СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПАРАЗИТАРНОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, точнее к диагностике паразитарных заболеваний на основе анализа крови, и может применяться в клинической практике.

Несмотря на высокую чувствительность и специфичность некоторых методов диагностики, их диагностическая ценность ограничена. Ко многим возбудителям еще не разработаны специфические тест-системы для их определения. Например, антитела к белкам аскарид можно обнаружить через 5-10 дней после заражения, а через 3 месяца они уже не выявляются. Многие персистентные микроорганизмы в крови человека имеют белок, подобный белку человека, и красители крови при стандартном окрашивании, которое применяется в медицине, их не выделяют, а формы и размеры этих микроорганизмов сопоставимы с эритроцитами, и это не позволяет при стандартном увеличении и разрешении отличить одних от других.

Известны способы диагностики паразитарного заболевания, включающие поиск и распознавание эндопаразитов и персистентных микроорганизмов - возбудителей инфекционных и паразитарных болезней при наблюдении через микроскоп нативного мазка крови пациента, патент РФ №2123682 от 20.12.1998 и патент РФ №2218565 от 10.12.2003.

Недостатками способа, описанного в патенте РФ №2123682 от 20.12.1998, является необходимость предварительной подготовки (окрашивании) крови, предназначенной для анализа, и невозможность отличить на фоне эритроцитов схожие с ними по размерам персистентные микроорганизмы.

Недостатками способа, описанного в патенте РФ №2218565 от 10.12.2003, также является необходимость предварительной (после ее забора, но до анализа) подготовки крови (кровь центрифугируют). Кроме того, любая обработка крови после ее забора приводит к увеличению интервала времени по проведению анализа и увеличивает риск неконтролируемого загрязнения крови и искажения результатов анализа.

Техническими результатами изобретения являются повышение точности диагностики кровепаразитарных заболеваний и сокращение времени диагностики.

Указанные технические результаты достигаются в способе диагностики паразитарного заболевания, включающего поиск и распознавание эндопаразитов и персистентных микроорганизмов - возбудителей инфекционных и паразитарных болезней при наблюдении через микроскоп нативного мазка крови пациента, при этом до забора крови пациент принимает антиоксидантный препарат, что приводит к увеличению концентрации эндопаразитов и персистентных микроорганизмов в крови через 20-40 минут после приема им антиоксидантного препарата, а наблюдают мазок нативной крови непосредственно после ее забора через микроскоп с увеличением более 1000х, позволяющим обнаружить и распознать паразитоформы.

Именно благодаря значительному повышению концентрации микроорганизмов в крови становится эффективным использование микроскопа с большим увеличением, позволяющим идентифицировать паразитоформы. Известно, что угол поля зрения оптической системы обратно пропорционален угловому увеличению. Следовательно, применение микроскопа с большим увеличением приводит к сужению поля зрения объектива микроскопа и, соответственно, к уменьшению вероятности обнаружения микроорганизмов. Поэтому так важно повысить концентрацию микроорганизмов в крови. Кроме того, повышение концентрации микроорганизмов в крови до ее забора позволяет отказаться от ухищрений по повышению концентрации микроорганизмов после забора крови. Это, в свою очередь, обеспечивает возможность исследования мазка крови сразу (непосредственно) после ее забора, что исключает возможность какого-либо загрязнения крови.

Дополнительно, до приема пациентом антиоксидантного препарата или до истечения 20 минут после его приема, могут осуществлять забор крови у пациента и наблюдать мазок нативной крови через микроскоп с увеличением от 1000х до 1500х, а результаты поиска и распознавания эндопаразитов и персистентных микроорганизмов сравнивать с результатами, полученными при наблюдении мазка нативной крови, забор которой осуществили через 20-40 минут после приема пациентом антиоксидантного препарата.

Дополнительно можно осуществлять видеозапись изображений нативного мазка крови, полученных через микроскоп.

Изображения наблюдаемого через микроскоп нативного мазка крови можно отображать на телевизионный экран.

Можно наблюдать мазок нативной крови непосредственно после ее забора через микроскоп с увеличением более 1400х.

В качестве антиоксидантного препарата можно использовать Микрогидрин.

В качестве антиоксидантного препарата можно использовать Гидросел или Алка-Майн.

Диагностика в соответствии с заявленным изобретением проводилась у 3000 пациентов в течение 3-х лет. При этом использовался микроскоп NICON ECLIPSE Е200 и методы наблюдения в светлом и темном полях.

