СРЕДСТВО ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ НАКОПЛЕНИЯ ВИСЦЕРАЛЬНОГО ЖИРА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/704 A61K36/835 A61K36/886 A61P3/00 

Область техники

Настоящее изобретение относится к средству для ингибирования накопления висцерального жира, который содержит 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол в качестве действующего ингредиента, и содержащим его продукту питания или напитку. В частности, настоящее изобретение относится к средству для ингибирования накопления висцерального жира, которое способно уменьшить количество жира, накопленного в брюшной полости, и предотвратить или уменьшить ожирение висцерального типа, которое считается главным фактором метаболического синдрома, и относится к физиологически функциональным продукту питания или напитку, содержащим его, таким как продукт питания, воздействующий на состояние здоровья.

Предпосылки изобретения

В последние годы быстрый рост ожирения, сопровождающий изменение образа жизни по западному образцу, стал серьезной проблемой. Ожирение означает состояние, при котором накапливается излишняя энергия из-за излишнего приема внутрь калорий и снижения расхода калорий, вызванного недостаточными упражнениями и т.п., и является «состоянием, при котором накапливается излишнее количество жировых тканей тела (жира тела)». Было отмечено, что ожирение может являться основой начала так называемых болезней, связанных с образом жизни, таких как диабет, гипертония и гиперлипидемия и т.д.

Ожирение проявляется состоянием накопления избыточного жира тела и феноменом увеличения веса тела. Сообщалось, что при проведении быстрого снижения веса тела для снижения ожирения количество мускулов, необходимых для потребления энергии, также уменьшается вместе с жиром, и в случае пожилых людей могут появиться такие симптомы, как нарушения кровяного давления и повреждение тазобедренного сустава (непатентный документ 1). Кроме того, есть сообщение о физической терапии, при которой ожидается проявление эффекта улучшения мышечных тканей в случае, где уменьшение количества жира проводится без снижения веса тела (непатентный документ 2). Как описано выше, в последние годы привлекли внимание способы снижения ожирения посредством ингибирования накопления жира вместо просто уменьшения веса тела.

Жировые ткани делятся на подкожный жир, который накапливается внутри кожи, и висцеральный жир, который накапливается вокруг внутренних органов в брюшной полости, который в общем называется «телесный жир». Известно, что ожирение классифицируется на группы: ожирение подкожного типа, включающее накопление подкожного жира, и ожирение висцерального типа, включающее накопление висцерального жира. Накопление висцерального жира особенно влияет на частоту возникновения осложнений, таких как нарушение метаболизма и сердечно-сосудистые заболевания, и их тяжесть при ожирении.

Известно, что патологический процесс, при котором индивидуум страдает от сочетания множества болезней, связанных с образом жизни, то есть от «синдрома множества факторов риска», существенно повышает риск начала атеросклеротических болезней, и была предложена концепция, в соответствии с которой синдром Х и метаболический синдром являются факторами риска атеросклероза. Поскольку для достижения более общей оценки риска и для предотвращения начала атеросклероза были предложены эти синдромы множественных факторов риска, были сведены в единое целое описания метаболического синдрома и диагностические критерии (непатентный документ 3). В диагностических критериях для метаболического синдрома, которые были предложены в Японии в апреле 2005 года, размер талии, соответствующий области висцерального жира, 100 см² или больше был принят как обязательное условие, вместо индекса массы тела (ИМТ) или процентного содержания телесного жира, которые обычно используются для указания уровня ожирения. Следовательно, накопление висцерального жира было признано в значительной степени вовлеченным в причину метаболического синдрома.

Упражнения, диета и терапия поведения рекомендованы в качестве средств для уменьшения телесного жира. Однако в случае, где эти терапии трудно проводить или продолжать, могут быть проведены лекарственная терапия или хирургическое вмешательство. В настоящее время мазиндол, являющийся анорексигенным средством, применяется в качестве терапевтического средства при ожирении и, в основном, прописывается только людям, страдающим высокой степенью ожирения, у которых ИМТ равен 35 или больше. Однако мазиндол не только дает побочные эффекты, такие как головная боль и сухость во рту, но также имеется большое число проблем, при которых мазиндол имеет противопоказания, такие как тяжелые нарушения деятельности почек, печени и поджелудочной железы, и не может вводиться в течение длительного периода времени из-за своей зависимости и т.п.

Растительные стерины, такие как β-ситостерин, кампестерин, стигмастерин уже были известны как обладающие эффектом снижения уровня холестерина в крови посредством абсорбции холестерина, и было раскрыто средство, улучшающее липидный метаболизм, содержащее диглицерид и растительный стерин в качестве действующих ингредиентов (патентный документ 1). Также раскрыты средство против ожирения и средство, улучшающее липидный метаболизм, содержащее холестеноновое соединение, синтезированное с использованием растительных стеринов, таких как β-ситостерин и кампестерин, в качестве стартового материала, или 4-холестен-3-он (патентные документы 2-5) в качестве действующего ингредиента.

Род Алоэ, принадлежащий к растениям семейства Liliaceae, является группой растений, включающих Алоэ вера (Aloe barbadensis Miller) и Алоэ древовидное (Aloe arborescens Miller var. natalensis Berger), в качестве типовых растений, и известно, что они обладают различными эффектами. Было описано, что экстракт алоэ обладает действием, предотвращающим или снижающим ожирение (патентный документ 6). Кроме того, описана пищевая добавка, обладающая эффектом уменьшения веса тела, которая содержит 0,25% порошка алоэ вера (патентный документ 7), и композиция незаменимых масел для контроля за весом тела, которая содержит алоэ вера (патентный документ 8). Кроме того, сообщалось, что введение крысам целого листа древовидного алоэ существенно снижало вес тела в зависимости от концентрации древовидного алоэ (непатентные документы 4 или 5).

[Патентный документ 1] Опубликованная Японская патентная заявка № 2005-15425

[Патентный документ 2] Опубликованная Японская патентная заявка № 07-165587

[Патентный документ 3] Опубликованная Японская патентная заявка № 11-193296

[Патентный документ 4] Опубликованная Японская патентная заявка № 2001-240544

[Патентный документ 5] Опубликованная Японская патентная заявка № 05-170651

[Патентный документ 6] Опубликованная Японская патентная заявка № 2000-319190

[Патентный документ 7] Патент Новой Зеландии № 330439

[Патентный документ 8] Патент США № 6280751

[Непатентный документ 1] Journal of Applied Physiology, vol.95, 2003, pp. 1728-1736

[Непатентный документ 2] Journal of Applied Physiology, vol.99, 2005, pp. 1220-1225

[Непатентный документ 3] Adiposcience, vol.2, 2005, pp. 11-15

[Непатентный документ 4] Igaku to Seibutsugaku, vol.125, No.5, pp.189-194

[Непатентный документ 5] Journal of Medicine of Fujita Gakuen, vol.22, No.2, pp. 153-157

Описание изобретения

Патентный документ 1 не описывает эффект от введения отдельно растительного стерина и не описывает, и не предполагает эффекта растительного стерина на висцеральный жир.

В дополнение раскрывается, что 3-кетостероидное соединение, раскрытое в патентном документе 2, холестеноновое соединение, раскрытое в патентном документе 3, и соединения 24-алкилхолестен-3-он, такие как 24-метилхолест-5-ен-3-он, раскрытые в патентном документе 4, обладают эффектами снижения веса тела, количества телесного жира и количества липидов в крови. Однако отсутствуют описание или предположение, что соединения обладают эффектом ингибирования накопления висцерального жира без влияния на количество перорального приема внутрь и увеличения веса тела.

