СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ТРОМБОЗОВ И НАРУШЕНИЙ КРОВООБРАЩЕНИЯ Российский патент 2009 года по МПК A61K9/113 A61K31/20 A61K31/355 A61K31/685 A61K47/02 A61K47/44 A61P7/02 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для профилактики тромбозов и нарушений микроциркуляции.

Тромбозы и нарушения микроциркуляции играют важную роль в патогенезе инфарктов миокарда, нарушений мозгового кровообращения, послеоперационных осложнений, сахарного диабета, эндоартериитов и др. Тромботические осложнения и нарушения микроциркуляции могут вызывать и лекарственные и диагностические средства (рентгеноконтрастные вещества, стероидные гормоны и др.).

В связи с изложенным, профилактика тромбозов и нарушений микроциркуляции является важнейшей задачей современной медицины. Известны средства для профилактики тромбозов и нарушений микроциркуляции. Широко используются антикоагулянты прямого действия (гепарины) и непрямого действия (варфарин). Однако их терапевтическая широта недостаточно велика, и их назначение может осложниться кровотечениями (Е.П.Панченко, А.Б.Добровольский «Тромбозы в кардиологии: механизмы развития и возможности терапии», М., 1999). Кроме того, для профилактики тромбозов и нарушений микроциркуляции используются антиагреганты (ингибиторы адгезивно-агрегационной способности тромбоцитов). Наиболее популярным препаратом в этой группе является ацетилсалициловая кислота. Однако известные антиагреганты также могут давать геморрагические осложнения. Ацетилсалициловая кислота, кроме того, обладает ульцерогенным эффектом, а также в больших концентрациях тормозит антиагрегационную активность сосудистой стенки (Е.П.Панченко, А.Б.Добровольский «Тромбозы в кардиологии: механизмы развития и возможности терапии», М., 1999). Разработаны блокаторы фибриногеновых рецепторов (GPIIb/IIIa) тромбоцитов: моноклональные антитела (абциксимаб, ReoPro), циклические пептиды (эптифибатид) и малые молекулы (тирофибан, орбофибан, роксифибан и др.). Вместе с тем, показано, что данные препараты вызывают тромбоцитопению и провоцируют аллергические реакции (Coller B.S. Anti-GPIIb/IIIa drugs: current strategies and future directions // Thromb. Haemost., 2001, V.86, P.427-423).

В последнее время большое внимание уделяется возможности использования для предотвращения тромбообразования n-З полиненасыщенных жирных кислот (n-З ПНЖК). В частности, выпускается биологически активная добавка Рыбий жир «Янтарная капля», содержащая 24% n-3 ПНЖК (М.Д.Машковский "Лекарственные средства", изд. 14. перераб., испр., Оникс 21 век, Новая Волна 2002; Федеральный Реестр биологически активных добавок к пище, изд.3., 2002; Интернет-ресурс http://www.aptekamos.ru/new/medicine_k.jsp). Однако эффект данной БАД незначителен, и клиническая практика нуждается в более активных препаратах n-3 ПНЖК.

С целью усиления антиагрегационного эффекта (ибо именно агрегация тромбоцитов является крайне лабильным инициатором тромбообразования) нами предложено средство для профилактики тромбозов и нарушений кровообращения, содержащее в своем составе n-3 полиненасыщенные жирные кислоты (3,0-50,0%), α-токоферола-ацетат (0,05-1,0%), масло вазелиновое (14,8-87,85%), фосфолипидный концентрат (9,0-45,0%), щелочь (NaOH или КОН) (0,1-1,0%) и воду (1-6%), отличающееся тем, что оно наноструктурировано за счет формирования структуры фосфолипидного (лецитинового) органогеля. При этом фосфолипидный концентрат включает фосфатидилхолин 22%, фосфатидилэтаноламин 20%, фосфатидилинозитол 14%, жирные кислоты 18%, гликолипиды 15%, натуральные углеводы 8%, стабилизатор 3%.