Для диагностики использовалась нативная периферическая кровь. Диагностика проводилась, как правило, в два этапа. На первом этапе проводился первичный (предварительный) забор крови, которая и исследуется в нативном виде.

В отличие от общепринятых лабораторных методов исследования мазка крови, в заявленном способе мазок не окрашивается красителями и не фиксируется. Взятая капля крови накрывается покровным стеклом для получения монослойного мазка. В центр проекции мазка крови на покровное стекло наносится 1 капля имерсионного масла для более полного соприкосновения с линзой объектива и улучшения оптической способности микроскопа.

Микроскоп NICON ECLIPSE Е200 соединялся через аналоговую видеокамеру с монитором компьютера или телевизором, что обеспечивало параллельное наблюдение изображения мазка крови в окуляре микроскопа (увеличение от 1000х до 1500х) и на экране монитора (линейное увеличение равно 3000). Разрешающая способность микроскопа обеспечивает четкость видения морфологического строения всех присутствующих в крови паразитоформ. А вывод изображения на монитор через видеоблок позволил довести увеличение изображения на экране монитора до 3000. Для сравнения в общепринятой лабораторной практике при исследованиях мазков крови используется увеличение микроскопа 400х-900х.

Эти технические возможности позволили увидеть в мазке крови наличие не только форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов), но и автономные от клеток крови неустановленные ранее живые объекты - паразитоформы. Распознавание паразитоформ, возможное при достаточно высоком увеличении микроскопа (исследования проводились, как правило, с использованием увеличения 1500х), позволяет диагностировать паразитарное заболевание.

Проведенная идентификационно - исследовательская работа по дифференцировке морфологических форм выявленных автономных от клеток крови объектов (паразитоформ) в нативном мазке периферической крови, позволила идентифицировать некоторые наиболее часто встречающиеся паразитоформы в плазме крови. Обнаружены и выявлены морфологические отличия личиночных миграционных стадий гельминтов представителей всех трех систематических групп гельминтов (нематодозов, цестодозов, трематодозов), редкие местные и завозные личиночные гельминтозы, протозоозы (споровики, жгутиконосцы, +), различные виды грибов (дрожжеподобные, плесневые, +), их мицелии и спорообразования, бактериальную инфекцию различных форм и видов (хламидии, уреаплазма, микоплазма, L-образные бактерии, палочковидные бактерии и т.д.)

В результате исследования групп пациентов с хроническими и онкологическими заболеваниями желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистыми и кожными заболеваниями было сделано следующее заключение о преимущественной локализации поражения микро- и макропаразитозами в следующих органах и системах (см. таблицу 1):

Таблица 1   Кожа Органы дыхания Мышцы ЦНС Мочеполовые Глаз Амеба дизентерийная   +   +   Криптоспоридий   +         Анкилостома +           Аскарида +           Описторх +           Парагоним +   +   +   Стронгилоид +   +   +   Трихинелла +     +   + Токсокара +       + + Фасциола +   +       Цистицерк   + +   + + Шистосомы + +     +   Острица   + +       Эхинококки + +     + +

В ЖКТ обитают более 70% из числа всех обнаруживаемых комменсалов и паразитов.

При диагностике использовалась система видеозаписи, позволяющая документировать наблюдаемое изображение мазка крови и значительно повысить качество диагностики, а в случае необходимости привлечь высококвалифицированных экспертов для экспертного заключения по видеозаписи.

На втором этапе диагностики испытуемый принимал антиоксидантный препарат, в частности, изготовленный на основе микрокластерной технологии (антиоксиданты - Микрогидрин, Гидросел, Ацидофилюс и др.) и, с некоторой экспозицией, как правило, 20-40 минут, осуществлялся повторный забор периферической крови и проводилось исследование мазка крови, которое также записывалось на видеокассету. В результате приема биоактивного препарата происходит изменение физико-химических свойств плазмы крови и форменных элементов, что приводит к значительному повышению (от 3-х раз до 35 раз) концентрации микроорганизмов (выход из депо тканей органов) в нативном мазке периферической крови.

Наиболее важным является второй этап диагностики, который может быть и единственным. Однако сравнение результатов первого и второго этапов диагностики позволяет сделать заключение о стадии паразитарного заболевания и степени угрозы здоровью пациента.

Эффективность использования антиоксидантов Микрогидрин, Гидросел, Ацидофилюс и др. особенно проявлялась при диагностике паразитарного заболевания у 20% пациентов, когда на первом этапе диагностики паразитоформы не обнаруживались, а на втором этапе выявлялось наличие сразу нескольких видов паразитоформ.