4-холестен-3-он, раскрытый в патентном документе 5, очевидно отличается от активного ингредиента настоящего изобретения. Конкретно эффектом 4-холестен-3-она, описанным в патентном документе 5, является то, что когда нормальная мышь поглощает калории, соединение снижает излишнее количество жира в брюшной полости вместе с жировыми компонентами, которые рассматриваются как находящиеся в нормальных пределах, более чем необходимо. Таким образом, эффект 4-холестен-3-она, описанный в патентном документе 5, является ясно отличным от эффекта настоящего изобретения, эффективно ингибирующего только жировые компоненты, накопленные вокруг внутренних органов в количестве больше, чем необходимо, в случае состояния ожирения или в случае, где принято внутрь излишнее количество калорий.

Кроме того описано, что средство для предотвращения и снижения ожирения патентного документа 6 ингибирует развитие ожирения, включая увеличение в весе тела, и, следовательно, является эффективным для поддержания стандартного веса тела без необходимости излишних ограничений в питании. Однако в документе нет описания эффекта на телесный жир и не описан эффект ингибирования накопления висцерального жира, посредством которого количество висцерального жира уменьшается без уменьшения веса тела.

В дополнение, активный ингредиент, описанный в патентном документе 6, является экстрактом алоэ. Однако компоненты, связанные с ингибированием развития ожирения, включающего увеличение веса тела, совсем не охарактеризованы. Вследствие этого является затруднительным предсказать из описания патентного документа 6 эффект ингибирования накопления висцерального жира, который является отличным от эффекта, описанного в патентном документе 6, и может снижать висцеральный жир без снижения веса тела, и наличие эффекта.

Соответственно, в отношении средства, способного избирательно снижать висцеральный жир, который строго связан с началом метаболического синдрома, или способного предотвратить или ингибировать его накопление, требуется дальнейшее изучение действующего вещества, которое может приниматься внутрь ежедневно безопасно и по возможности наиболее безболезненно и может эффективно уменьшать висцеральным жир.

В свете вышеупомянутых проблем авторы настоящего изобретения тщательно исследовали средство для ингибирования накопления висцерального жира, которое может предотвратить или снизить ожирение висцерального типа, что считается главной причиной метаболического синдрома. Как результат авторы настоящего изобретения обнаружили, что 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол обладает свойством эффективно уменьшать накопление жира в брюшной полости. В дополнение было найдено, что эффект может поддерживать стандартный вес тела без снижения веса тела и, следовательно, является полезным для ингибирования развития ожирения без необходимости излишних ограничений в питании.

Объектом настоящего изобретения является предоставление средства для ингибирования накопления висцерального жира, которое содержит 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол в качестве действующего ингредиента. В дополнение, другим объектом настоящего изобретения является предоставление физиологически функциональных продукта питания или напитка, содержащих средство для ингибирования накопления висцерального жира, такого как продукт питания, воздействующий на состояние здоровья.

Первым изобретением настоящей заявки для решения вышеупомянутых проблем является средство для ингибирования накопления висцерального жира, содержащее соединение, представленное следующей формулой (1), в качестве действующего ингредиента.

Вторым изобретением настоящей заявки для решения вышеупомянутых проблем является средство для ингибирования накопления висцерального жира, которое содержит экстракт активного соединения в органическом растворителе, экстракт активного соединения в горячей воде или в отжатой жидкости из растения, содержащего соединение, представленное следующей химической формулой (1) или ее частью, в качестве действующего ингредиента, где экстракт в органическом растворителе, экстракт в горячей воде или отжатой жидкости вышеупомянутого растения или его части содержат, по крайней мере, 0,001% от сухой массы соединения, представленного следующей химической формулой (1). Кроме того, предпочтительно, что вышеуказанное растение является растением семейства Liliaceae.

Третьим изобретением настоящей заявки для решения вышеупомянутых проблем являются продукт питания или напиток, содержащие средство для ингибирования накопления висцерального жира по первому и второму изобретению, где предпочтительным является то, что продукт питания или напиток содержит 0,0001% по сухой массе или более соединения, представленного вышеупомянутой химической формулой (1).

Четвертым изобретением настоящей заявки для решения вышеупомянутых проблем является применение соединения, представленного вышеупомянутой химической формулой (1), или экстракта в органическом растворителе, экстракта в горячей воде или в отжатой жидкости растения, содержащих, по крайней мере, 0,001% по сухой массе соединения или его фракции, в производстве средства для ингибирования накопления висцерального жира. Кроме того, предпочтительно, что вышеуказанное растение является растением семейства Liliaceae.

Пятым изобретением настоящей заявки для решения вышеупомянутых проблем является способ ингибирования накопления висцерального жира, который включает введение соединения, представленного вышеупомянутой химической формулой (1), или экстракта в органическом растворителе, экстракта в горячей воде или в отжатой жидкости растения, содержащих, по крайней мере, 0,001% по сухой массе соединения или его фракции, субъекту, который нуждается в ингибировании накопления висцерального жира. Кроме того, предпочтительно, что вышеупомянутым растением является растение семейства Liliaceae.

Средство для ингибирования накопления висцерального жира согласно настоящему изобретению и продукт питания или напиток, содержащие его, могут быть безопасно введены или приняты внутрь и обладают свойствами эффективно ингибировать накопление висцерального жира. Кроме того, действующий ингредиент средства для ингибирования накопления висцерального жира по настоящему изобретению может быть легко получен из растения семейства Liliaceae, такого как алоэ вера (Aloe barbadensis Miller), которое, как известно из эмпирического опыта, может быть безопасно принято внутрь и является легко доступным.

Лучший вариант осуществления изобретения

Далее предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения будут подробно объяснены. Однако настоящее изобретение не ограничено следующими предпочтительными вариантами осуществления и может быть модифицировано в объеме настоящего изобретения. Кроме того, если особо не оговорено другое, процентное содержание обозначает массу.

В настоящем изобретении эффект ингибирования накопления висцерального жира означает эффект уменьшения количества жира, накапливающегося в брюшной полости. Поэтому эффект ингибирования накопления висцерального жира может быть оценен посредством измерения количества жира в брюшной полости, такого как вес брыжеечного жира.

Соединение, используемое как действующий ингредиент средства для ингибирования накопления висцерального жира (далее именуемого как «средство настоящего изобретения») настоящего изобретения, является соединением, имеющим структуру, представленную вышеупомянутой общей формулой (1), а именно содержит 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол. Соединение настоящего изобретения имеет структуру, полученную дегидратирующей конденсацией гидроксильной группы в 3-м положении 4-метилэргост-7-ен-3-ола и гидроксильной группы 1-го положения D-глюкозы.

Кроме того, композиция, используемая как действующий ингредиент средства для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения (далее именуемая как «композиция настоящего изобретения»), является экстрактом растения семейства Liliaceae или его части, содержащим, по крайней мере, 0,001% от сухой массы или больше, предпочтительно, 0,01% от сухой массы или больше и, более предпочтительно, 0,1% от сухой массы или больше вышеупомянутого соединения настоящего изобретения. Верхняя граница содержания соединения настоящего изобретения конкретно не ограничена и она может быть, предпочтительно, 10% от сухой массы или 50% от сухой массы, 70% от сухой массы или 90% от сухой массы.