Лецитиновые органогели - это наноструктурированные среды, существующие в системах лецитин - неполярный органический растворитель - вода в области низких концентраций воды. Пространственная структура лецитиновых органогелей образована из переплетенных между собой цилиндрических агрегатов диаметром единицы и длиной десятки и сотни нанометров - обратных мицелл лецитина (Luisi P.L., Scartazzini R., Haering G., Schurtenberg P. Organogels from water-in-oil microemulsions // Colloid & Polymer Sci. 1990. V.268. P.356.; Щипунов Ю.А. Самоорганизующиеся структуры лецитина // Успехи химии. - 1997. - т.66, №4. - С.128-352). Благодаря такой структуре лецитиновые гели обладают рядом преимуществ по сравнению с традиционно используемыми эмульсиями и липосомами.

Достоинства лецитиновых органогелей как материалов для медицины, косметики и биотехнологии - термодинамическая устойчивость, возможность введения биологически активных веществ как гидрофильной и амфифильной (за счет солюбилизации в мицеллах), так и гидрофобной (за счет растворения в органической фазе) природы, способность ускорять транспорт веществ через кожу (Luisi P.L., Scartazzini R., Haering G., Schurtenberg P. Organogels from water-in-oil microemulsions // Colloid & Polymer Sci. 1990. V.268. P.356.; Willimann H.-L., Luisi P.L.: Lecithin organogels as matrix for the transdermal transport of drugs // Biochem. Biophys. Research Communications. 1991, 177, №3, 897-900) и простота получения (Юртов Е.В., Мурашова Н.М. Получение и свойства лецитиновых гелей в углеводородном масле // Химическая технология, 2002 - №5, С.36-39).

В качестве основы для медицинских средств предлагались лецитиновые органогели в циклогексане или в изопропилпальмитате (Bhatnagar S., Vyas S.P Organogel-based system for transdermal delivery of propranolol // J. Microencapsulation. 1994. V.11. P.431). В качестве материала для медицины и косметики был предложен лецитиновый гель в вазелиновом масле (Юртов Е.В., Мурашова Н.М. Лецитиновый органогель. Пат. РФ №2155604, приоритет от 29.01.1998, Бюл. изобретений №25, 2000). Известны композиции для наружного применения, содержащие в своем составе лецитиновый гель в изопропилпальмитате (например, Crandall W.T. Topical Anti-Inflammation Composition and Method // PCT WO 96/06636; Roentsch G.E., Snyder W.S. Topical Formulation for local Delivery of a Pharmaceutically Active Agent // PCT WO 96/29988).

Формирование наноструктуры геля происходит при солюбилизации щелочи и воды в растворе лецитина в вазелиновом масле. При этом щелочь вступает в реакцию нейтрализации с содержащимися в системе жирными кислотами. Образующиеся соли жирных кислот способствуют формированию наноструктуры органогеля. Полученный вязкий гелеобразный продукт обладает способностью снижать агрегацию тромбоцитов и уменьшать вязкость крови. Получение наноструктурированного геля и его свойства приведены в примерах 1 и 2. При этом наноструктурированное средство обладает большей антиагрегационной активностью и большей способностью снижать вязкость крови.

Пример 1. Получение и свойства наноструктурированного геля.

В качестве источника лецитина был использован очищенный фосфолипидный концентрат (ФЛК) из соевого масла. Навеску концентрата растворяли в медицинском вазелиновом масле при температуре 40°С и перемешивании в течение трех часов. В полученный раствор добавляли воду или водный раствор NaOH. Солюбилизация водной фазы происходила при температуре 40°С и перемешивании в течение двух-трех часов. После образования гомогенной системы образец охлаждали до комнатной температуры. Макроскопическим критерием образования наноструктуры геля является значительное возрастание вязкости. Вязкость измеряли с помощью ротационного вискозиметра "Rheotest 2" (Германия) при температуре 20°С (при термостатировании) и различных скоростях сдвига. Влияние солюбилизированных компонентов (воды и щелочи) на вязкость системы представлено в таблице 1.

Как видно из таблицы 2, изменение концентрации воды в системе фосфолипидный концентрат - вазелиновое мало - вода, не содержащей NaOH, незначительно влияет на вязкость и не приводит к гелеобразованию. В то же время введение NaOH в систему фосфолипидный концентрат - вазелиновое мало - вода в малых (доли %) количествах вызывает существенное, в несколько раз, возрастание вязкости и образование наноструктурированного лецитинового геля.

