СРЕДСТВО, ПРЕПЯТСТВУЮЩЕЕ РАЗВИТИЮ ДЕПРЕССИИ ЭРИТРОИДНОГО РОСТКА КРОВЕТВОРЕНИЯ ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ МИЕЛОДЕПРЕССИЯХ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/4515 A61P7/06 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к гематологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений в системе крови, развивающихся при цитостатическом воздействии.

Депрессия эритроидного ростка кроветворения, отмечаемая у большинства онкологических больных, при проведении полихимиотерапии приводит к снижению эффективности противоопухолевого лечения и повышению агрессивности роста опухоли. Коррекцию нарушений эритропоэза, вызванных цитостатиками, проводят, используя метод трансфузии донорской эритроцитной массы, предшественники нуклеиновых кислот, витамины группы В, зимозан, рекомбинантный эритропоэтин, иммуномодуляторы и другие [1]. Несмотря на высокую эффективность указанных фармакопейных препаратов, они могут вызвать побочные эффекты. В частности, к отрицательным сторонам трансфузии донорской эритроцитной массы относят риск трансфузиологических реакций (групповая несовместимость, анафилаксия, нитратные реакции), возможность передачи инфекции (вирусы гепатита, иммунодефицита человека и др.), а также гемосидероз внутренних органов, а также непродолжительный эффект. Без повторных, иногда множественных гемотрансфузий анемизация быстро прогрессирует [2]. При назначении широко используемого в современной лечебной практике эритропоэтина могут наблюдаться: гипертонический криз с явлениями энцефалопатии, дозозависимое увеличение числа тромбоцитов, тромбоцитоз, снижение сывороточных показателей обмена железа, кожные аллергические реакции в виде сыпи, зуда, крапивницы или реакции в месте инъекции и индивидуальная непереносимость препарата [3].

Поэтому лекарственное средство, предлагаемое нами, может являться препаратом выбора при наличии у больного противопоказаний для применения других лекарственных препаратов и не имеет адекватных аналогов.

Галоперидол (АТС код: №05AD01) - нейролептический препарат энергетического действия, по химической структуре относится к группе производных бутирофенона. Обладает антипсихотическим, психомоторным успокаивающим и выраженным противорвотным эффектом. Блокирует центральные альфа-адренергические и дофаминовыс рецепторы [4J. Применяют препарат при патологических процессах, сопровождаемых психомоторным возбуждением различного генеза (маниях, деменциях, олигофрениях, алкоголизме, психопатиях), при острых и хронических шизофрениях, острой копфузии, хорее Харингюна [4].

Нами впервые выявлена способность галоперидола предотвращать развитие депрессии эритроидного ростка кроветворения, развивающейся при цитостатических миелодепрессиях.

Применение галоперидола по новому назначению стало возможным благодаря выявленному авторами новому свойству стимулировать эритроидный росток при цитостатических миелодепрессиях.

Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала средств, используемых для предотвращения развития депрессии эритроидного ростка кроветворения, развивающейся па фоне применения цитостатиков.

Поставленная задача достигается применением нейролептика галоперидола в качестве средства, способного предотвращать развитие депрессии костномозгового эритропоэза, развивающейся при цитостатических миелодепрессиях.

Новым в предлагаемом изобретении является использование препарата галоперидола за 30 минут до введения цитостатического препарата.