В настоящем изобретении сухая масса означает массу, измеренную после высушивания соединения посредством способа сушки, охарактеризованного в «тесте потери веса», являющегося общим способом исследования, описанным в Japanese Pharmacopoeia, 14th Revision (March 30, 2001, Japan Ministry of Health, Labor and Welfare, Ministerial Notification No.111). Например, масса соединения настоящего изобретения может быть определена этим способом так: примерно 1 г соединения настоящего изобретения измеряли и высушивали при 105°С в течение 4 часов; и получившийся материал охлаждали в эксикаторе; и массу соединения взвешивали на весах.

Соединение настоящего изобретения или композиция, содержащая его, могут быть получены посредством, например, экстракции фракции, содержащей соединение настоящего изобретение, из растения, принадлежащего семейству Liliaceae и содержащего соединение настоящего изобретения, его части или продукта его дробления посредством использования органического растворителя или горячей воды и концентрирования фракции.

Примеры вышеупомянутого растения, принадлежащего к семейству Liliaceae, включают растения, принадлежащие родам Aloe или Allium. Примеры растений рода Aloe включают Aloe barbadensis Miller, Aloe ferox Miller, Aloe africana Miller, Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger, Aloe spicata Baker и т.д. В производстве соединения настоящего изобретения или композиции, содержащей его, хотя может быть использовано целое растение, предпочтительным является использование его мезофилла (прозрачной гелеобразной части). Такое растение или его часть измельчают, предпочтительно используя гомогенизатор и т.п., и таким образом превращают его в жидкость, и экстрагируют соединение настоящего изобретения или композицию, содержащую его, из продукта измельчения, используя органический растворитель или горячую воду. Примеры органического растворителя включают спирты, такие как метанол, этанол и бутанол и т.д.; сложные эфиры, такие как метилацетат, этилацетат, пропилацетат и бутилацетат и т.д.; кетоны, такие как ацетон и метилизобутилкетон и т.д.; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир и петролейный эфир и т.д.; углеводороды, такие как гексан, циклогексан, толуол и бензол и т.д.; галогенированные углеводороды, такие как четыреххлористый углерод, дихлорметан и хлороформ и т.д.; гетероциклические соединения, такие как пиридин и т.д.; гликоли, такие как этиленгликоль и т.д.; многоатомные спирты, такие как полиэтиленгликоль и т.д.; нитрильные растворители, такие как ацетонитрил и т.д., смеси этих соединений и т.д. Кроме того, эти растворители могут быть безводными или содержать воду. Из этих растворителей особенно предпочтительными являются смеси этилацетат/бутанол (3:1) и хлороформ/метанол (2:1).

В качестве способа экстракции может быть применен способ для обычной экстракции растительных компонентов. Обычно используемым является, например, способ дефлегмации от 1 до 300 частей по массе органического растворителя с 1 массовой частью свежего растения или высушенного растения с нагреванием при температуре кипения или ниже растворителя и перемешивании или встряхивании, или способ проведения экстракции обработкой ультразвуком при комнатной температуре. Экстракт-сырец получают отделением нерастворимых частей от экстракционной жидкости с использованием подходящего способа, такого как фильтрование или центрифугирование.

Экстракт-сырец может быть очищен с помощью различных видов хроматографии, такой как нормальная или обращеннофазовая колоночная хроматография на силикагеле. Когда используется градиент смеси хлороформ/метанол в качестве элюирующего растворителя в нормальнофазовой колоночной хроматографии на силикагеле, соединение настоящего изобретения элюируется при соотношении хлороформ:метанол, равном примерно 5:1. Кроме того, используется градиент смеси метанол/вода в качестве элюирующего растворителя в обращеннофазовой колоночной хроматографии на силикагеле, соединение настоящего изобретения элюируется при концентрации метанола, равной примерно 95%. Полученная фракция может далее быть очищена ВЭЖХ и т.п.

Действительно ли соединение или композиция, содержащая его, полученные как описано выше, содержат соединение настоящего изобретения, может быть подтверждено измерением эффекта ингибирования накопления висцерального жира как индикатора посредством применения, например, способов, показанных в примерах, описанных выше. Является ли соединение гликозидом, связанным с глюкозой агликоновой частью, или является ли агликоновая часть 4-метилэргост-7-ен-3-олом, может быть подтверждено посредством, например, ¹³С-ЯМР и т.п.

Соединение настоящего изобретения может также быть получено посредством конденсации D-глюкозы и 4-метилэргост-7-ен-3-ола. 4-метилэргост-7-ен-3-ол может быть получен экстракцией из растения и очисткой экстракта. D-глюкоза и 4-метилэргост-7-ен-3-ол могут быть конденсированы посредством, например, комбинации способов, описанных в Jikken Kagaku Koza (Lecture of Experimental Chemistry), 4th edition, vol. 26, 1992 (p.272, p.297 and p.342). А именно, D-глюкозу полностью ацетилируют и затем аномерное положение превращают в α-бромид. Затем 4-метилэргост-7-ен-3-ол вводят в реакцию с α-бромидом в диэтиловом эфире, чтобы достигнуть β-гликозилирования, и после этого ацетильные группы гидролизуют в смеси метилат натрия/метанол для получения целевого соединения.

Соединение настоящего изобретения может быть использовано в качестве действующего ингредиента средства для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения и пищевого продукта или напитка, содержащего его. Дополнительно, экстракт в органическом растворителе, экстракт в горячей воде или отжатая жидкость растения, содержащего соединение настоящего изобретения или его части (далее именуемые «экстракт и т.д.»), могут также быть использованы в качестве действующего ингредиента средства для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения и пищевого продукта или напитка, содержащего его.

В настоящем изобретении отжатая жидкость может быть получена путем переработки гомогената растения с помощью компрессора, сбора сырца отжатой жидкости растения и фильтрации сырца для удаления нерастворимой фракции (примеси) через фильтр или фильтровальную ткань. Например, когда алоэ вера используется в качестве растения семейства Liliaceae, жидкость, отжатая из алоэ вера, может быть получена посредством переработки мезофильной гелеобразной части, получаемой отжимом листа алоэ вера в измельчителе, сжатием отжатой жидкости, чтобы собрать сырец алоэ вера, и фильтрованием для удаления загрязнения сырца алоэ вера через фильтр или фильтровальную ткань. В этом случае предпочтительным является, чтобы общее содержание алоина и алоэ-эмодина, которые содержатся в большом количестве в коже листьев алоэ вера, составляло 5 ppm (частей на миллион) или меньше.

Вышеупомянутый экстракт и т.д., содержащийся в средстве для ингибирования накопления висцерального жира, предпочтительно содержит, по крайней мере, 0,001% по сухой массе, более предпочтительно, от 0,01 до 1% по сухой массе, особенно предпочтительно, от 0,05 до 1% по сухой массе соединения настоящего изобретения. Далее, вышеупомянутый экстракт и т.д., содержащийся в пище или напитке, предпочтительно содержит, по крайней мере, 0,0001% по сухой массе, более предпочтительно, от 0,001 до 1% по сухой массе, особенно предпочтительно, от 0,005 до 1% по сухой массе соединения настоящего изобретения. Вышеупомянутый экстракт и т.д. может содержать два или более типов соединения настоящего изобретения. Далее, вышеупомянутый экстракт и т.д. может являться раствором или может также являться лиофилизованным или высушенным распылением традиционным способом и храниться или использоваться в виде порошка.

