, 2000. - С.171-217.

2. Удут Е.В. Коррекция анемического синдрома при миелоингибирующих воздействиях. - Автореф. дис… д-ра мед. наук. - Томск, 2008. - С.8-37.

3. Миненко С. В., Птушкин В.В. Роль эритропоэтина бета (рекормон) в лечении анемии при опухолевых заболеваниях. // Вместе против рака. Новое в химиотерапии злокачественных новообразований. - 2005. - Спец. выпуск №2.

4. Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств. - 15-й вып. / Гл. ред. Г.Л. Вышковский. - М.: ”РЛС-2007”. - 2006. - С.955-956; 998-999; 1035-1036.

5. Peroutka S.J., Lebovitz R.M., Snyder S.H. Two distinct central serotonin receptors with different physiological functions. // Science. - 1981. - Vol.212, №4496. - P.827-829.

6. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях. - Томск: STT, 1999. - С.61-84.

7. Удут Е.В. Влияние рекормона на функциональную активность прекурсоров эритропоэза при миелосупрессии, вызванной 5-фторурацилом. // Сибирский онкологический журнал. Приложение №2. - 2007. - C.115-116.

8. Минакова М.Ю., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Удут Е.В. Роль серотонинергической системы в регуляции эритропоэза при цитостатических миелосупрессиях. // Бюл. эксперим. биол. и медицины. Приложение №1 - 2007. - С.86-91.

9. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематалогии. - Томск, 1992. - С.172-173, 208.

Таблица 1 Динамика содержания эритрокариоцитов (×10⁶ клеток/бедро) в костном мозге мышей, получавших 5-фторурацил, 5-фторурацил совместно с рекормоном либо 5-фторурацил совместно с ципрогептадином и рекормоном Сроки исследования, сутки 5-фторурацил 5-фторурацил + рекормон Ципрогептадин + 5-фторурацил + рекормон   Интактный контроль 0,89±0,08 0,89±0,08 0,89±0,08   2 0,04±0,01 0,04±0,01 0,05±0,02     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А         Б         В 3 0,04±0,01 0,03±0,01 0,12±0,01     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А       Р<0,002 Б       Р<0,001 В 4 0,09±0,01 0,17±0,03 0,7±0,06     Р<0,001 Р<0,001   А     Р<0,05 Р<0,001 Б       Р<0,001 В 5 0,31±0,03 0,22±0,02 1,24±0,19     Р<0,001 Р<0,001   А       Р<0,002 Б       Р<0,002 В 6 0,49±0,07 0,82±0,04 0,81±0,07     Р<0,02     А     Р<0,02 Р<0,01 Б         В 7 0,23±0,04 0,74±0,07 0,94±0,09     Р<0,001     А     Р<0,001 Р<0,001 Б         В 12 0,35±0,06 0,66±0,05 0,74±0,13     Р<0,002 Р<0,02   А     Р<0,02 Р<0,02 Б         В Примечание. Р<0,002, Р<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных в интактном контроле, Б - у животных той же модели без препарата, В - у животных той же модели с рекормоном

Таблица 2 Динамика содержания ретикулоцитов в периферической крови мышей, получавших 5-фторурацил, 5-фторурацил совместно с рекормоном либо 5-фторурацил совместно с ципрогептадином и рекормоном (‰) Сроки исследования, сутки 5-фторурацил 5-фторурацил + рекормон Ципрогептадин + 5-фторурацил + рекормон   Интактный контроль 29,4±1,86 29,4±1,86 29,4±1,86   2 3,83±0,6 11,5±1,48 3,0±0,45     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А     Р<0,001   Б       Р<0,001 В 3 7,83±0,65 10,33±1,26 6,8±0,58     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А     Р<0,05   Б       Р<0,05 В 4 7,6±0,51 17,0±1,75 7,6±0,93     Р<0,001 Р<0,01 Р<0,001 А     Р<0,001   Б       Р<0,002 В 5 6,0±0,73 15,5±1,67 15,67±1,71     Р<0,001 Р<0,002 Р<0,002 А     Р<0,002 Р<0,002 Б         В 6 9,33±1,17 35,17±4,2 55,67±6,17     Р<0,001   Р<0,002 А     Р<0,001 Р<0,001 Б       Р<0,02 В 7 30,6±3,2 38,8±4,04 63,67±5,34         Р<0,002 А       Р<0,001 Б       Р<0,001 В 12 31,6±2,6 51,6±6,6 38,6±3,66       Р<0,02 Р<0,05 А     Р<0,02   Б         В Примечание. Р<0,05, Р<0,02, Р<0,002, Р<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных в интактном контроле, Б - у животных той же модели без препарата, В - у животных той же модели с рекормоном

