СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОЗОВ В КИШЕЧНОМ ОТДЕЛЯЕМОМ (КАЛЕ) Российский патент 2009 года по МПК G01N33/48 G01N1/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к анализу биологических материалов, и может быть использовано в лабораториях практического здравоохрания для выявления больных микозом кишечника как с клинической симптоматикой, так и пациентов с асимптомным носительством в качестве дополнения к копрологическому исследованию.

Актуальность проблемы заявляемого изобретения состоит в том, что среди внутрибольничных инфекционных осложнений микозы занимают четвертое место по выявляемости у больных, в том числе онкологических. Значительный рост указанных осложнений в последнее десятилетие вызван расширением использования в практике агрессивного противоопухолевого лечения в виде больших доз противоопухолевых цитостатических препаратов, антибиотиков, стероидных гормонов. Микозы играют роль причинного и/или отягощяющего фактора у больных с аллергическими заболеваниями, с декомпенсированным сахарным диабетом. Пролиферация грибов в желудочно-кишечном тракте, особенно кандидоносительство, способствует развитию нозокомиальных грибковых инфекций у пациентов палат интенсивной терапии, онкогематологических больных, после трансплантации органов и полостных операций.

Известен способ выявления и идентификация грибов с помощью культурального метода (посев), который осуществляют в микробиологических лабораториях (Меньшиков В.В. «Лабораторные методы исследования в клинике», Москва, 1987 г.).

Известный способ обладает следующими недостатками:

- длительность проводимого анализа,

- проведение анализа в условиях специализированной лаборатории при участии специалистов высокой квалификации;

- предпосылкой для проведения анализа является наличие клинической картины предполагаемого поражения, что приводит к появлению запущенных форм при латентной и торпидной видах поражения кишечника.

Наиболее близким к заявляемому изобретению по совокупности признаков является способ выявления микозов в кишечном отделяемом путем микроскопии препаратов кала при исследовании копрограммы, включающий микроскопическое исследование биологического материала на наличие спор и мицелия грибов (Миронова И.И., Романова Л.А., Долгов В.В. «Общеклинические исследования», стр.109, Москва, 2005 г.). Принят за прототип. Патогномоничным критерием при использовании известного способа, принятого за прототип, является обнаружение нитей мицелия и спор гриба. Эта картина является убедительным аргументом выявления микоза. Однако использование в лабораторной практике способа-прототипа не позволяет достичь технических результатов заявляемого изобретения по той причине, что при микроскопии на фоне калового детрита обнаруживают остатки непереваренной белковой пищи - соединительную ткань, остатки нерасщепленного и расщепленного жира, капли жирных кислот и их солей, лейкоциты, слизь, яйца гельминтов. Все эти компоненты нередко имитируют нити мицелия и споры гриба, что приводит к ложноположительному заключению или не обнаружению интересующих включений при обильной картине кишечного отделяемого.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи повышения чувствительности и специфичности выявления микозов кишечника у больных и у лиц с бессимптомным носительством поражений кишечника микозом.

Использование в клинической практике заявляемого способа позволяет достичь нескольких технических и экономических результатов:

- повышение чувствительности и специфичности выявления микозов в кишечном отделяемом (кале),

- уменьшение продолжительности анализа выявления микозов,

- возможность осуществления анализа в рамках стандартной лабораторной диагностики.

Указанные технические и лечебные результаты при осуществлении изобретения достигаются за счет того, что также как в известном способе выявление микозов в кишечном отделяемом (кале) осуществляют путем микроскопического исследования препаратов кишечного отделяемого. Особенность заявляемого способа заключается в том, что дополнительно осуществляют гомогенизацию каловойэмульсии с равным количеством этилового спирта, после чего перемешивают на предметном стекле в течение не менее 40 с с равным количеством красителя, содержащего углеродный пигмент, и приготовляют мазковый препарат, который высушивают на воздухе и подвергают микроскопическому исследованию для выявления спор и мицелия грибов.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Общепринятым поводом для назначений исследования на микоз кишечника является выраженная картина дисбактериоза, при этом из поля зрения выпадают пациенты, имеющие асимптомные, торпидные формы течения болезни. Между тем длительное существование микотической инфекции приводит к интоксикации сенсибилизации организма больного, может быть причиной диссеминации грибов в различные органы и ткани.