В качестве средства для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения соединение настоящего изобретения или композиция, содержащая его, такая как экстракт и т.п. как таковой, или они же, смешанные с фармацевтически приемлемым носителем, могут быть введены перорально или парентерально млекопитающему, включая человека. В средстве настоящего изобретения соединение может являться фармацевтически приемлемой солью. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают как соли металлов (неорганические соли), так и органические соли, включающие, например, перечисленные в “Remington's Pharmaceutical Sciences,” 17th edition, p.1418, 1985. Конкретные примеры их включают, но не ограничены этим, соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, сульфат, фосфат, дифосфат и гидробромат, и соли органических кислот, такие как малат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, ацетат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат, салицилат и стеарат. Кроме того, соль может быть солью с металлом, таким как, натрий, калий, кальций, магний и алюминий, или солью с аминокислотой, такой как лизин. Кроме того, сольваты, такие как гидраты вышеуказанного соединения или его фармацевтически приемлемые соли также попадают в объем настоящего изобретения.

Лекарственная форма средства для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения не является конкретно ограниченной и может быть соответственно выбрана в зависимости от терапевтической цели. Конкретные примеры этого включают таблетку, пилюлю, порошок, раствор, суспензию, эмульсию, гранулы, капсулу, сироп, суппозиторий, инъекцию, мазь, пластырь, глазные капли, капли в нос и т.д. Для приготовления могут быть использованы добавки, как правило, используемые в обычном средстве для ингибирования накопления висцерального жира в качестве фармацевтических носителей, такие как вспомогательные вещества, связующие вещества, разрыхлители, смазывающие вещества, стабилизаторы, ароматизаторы, разбавители, поверхностно-активные вещества и растворители для инъекций и т.д. Далее, до тех пор, пока эффект настоящего изобретения не нарушается, соединение настоящего изобретения или экстракт и т.д., содержащий его, могут быть использованы в комбинации с другими средствами, обладающими эффектом ингибирования накопления висцерального жира.

Хотя количество соединения настоящего изобретения или экстракта и т.д., содержащего его, содержащееся в средстве для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения, не является конкретно ограниченным и может быть соответственно выбрано, количество может быть, например, по крайней мере, 0,001% по массе, предпочтительно, от 0,01% до 1% по массе, особенно предпочтительно, от 0,05 до 1% по массе в расчете на количество соединения настоящего изобретения.

Средство для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения обладает эффектом ингибирования накопления висцерального жира и, следовательно, может предотвращать ожирение висцерального типа. Ожирение висцерального типа обычно означает состояние, при котором площадь висцерального жира равна 100 см² или больше, и по диагностическим критериям для метаболического синдрома означает случай, в котором мужчина-японец имеет размер талии 85 см или больше, или женщина-японка имеет размер талии 90 см или больше (Internal Medicine, vol. 94, pp. 188-203, 2005). В дополнение, средство для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения предпочтительно применяется для лечения пациентов, которые имеют большее количество накопленного висцерального жира, чем здоровый человек.

Кроме того, средство для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения может облегчать или предотвращать заболевания, осложнения и т.п., вызванные накоплением висцерального жира, такие как нарушенный метаболизм липидов и сердечно-сосудистые заболевания, и может также уменьшать риск этих болезней, осложнений и т.п. Примеры различных заболеваний, вызванных накоплением висцерального жира, включают ожирение, в частности ожирение висцерального типа, гиперлипидемию, диабет, гипертонию и атеросклероз. В дополнение, примеры осложнений, вызванных этими болезнями, включают диабетическую ретинопатию, нефропатию, нейропатию и диабетическую гангрену, вызванные диабетом; церебральную эмболию, нефросклероз и почечную недостаточность, вызванные гипертонией; и церебральную эмболию, церебральный инфаркт, сердечно-сосудистые заболевания, такие как стенокардия и инфаркт сердца, и нефропатию, такую как уремия, нефросклероз и почечная недостаточность, вызванные атеросклерозом.

Кроме того, средство для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения является полезным для предотвращения начала метаболического синдрома. Действие средства ингибирования или снижения накопления висцерального жира, описанное выше, является особенно эффективным для предотвращения начала метаболического синдрома и связанных с метаболическим синдромом атеросклеротических болезней, связанных с образом жизни болезней, указанных как его факторы риска, таких как диабет, гипертония и гиперлипидемия, и осложнений, связанных с этими заболеваниями. В дополнение, метаболический синдром в настоящем изобретении обозначает состояния, наблюдаемые при синдроме множественных факторов риска, а именно состояний, при которых легко образуется атеросклероз, и в которых такие симптомы рассматриваются в качестве факторов риска, как гиперинсулинемия, нарушенная глюкозная толерантность или гипергликемия, нарушенный липидный метаболизм, гиперлипидемия (гипертриглицеридемия и гипо-HDL-холестеринемия), гипертония, ожирение и накопление висцерального жира. В дополнение, авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение настоящего изобретения обладает эффектом уменьшения уровня гликозилированного гемоглобина и улучшения гипергликемии (WO 2005/095436). Является предпочтительным, чтобы заболевания, при которых применяется средство для ингибирования накопления висцерального жира настоящего изобретения, не сопровождались состоянием, при котором уровень гликозилированного гемоглобина являлся более высоким, чем у здорового человека.

Время введения средства настоящего изобретения не является конкретно ограниченным и может быть соответственно выбрано в соответствии со способом для лечения целевого заболевания. Кроме того, путь введения предпочтительно определяется в зависимости от лекарственной формы, возраста, пола и других характеристик пациентов, тяжести симптомов пациентов и т.д. Доза средства настоящего изобретения соответственно выбирается в зависимости от схемы дозирования, возраста, пола, тяжести заболевания, других характеристик пациентов и т.д. Количество соединения настоящего изобретения в качестве действующего ингредиента обычно выбирается в диапазоне предпочтительно от 0,001 до 50 мг/кг/день, более предпочтительно - от 0,01 до 1 мг/кг/день, в качестве ориентировочной дозы. Далее, когда используется экстракт и т.д., содержащий соединение настоящего изобретения, сухой вес экстракта и т.д. выбирается в диапазоне предпочтительно от 0,1 до 1000 мг/кг/день, более предпочтительно - от 1 до 100 мг/кг/день, в качестве предварительной дозы. В любом случае доза может быть принята внутрь один раз в день или несколько раз, разделенная на несколько порций.

Соединение настоящего изобретения или композиция, содержащая его, могут быть добавлены к продукту питания или напитку (любым напитку или продукту питания) для получения продукта питания или напитка, обладающего эффектом ингибирования накопления висцерального жира. Форма и свойство продукта питания или напитка не являются конкретно ограниченными до тех пор, пока эффект действующего ингредиента не разрушается, и продукт питания или напиток могут быть перорально приняты внутрь, и он может быть произведен обычным способом посредством использования сырья, обычно используемого для продуктов питания или напитков, за исключением того, что добавлен вышеупомянутый действующий ингредиент. Кроме того, количество соединения настоящего изобретения или экстракта и т.д., содержащего его, содержащихся в продукте питания или напитке настоящего изобретения, не является конкретно ограниченным и может быть соответственно выбрано. Например, соединение настоящего изобретения или экстракт и т.д., содержащий его, содержатся в продукте питания или напитке в количестве, по крайней мере, 0,0001% по массе, предпочтительно - от 0,001 до 1% по массе, особенно предпочтительно - от 0,005 до 1% по массе в расчете на количество соединения настоящего изобретения.

