СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРОВИ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ ИЗ ГЕМОСПОРИДИЙ Российский патент 2010 года по МПК A61K39/02 

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной протозоологии, в частности к получению крови для изготовления антигенов из гемоспоридий.

Бабезиоз (пироплазмоз) собак - природно-очаговое протозойное трансмиссивное неконтагиозное кровепаразитарное заболевание, вызываемое простейшим паразитом Babesia canis. Болезнь протекает сверхостро (молниеносно), остро и хронически. Поражение организма собаки Babesia canis вызывает лихорадку, резкое повышение температуры тела до 41-42°С, удерживающееся в течение 2-3 суток, с последующим быстрым падением ее до и ниже нормы. В некоторых очень редких случаях температурная кривая менее правильная; температура подвергается большим колебаниям, сохраняется на высоком уровне, после чего идет медленное и постепенное ее снижение. У совсем молодых собак, у которых смерть наступает очень быстро, повышение температуры в начале заболевания может отсутствовать.

У собак отмечаются отсутствие аппетита, депрессия, угнетенное состояние, слабый нитевидный пульс (до 120-160 ударов в минуту), в дальнейшем становится аритмичным. Сердечный толчок усилен. Дыхание учащенное (до 36-48 в минуту) и затрудненное, у молодых собак часто со стоном. При пальпации левой брюшной стенки (за реберной дугой) обнаруживают увеличенную селезенку. Слизистые оболочки ротовой полости и конъюнктива анемичны, желтушны. Интенсивное разрушение эритроцитов сопровождается нефритом. Походка становится затрудненной, появляется гемоглобинурия. Болезнь продолжается от 2 до 5 суток, реже 10-11 суток, часто со смертельным исходом.

По данным многих авторов, на долю данного заболевания приходится от 14 до 25% от общего количества собак, которым были оказаны ветеринарные услуги. Согласно статистическим данным в течение последних 10 лет заболеваемость собак бабезиозом возросла в несколько раз [3].

Для диагностики бабезиоза собак широко применяют серологические реакции: реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др., постановка этих реакций предполагает использование антигенов Babesia canis, получаемых из крови зараженных животных.

Существует способ, согласно которому больное животное спленэктомируют для обострения патологического процесса. На пике паразитемии животное тотально обескровливают. Полученную кровь консервируют и используют для изготовления антигенов. В качестве консерванта крови используют глюгицир [1].

Известен также способ, согласно которому для получения крови для изготовления антигена животное спленэктомируют, затем заражают и на пике паразитемии, при поражении до 50% эритроцитов, тотально обескровливают. Полученную кровь консервируют цитратом натрия и используют для получения антигена. Этот способ является прототипом предложенного [2].

В задачи исследований входило - получить больший объем полноценной крови, пригодной для получения высокоактивных бабезийных антигенов, от одного животного.

Предложенный способ заключается в следующем. У собаки массой 15-20 кг объем крови составляет примерно 2-2,5 л. Животное спленэктомируют. Через несколько дней после операции у животного берут 150 мл венозной крови, которую консервируют глюгициром в соотношении 1:4. Потерю крови возмещают введением изотонических растворов.

Через 3-4 дня у животного берут 300 мл крови, вместо которой вводят 150 мл полученной ранее крови и 150 мл изотонического раствора. Далее через 3-4 дня берут 500 мл крови, которые заменяют 300 мл аутокрови и 200 мл изотонического раствора. Затем через 3-4 дня берут 700 мл крови, которые заменяют 500 мл аутокрови и 200 мл изотонического раствора. И через 3-4 дня берут 1000 мл крови, которые заменяют 700 мл аутокрови и 300 мл изотонического раствора. Полученную кровь делят на две равные части.

Затем животное заражают возбудителем Babesia canis, подсчет паразитемии проводят путем микроскопии мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимза. При паразитемии более 50% у животного берут 800-900 мл крови, которую восполняют 500 мл заготовленной раннее крови (или половину от заготовленной крови) и 300-400 мл изотонического раствора. Отмечается снижение паразитемии. При повторном ее нарастании процедуру повторяют аналогично первому взятию крови. На третьем пике паразитемии животное обескровливают. Полученную на всех трех этапах кровь консервируют глюгициром и используют для получения антигена.

Длительность взятия и объем крови может изменяться в зависимости от размеров животного. Конкретные примеры отражены в таблице.

Технико-экономические обоснования. Предложенный способ позволяет получить больший объем крови от одного животного, несмотря на более длительные сроки выполнения по сравнению с прежним. Вливание неинвазированной крови и изотонических растворов оказывает положительное действие на организм больной собаки.

Предложенный способ может быть использован при получении крови для приготовления антигенов и из других видов бабезий, поражающих других животных.

Предложенный способ апробирован с положительным результатом в ветеринарных клиниках «Animal Park» и «Зоосфера» в 2007-2008 гг.

Данный способ найдет применение при изготовлении бабезийных антигенов в научно-исследовательских институтах и ветеринарных производственных лабораториях и позволит усилить меры борьбы с кровепаразитарными заболеваниями.

Источники информации

1. Автореферат дисс.… кандидата ветеринарных наук: Семенко О.В. Удосконалення Meroia зажитевоi дiагностики бабезioзу собак, Киiв, 2007 - 21 с.

2. Методические рекомендации по изучению и разработке мер борьбы с протозойными болезнями животных, Москва, ВАСХНИЛ, 1984 - с.7. (Прототип)

3. Автореферат дисс.… кандидата ветеринарных наук: Кошелева М.И. Бабезиоз собак в условиях Московской области, Москва, 2006 - 3 с.

Таблица Объем крови, получаемый от животных с разной массой, в сравнении с прототипом Масса животного, кг Прототип, мл Предлагаемый способ, мл 10 500-600 1000-1400 20 1000-1500 2500-3000 30 1500-2000 3000-3500

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает спленэктомию животного, заражение кровепаразитами, обескровливание на пике инвазии, консервирование крови и использование ее для изготовления антигенов. При этом перед заражением проводят накопление аутокрови путем пятикратного взятия и переливания аутокрови в количестве 150, 300, 500, 700 и 1000 мл соответственно совместно с изотоническим раствором с интервалом 3-4 дня, после чего животное заражают Babesia canis. На пике паразитемии, при поражении 30-50% эритроцитов, берут двукратно с интервалом 3-4 дня кровь по 800-900 мл с последующим вливанием полученной ранее аутокрови. После чего на третьем пике паразитемии животное тотально обескровливают, а полученную на трех этапах кровь используют для изготовления антигена. Способ позволяет получить больший объем крови от одного животного. 1 табл.

Способ получения крови для изготовления антигенов из гемоспоридий Babesia canis, включающий спленэктомию животного, заражение кровепаразитами, обескровливание на пике инвазии, консервирование крови и использование ее для изготовления антигенов, отличающийся тем, что перед заражением проводят накопление аутокрови путем пятикратного взятия и переливания аутокрови в количестве 150, 300, 500, 700 и 1000 мл соответственно совместно с изотоническим раствором с интервалом 3-4 дня, после чего животное заражают Babesia canis и на пике паразитемии при поражении 30-50% эритроцитов берут двукратно с интервалом 3-4 дня кровь по 800-900 мл с последующим вливанием полученной ранее аутокрови, после чего на третьем пике паразитемии животное тотально обескровливают, а полученную на трех этапах кровь используют для изготовления антигена.