Показано, что эритрон, как наиболее интенсивно делящаяся популяция клеток костного мозга, особенно чувствителен к действию цитостатиков с различными механизмами действия [5]. Установлено, что причинами ингибирующего действия цитостатических препаратов на кроветворение, наряду с не непосредственным токсическим их влиянием на гемопоэтические клетки и стромальные элементы, существенную роль играет нарушение регуляции на разных уровнях организации контролирующих систем [6]. Алкилирующий цитостатический препарат циклофосфан обладает широким противоопухолевым спектром действия и оказывает более мягкое действие, чем другие аналогичные препараты. Он используется также как иммунодепрессивное средство. Имеются данные о применении алкилирующего агента при гломерулонефритах, красной волчанке, ревматоидном артрите. Однако основным противопоказанием применения циклофосфана является анемия [4]. При этом депрессия эритроидного ростка кроветворения у больных на фоне проведения химиотерапии приводит к усилению гипоксичсского состояния и способствует формированию нового порочного круга, усугубляя течение основного процесса или пролонгируя скрытое неблагополучие организма [5]. Проведение эффективного лечения депрессии эритропоэза позволит существенно повысить эффективность противоопухолевого лечения, снизить потребность к гемотрансфузиям, переливанию эритроцитарной массы, а также повысить качество жизни больных.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Способ может быть использован для повышения эффективности лекарственной химиотерапии в эксперименте и клинике. Исходя из вышеизложенного заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Предлагаемый способ изучен в экспериментах на мышах-самцах линии CBA/CaLac в количестве 380 штук, массой 20-22 г. Животные первой категории, конвенциональные линейные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМП (сертификат имеется).

Способ осуществляют следующим образом.

У лабораторного животного (мыши) цитостатическую миелодепрессию моделировали однократным внутрибрюшинным введением в 1/3 МПД алкилирующего агента циклофосфана (83 мг/кг). За 30 мин до цитостатического воздействия животным опытных групп однократно внутрибрюшинно вводили галоперидол ("Gedeon Richter А.О.", Венгрия) в дозе 3 мг/кг. Непосредственно перед использованием препарат растворяли в стерильном физиологическом растворе. Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем физиологического раствора (0,2 мл). В качестве фона использовали интактных животных.

На 1-7-е сут после цитостатического воздействия у животных определяли показатели периферической крови и костномозгового кроветворения стандартными гематологическими методами, структурно-функциональную организацию костного мозга изучали путем ферментативного выделения гемопоэтических островков и последующей оценки их количественного и качественного состава. Тестирование уровня эритропоэтической активности в кондиционных средах от адгезирующих элементов гемопоэзиндуцирующего микроокружения осуществляли на интактных мышиных миелокариоцитах [7].

Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием 1-критерия Стьюдента.

Пример.

В ходе исследований установлено, что циклофосфан значительно снижает число эритрокариоцитов в костном мозге (1, 3-7 сут) и ретикулоцитов в периферической крови (1-6 сут) (табл.1, 2). В основе депрессии эритропоэза лежит угнетение формирования эритроидных и эритро-гранулоцитарных гемопоэтических островков (1-7 сут) (табл.3), нарушение продукции эритропоэтической активности адгезирующих клеток гемопоэзиндуцирующего микроокружения (1, 3, 5 сут) (табл.5).

Предварительное введение галоперидола препятствует развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения, подавленного циклофосфаном. Об этом свидетельствует достоверное увеличение эритрокариоцитов в костном мозге мышей на 3, 4, 5 сут эксперимента в опытной группе по сравнению с таковым в цитостатическом контроле (табл.1). Под влиянием галоперидола на протяжении всего периода исследования, за исключением 1 сут опыта, наблюдается увеличение содержания ретикулоцитов в периферической крови выше уровня, отмеченного в контроле (без препарата) (табл.2).

Показана способность галоперидола восстанавливать структурно-функциональную целостность костного мозга у мышей, получавших циклофосфан. Так, препарат способствует накоплению числа макрофагпозитвных (1, 2, 4, 6 сут), эритроидных (2, 4, 6 сут) и эритро-гранулоцитарных (2, 4, 6 сут) клеточных комплексов (табл.3, 4). Кроме того, под влиянием нейролептика наблюдается увеличение также уровня эритропоэтической активности в кондиционных средах адгезирующих клеток костного мозга (1, 3, 7 сут) (табл.5). Как видно, возрастанию числа эритрокариоцитов в костном мозге и ретикулоцитов в периферической крови под влиянием галоперидола у животных, получавших циклофосфан, предшествует организация дополнительных очагов эритроидного и смешанного кроветворения и изменение продукции эритропоэтической активности адгезирующих клеточных элементов гемопоэзиндуцирующего микроокружения.