Продукт питания или напиток настоящего изобретения может быть использован в различных назначениях, использующих эффект снижения висцерального жира. Например, они могут быть использованы как продукт питания или напиток, подходящий для людей, которые начали беспокоиться о размере своей талии, продукт питания или напиток, подходящий для людей, которые начали беспокоиться о липидах крови, и продукт питания или напиток, пригодный для снижения или исключения факторов риска метаболического синдрома и т.п.

В настоящем изобретении «ингибирование накопления висцерального жира» означает эффект улучшения или предотвращения различных негативных эффектов на здоровье, вызванных накоплением висцерального жира. «Снижение ожирения висцерального типа», «предотвращение ожирения висцерального типа», «снижение висцерального жира» и «предотвращение накопления висцерального жира» и т.п. являются примерами одинаковых значений с вышеупомянутым термином «ингибирование накопления висцерального жира» в настоящем изобретении.

В дополнение, продукт питания или напиток настоящего изобретения является полезным для улучшения или предотвращения заболеваний, вызываемых накоплением висцерального жира, таких как нарушенный метаболизм липидов и сердечно-сосудистые заболевания, типичным представителем которых является гиперлипидемия. Кроме того, продукт питания или напиток настоящего изобретения может также быть использован для предотвращения начала метаболического синдрома, ожирения висцерального типа и т.п. Далее, продукт питания или напиток настоящего изобретения может излечить или предотвратить разнообразные болезни, осложнения и т.п., вызванные накоплением висцерального жира, и может снижать риски этих болезней, осложнений и т.п., как те, что упоминались выше для средства настоящего изобретения.

Продукт питания или напиток настоящего изобретения может предпочтительно продаваться как продукт питания или напиток с прилагаемым указанием, что продукт питания или напиток используется для ингибирования накопления висцерального жира, например «продукт питания или напиток, содержащий соединение, обладающее эффектом ингибирования накопления висцерального жира, указанное как "Для ингибирования накопления висцерального жира" или «продукт питания или напиток, содержащий растительный экстракт, указанный как "Для ингибирования накопления висцерального жира" и т.п. В дополнение, поскольку соединение настоящего изобретения и композиция, содержащая его, обладают эффектом ингибирования накопления висцерального жира, указание «ингибирование накопления висцерального жира» для продукта питания или напитка считается как имеющее значение «улучшение ожирения висцерального типа». Вследствие этого продукт питания или напиток настоящего изобретения может быть обозначен как «Для улучшения ожирения висцерального типа». Другими словами, указание «Для ингибирования накопления висцерального жира» может быть заменено указанием «Для снижения ожирения висцерального типа».

Формулировка, используемая для такого указания, упомянутого выше, не является обязательно ограниченной выражением «Для ингибирования накопления висцерального жира» или «Для снижения ожирения висцерального типа», и любая другая формулировка, отражающая эффект ингибирования накопления висцерального жира или эффект предотвращения и снижения ожирения висцерального типа, конечно, попадает в объем настоящего изобретения. В качестве такой формулировки, например, указание, основанное на различных применениях, позволяющее потребителям распознать эффект для ингибирования накопления висцерального жира или эффект снижения ожирения висцерального типа, является также возможным. Примеры включают указания «Подходит для тех, кто начал беспокоиться о размере обхвата талии», «Подходит для тех, кто имеет склонность к ожирению висцерального типа» и «Полезно для снижения или устранения факторов риска (рисков) метаболического синдрома».

Вышеупомянутый термин «указание» включает все действия по информированию потребителей о вышеупомянутом применении и любые указания, напоминающие или проводящие аналогию с вышеупомянутым применением, попадают в объем «указания» настоящего изобретения, независимо от цели, содержания, целевого предмета, среды и т.д. указания. Однако указание предпочтительно выполняется выражением, которое позволяет потребителям прямо распознать вышеуказанное применение. Конкретные примеры включают действия по указанию вышеупомянутого применения на товарах или упаковках товаров, относящихся к продукту питания или напитку настоящего изобретения, действия по назначению, доставке, отображению для целей назначения или доставки или импорта таких товаров или упаковок товаров, указанных для вышеупомянутого использования, отображению или распространению рекламы, прейскурантов или деловых бумаг, относящихся к товарам с указанием вышеупомянутого применения, или предоставлению информации, включающей их в качестве содержимого с указанием вышеупомянутого использования посредством электромагнитного способа (Интернет и т.п.) и т.д. Указание является, предпочтительно, указанием, одобренным администрацией и т.п. (например, указание в виде, основанном на разрешении, которое квалифицируется на основе любой из различных юридических систем, предоставленных администрацией), и особенно предпочтительным является указание на рекламных материалах в точках продаж, таких как упаковки, контейнеры, каталоги, брошюры и места продаж, другие документы и т.д.

Примеры указаний далее включают, например, указания как лечебное питание, здоровое питание, продукт для питания кишечника, продукт для особого диетического применения, продукт со специальными питательными свойствами, квази-лекарство и т.д., а также указания, одобренные Министерством здравоохранения, труда и соцобеспечения, например указания, одобренные на основе системы продукта питания, воздействующего на состояние здоровья, и похожие системы. Примеры последних включают указания как продукта питания, воздействующего на состояние здоровья, указания как продукта питания, воздействующего на состояние здоровья с научно-обоснованным указанием эффекта на здоровье, указания влияния на структуру и функции организма, указания на уменьшение риска заболевания и т.д., и, более точно, типичные примеры включают указания как продукта питания, воздействующего на состояние здоровья (особенно указания применения для здоровья), предоставленные в исполнительных требованиях Закона о стимулировании здоровья (Health Promotion Law (Japan Ministry of Health, Labor and Welfare, Ministerial ordinance No. 86, April 30, 2003), и похожие указания.

Настоящее изобретение будет объяснено более определенно со ссылкой на следующие примеры. Однако объем настоящего изобретения не является ограниченным следующими примерами.

Во-первых, в примерах приготовления объяснено, что соединение или композиция настоящего изобретения могут быть получены из растения, принадлежащего семейству Liliaceae.

[Пример получения 1]

В качестве примера получения из растения, принадлежащего семейству Liliaceae, примеры получения 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола из алоэ вера будут описаны ниже.

В количестве 100 кг мезофилла (прозрачная гелеобразная часть) алоэ вера с помощью гомогенизатора превратили в жидкость, добавили к ней 100 л смеси этилацетат/бутанол (3:1) и перемешали. Смесь оставили на ночь для разделения смеси этилацетат/бутанол и водного слоя и собрали водный слой и смесь этилацетат/бутанол. Экстракт из смеси этилацетат/бутанол, полученный концентрированием смеси этилацетат/бутанол при уменьшенном давлении, весил 13,5 г. Эффект ингибирования накопления висцерального жира оценивали для вышеупомянутого водного слоя посредством измерения веса брыжеечного жира и экстракта из смеси этилацетат/бутанол в мышиной модели диабета, описанной позже в справочном примере 1, и эффект наблюдался для экстракта из смеси этилацетат/бутанол. Поэтому была проведена попытка выделить и очистить компоненты экстракта.

