СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ "СОЗРЕВАНИЯ" ШЕЙКИ МАТКИ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования «созревания» шейки матки к 40 неделям гестации при доношенной беременности.

Актуальность предлагаемого способа определяется тем, что ключевой проблемой акушерства является благоприятный исход родов, который во многом зависит от характера, качества и эффективности родовой деятельности. Отсутствие биологической готовности организма к родам неблагоприятно сказывается на развитии регулярной родовой деятельности и течение родов. Большое значение в конце беременности имеет состояние шейки матки (Н.Д.Гаспарян, Е.Н.Карева. Мифепристон в подготовке и индукции родов.//Акушерство и гинекология. - 2008. - №3. - С.50-53). Преждевременный разрыв плодных оболочек (75,6%), слабость родовой деятельности (28,1%), высокие показатели перинатальной заболеваемости и смертности (31,8%) осложняют роды у женщин с «незрелой» шейкой матки (Е.А.Чернуха, Э.М.Алиева. Локальное применение простагландинов для подготовки шейки матки и индуцирования родов у первобеременных.//Акушерство и гинекология. - 1996. - №3. - С.7-8).

В связи с этим особую актуальность представляет разработка прогностических критериев «созревания» шейки матки, которые помогли бы врачу своевременно разработать тактику подготовки беременной женщины перед родами.

Ранее был предложен метод определения биологической «зрелости» шейки матки по измерению сопротивления шейки матки на переменном токе, при этом измеряют активную составляющую удельного импеданса шейки матки по четырехэлектродной схеме при величине зондирующего тока 10^-4 А на частоте 1000 Гц и при величине удельного сопротивления в интервале 1,5-2,1 Ом и определяют биологическую «зрелость» шейки матки к родам (патент №2178265. Способ определения биологической «зрелости» шейки матки перед родами./А.В.Ефремов, P.P.Ибрагимов //Изобретения. Полезные модели. - 2002. - №2, Ч.2. - С.178-179).

Однако:

- данный способ позволяет судить лишь о готовности организма беременной к родам и может быть использован непосредственно перед родами, способ не позволяет прогнозировать процесс «созревания»;

- отсутствуют данные о точности способа;

- для выполнения способа требуется обучение специалистов.

Известен способ прогнозирования «созревания» шейки матки и времени наступления родов по одновременному определению в цервиковагинальном секрете содержания IL-6, IL-8, хорионического гонадотропина и длины шейки матки и величины раскрытия внутреннего зева с помощью ультразвукового исследования трансвагинальным датчиком, при этом при высоких показателях IL-6, IL-8, хорионического гонадотропина и показателях длины шейки матки менее или равных 30 мм прогнозируют «созревание» шейки матки и наступление родов в течение 7 дней (Jian L., Mu X, Wu W, Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. Comparison study on transvaginal ultrasonographic measurement and cytokine in prediction of the cervical ripening and the onset time of term labor, 2002 Dec.; 37(12):708-11).

Способ имеет ряд недостатков:

1. Определение IL-6, IL-8, хорионического гонадотропина в цервикальной слизи является дорогостоящим и требует больших временных и трудозатрат.

2. Определение цитокинов и хорионического гонадотропина обычно проводится методом ИФА, который имеет плохую воспроизводимость.

3. Точность прогноза достигается при одновременном проведении ультразвукового обследования и изучения концентрации в цервикальной слизи цитокинов, что затрудняет интерпретацию результатов.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ определения готовности организма к родам путем определения в периферической крови содержания Тγ-лимфоцитов. При их снижении относительно нормы на 20-30% определяют готовность организма к родам через 9-14 дней, при снижении на 50-80% определяют готовность к родам через сутки, а при отсутствии снижения определяют перенашивание беременности более 2 недель (патент №1770905. Способ определения готовности организма к родам./Н.Ю.Сотникова, Л.Б.Брагина, Л.А.Бабакова, Э.Г.Скрябина, А.В.Кудряшова (Россия). //Изобретения. - 1992. - №39. - С.159). Данный способ выбран нами в качестве прототипа, т.к. «зрелая» шейка матки является одним из показателей готовности организма к родам.