Таким образом, введение галоперидола до моделирования цитостатической миелодепрессии препятствует разрушению структурно-функциональной целостности эритроидного ростка кроветворения и развитию его депрессии.

Литература

1. Воробьев П.А. Анемический синдром в клинической практике. - М.: Ньюдиамед, 2001. - С.28-35.

2. Миненко С.В., Птушкин В.В. Роль эритропоэтина бета (рекормон) в лечении анемии при опухолевых заболеваниях // Вместе против рака. Новое в химиотерапии злокачественных новообразований. - 2005. - Спец. выпуск № 2.

3. Козловская Л.В., Милованов Ю.С., Фомин В.В., Милованова Л.Ю. Сердечно-сосудистые эффекты эритропоэтина у больных с консервативной стадией ХПН // Врач. - 2004. - № 10. - С.57-59.

4. Энциклопедия лекарств. - 12-й вып./Гл. ред. Вышковской Г.Л. - М.: РЛС, 2005. - С.202.

5. Новицкий В.В., Степовая Е.А., Гольдберг В.Е. и др. Эритроциты и злокачественные образования. - Томск: "STT", 2000. - С.163-217.

6. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Хлусов И.А. Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза. - Томск: Изд-во ТГУ, 1997. - С.123-171.

7. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск, 1992. - С.152, 172-177, 208.

Таблица 1 Динамика содержания эритрокариоцитов (×106 клеток/бедро) в костном мозге мышей, получавших циклофосфан либо циклофосфан совместно с галоперидолом () Сроки исследования, сутки Циклофосфан Галоперидол+циклофосфан   Интактный контроль 2,39±0,2 2,39±0,2   1 0,55±0,12
P<0,002 0,56±0,02
P<0,001   А Б 2 1,5±0,15
P<0,001 1,5±0,1
P<0,05   А Б 3 0,82±0,07
P<0,001 1,35±0,1
P<0,01
P<0,001   А Б 4 0,04±0,02
P<0,001 0,55±0,01
P<0,001
P<0,001   А Б 5 0,38±0,01
P<0,001 1,0±0,04
P<0,002
P<0,001   А Б 6 0,21±0,02
P<0,001 0,2±0,02
P<0,001   А Б 7 0,38±0,03
P<0,001 0,23±0,03
P<0,001
P<0,002   А Б Примечание. P<0,002, P<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных в интактном контроле, Б - у животных в той же модели без препарата. Таблица 2 Динамика содержания ретикулоцитов в периферической крови мышей, получавших циклофосфан либо циклофосфан с гелоперидолом (‰) () Сроки исследования, сутки Циклофосфан Галоперидол+циклофосфан   Интактный контроль 36,80±2,18 36,80±2,18   1 13,8±1,85
P<0,002 8,8±1,77
P<0,001   А   Б 2 4,4±1,21
P<0,001 5,6±1,32
P<0,001   А Б 4 5,2±1,15
P<0,001 13,8±1,02
P<0,001
P<0,002   А Б 5 17,2±1,66
P<0,01 21,0±2,39
P<0,001   А Б 6 24,4±3,59
P<0,05 36,6±1,96
P<0,05   А Б 7 31,8±1,53 24,6±1,82
P<0,05   А Б Примечание. P<0,05, P<0,01, P<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных в интактном контроле, Б - у животных в той же модели без препарата.

Таблица 3 Влияние циклофосфана на качественный состав гемопоэтических островков (×10³/бедро) в костном мозге мышей () Сроки исследования, сутки Макрофаг-позитивные островки Эритроидные островки Эритро-гранулоцитарные островки   Интактный контроль 8,88±0,7 6,66±0,67 14,38±0,47   1 4,89±0,44 3,0±0,32
P<0,05 7,96±0,6
P<0,02   P<0,05 A 2 2,67±0,27
P<0,02 1,04±0,1
P<0,01 4,1±0,24
P<0,001   A 3 2,66±0,25
P<0,02 0,74±0,07
P<0,001 2,34±0,24   P<0,001 A 4 1,78±0,27 1,8±0,23
P<0,01 3,04±0,38   P<0,01 P<0,01 A 5 3,56±0,54 0,92±0,08
P<0,001 2,95±0,29   P<0,05 P<0,001 A 6 1,78±0,28 0,53±0,05
P<0,001 2,85±0,24   P<0,01 P<0,002 A 7 9,33±0,83 1,52±0,15
P<0,01 8,99±0,92     P<0,05 A Примечание. Р<0,05, P<0,01, P<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных интактного контроля.