Сначала вышеупомянутый экстракт исследовали с помощью тонкослойной хроматографии (Merck Ltd., Silica gel 60F254 and RP-18F2543). В результате подходящим оказался способ выделения, основанный на нормальнофазовой колоночной хроматографии на силикагеле с использованием смеси хлороформ/метанол. Соответственно, раствор 13 г вышеупомянутого экстракта, растворенного в 1 мл смеси хлороформ/метанол (1:1), нанесли на колонку, заполненную 400 г силикагеля 60 (Merck Ltd.), чтобы достичь адсорбции компонентов на колонку, затем компоненты элюировали смесью хлороформ/метанол способом ступенчатого градиента, в котором концентрацию метанола увеличивали ступенчато (коэффициент смешения хлороформ/метанол = 100:1, 25:1, 5:1 и 1:1), и элюат фракционировали для каждого коэффициента смешения вышеупомянутой смеси. Выходы неочищенных продуктов очистки, полученных из фракций после удаления растворителя, были 1,44, 3,0, 1,17, 1,28 и 2,27 г, соответственно. С помощью вышеупомянутого метода оценки ингибирования накопления висцерального жира было подтверждено, что среди этих фракций активный компонент находился во фракции, элюированной смесью хлороформ/метанол 5:1 (неочищенный продукт очистки А).

Кроме того, чтобы выделить и очистить активный компонент из вышеупомянутого неочищенного продукта очистки А, неочищенный продукт очистки А был исследован с использованием тонкослойной хроматографии (Merck Ltd., Silica gel 60F254 and RP-18F2543). В результате подходящим оказался способ выделения, основанный на обращеннофазовой колоночной хроматографии на силикагеле с использованием метанола. Соответственно, вышеупомянутый неочищенный продукт очистки А растворили в 1 мл смеси хлороформ/метанол (1:1), нанесли на колонку, заполненную 180 г COSMOSIL 140 (Nacalai Tesque, Inc.), чтобы достичь адсорбции компонентов на колонку. Затем проводили элюирование, последовательно используя 600 мл 85% раствора метанола, 600 мл 95% раствора метанола и 100 мл 100% метанола. 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол был сконцентрирован и выделен во фракции с 95% метанолом и весил 370 мг после удаления растворителя. Далее этот продукт именуется как соединение 1.

Поскольку соединение 1 показало значение Rf, очень близкое к значению β-ситостеринового гликозида при исследовании методом тонкослойной хроматографии, ожидалось что оно будет являться гликозидом, в котором одна молекула сахара связана с агликоновой частью. Кроме того, чтобы исследовать композицию сахара соединения 1, соединение 1 подвергали метанолизу, затем получали TMS производное и подвергали ГХ-МС анализу (газовая хроматография/масс-спектрометрия). В результате при анализе TMS производного для сахарной части соединения 1 оно показало основные пики с временами удерживания 14,28, 14,61 и 16,34 минут, которые практически полностью соответствовали временам удерживания основных пиков образца глюкозы (Nacalai Tesque, Inc.), 14,27, 14,60 и 16,33 минут. Кроме того, не наблюдались пики, соответствующие основным пикам образца галактозы (Kishida Chemical Co., Ltd) и образца ксилозы (Kishida Chemical Co., Ltd.). Таким образом, было подтверждено, что сахаром, содержащимся в соединении 1, являлась глюкоза.

На основании вышеописанных результатов было выдвинуто предположение, что соединение 1 является гликозидом, в котором 1 молекула глюкозы связана с агликоновой частью. Однако анализ соединения 1 с помощью ¹³С-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) подтвердил наличие примесей. Поэтому сочли необходимой дальнейшую очистку для определения его структуры. Соответственно, проводили метанолиз соединения 1 и затем проводили его ацетилирование и затем подтверждали структуру агликоновой части, а также участок связывания агликоновой части и сахара. Этот способ будет описан ниже.

В количестве 50 мг соединение 1 растворили в метаноле (50 мл), содержащем 5% соляную кислоту, и раствор дефлегмировали при нагревании 6 часов для метанолиза и высушивали, чтобы получить осадок (около 30 мг). Этот осадок очищали посредством гель-хроматографии на силикагелевой колонке (в смеси гексан:хлороформ = 9:1), чтобы получить соединение 2 (10 мг). К этому соединению 2 (5 мг) добавляли уксусный ангидрид и пиридин (по 2 капли каждого), и смесь нагревали при 70°С в течение 30 минут для ацетилирования и затем выпаривали растворитель из реакционной смеси, чтобы получить соединение 3. Проводили анализ соединения 3 с помощью ГХ-МС и ¹³С-ЯМР (125 МГц, CDCl₃).

Результаты анализа этого соединения 3 с помощью ГХ-МС и ¹³С-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) приведены ниже. 3-ацетокси-4-метилэргост-7-ен, используемый в качестве референсного вещества, был получен экстракцией из алоэ, очисткой экстракта, подтверждением структуры очищенного продукта с помощью ¹³С-ЯМР и ацетилированием этого.

[Спектр ¹³C-ЯМР (δ значения, в CDCl₃)]; C-1:36,8, C-2:27,3, C-3:78,7, C-4:37,0, C-5:46,9, C-6:26,8, C-7:117,4, C-8:139,4, C-9:49,7, C-10:34,9, C-11:21,6, C-12:39,7, C-13:43,6, C-14:55,1, C-15:23,1, C-16:28,2, C-17:56,3, C-18:12,0, C-19:14,2, C-20:36,5, C-21:19,0, C-22:33,9, C-23:30,6, C-24:39,1, C-25:32,6, C-26:20,4, C-27:18,4, C-28:15,6, C-29:15,3

[ГХ-МС]

Прибор: GC-17A/GCMS5050A (SHIMADZU)

Колонка ГХ: NEUTRA BOND-5 (GL Scienses)

Температура колонки: 100°C (2 мин) → (10°C/мин) → 300°C (28 мин)

Температура вспрыскивания: 250°C

Газ-носитель: He (1,3 мл/мин)

Межфазовая температура: 300°C

Тип МС: ЭИ

Энергия ионизации: 70 эВ

[Результаты]

Референсное вещество: 3-ацетокси-4-метилэргост-7-ен: tR [мин.] = 39,4; m/z 456 [M]⁺, 441 [M-CH₃]⁺, 396 [M-AcOH]⁺, 381 [M-CH₃-AcOH]⁺

Соединение 3: tR [мин] = 39,2; m/z 456 [M]⁺, 441 [M-CH₃]⁺, 396 [M-AcOH]⁺, 381 [M-CH₃-AcOH]⁺

Результаты ЯМР анализа соединения 3 соответствовали значениям 3-ацетокси-4-метилэргост-7-ена, приведенным в литературе (Yukagaku (Oil Chemistry), Vol. 36, No. 5, pp.301-319, 1987). Эти результаты выявили, что соединение 2 было 4-метилэргост-7-ен-3-олом. Кроме того, в результате ББА-МС анализа было найдено, что молекулярный вес соединения 1 равен 576. Когда соединение 2 (агликоновая часть) и глюкоза были сконденсированы, молекулярный вес полученного соединения был 414 (соединение 2) + 180 (глюкоза) - 18 (вода) = 576, что соответствовало молекулярному весу соединения 1. Вышеизложенные результаты выявили, что соединение имело структуру 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола.

Молекулярные формулы, молекулярный вес и химические формулы соединений приведены ниже.

(Соединение 1)

Молекулярная формула: C₃₅H₆₀O₆

Молекулярный вес: 576

Химическая формула: Следующая химическая формула (1)

(Соединение 2)

Молекулярная формула: C₂₉H₅₀O

Молекулярный вес: 414

Химическая формула: Следующая химическая формула (2)

(Соединение 3)

Молекулярная формула: C₃₁H₅₂O₂

Молекулярный вес: 456

Химическая формула: Следующая химическая формула (3)

[Пример получения 2]

Мезофилл (прозрачную гелеобразную часть) алоэ вера высушили при нагревании, к 0,3 г молотого сухого порошка алоэ вера добавили 60 мл 60, 80 или 100% этанола, и дефлегмировали жидкость при нагревании при 60°С в течение 1 часа. Экстракт центрифугировали при 1500 об/мин в течение 20 минут и надосадочную жидкость концентрировали при уменьшенном давлении до полного удаления этанола и, таким образом, получали экстракт-сырец. Сухой вес экстрактов-сырцов, полученных экстракцией с использованием 60, 80 и 100% этанола, был 65, 42 и 18 мг, соответственно. С помощью тонкослойной хроматографии было подтверждено, что эти неочищенные экстракты содержали 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол.