Однако этот способ имеет ряд недостатков:

1. Метод розеткообразования в настоящее время является морально устаревшим и не используется.

2. В настоящее время отсутствуют стандартизованные реактивы, необходимые для выполнения метода.

3. Проведение методики требует больших временных затрат (6 ч 30 мин).

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является прогнозирование «созревания» шейки матки к 40 неделям гестации по уровню относительного содержания CD49e позитивных нейтрофилов в периферической венозной крови беременных женщин в 38-39 недель и при значении этого показателя, равном 24,6% или более, прогнозируют «созревание» шейки с точностью 82%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать «созревание» шейки матки по определению относительного содержания уровня CD49e+ нейтрофилов в периферической крови беременных женщин.

Ранее было показано, что уровень CD49e+лимфоцитов и макрофагов снижен в эндометриальной ткани пациенток с наружным генитальным эндометриозом (Д.В.Посисеев. Иммунные механизмы инвазивности эндометриальных клеток при эндометриозе: автореф. дис…канд. биол.наук. М., 2006. - 22 с). Кроме того, есть данные об увеличении уровня CD49e лейкоцитов при развитии сепсиса (Brown Kenneth Alun, Lewis Sion Marc, патент GB 20060001959 20060131, Sepsis test) и у больных с развившимся острым миелоидным лейкозом (Е.Ю.Садовникова, Д.А.Свинарева, Е.Н.Паровичникова, Е.Л.Семикина, Е.А.Копыльцова, Н.А.Торубарова, В.М.Белкин, В.Г.Савченко. Адгезивные свойства и экспрессия интегринов клетками больных острыми миелойдными лейкозами, стимулированными в культуре ионофором для ионов кальция.// Цитология. - 2004. - Т.46, №4. - С.337-345).

Для прогнозирования «созревания» шейки матки этот показатель ранее не применяли. CD49e молекулы относятся к классу β1- или VLA+интегринов и являются рецепторами к фибронектину. Эти молекулы опосредуют адгезию клеток к фибронектину, который является одним из основных компонентов экстрацеллюлярного матрикса (М.А.Пальцев, А.А.Иванов. Межклеточные взаимодействия. - М.: Медицина, 1995. - 224 с).

Известно, что в конце гестации усиливается инфильтрация тканей шейки матки нейтрофилами, которые играют большую роль в локальных процессах «созревания» шейки матки. По-видимому, увеличение экспрессии рецепторов к фибронектину на поверхности нейтрофилов может свидетельствовать об усилении готовности взаимодействия нейтрофилов с компонентами межклеточного матрикса, что может определять их полноценное участие в локальных процессах ремоделирования тканей шейки матки, приводящего к «созреванию» шейки матки перед родами.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1. К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию нейтрофилов стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (Boum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow// Scand. J. Clin. Invest. - 1968. - V.21. - N97. - P.77.).

2. Суспензию нейтрофилов дважды отмывают физраствором, доводят концентрацию клеток до 1×10⁶ кл/мл. К 0,1 мл полученной суспензии одновременно добавляют 5 мкл моноклональных антител анти-human CD49e, коньюгированных с фикоэритрином (BD Bioscience Pharmingen, США). Клетки инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте, отмывают в 1 мл физраствора, и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix™ (BD Biosciences, Belgium).

3. Определяют относительное (процентное) количество CD49e+клеток в нейтрофильном гейте на проточном цитометре.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью 82% прогнозировать созревание шейки матки.

Отличительными признаками способа являются: установлен прогностический параметр относительного содержания CD49e+нейтрофилов в сроке гестации 38-39 недель, при значении которого 24,6% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки к 40 неделям гестации, а при значении менее 24,6% - отсутствие «созревания» шейки матки после проведения традиционной медикаментозной подготовки к родам.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1.