Наноструктурированный гель существует в системе фосфолипидный концентрат-вазелиновое мало-вода при содержании водной фазы (раствора NaOH) ниже, чем определенные граничные значения. При более высоких концентрациях водной фазы наблюдалось помутнение и расслаивание геля. Значения концентрации водной фазы в образцах, при которой наблюдалось помутнение и расслаивание геля (граница области существования геля), приведены в таблице 2. Водная фаза представляла собой 10%-ный раствор NaOH.

Таблица 1 Влияние воды и NaOH на вязкость образцов Состав образца (мас.%) Вязкость при различных скоростях сдвига, Па·с 3 с^-1 9 с^-1 27 с^-1 81 с^-1 243 с^-1 729 с^-1 ФЛК - 40,0%, ваз. масло - 57,3%, вода - 2,7% 0,160 0,118 0,117 0,111 0,110 0,107 ФЛК - 40,0%, ваз. масло - 57,0%, вода - 3,0% 0,213 0,177 0,160 0,148 0,148 0,146 ФЛК - 40,0%, ваз. масло - 56,7%, вода - 3,3% 0,177 0,188 0,195 0,197 0,177 0,175 ФЛК - 40,0%, ваз. масло - 56,67%, вода - 3,0%, NaOH - 0,33% 0,383 0,337 0,299 0,293 0,278 0,263 ФЛК - 40,0%, ваз. масло - 56,5%, вода -3,0%, NaOH - 0,50% 0,585 0,514 0,484 0,465 0,420 0,352 ФЛК - 40,0%, ваз. масло - 56,33%, вода - 3,0%, NaOH - 0,67% 0,744 0,631 0,593 0,563 0,501 0,408

Таблица 2 Граница области существования геля (по содержанию водной фазы) Исходная концентрация ФЛК в вазелиновом масле, мас.% 10 20 30 40 50 Концентрация водной фазы (10%-ный р-р NaOH) в образце, мас.% 2,32 3,07 5,25 5,96 6,65

Таким образом, для формирования наноструктурированного геля в системе фосфолипидный концентрат - вазелиновое масло - вода на основе фосфолипидного концентрата, содержащего значительные количества жирных кислот, необходимо присутствие определенных количеств воды и щелочи.

Пример 2. Получение композиции на основе наноструктурированного геля.

В качестве источника лецитина был использован очищенный фосфолипидный концентрат (ФЛК) из соевого масла. 120 г фосфолипидного концентрата растворяли в 137 мл медицинского вазелинового масла при температуре 40°С и перемешивании в течение двух часов. После растворения фосфолипидного концентрата в раствор вводили 194 мл препарата n-3 полиненасыщенных жирных кислот и после перемешивания добавляли 10 мл 10%-ного водного раствора NaOH. Водную и органическую фазы перемешивали при той же температуре до полной солюбилизации воды и NaOH и получения вязкой гомогенной системы. В полученный наноструктурированный гель добавляли 3 мл 30%-ного раствора α-токоферола-ацетата в масле. Компоненты перемешивали и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученные гели устойчивы и могут храниться в закрытом сосуде при температуре 3-6°С в течение нескольких месяцев.

Ниже приведены примеры, подтверждающие фармакологический эффект предложенной нами композиции в сравнении с БАД «Рыбий жир - Янтарная капля» и с ненаноструктурированной композицией.

Пример 3. На уши кроликам наносили БАД «Рыбий жир - Янтарная капля». Исходная агрегация тромбоцитов составила 58%. Через неделю она не изменилась - 55%. Через 2 недели она составила 49% и лишь через 4 недели она снизилась до уровня 42%.

Пример 4. На уши кроликам наносили композицию, содержащую n-3 полиненасыщенных жирных кислот 10,7%, α-токоферола-ацетата 0,2%, масла вазелинового 60,5%, фосфолипидного концентрата 28,6%. Исходная агрегация составила 51%. Агрегация тромбоцитов в снизилась через 1 неделю до 45%, через 2 недели до 35% и через 4 недели до 30%. У кроликов отмечалось расширение сосудов уха и снижение вязкости крови при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1.