Таблица 3 Влияние 5-фторурацила на качественный состав гемопоэтических островков (×10³/ бедро) в костном мозге мышей Сроки исследования, сутки Макрофагпозитивные островки Эритроидные островки Эритрогранулоцитарные островки   Интактный контроль 12,88±1,29 3,52±0,43 14,33±1,47   2 5,92±0,47 1,46±0,13 4,38±0,58     Р<0,001 Р<0,01 Р<0,001 А 3 3,7±0,47 1,57±0,17 2,81±0,19     Р<0,001 Р<0,01 Р<0,001 А 4 1,33±0,54 0,82±0,18 1,56±0,33     Р<0,001 Р<0,01 Р<0,001 А 5 1,85±0,37 0,64±0,04 2,63±0,14     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А 6 1,11±0,5 0,35±0,04 1,12±0,15     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А 7 2,96+0,47 1,24+0,1 3,1+0,37     Р<0,001 Р<0,01 P<0,001 А 12 5,33±0,54 0,47±0,04 4,11±0,28     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А Примечание. Р<0,01, Р<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных интактного контроля

Таблица 4 Влияние рекормона на качественный состав гемопоэтических островков (×10³/ бедро) в костном мозге мышей, получавших 5-фторурацил Сроки исследования, сутки Макрофагпозитивные островки Эритроидные островки Эритрогранулоцитарные островки   Интактный контроль 12,88±1,29 3,52±0,43 14,33±1,47   2 3,33±0,5 1,1±0,14 2,54±0,16     Р<0,001   Р<0,02 А   Р<0,001 Р<0,001 Р<0001 Б 3 2,96±0,47 1,67±0,26 2,32±0,39     Р<0,001 Р<0,02 Р<0,001 А         Б 4 2,96±0,47 1,35±0,16 2,65±0,31     Р<0,001 Р<0,01 Р<0,001 А   Р<0,02   Р<0,02 Б 5 1,11±0,5 0,33±0,04 1,45±0,16     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А     Р<0,001 Р<0,001 Б 6 2,59±0,37 1,16±0,18 2,25±0,23     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А     Р<0,01 Р<0,01 Б 7 4,44±0,81 1,9±0,12 4,77±0,18     Р<0,001 Р<0,01 Р<0,001 А     Р<0,01 Р<0,001 Б 12 2,66±0,44 0,6±0,1 4,08±0,47     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А   Р<0,01     Б Примечание. Р<0,02, Р<0,01, Р<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных интактного контроля, Б - у животных той же модели без препарата

Таблица 5 Влияние ципрогептадина и рекормона на качественный состав гемопоэтических островков (×10³/ бедро) в костном мозге мышей, получавших 5-фторурацил Сроки исследования, сутки Макрофагпозитивные островки Эритроидные островки Эритрогранулоцитарные островки   Интактный контроль 12,88±1,29 3,52±0,43 14,33±1,47   2 11,47±1,56 4,88±0,15 8,5±0,69       Р<0,02 Р<0,01 А   Р<0,02 Р<0,001 Р<0,01 Б   Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 В 3 3,55±0,54 3,1±0,41 2,89+0,29     Р<0,001   Р<0,001 А     Р<0,002 Р<0,02 Б     Р<0,02   В 4 4,0±0,44 2,51±0,27 3,08±0,39     Р<0,001   Р<0,001 А   Р<0,001 Р<0,001 Р<0,02 Б     Р<0,01   В 5 3,33±0,5 0,93±0,07 2,84±0,28     Р<0,001 Р<0,001 Р<0,001 А     Р<0,01   Б   Р<0,01 Р<0,001 Р<0,01 В 6 4,07±0,89 1,51±0,19 3,08±0,45     Р<0,002 Р<0,001 Р<0,001 А     Р<0,001 Р<0,001 Б         В 7 7,4±0,74 1,69±0,16 7,98±0,87     Р<0,02 Р<0,05 Р<0,02 А   Р<0,001 Р<0,05 Р<0,001 Б   Р<0,02   Р<0,01 В 12 6,66±0,99 0,7±0,1 5,94±0,59     Р<0,002 Р<0,001 Р<0,001 А       Р<0,02 Б   Р<0,01   Р<0,01 В Примечание. Р<0,02, Р<0,01, Р<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных интактного контроля, Б - у животных той же модели без препарата, В - у животных той же модели с рекормоном

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии. Для этого вводят ципрогептадин в дозе 30 мг/кг за 30 минут до введения цитостатика. На следующие сутки после цитостатического воздействия вводят рекормон в дозе 10 ЕД/мышь 1 раз в сутки в течение 5 дней. Способ обеспечивает потенциирование эффекта и уменьшение побочного действия рекормона, способствуя нормализации содержания эритроидных элементов в периферической крови. 5 табл.

Способ лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии, заключающийся во введении через сутки после цитостатика рекормона в дозе 10 ЕД/мышь 1 раз в сутки в течение 5 дней, отличающийся тем, что дополнительно за 30 мин до введения цитостатического препарата вводят ципрогептадин в дозе 30 мг/кг.