Указанные антиоксиданты являются модификаторами воды (снижают величину ее поверхностного натяжения) и способствуют вымыванию паразитоформ из депо тканей.

Благодаря предложенному методу диагностики найдены и подтверждены причинно-следственные факторы биохимического сдвига гомеостаза для развития гомотоксикологической этапности в развитии хронических и онкологических заболеваний, а также изучены условия прерывания патологических звеньев выявленной этапности и прекращения стадийности прогрессирования данного заболевания.

Достоверно показано, что применение заявленного способа диагностики и использование данных, полученных на его базе для проведения комплексных поэтапных подходов в восстановительной терапии, обеспечивает восстановление гомеостаза, нормализацию всех биологических параметров крови и всего организма, приводит к освобождению человека от паразитарной эндофауны и флоры персистентных микроорганизмов и макропаразитов, что, в свою очередь, ведет к стойкому состоянию ремиссии заболеваний и поэтапному выздоровлению больных.

Ниже в таблице 2 показана сравнительная характеристика обнаружения паразитов методами иммуноферментного анализа (ИФА), бактериологическим методом и заявленным способом сканирования нативной периферической крови.

Таблица 2 Название возбудителя Гемосканирование нативной периферической крови Бактериологические исследования мазков крови по Грамму, Р.Гимзе ИФА Хламидиоз 123 - 122 Микоплазмоз 170 - 87 Уреаплазмоз 41 - 15 Лямблиоз 163 - 32 Токсоплазмоз 121 - 130 Трихомонадоз 362 - 41 Токсокароз 82 - 12 Стронгилоидоз 87 - - Анкилостомидоз 238 - - Др. нематоды 122 - - Описторхоз 48 - 21 Микозы 362 - - Внутриклеточные поражения клеток крови: грибковые, бактериальные, гельминтные 178    

Пример 1

Онкологический больной К., 32 лет, поступивший на диагностическое обследование в отделение восстановительной медицины 18.12.2006 г. в тяжелом состоянии, жалобы на общую слабость, отсутствие аппетита, потеря интереса к жизни, похудание на 27 кг с 2002 года, периодические тошноту и рвоту. Больной с трудом передвигается, состояние кахексии. Из анамнеза: в 2003 г.в НИИ Онкологии г.Москва поставлен диагноз: Cancer rectum T2N0M0. От операции и химиотерапии отказался. Продолжал работать электриком до 2006 г. В марте пациент поступает в Городскую больницу №62 по поводу острого парапроктита. Выведена колостома.

Из анамнеза vitae: проживает в деревянном доме в подмосковной деревне вместе с женой, матерью и бабушкой. Имеется хозяйство из домашних животных. У бабушки по материнской линии и у матери был поставлен диагноз: рак сигмовидной кишки, секторальная резекция сигмовидной кишки - у обоих. В настоящее время мать чувствует себя удовлетворительно, бабушки нет в живых. В мае 2005 г. жена больного К. забеременела от него и на 29 неделе беременности по причине внутриутробной смерти ребенка произведено прерывание беременности, у плода обнаружены врожденные пороки развития.

За 30 минут до исследования крови методом сканирования на микроскопе NICON ECLIPCE Е200 в светлом и темном полях до его проведения пациент принял антиоксидантные препараты нанокластерного ряда - водные растворы:

Микрогидрин 1 капсула на 200 мл воды, Алка-Майн 1 порошок на 200 мл воды, Гидросел - по 10 капель раствора в каждый стакан с антиоксидантами. Через 30 мин была взята периферическая кровь и на экране монитора визуализировалась следующая картина.

В крови выявилось: выраженная железодефицитная анемия, пойкилоцитоз, эхиноцитоз, 3 ст. токсичности плазмы (споры грибов, бактериемия, фаговые и водорослевые формы), внутриклеточное поражение эритроцитов (стрептококковое и грибковое инфицирование) - в 1 п/зр. 15-25 инфицированных эритроцитов, эозинофилия, иммунодепрессия 3 ст., множественные цисты лямблий, несовершенные хищные грибы в стадиях агрессивного захвата (выбрасывания ловчих колец) и размножения, симбионтное тканеобразование диатомовой водоросли и несовершенных хищных грибов в виде полупрозрачных белесых неравномерно агрегированных тканей, генерализованное распространение миграционных личиночных форм нематод (аскаридоз, анкилостомидоз, токсокароз и др. формы редкой невыясненной морфологии) - в каждом поле зрения 3-5 паразитоформ, трематод (шистосоматоз и др. формы редких сосальщиков) - 7-12 паразитоформ в 1 мазке, множественные цистные и вегетативные жгутиковые формы трихомонад в каждом поле зрения - 15-25 форм.