Таблица 4 Влияние галоперидола на качественный состав гемопоэтических островков (×10³/бедро) в костном мозге мышей, получавших циклофасфан () Сроки исследования, сутки Макрофаг-позитивные островки Эритроидные островки Эритро-гранулоцитарные островки   Интактный контроль 8,88±0,7 6,66±0,67 14,38±0,47   1 8,54±0,54 1,88±0,15 9,1±0,81     P<0,001 P<0,05 A P<0,01 P<0,01 Б 2 7,11±0,44 4,41±0,29 6,45±0,35     P<0,05 P<0,05 A P<0,05 P<0,05 P<0,05 Б 3 0,89±0,54 0,84±0,09 0,93±0,12   P<0,001 P<0,05 P<0,001 A P<0,05 P<0,05 Б 4 4,0±0,44 5,88±0,38 6,82±0,64   P<0,05   P<0,05 A P<0,01 P<0,05 P<0,05 Б 5 1,33±0,54 0,89±0,06 2,94±0,17   P<0,001 P<0,001 P<0,001 A P<0,05 Б 6 8,44±0,83 0,95±0,06 6,74±0,58     P<0,001 P<0,01 A P<0,01 P<0,01 P<0,01 Б 7 8,44±0,83 0,94±0,14 8,09±0,47     P<0,001 P<0,05 A P<0,05 Б Примечание. P<0,05, P<0,01, P<0,001 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных интактного контроля, Б - у животных той же модели без препарата.

Таблица 5 Динамика изменения уровня эритропоэтической активности кондиционной среды адгезирующих клеток костного мозга (×10⁵ клеток) мышей линии CBA/CaLac после введения циклофосфана либо циклофосфана совместно с галоперидолом () Сроки исследования, сутки Циклофосфан Галоперидол+циклофосфан     КлОЕ-Э КОЕ-Э КлОЕ-Э КОЕ-Э   Адгезирующие клетки Интактный контроль 0,25±0,25 0,25±0,25 0,25±0,25 0,25±0,25   1 0,125±0,125 0,125±0,125 1,0±0,25 1,75±0,28   P<0,05 A P<0,05 Б 3 0,125±0,125 0,125±0,125 2,0±0,25 0,725±0,25   P<0,05 А P<0,05 Б 5 0,25±0,25 0,125±0,25 0,75±0,25 0,125±0,25   А Б 7 1,25±0,25 1,25±0,01 2,75±0,01 3,5±0,4   P<0,05 P<0,05 P<0,05 P<0,05 А P<0,05 P<0,05 Б Примечание. P<0,05 - отмечена достоверность различия показателя от его значения А - у животных интактного контроля, Б - у животных той же модели без препарата.

Предложено средство фармакологической коррекции нарушений в системе крови, развивающихся при цитостатическом воздействии. Средство представляет собой нейролептик галоперидол. Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала средств, используемых для предотвращения развития депрессии эритроидного ростка кроветворения, развивающейся на фоне применения цитостатиков. Галоперидол при введении за 30 мин до циклофосфана предотвращал депрессию костномозгового эритропоэза, вызывал возрастание числа эритрокариоцитов в костном мозге и ретикулоцитов в периферической крови. Галоперидол вызывал организацию дополнительных очагов эритроидного и смешанного кроветворения и изменение продукции эритропоэтической активности адгезирующих клеточных элементов гемопоэзиндуцирующего микроокружения. 5 табл.

Применение галоперидола в качестве средства, препятствующего развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения при введении цитостатиков.