Беременная Ч., 25 лет, первобеременная, первородящая. Беременность протекала без осложнений. Клинический диагноз при поступлении на дородовую госпитализацию: Беременность 38-39 недель, головное предлежание плода. Зоб I, эутиреоз.

При влагалищном исследовании шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая».

Произведено определение в периферической крови относительного содержания CD49e позитивных нейтрофилов. Полученный результат: 57,3%, что указывало на «созревание» шейки матки к 40 неделям.

Проведен курс традиционной медикаментозной подготовки к родам. При влагалищном исследовании в 40 недель гестации шейка матки оценена по шкале Бишопа как «зрелая». Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Роды произошли в срок 40 недель, без осложнений, через естественные родовые пути.

Пример 2.

Беременная Т., 19 лет, первобеременная, первородящая. Беременность протекала без осложнений. Клинический диагноз при поступлении на дородовую госпитализацию: Беременность 38 недель, головное предлежание плода. Зоб I, эутиреоз. Анемия I.

При влагалищном исследовании шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая».

Выполнено определение в периферической крови относительного содержания CD49e позитивных нейтрофилов. Полученный результат: 22,0%, что указывало на отсутсвие «созревания» шейки матки к 40 неделям. Проведен курс традиционной медикаментозной подготовки к родам. При влагалищном исследовании в 40 недель гестации шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая». Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

В связи с отсутствием готовности организма к родам женщина была родоразрешена путем операции кесарево сечение в плановом порядке.

Пример 3.

Беременная К., 27 лет, первобеременная, первородящая. Беременность протекала без осложнений. Клинический диагноз при поступлении на дородовую госпитализацию: Беременность 38-39 недель, головное предлежание плода. Анемия I.

При влагалищном исследовании шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая».

Произведено определение в периферической крови относительного содержания CD49e позитивных нейтрофилов. Полученный результат: 24,6%, что указывало на «созревание» шейки матки к 40 неделям.

Проведен курс традиционной медикаментозной подготовки к родам. При влагалищном исследовании в 40 недель гестации шейка матки оценена по шкале Бишопа, как «зрелая». Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Роды призошли в срок 40 недель гестации через естественные родовые пути. В родах имела место дискоординация родовой деятельности с положительным эффектом от ее консервативного лечения.

Указанным способом обследовано 33 женщины. Данные исследований приведены в таблице.

Показатель Количество обследованных Всего женщин 33 истинно-положительный результат 20 ложно-положительный результат 4 истинно-отрицательный результат 7 ложно-отрицательный результат 2 Итого: точность заявляемого способа - 82%; чувствительность заявляемого способа - 91%; специфичность заявляемого способа - 64%.

Преимущества заявляемого способа:

1. Способ осуществляется с применением современного метода иммунологического обследования.

2. Способ не является трудоемким, на его проведение требуется 1 час 40 мин.

3. Высокая точность - 82%, чувствительность - 91%.

4. Способ расширяет арсенал диагностических средств и обеспечивает возможность прогнозирования «созревания» шейки матки с целью определения дальнейшей тактики ведения и родоразрешения беременной.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования «созревания» шейки матки перед родами. При этом у беременных в 38-39 недель гестации в периферической крови определяют относительное содержание CD49e позитивных нейтрофилов и при его значении, равном 24,6% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки, а при значении менее 24,6% отсутствие «созревания» шейки матки к 40 неделям гестации. Использование способа обеспечивает возможность своевременного прогнозирования «созревания» шейки матки с целью определения дальнейшей тактики ведения и родоразрешения беременной. 1 табл.

Способ прогнозирования «созревания» шейки матки путем иммунологического исследования периферической венозной крови беременных женщин с «незрелой» шейкой матки, отличающийся тем, что в 38-39 недель гестации определяют относительное содержание CD49e позитивных нейтрофилов и при его значении, равном 24,6% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки к 40 неделям гестации, а при значении менее 24,6% - отсутствие «созревания» шейки матки после проведения традиционной медикаментозной подготовки к родам.