В каждом поле зрения 15-25 паразитоформ и 15-25 поврежденных эритроцитов (N количественного состава эритроцитов - 35-45 в каждом поле зрения).

После проведенных курсов дегельминтизации у больного происходил выход гельминтов различных видов и после этого объективное улучшение общего состояния и показателей лабораторного исследования крови. Следственно, у остальных членов семьи, ввиду одинаковых клинических диагнозов всей семьи - рака толстого кишечника - можно интерпретировать этиологию заболевания как инфекционно-паразитарную и предположить гематоплацентарное заражение гельминтозом, бактериально-протозойной и микроплазматической инфекцией, переданное зараженной бабушкой матери больного, а матерью сыну.

Пример 2

Онкологический больной М., 45 лет, поступивший на диагностическое обследование в тяжелом состоянии, жалобы на общую слабость, периодические тошноту и рвоту, состояние кахексии.

Исследование крови методом сканирования на микроскопе NICON ECLIPCE Е200 в светлом и темном полях проводится натощак. 1 капля периферической крови из пальца помещается на предметное стекло. Взятая капля крови накрывается покровным стеклом для получения монослойного мазка. В центр проекции мазка крови на покровное стекло наносится 1 капля имерссионного масла для более полного соприкосновения с линзой объектива и улучшения оптической разрешающей способности микроскопа.

При сканировании нативной периферической крови пациента М. обнаружено:

1 исследование:

Выраженная железодефицитная анемия, пойкилоцитоз, эхиноцитоз, 2 ст.токсичности плазмы (споры грибов, бактериемия, фаговые и водорослевые формы), внутриклеточное поражение эритроцитов (стрептококковое и грибковое инфицирование) - в 1 п/зр. 5-10 инфицированных эритроцитов, эозинофилия, иммунодепрессия 3 ст., несовершенные хищные грибы в стадиях агрессивного захвата (выбрасывания ловчих колец) и размножения, единичные споры диатомовой водоросли, миграционные личиночные формы нематод (аскаридоз, анкилостомидоз) - 2-3 паразитоформы на 10-15 полей зрения, трематод (шистосоматоз и др. формы редких гельминтов сосальщиков) - 3-6 паразитоформ в 1 монослойном мазке, жгутиковые формы трихомонад - 5-6 в каждом поле зрения.

В каждом поле зрения 5-10 паразитоформ и 5-10 поврежденных эритроцитов (N количественного состава эритроцитов 35-45 в каждом поле зрения).

2 исследование:

За 30 мин до его проведения пациент М. принял антиоксидантные препараты нанокластерного (микрокластерного) ряда, а именно водные растворы: Микрогидрин 1 капсула на 200 мл воды, Алка-Майн 1 порошок на 200 мл воды, Гидросел - по 10 капель раствора в каждый стакан с антиоксидантами. Через 30 мин была повторно взята периферическая кровь и на экране монитора визуализировалась следующая картина.

На фоне улучшения общей микроциркуляторной гемодинамики в крови выявилось: выраженная железодефицитная анемия, пойкилоцитоз, эхиноцитоз, 3 ст. токсичности плазмы (споры грибов, бактериемия, фаговые и водорослевые формы), внутриклеточное поражение эритроцитов (стрептококковое и грибковое инфицирование) - в 1 п/зр. 15-25 инфицированных эритроцитов, эозинофилия, иммунодепрессия 3 ст., множественные цисты лямблий, несовершенные хищные грибы в стадиях агрессивного захвата (выбрасывания ловчих колец) и размножения, симбионтное тканеобразование диатомовой водоросли и несовершенных хищных грибов в виде полупрозрачных белесых неравномерно агрегированных тканей, генерализованное распространение миграционных личиночных форм нематод (аскаридоз, анкилостомидоз, токсокароз и др. формы редкой невыясненной морфологии) - в каждом поле зрения 3-5 паразитоформ, трематод (шистосоматоз и др. формы редких сосальщиков) 7-12 паразитоформ в 1 мазке, множественные цистные и вегетативные жгутиковые формы трихомонад в каждом поле зрения 15-25 форм.

В каждом поле зрения 15-30 паразитоформ и 15-25 поврежденных эритроцитов (N количественного состава эритроцитов 35-45 в каждом поле зрения).