Пример 5. На уши кроликам наносили композицию, содержащую n-3 полиненасыщенных жирных кислот 3,0%, α-токоферола-ацетата 0,05%, масла вазелинового 86,85%, фосфолипидного концентрата 9,0%, 0,1% КОН и 1,0% воды. Композиция представляла собой вязкий наноструктурированный гель. Исходная агрегация в опытной и контрольной группе животных составила 56%. Агрегация тромбоцитов у кроликов снизилась через 1 неделю до 36%, через 2 недели до 30%, через 3 недели до 25%, через 4 недели - до 19%. Отмечалось расширение сосудов уха и снижение вязкости крови при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1.

Пример 6. На уши кроликам наносили композицию, содержащую n-3 полиненасыщенных жирных кислот 30,3%, α-токоферола-ацетата 0,7%, масла вазелинового 20,0%, фосфолипидного концентрата 42,0%, 1,0% КОН и 6,0% воды. Композиция представляла собой вязкий наноструктурированный гель. Исходная агрегация у животных составила 63%. Агрегация тромбоцитов снизилась через 1 неделю до 35%, через 2 недели - до 25% и через 4 недели - до 19%. Отмечалось расширение сосудов уха и снижение вязкости крови при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1.

Пример 7. На уши кроликам наносили композицию, содержащую n-3 полиненасыщенных жирных кислот 50,0%, α-токоферола-ацетата 1,0%, масла вазелинового 14,8%, фосфолипидного концентрата 30,2%, 1,0% NaOH и 3% воды. Композиция представляла собой вязкий наноструктурированный гель. Исходная агрегация составила 59%. Через 1 неделю применения смеси агрегация составила 34%, через 2 недели - 28% и через 4 недели до 16%. Отмечалось расширение сосудов уха и снижение вязкости крови при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1.

Пример 8. На уши кроликам наносили композицию, содержащую n-3 полиненасыщенных жирных кислот 10,0%, α-токоферола-ацетата 1,0%, масла вазелинового 38,9%, фосфолипидного концентрата 45,0%, 0,1% NaOH и 5,0% воды. Композиция представляла собой вязкий наноструктурированный гель. Исходная агрегация у животных составила 51%. Агрегация тромбоцитов в опытной группе снизилась через 1 неделю до 34%, через 2 недели до - 29% и через 4 недели - до 17%. Отмечалось расширение сосудов уха и снижение вязкости крови при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1.

Пример 9. На уши кроликам наносили композицию, содержащую n-3 полиненасыщенных жирных кислот в составе рыбьего жира 21,5%, α-токоферола-ацетата 0,5%, масла вазелинового 55,0%, фосфолипидного концентрата 20,0%, 0,3% КОН и 2,7% воды. Композиция представляла собой вязкий наноструктурированный гель. Исходная агрегация составила 61%. Агрегация тромбоцитов снизилась через 1 неделю до 30%, через 2 недели до 24% и через 4 недели до 19%. Отмечалось расширение сосудов уха и снижение вязкости крови при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1.

Таким образом, качественный состав, количественное содержание ингредиентов и наноструктурирование предложенной нами композиции позволяет усилить антиагрегационный эффект и способность снижать вязкость крови.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства, которое может применяться наружно для профилактики тромбозов и нарушений кровообращения. Средство представляет собой наноструктурированный гель, содержащий в своем составе n-3 полиненасыщенные жирные кислоты, α-токоферола-ацетат, фосфолипидный концентрат, щелочь, воду и масло вазелиновое. Достоинства такой композиции в термодинамической устойчивости, возможности введения биологически активных веществ как гидрофильной и амфифильной, так и гидрофобной природы, способность ускорять транспорт веществ через кожу и простота получения. 2 табл.

Средство для профилактики тромбозов и нарушений кровообращения, характеризующееся тем, что оно наноструктурировано за счет формирования структуры лецитинового органогеля и содержит n-3 полиненасыщенные жирные кислоты, α-токоферола-ацетат, масло вазелиновое, фосфолипидный концентрат, щелочь (NaOH или КОН) и воду при их содержании, мас.%:
n-3 полиненасыщенные жирные кислоты 3,5-50,0 α-токоферола-ацетат 0,05-1,0 фосфолипидный концентрат 9,0-45,0 щелочь 0,1-1,0 вода 1,0-6,0 масло вазелиновое остальное,