[Пример получения 3]

Мезофилл (прозрачную гелеобразную часть) алоэ вера высушили при нагреве, к 0,3 г молотого сухого порошка алоэ вера добавили 60 мл воды, смесь дефлегмировали при нагревании при 95°С в течение 5 часов. Экстракт центрифугировали при 1500 об/мин в течение 20 минут и надосадочную жидкость лиофилизировали, чтобы получить 75 мг экстракта-сырца. С помощью тонкослойной хроматографии было подтверждено, что этот экстракт-сырец содержал 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол.

[Пример получения 4]

Мезофилл (прозрачную гелеобразную часть) алоэ вера высушили при нагреве, перемололи и высушили, к 21 кг порошка алоэ вера, полученного таким образом, добавили 90 л смеси хлороформ/метанол (2:1), затем оставили погруженным в смесь на ночь при комнатной температуре и собрали фильтрованием, и к осадку, полученному фильтрованием, снова добавили 90 л смеси хлороформ/метанол (2:1). Эту процедуру повторили всего 4 раза. Полученный фильтрат (350 л) концентрировали при 28°С, чтобы в конце получить 784 г экстракта-сырца. К количеству 780 г этого экстракта-сырца добавили 2 л смеси хлороформ/метанол (2:1), перемешивали в течение 1 часа и фильтровали для выделения слоя смеси хлороформ/метанол (А). К осадку, полученному фильтрованием, последовательно добавили 2,5 л воды и 2 л этилацетата и перемешивали в течение 1 часа, и выделили слой этилацетата (Б). К оставшемуся водному слою снова добавили 5 л хлороформа и перемешивали в течение 1 часа, и выделили слой хлороформа (В).

Выделенные экстракты органических растворителей А, Б и В смешали, сконцентрировали при 23°С и нанесли на силикагелевую колонку [стеклянная колонка: 52 мм × 350 мм, носитель: IR-63/210-W (Daiso Co., Ltd.)]. Последовательно, одновременно контролируя элюат с помощью тонкослойной хроматографии, 10 л смеси гексан/хлороформ (1:1), 10 л хлороформа, 20 л смеси хлороформ/метанол (10:1) и 20 л смеси хлороформ/метанол (5:1) пропустили через колонку в этом порядке и собирали фракцию 1 (примерно, 1 л), фракцию 2 (примерно, 1,5 л), фракцию 3 (примерно, 1,5 л) и фракцию 4 (примерно, 1,5 л) в порядке используемого растворителя элюции.

С помощью тонкослойной хроматографии было подтверждено, что среди них фракция 3 содержала целевой гликозид, и затем удаляли растворитель фракции 3, получая 131,6 г экстракта-сырца. В количестве 130 г этот экстракт снова наносили на силикагелевую колонку [стеклянная колонка: 70 мм × 500 мм, носитель: SP-60-40/60 (Daiso Co., Ltd.)] и элюировали последовательно 10 л смеси хлороформ/метанол (30:1), 50 л смеси хлороформ/метанол (20:1), 10 л смеси хлороформ/метанол (10:1) и 10 л смеси хлороформ/метанол (1:1) в качестве элюирующих растворителей при условиях давления 10 кгс/см² и скорости потока 40 мл/мин. Элюаты фракционировали по 100 мл фракциям, используя коллектор фракций для сбора фракций 1-8.

Собранные фракции анализировали с помощью тонкослойной хроматографии, и в результате было выявлено, что целевой гликозид и примеси находятся во фракции 7. Поэтому эта фракция была сконцентрирована, нанесена снова на силикагелевую колонку [стеклянная колонка: 70 мм × 500 мм, носитель: SP-60-40/60 (Daiso Co., Ltd.)] и последовательно элюирована 10 л смеси хлороформ/метанол (20:1) и 10 л смеси хлороформ/метанол (10:1) в качестве элюирующих растворителей при условиях давления 10 кгс/см² и скорости потока 40 мл/мин. В результате было получено 25,3 г 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола, который являлся целевым гликозидом, содержащимся во фракции, элюированной смесью хлороформ/метанол (10:1).

Пример 1

Этот пример был выполнен для того, чтобы оценить ингибиторный эффект 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола и жидкости, отжатой из алоэ вера, на накопление висцерального жира посредством использования ZDF крыс, которые являются модельными животными для диабета, вызываемого ожирением (второго типа).

(1) Приготовление образца

3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол, полученный в примере получения 1, использовался в качестве образца. Образец растворяли в ДМСО, и концентрацию образца доводили дистиллированной водой до 15 мкг/мл и 1,5 мкг/мл, чтобы, таким образом, приготовить тестовые образцы А-1 и А-2, соответственно. Тем временем, неочищенный раствор был получен посредством измельчения геля алоэ вера с помощью соковыжималки и затем фильтрования через сито №200 (изготовленное NBC), чтобы, таким образом, получить отжатую жидкость из геля алоэ вера в качестве тестового образца Б-1. Отжатую жидкость из геля алоэ вера разводили в 20 раз, чтобы получить тестовый образец Б-2. Было подтверждено, что отжатая жидкость из геля алоэ вера содержала 0,1% 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола по массе. В дополнение, конечная концентрация ДМСО была доведена до 0,2%. Кроме того, был приготовлен раствор без испытуемых образцов в качестве отрицательного контроля.

(2) Способ тестирования

6-недельных самцов ZDF крыс (купленных у Charles River Laboratories, Inc., USA) предварительно кормили питанием с высоким содержанием жира (Research Diet, Inc.) в течение 1 месяца. Эти крысы были разделены на группы, состоящие каждая из 6 крыс. Каждой группе крыс вводили перорально по 1 мл растворов отрицательного образца, тестовых образцов А-1, А-2, Б-1 и Б-2, соответственно, на 400 г веса тела крысы в день, один раз в день последовательно в течение 44 дней через зонд. В этих случаях вводимые количества 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола тестовых образцов А-1 и А-2 были 25 мкг/кг и 2,5 мкг/кг, соответственно. В дополнение вводимые количества твердого содержимого алоэ вера из тестовых образцов Б-1 и Б-2 были 2,5 г/кг и 0,125 г/кг, соответственно.

На 45-й день от начала введения вес брыжеечного жира измеряли как висцеральный жир.