После циклового поэтапного терапевтически-реабилитационного курса больной почувствовал объективное улучшение общего состояния.

На контрольном сканировании через 2 месяца лечения параметры чистоты плазмы улучшились (в 1 п/зр. инфицированных эритроцитов стало 3-6, форменных элементов крови относительно количества паразитоформ стало в 2 раза больше (5-10 паразитоформ и 25-35 Эр), количество сегментоядерных нейтрофилов возросло в 1,5 раза по сравнению с первичным обследованием.

На представленных чертежах (фиг.1) - периферическая нативная кровь онкологического больного М., 45 лет, при сканировании на микроскопе Nicon Eclipse Е200 и снимки растровой микроскопии (фиг.2, 3).

На фиг.1 представлены множественные личиночные формы гельминтов (нематод, цестод и трематод), грибы различных видов в периоды размножения, железодефицитная анемия.

На фиг.2 представлен снимок растровой микроскопии симбиотической ткани, при построении которой только частично используются метамеры. Характерно для хронических заболеваний последних стадий.

На фиг.3 представлен снимок растровой микроскопии различных форм тканей из метамер. Характерно для онкозаболевания второй и третьей стадий.

Очевидно, что наиболее важным является второй этап диагностики, который может быть и единственным. Однако сравнение результатов первого и второго этапов диагностики позволяет сделать заключение о стадии паразитарного заболевания и степени угрозы здоровью пациента.

Данные случаи наглядно показывают наличие инфекционно-паразитарной преемственности поколений и проводят параллель между паразитозами и развитием онкологических заболеваний.

Исследовательская статистика свидетельствует, что у каждого человека есть носительство гельминтов единичных видов и смешанной гельминтной инвазии, простейших, грибов, патогенных бактерий и персистентных микроорганизмов. Только в разном титровом количестве и качестве. И при возникновении благоприятных для них условий, которые автор описывала выше, происходит нарушение баланса биоценозов в организме человека и массовое их размножение. Включаются гистопатоморфологические звенья патогенезов хронических и онкологических заболеваний.

Кровь - это зеркало жизни и зеркало болезней человека. После водных антиоксидантов за счет выхода "спрятанных" в депо органов ассоциативных микробиоценозов, мы видим их количественное и видовое повышение в каждом поле зрения исследуемых полей крови (их за 1 исследование отсматривается 700-900 полей на 19-дюймовом экране монитора).

Концентрация паразитозов после водных антиоксидантов возрастает от 3-35 раз во всех полях зрения.

Изобретение относится к области медицины, точнее к диагностике паразитарных заболеваний на основе анализа крови, и может применяться в клинической практике. Заявлен способ диагностики паразитарного заболевания, включающий поиск и распознавание эндопаразитов и персистентных микроорганизмов - возбудителей инфекционных и паразитарных болезней при наблюдении через микроскоп нативного мазка крови пациента, отличающийся тем, что за 20-30 минут до забора крови пациент принимает антиоксидантный препарат, а наблюдают мазок нативной крови через микроскоп с увеличением более 1000х. Заявленное изобретение обеспечивает повышение точности диагностики кровепаразитарных заболеваний и сокращение времени диагностики. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл.

1. Способ диагностики паразитарного заболевания, включающий поиск и распознавание эндопаразитов и персистентных микроорганизмов - возбудителей инфекционных и паразитарных болезней при наблюдении через микроскоп нативного мазка крови пациента, отличающийся тем, что за 20-30 мин до забора крови пациент принимает антиоксидантный препарат, а наблюдают мазок нативной крови через микроскоп с увеличением более 1000х.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно до приема пациентом антиоксидантного препарата осуществляют предварительный забор крови у пациента и наблюдают мазок нативной крови через микроскоп с увеличением более 1000х, а результаты поиска и распознавания эндопаразитов и персистентных микроорганизмов сравнивают с результатами, полученными при наблюдении мазка нативной крови, забор которой осуществили через 20 - 40 мин после приема пациентом антиоксидантного препарата.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют видеозапись изображений нативного мазка крови, полученных через микроскоп.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что изображения наблюдаемого через микроскоп нативного мазка крови отображают на телевизионном экране.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что наблюдают мазок нативной крови непосредственно после ее забора через микроскоп с увеличением более 1400х.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве антиоксидантного препарата используют Микрогидрин.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве антиоксидантного препарата используют Гидросел.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве антиоксидантного препарата используют Алка-Майн.