Заявляемая методика выявления грибковой инфекции состоит в том, что проводят микроскопическое исследование кишечного отделяемого путем предварительной гомогенизации каловой эмульсии с равным количеством этилового спирта. Под воздействием этилового спирта происходит растворение большей части органических составляющих кала и частичное обесцвечивание препарата. К полученному гомогенному препарату добавляют равное количество красителя, содержащего углеродный пигмент (КУП) и тщательно перемешивают на предметном стекле. В качестве красителя используют, например, тушь, то есть краску, преимущественно содержащую сажу - дисперсный аморфный углеродный продукт неполного сгорания или термического разложения углеводородов. При этом наблюдается эффект равномерного расположения частиц аморфного углерода по всему препарату и по границе спор грибов и нитей мицелл. Споры и мицелий грибов приобретают вид белых округлых образований с ровными краями и длинных нитей на фоне окрашенного мазка.

Чувствительность предлагаемого метода составляет 90,3%, специфичность - 96,6%.

Способ осуществляют следующим образом.

Каловую эмульсию гомогенизируют с равным количеством (1:1) 96% этилового спирта, на предметном стекле размещают с помощью пастеровской пипетки часть полученной гомогенной массы и равный объем КУП, перемешивают капли не менее 40 секунд. Дальнейшее приготовление препарата осуществляют аналогично приготовлению мазка крови: путем высушивания на воздухе микроскопирования с иммерсией полученного мазка. При микроскопировании отчетливо наблюдаются округлые с ровными краями споры и нити мицелия грибов на фоне окрашенного мазка, что является убедительным аргументом наличия микоза.

Заявляемый способ исследования апробирован в клинико-диагностической лаборатории МНИОИ им. П.А.Герцена. Проведено сопоставление заявляемого способа с исследованием препаратов копрограмм у 30 пациентов, проходящих стационарное лечение в клинике МНИОИ им. П.А.Герцена. У 29 пациентов грибы были обнаружены только в препаратах, исследованных в соответствии с заявляемой методикой. У 1 пациента ложноположительное обнаружение спор грибов в копрограмме не подтвердилось ни в мазковом препарате, ни методом посева, что возможно при имитации мицелия гриба слизью. Все 30 проб контролировались методом посева. Из 29 пациентов данные мазка с тушью, давшие положительную информацию о наличии грибов, копрологически подтверждено только у 16, однако при посеве подтверждены 29 находок.

Пример выполнения.

Пациент Д. по поводу лимфомы проведены неоднократные курсы цитостатической противоопухолевой терапии. Для выявления грибковой инфекции провели гомогенизацию кишечного отделяемого с равным количеством (1:1) 96% этилового спирта, полученный гомогенат перенесли на предметное стекло, добавили равное количество красителя, содержащего углеродный пигмент (туши), тщательно перемешали полученную массу в течение 40 секунд, приготовили мазковый препарат, высушили на воздухе и подвергли микроскопическому исследованию. Обнаружены споры и мицелий гриба в виде округлых образований с ровными краями и длинных нитей на темном фоне окрашенного мазка. В препаратах копрограммы споры и мицелий не обнаружены, посев и мазок с тушью обнаружили наличие микоза кишечника.

Таким образом, заявляемый способ обнаружения микозов кишечника является простым, доступным, высокочувствительным, специфичным, дешевым методом практической лабораторной диагностики для своевременного выявления и проведения контроля за лечением заболевания. Способ отвечает критериям патентоспособности.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному методу исследования. Способ выявления микозов в кишечном отделяемом осуществляют путем микроскопического исследования препаратов кишечного отделяемого, при этом осуществляют гомогенизацию каловой эмульсии с равным количеством этилового спирта, перемешивают на предметном стекле в течение не менее 40 с с равным количеством красителя, содержащего углеродный пигмент, и приготовляют мазковый препарат, который высушивают на воздухе и подвергают микроскопическому исследованию для выявления спор и мицелия грибов. Способ может быть использован как дополнительный к копрологическому исследованию, для выявления больных микозом кишечника как с клинической симптоматикой, так и пациентов с асимптомным носительством.

Способ выявления микозов в кишечном отделяемом (кале), включающий микроскопическое исследование препаратов кишечного отделяемого, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют гомогенизацию каловой эмульсии с равным количеством этилового спирта, после чего перемешивают на предметном стекле в течение не менее 40 с с равным количеством красителя, содержащего углеродный пигмент, и приготовляют мазковый препарат, который высушивают на воздухе и подвергают микроскопическому исследованию для выявления спор и мицелия грибов.