Таблица 1 показывает вес брыжеечного жира на 45-й день от начала введения. Вес брыжеечного жира группы, которой вводили тестовые образцы А-1 (вводимое количество: 25 мкг/кг) и А-2 (вводимое количество: 2,5 мкг/кг), был 3,15±0,28 г и 4,99±0,53 г, соответственно. По сравнению с весом брыжеечного жира группы, которой вводили отрицательный образец (6,83±1,10 г), наблюдалась тенденция к снижению веса брыжеечного жира на 46,2% и 73,1% в группе, которой вводили тестовые образцы А-1 и А-2. Таким образом, было подтверждено, что тестовые образцы А-1 и А-2 обладали статистически достоверным эффектом ингибирования накопления висцерального жира. Кроме того, вес брыжейки группы, которой вводили тестовые образцы Б-1 (вводимое количество: 2,5 г/кг) и Б-2 (вводимое количество: 0,125 г/кг), был 4,72±0,66 г и 4,75±0,79 г, соответственно. По сравнению с весом брыжеечного жира группы, которой вводили отрицательный образец, наблюдалась тенденция к снижению веса брыжеечного жира на 69,1% и 69,5% в группе, которой вводили тестовые образцы Б-1 и Б-2. Таким образом было подтверждено, что тестовые образцы Б-1 и Б-2 обладали статистически достоверным эффектом ингибирования накопления висцерального жира. Кроме того, не наблюдались никакие побочные эффекты, с точки зрения патологии. В дополнение, р-значения в таблицах указывают достоверную вероятность по тесту Тьюки-Крамера.

[Таблица 1] Образец Вес брыжеечного жира р значение Тестовый образец А-1 3,15±0,28^* 0,00003 Тестовый образец А-2 4,99±0,53^* 0,007 Тестовый образец Б-1 4,72±0,66^* 0,0012 Тестовый образец Б-2 4,75±0,79^* 0,0039 Отрицательный образец 6,83±1,10 - В таблице «*» означает, что присутствует статистически достоверный эффект ингибирования накопления висцерального жира.

Пример 2

Этот пример был выполнен для того, чтобы исследовать эффект 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола и жидкости, отжатой из алоэ вера, на количество принятой внутрь пищи (количество потребления пищи) и увеличения веса тела (величина увеличения веса тела) крыс.

(1) Приготовление образцов

3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол, полученный в примере получения 1, использовался в качестве образца. Образец растворяли в ДМСО, и концентрацию образца доводили дистиллированной водой до 10 мкг/мл, чтобы, таким образом, приготовить тестовый образец В. Тем временем неочищенный раствор был получен посредством измельчения геля алоэ вера с помощью соковыжималки и затем фильтрования через сито №200 (изготовленное NBC), чтобы, таким образом, получить отжатую жидкость из геля алоэ вера в качестве тестового образца Г. Было подтверждено, что отжатая жидкость из геля алоэ вера содержала 0,1% 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола по массе. В дополнение, конечная концентрация ДМСО была доведена до 0,2%. Кроме того, был приготовлен раствор без испытуемых образцов в качестве отрицательного контроля.

(2) Способ тестирования

6-недельных самцов ZDF крыс (купленных у Charles River Laboratories, Inc., USA) предварительно кормили питанием с высоким содержанием жира (Research Diet, Inc.) в течение 1 месяца. Эти крысы были разделены на группы, состоящие каждая из 6 крыс, после измерения их веса тела. Каждой группе крыс вводили перорально по 1 мл растворов тестовых образцов В, Г и отрицательного образца, соответственно, на 400 г веса тела крысы в день, один раз в день последовательно в течение 44 дней через зонд. В этих случаях вводимые количества 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ола тестового образца В были 37,5 мкг/кг. В дополнение, вводимые количества твердого содержимого алоэ вера тестовых образцов Г были 3,75 г/кг.

В течение 42 дней после начала введения измеряли вес тела крыс и разницу между весом тела на 42-й день и весом тела, измеренным перед началом введения, считали как значение увеличения веса тела. В дополнение, вес пищи, потребляемой в день, измеряли один раз в неделю со дня начала введения, и среднее веса считалось как количество пищи, потребляемой в день.

(3) Результаты теста

Таблица 2 показывает результаты потребления пищи в день и значения увеличения веса тела в течение 42 дней на крысу. Наблюдалось, что группы, которым вводили тестовые образцы В и Г, не показывали существенного увеличения или уменьшения в количестве потребляемой пищи по сравнению с группой, которой вводили отрицательный образец. В дополнение, величины увеличения веса тела (увеличение в весе тела) групп, которым вводили тестовые образцы В и Г, были практически те же самые, что и у групп, которым вводили отрицательный образец. Таким образом, было выявлено, что 3-О-β-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол не влияет на количество поглощаемой внутрь пищи и увеличение веса тела крыс.

[Таблица 2] Образец Количество потребления пищи, (г) Величина увеличения веса тела, (г) Тестовый образец В 22,5±1,2 166,5±19,3 Тестовый образец Г 21,7±1,4 173,3±32,5 Отрицательный образец 22,5±1,2 159,9±37,2

Промышленное применение

По настоящему изобретению может быть предоставлено средство для ингибирования накопления висцерального жира, которое способно поддерживать стандартный вес тела без снижения веса тела и является эффективным для ингибирования развития ожирения без излишних ограничений в питании и т.п., и физиологически функциональный продукт питания или напиток, такой как продукт питания, воздействующий на состояние здоровья, содержащий средство для ингибирования накопления висцерального жира. Следовательно, болезни, осложнения и т.п., вызываемые накоплением висцерального жира, такие как нарушенный метаболизм липидов и болезни кровообращения, могут быть облегчены или предотвращены, и риск этих заболеваний, осложнений и т.п. может быть также уменьшен. В дополнение, настоящее изобретение также предоставляет эффект предотвращения начала метаболического синдрома и заболеваний, связанных с образом жизни, которые указаны, как факторы риска метаболического синдрома, такие как диабет, гипертония и гиперлипидемия.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, и касается средства для ингибирования накопления висцерального жира, для снижения количества жира, накопленного в брюшной полости, и для предотвращения или уменьшения ожирения висцерального типа, считающегося основным фактором метаболического синдрома, предоставлено средство или продукт питания, или напиток, включающие в качестве действующего ингредиента 3-O-b-D-глюкопиранозил-4-метилэргост-7-ен-3-ол, экстракт в органическом растворителе, экстракт в горячей воде, отжатую жидкость растения семейства Liliaceae или его части, которая содержит соединение. Средство обладает высокой эффективностью для лечения ожирения висцерального типа. 5 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Средство для ингибирования накопления висцерального жира, содержащее соединение, представленное следующей формулой (1), в качестве активного ингредиента

2. Средство для ингибирования накопления висцерального жира, содержащее экстракт растения семейства Liliaceae или его части смесью этилацетат/бутиловый спирт или смесью хлороформ/метиловый спирт, который содержит соединение, представленное следующей химической формулой (1), где экстракт растения или его части смесью этилацетат/бутиловый спирт или смесью хлороформ/метиловый спирт, содержит композицию, в качестве активного ингредиента, содержащую, по крайней мере, 0,001% от сухой массы соединения, представленного следующей химической формулой (1)

3. Продукт питания или напиток, содержащий средство для ингибирования накопления висцерального жира по п.1 или 2.

4. Продукт питания или напиток по п.3, который содержит, по крайней мере, 0,0001% по массе указанного соединения, представленного химической формулой (1).

5. Применение соединения, представленного следующей химической формулой (1), или экстракта растения семейства Liliaceae или его части смесью этилацетат/бутиловый спирт или смесью хлороформ/метиловый спирт, который содержит, по крайней мере, 0,001% по сухой массе соединения, для изготовления средства для ингибирования накопления висцерального жира

6. Способ ингибирования накопления висцерального жира, включающий введение соединения, представленного следующей химической формулой (1), или экстракта растения семейства Liliaceae или его части смесью этилацетат/бутиловый спирт или смесью хлороформ/метиловый спирт, который содержит, по крайней мере, 0,001% по сухой массе соединения, субъекту, у которого должно быть ингибировано накопление висцерального жира